RU2605843C2 - Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma - Google Patents

Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma Download PDF

Info

Publication number
RU2605843C2
RU2605843C2 RU2015111461/15A RU2015111461A RU2605843C2 RU 2605843 C2 RU2605843 C2 RU 2605843C2 RU 2015111461/15 A RU2015111461/15 A RU 2015111461/15A RU 2015111461 A RU2015111461 A RU 2015111461A RU 2605843 C2 RU2605843 C2 RU 2605843C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
erythrocytes
autoplasma
red blood
aggregate state
blood cells
Prior art date
Application number
RU2015111461/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2015111461A (en
Inventor
Юрий Александрович Шереметьев
Александр Николаевич Успенский
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА)
Priority to RU2015111461/15A priority Critical patent/RU2605843C2/en
Publication of RU2015111461A publication Critical patent/RU2015111461A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2605843C2 publication Critical patent/RU2605843C2/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/48707—Physical analysis of biological material of liquid biological material by electrical means

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely, to a method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma. Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma consists in sampling of blood with anticoagulant, separation of erythrocytes, then plateletless plasma is mixed with erythrocytes, is placed on a glass slide, field lens is lowered into a drop of the mixture and microphotography is performed under certain conditions.
EFFECT: method described above enables to perform intravital assessment of aggregate state of erythrocytes at high magnification of a light microscope more efficiently.
1 cl, 2 dwg, 2 ex

Description

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к исследованию реологических свойств крови, и может быть использовано для оценки агрегатного состояния эритроцитов.The invention relates to medicine and biology, namely to the study of the rheological properties of blood, and can be used to assess the state of aggregation of red blood cells.

Известен фотометрический способ оценки агрегации эритроцитов в аутоплазме (Schmid-Schonbein et al., Microvasc. Res. 1973.Vol. 6. P. 366-376), включающий выделение эритроцитов из крови, смешивание с аутоплазмой, помещение в кювету реоскопа и регистрацию записи агрегатограммы.A known photometric method for evaluating the aggregation of red blood cells in autoplasma (Schmid-Schonbein et al., Microvasc. Res. 1973. Vol. 6. P. 366-376), including the allocation of red blood cells from the blood, mixing with autoplasma, placing a rheoscope in a cuvette and recording recording aggregatograms.

Однако этот способ требует специального и дорогого оборудования (реоскопа). Кроме того, с помощью фотометрического метода можно определить только степень агрегации эритроцитов в виде «монетных столбиков». Практически не изученным остается прижизненная морфология агрегатного состояния эритроцитов при большом увеличении микроскопа.However, this method requires special and expensive equipment (rheoscope). In addition, using the photometric method, you can only determine the degree of aggregation of red blood cells in the form of "coin columns". The intravital morphology of the state of aggregation of erythrocytes with a large magnification of the microscope remains practically unstudied.

Известен способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в крови, включающий помещение капли крови на предметное стекло, опускание в нее объектива 100х и проведение микрофотосъемки (Свищева Т.Я. Перспективная диагностика. Биорезонансная, световая, темнопольная, люминисцентная. - Спб.: Издательство Диля, 2006). Этот способ взят за прототип.There is a method of microscopic evaluation of the state of aggregation of red blood cells in the blood, including placing a drop of blood on a glass slide, lowering a 100 x lens into it and conducting microphotography (Svishcheva T.Ya. Perspective diagnostics. Bioresonance, light, dark-field, luminescent. - St. Petersburg: Dilya Publishing House , 2006). This method is taken as a prototype.

Однако этот способ имеет существенные недостатки. В данном способе забор крови проводится без антикоагулянта. В течение нескольких минут кровь свертывается, что не позволяет работать длительное время. Кроме того, гематокритное число крови составляет 40-45, что создает трудности в фокусировании изображения.However, this method has significant disadvantages. In this method, blood sampling is performed without an anticoagulant. Within a few minutes, the blood coagulates, which does not allow working for a long time. In addition, the hematocrit number of blood is 40-45, which creates difficulties in focusing the image.

Известен также способ определения степени агрегации эритроцитов (Повзнер А.А., Муравьев А.В., Вдовин В.А., Тихомирова И.А. Способ определения степени агрегации клеток крови. Пат. 2484465 РФ, 2016).There is also a method for determining the degree of aggregation of red blood cells (Povzner A.A., Muravyov A.V., Vdovin V.A., Tikhomirova I.A. Method for determining the degree of aggregation of blood cells. Pat. 2484465 RF, 2016).

Однако в данном способе используется низкое гематокритное число (разведение эритроцитов плазмой в 200 раз) и малое увеличение микроскопа.However, this method uses a low hematocrit number (dilution of red blood cells by plasma 200 times) and a small increase in the microscope.

Задачей предлагаемого изобретения является создание способа микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в течение длительного времени и при большом увеличении светового микроскопа.The objective of the invention is to provide a method for microscopic evaluation of the state of aggregation of red blood cells for a long time and with a large increase in light microscope.

Поставленная задача решается за счет того, что забор крови проводят с антикоагулянтом, бестромбоцитарную плазму смешивают с эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в нее объектив (100х) светового микроскопа и после достижения фокуса (x1000) наблюдают через окуляр микроскопа. Для микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов проводят микрофотосъемку.The problem is solved due to the fact that blood sampling is carried out with an anticoagulant, platelet-free plasma is mixed with red blood cells in a 2: 1 ratio, a drop of the mixture is placed on a glass slide, mixed, the lens (100 x ) of the light microscope is lowered into it and after reaching the focus (x1000 ) are observed through the eyepiece of the microscope. For microscopic assessment of the state of aggregation of red blood cells, microphotography is performed.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь забирают в вакуумные пробирки, содержащие 3.8% цитрат натрия (соотношение 9:1). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Плазму и клетки белой крови убирают, после чего бестромбоцитарную плазму смешивают с эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в нее объектив (100х) светового микроскопа и после достижения фокуса (x1000) проводят микрофотосъемку.The method is as follows. Blood is collected in vacuum tubes containing 3.8% sodium citrate (9: 1 ratio). The tubes are centrifuged at 3000 rpm for 20 minutes Plasma and white blood cells are removed, after which the platelet-free plasma is mixed with red blood cells in a ratio of 2: 1, a drop of the mixture is placed on a glass slide, mixed, the lens (100 x ) of the light microscope is lowered into it, and after reaching the focus (x1000), microphotography is performed.

Пример 1. Бестромбоцитарную плазму крови здоровых людей смешивали с эритроцитами в соотношении 2:1, каплю смеси помещали на предметное стекло, перемешивали, опускали в каплю смеси объектив 100х, фокусировали и проводили микрофотосъемку. На рис. 1 видно образование «монетных столбиков» из здоровых эритроцитов в аутоплазме.Example 1. The platelet-free blood plasma of healthy people was mixed with red blood cells in a 2: 1 ratio, a drop of the mixture was placed on a glass slide, mixed, a 100 x objective was lowered into the drop of the mixture, focused and microphotographed. In fig. Figure 1 shows the formation of “coin columns” from healthy red blood cells in autoplasma.

Пример 2. Бестромбоцитарную плазму крови, хранящейся 7 дней при 4°C, смешивали с хранящимися эритроцитами в соотношении 2:1, помещали на предметное стекло, перемешивали, опускали в каплю смеси объектив 100х, фокусировали и проводили микрофотосъемку. На рис. 2 видно, что наряду с агрегацией эритроцитов, состоящей из «монетных столбиков», наблюдается агрегация эхиноцитов.Example 2. Platelet-free blood plasma stored at 7 ° C for 7 days was mixed with stored red blood cells in a 2: 1 ratio, placed on a glass slide, mixed, a 100 x objective was lowered into a drop of the mixture, focused and microphotographed. In fig. 2 shows that along with the aggregation of red blood cells, consisting of "coin columns", there is an aggregation of echinocytes.

Приведенные примеры показывают возможности применения способа микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме.The above examples show the possibilities of using the method of microscopic assessment of the state of aggregation of red blood cells in autoplasma.

Claims (1)

Способ микроскопической оценки агрегатного состояния эритроцитов в аутоплазме, включающий забор крови и микроскопическое изучение агрегации эритроцитов, отличающийся тем, что забор крови проводят с антикоагулянтом, выделяют эритроциты, бестромбоцитарную плазму смешивают с эритроцитами в соотношении 2:1, помещают на предметное стекло, перемешивают, опускают в каплю смеси объектив 100х, проводят микрофотосъемку. A method of microscopic assessment of the state of aggregation of red blood cells in an autoplasma, including blood sampling and microscopic examination of red blood cell aggregation, characterized in that the blood is taken with an anticoagulant, erythrocytes are isolated, platelet-free plasma is mixed with red blood cells in a ratio of 2: 1, placed on a glass slide, mixed, and optically mixed. in a drop of a mixture of a 100 x lens, microphotography is carried out.
RU2015111461/15A 2015-03-30 2015-03-30 Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma RU2605843C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015111461/15A RU2605843C2 (en) 2015-03-30 2015-03-30 Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015111461/15A RU2605843C2 (en) 2015-03-30 2015-03-30 Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2015111461A RU2015111461A (en) 2016-10-20
RU2605843C2 true RU2605843C2 (en) 2016-12-27

Family

ID=57138295

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015111461/15A RU2605843C2 (en) 2015-03-30 2015-03-30 Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2605843C2 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704969C1 (en) * 2018-07-09 2019-11-01 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) Method for morphological evaluation of erythrocyte aggregation induced by high-molecular polymers

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2428995C1 (en) * 2010-05-11 2011-09-20 Антон Артурович Кескинов Method of obtaining autologic platelet gel
RU2484465C1 (en) * 2012-03-12 2013-06-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный педагогический университет" им. К.Д. Ушинского (ЯГПУ им. К.Д. Ушинского) Method for determining degree of blood cell aggregation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2428995C1 (en) * 2010-05-11 2011-09-20 Антон Артурович Кескинов Method of obtaining autologic platelet gel
RU2484465C1 (en) * 2012-03-12 2013-06-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославский государственный педагогический университет" им. К.Д. Ушинского (ЯГПУ им. К.Д. Ушинского) Method for determining degree of blood cell aggregation

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
СВИЩЕВА Т.Я. Перспективная диагностика. биорезонансная, световая, темнопольная, люминесцентная. -Спб.: Из-во Диля, 2006, 137,142,83. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2704969C1 (en) * 2018-07-09 2019-11-01 Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВО НГСХА) Method for morphological evaluation of erythrocyte aggregation induced by high-molecular polymers

Also Published As

Publication number Publication date
RU2015111461A (en) 2016-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2010134422A (en) METHOD AND DEVICE FOR ANALYSIS OF PARTICLES IN A LIQUID SAMPLE
US20200264557A1 (en) Specific malaria detection with digital holographic microscopy
Galli et al. Non‐linear optical microscopy of kidney tumours
US11969739B2 (en) Apparatus for performing contactless optically-induced dielectrophoresis for separation of circulating tumor cells
RU2605843C2 (en) Method for microscopic evaluation of aggregate state of erythrocytes in autoplasma
CN103776835B (en) A kind of diatom inspection method in medical jurisprudence based on filter membrane
CN103868774A (en) Method for manufacturing parasitic ovum permanent slide specimens
Phillips et al. Three‐dimensional spatial quantitative analysis of cardiac lymphatics in the mouse heart
GB353340A (en) Improvements in methods and devices for microscopically viewing living objects
CN111638358A (en) Immunofluorescence kit and method for E-Cadherin mutation of peripheral blood circulating tumor cells of small cell lung cancer patients
RU2590985C2 (en) Method of estimating aggregate state of erythrocytes in autologous blood serum
RU2675376C1 (en) Method of quantitative analysis of cellular components of scaffold
Tang et al. Filtration and analysis of circulating cancer associated cells from the blood of cancer patients
RU2665171C2 (en) Method for detecting phosphatidylserine on the erythrocyte membrane surface
RU2704969C1 (en) Method for morphological evaluation of erythrocyte aggregation induced by high-molecular polymers
Woods et al. Tracking protein dynamics with photoconvertible Dendra2 on spinning disk confocal systems
RU2015113069A (en) METHOD FOR DETERMINING THE TOTAL ACTIVITY OF ANTIMICROBE PEPTIDES AS A MARKER OF THE STATE OF LOCAL IMMUNITY OF VARIOUS EPITELIAL TISSUES
Böhm* Flow cytometric analysis of the LE cell phenomenon
Agi et al. The status of Schistosoma haematobium infection in Anyu community in the Niger Delta, Nigeria
RU2625036C1 (en) Method for prediction of clinical course of atrophic anaemia after splenectomy after splenectomy based on spleen cd4+lymphocytes weight
Schoenfeld et al. Neutrophil Extracellular Traps Imaging in Human and Mouse Tissues (Video)| JoVE
Chetan Evaluation of Platelet Indices and Red Cell Distribution Width as Emerging-Biomarker for the Diagnosis of Acute Appendicitis and Appendicular Perforation
Reuss aDISCO: 3D Histology of Whole Archival Human Tissue Blocks
Xavier et al. Advancing precision imaging for 3D Organoids-on-Chip: A novel lightsheet microscopy approach with comprehensive vascular network assessment
RU2555355C1 (en) Method of morphometric estimation of prognosis of course of aplastic anaemia after splenectomy

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20180331