RU2603732C2 - Способ быстрого отбора вариантов gp-120 вич - Google Patents
Способ быстрого отбора вариантов gp-120 вич Download PDFInfo
- Publication number
- RU2603732C2 RU2603732C2 RU2013143295/10A RU2013143295A RU2603732C2 RU 2603732 C2 RU2603732 C2 RU 2603732C2 RU 2013143295/10 A RU2013143295/10 A RU 2013143295/10A RU 2013143295 A RU2013143295 A RU 2013143295A RU 2603732 C2 RU2603732 C2 RU 2603732C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hiv
- virus
- antibodies
- antibody
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 238000010187 selection method Methods 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 129
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 110
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 95
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims abstract description 59
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 33
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 28
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 17
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 48
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 47
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 31
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 31
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 31
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 14
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 95
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 93
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 abstract description 59
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 49
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 40
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 30
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 29
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 22
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 21
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 21
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 21
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 21
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 18
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 17
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 17
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 17
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 14
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 12
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 12
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 11
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 11
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 9
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 8
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 7
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 7
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- 241001533399 Circoviridae Species 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N amprenavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN(CC(C)C)S(=O)(=O)C=1C=CC(N)=CC=1)NC(=O)O[C@@H]1COCC1)C1=CC=CC=C1 YMARZQAQMVYCKC-OEMFJLHTSA-N 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 241000711895 Bovine orthopneumovirus Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 4
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 4
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- -1 Al (OH) 3 Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 3
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 3
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 3
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 3
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 3
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 3
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 3
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 3
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 3
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 102220274636 rs144712084 Human genes 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 2
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 2
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 2
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 2
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 208000007027 Oral Candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 206010049025 Persistent generalised lymphadenopathy Diseases 0.000 description 2
- 208000005384 Pneumocystis Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010073755 Pneumocystis jirovecii pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 2
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000713675 Spumavirus Species 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 description 2
- 241000287411 Turdidae Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N delavirdine Chemical compound CC(C)NC1=CC=CN=C1N1CCN(C(=O)C=2NC3=CC=C(NS(C)(=O)=O)C=C3C=2)CC1 WHBIGIKBNXZKFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 2
- 201000003450 persistent generalized lymphadenopathy Diseases 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 201000000317 pneumocystosis Diseases 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M rubidium chloride Chemical compound [Cl-].[Rb+] FGDZQCVHDSGLHJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- 229960002555 zidovudine Drugs 0.000 description 2
- HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N zidovudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000712892 Arenaviridae Species 0.000 description 1
- 241001533362 Astroviridae Species 0.000 description 1
- AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N Atazanavir Natural products C=1C=C(C=2N=CC=CC=2)C=CC=1CN(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC(O)C(NC(=O)C(NC(=O)OC)C(C)(C)C)CC1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010019625 Atazanavir Sulfate Proteins 0.000 description 1
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000702628 Birnaviridae Species 0.000 description 1
- 241001446316 Bohle iridovirus Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000712005 Bovine respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N CPD000469186 Natural products CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)NC(C(O)CN1C(CC2CCCCC2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000714198 Caliciviridae Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 108700000434 Cannabis sativa edestin Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101900144306 Cauliflower mosaic virus Reverse transcriptase Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Chemical class 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700020911 DNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N Didanosine Chemical compound O1[C@H](CO)CC[C@@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 BXZVVICBKDXVGW-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N Emtricitabine Chemical compound C1=C(F)C(N)=NC(=O)N1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 XQSPYNMVSIKCOC-NTSWFWBYSA-N 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010032976 Enfuvirtide Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000230501 Equine herpesvirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108010000916 Fimbriae Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000713813 Gibbon ape leukemia virus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 108010027044 HIV Core Protein p24 Proteins 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000669402 Homo sapiens Toll-like receptor 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000800483 Homo sapiens Toll-like receptor 8 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010084873 Human Immunodeficiency Virus nef Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 108010070875 Human Immunodeficiency Virus tat Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 101000807236 Human cytomegalovirus (strain AD169) Membrane glycoprotein US3 Proteins 0.000 description 1
- 241000712003 Human respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- PIJXCSUPSNFXNE-QRZOAFCBSA-N N-acetyl-4-(N-acetylglucosaminyl)muramoyl-L-alanyl-D-isoglutamine Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](NC(C)=O)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 PIJXCSUPSNFXNE-QRZOAFCBSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 206010061304 Nail infection Diseases 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 102100035069 Neuronal vesicle trafficking-associated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940122313 Nucleoside reverse transcriptase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000702665 Porcine rotavirus Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710150344 Protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 101710149136 Protein Vpr Proteins 0.000 description 1
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 1
- 241000713126 Punta Toro virus Species 0.000 description 1
- 108010066717 Q beta Replicase Proteins 0.000 description 1
- 108091036333 Rapid DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000702247 Reoviridae Species 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000713820 Squirrel monkey retrovirus Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N Stavudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1C=C[C@@H](CO)O1 XNKLLVCARDGLGL-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108010052762 Suid herpesvirus 1 glycoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N Tipranavir Natural products C1C(O)=C(C(CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)C(=O)OC1(CCC)CCC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008235 Toll-Like Receptor 9 Human genes 0.000 description 1
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100039390 Toll-like receptor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100033110 Toll-like receptor 8 Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010067409 Trichophytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N Zalcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)CC1 WREGKURFCTUGRC-POYBYMJQSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004748 abacavir Drugs 0.000 description 1
- MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N abacavir Chemical compound C=12N=CN([C@H]3C=C[C@@H](CO)C3)C2=NC(N)=NC=1NC1CC1 MCGSCOLBFJQGHM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001830 amprenavir Drugs 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000002259 anti human immunodeficiency virus agent Substances 0.000 description 1
- 229940124411 anti-hiv antiviral agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 229960003277 atazanavir Drugs 0.000 description 1
- AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N atazanavir Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)[C@@H](O)CN(CC=1C=CC(=CC=1)C=1N=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)(C)C)C1=CC=CC=C1 AXRYRYVKAWYZBR-GASGPIRDSA-N 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 229960005319 delavirdine Drugs 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229960002656 didanosine Drugs 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960000366 emtricitabine Drugs 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N enfuvirtide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(C)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CN=CN1 PEASPLKKXBYDKL-FXEVSJAOSA-N 0.000 description 1
- 229960002062 enfuvirtide Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- ISLJZDYAPAUORR-UHFFFAOYSA-N ethyl n-[2-[(5-nitrothiophene-2-carbonyl)amino]thiophene-3-carbonyl]carbamate Chemical compound C1=CSC(NC(=O)C=2SC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=C1C(=O)NC(=O)OCC ISLJZDYAPAUORR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229960001936 indinavir Drugs 0.000 description 1
- CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N indinavir Chemical compound C([C@H](N(CC1)C[C@@H](O)C[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H]2C3=CC=CC=C3C[C@H]2O)C(=O)NC(C)(C)C)N1CC1=CC=CN=C1 CBVCZFGXHXORBI-PXQQMZJSSA-N 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011901 isothermal amplification Methods 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 1
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 1
- 108700007621 mifamurtide Proteins 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 229960000884 nelfinavir Drugs 0.000 description 1
- QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N nelfinavir Chemical compound CC1=C(O)C=CC=C1C(=O)N[C@H]([C@H](O)CN1[C@@H](C[C@@H]2CCCC[C@@H]2C1)C(=O)NC(C)(C)C)CSC1=CC=CC=C1 QAGYKUNXZHXKMR-HKWSIXNMSA-N 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 229940042402 non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002726 nonnucleoside reverse transcriptase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 238000011338 personalized therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 108010015936 pseudorabies virus glycoprotein gH Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 239000003419 rna directed dna polymerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 229960001852 saquinavir Drugs 0.000 description 1
- QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N saquinavir Chemical compound C([C@@H]([C@H](O)CN1C[C@H]2CCCC[C@H]2C[C@H]1C(=O)NC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)C=1N=C2C=CC=CC2=CC=1)C1=CC=CC=C1 QWAXKHKRTORLEM-UGJKXSETSA-N 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 229960001203 stavudine Drugs 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N tamsulosin hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CCOC1=CC=CC=C1OCCN[C@H](C)CC1=CC=C(OC)C(S(N)(=O)=O)=C1 ZZIZZTHXZRDOFM-XFULWGLBSA-N 0.000 description 1
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 1
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229960000838 tipranavir Drugs 0.000 description 1
- SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N tipranavir Chemical compound C([C@@]1(CCC)OC(=O)C([C@H](CC)C=2C=C(NS(=O)(=O)C=3N=CC(=CC=3)C(F)(F)F)C=CC=2)=C(O)C1)CC1=CC=CC=C1 SUJUHGSWHZTSEU-FYBSXPHGSA-N 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 229960000523 zalcitabine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
- C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/16043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/162—HIV-1, HIV-2 env, e.g. gp160, gp110/120, gp41, V3, peptid T, DC4-Binding site
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к новым иммуногенам ВИЧ, и может быть использовано в медицине для лечения или предотвращения заболевания, вызываемого инфекцией ВИЧ. Полипептид - вариант gp120 ВИЧ-1 с SEQ ID NO: 4 отбирают способом быстрого отбора иммуногенов (RIS) на основании связывания библиотеки рекомбинантных вирусов, содержащих рандомизированные варианты gp120 ВИЧ, поверхностного полипептида, находящегося на антителах с нейтрализующей активностью. Изобретение позволяет эффективно индуцировать антитела с нейтрализующей активностью против ВИЧ-1. 6 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 1 табл.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу быстрого отбора иммуногенов, которые могут индуцировать антитела с высокой нейтрализующей активностью (nAb). Описано и приведено в качестве примера несколько примеров таких иммуногенов с повышенной активностью nAb. В частности, описаны иммуногены с повышенной аффинностью антитела в отношении эпитопов Env ВИЧ-1.
Уровень техники
По расчетам, с 1982 года более 60 миллионов человек во всем мире было инфицировано вирусом иммунодефицита человека. Приблизительно половина из этих инфицированных индивидуумов умерли в результате синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД) в течение того же периода времени. Несмотря на то, что в последнее время распространение вируса достигло плато, в 2009 годы было опубликовано о 2,5 миллионах новых ВИЧ-инфицированных. ВИЧ все еще представляет собой основную проблему здравоохранения. См. UNAIDS, 2010, Report on the global AIDS epidemic.
ВИЧ-1 представляет собой один из наиболее генетически многообразных вирусных патогенов, описанных на настоящее время. Существует три основных ветви филогенетического дерева ВИЧ-1, группы M (основной), N (новый) и O (посторонний). Вирусы группы M являются наиболее распространенными, насчитывая более 99% случаев инфекции во всем мире. В настоящее время эту группу разделяют на девять отдельных генетических подтипов или типов (от A до K), в основном в зависимости от коротких последовательностей гена env (оболочки). См. McCutchan F, AIDS, 2000, 14(S3):S31-S44 и Robertson D. et al., Science, 2000, 288:55-56.
Env представляет собой наиболее изменчивый ген ВИЧ-1, имеющий изменчивость последовательности до 35% между типами, изменчивость последовательности 20% внутри типа и изменчивость последовательности до 10% у инфицированного индивидуума. См. Kuiken C. et al., AIDS, 1996, 10:31-37 и Shankarappa R. et al., J. Virol., 1999, 73:10489-10502. Clade B is dominant in Europe, the Americas, and Australia. См. Kuiken C. et al., AIDS, 1996, Am. J. Epidemiol., 2000, 152:814-822. Clade C is common in southern Africa, China, and India and presently infects more people worldwide than any other clade. См. McCutchan, 2000, выше. Clades A and D are prominent in central and eastern Africa.
Однако большое число вирусов трудно классифицировать по типам вследствие обычно происходящего смешивания совместно циркулирующих вирусов, которое приводит к образованию рекомбинантных форм внутри типа. См. Heyndrickx L. et al., J. Virol., 200, 74:363-370 и McCutchan F. et al., Virology, 1999, 254:226-234. Некоторые рекомбинантные формы фактически дают важные эпидемиологические линии, называемые циркулирующие рекомбинантные формы (CRF). Две наиболее распространенные формы представляют собой CRF01 (AE), обнаруженный в Таиланде, который изначально классифицировали как тип E, хотя позже было обнаружено, что он является типом E только по env и типом A по другим частям генома, и CRF02, рекомбинантная форма AG, широко распространенная в Западной Африке. См. Robertson, 2000, выше. Во всем мире типы от A до D и рекомбинантые формы AE CRF01 и AG CRF02 насчитывают более 90% случаев инфицирования во всем мире.
Антитела с нейтрализующей активностью (nAb) в отношении белков оболочки вируса (Env) представляют собой первую линию приобретенной иммунной защиты против действия ВИЧ-1, благодаря блокированию инфицирования восприимчивых клеток. См. Kwong P, et al., Nature 1998; 393:648-659, Moore J, et al., J. Virol. 1994; 68:469-484, Moore P, et al., J. Virol. 1996; 70:1863-1872, and Parren P, et al., AIDS 1999; 13:S137-S162. Эффективность вакцин против некоторых вирусов объясняется их способностью индуцировать nAb. См. Burton D., Nat. Rev. Immunol., 2002, 2:706-713 и Zinkerangel R. et al., Adv. Immunol., 2001, 79:1-53. Однако несмотря на огромные усилия прогресс в разработке эффективных иммуногенов ВИЧ-1 крайне ограничен. См. Burton, 2002, выше, McMichael A., Hanke T., Nat. Med., 2003, 9:874-880 и Moore, 1996, выше. Для создания таких иммуногенов необходимо идентифицировать эпитопы, которые способны индуцировать более эффективную продукцию nAb. К сожалению, сделанные до настоящего времени попытки получения иммуногенов, которые вызывают продукцию широкого спектра nAb, были неудачными.
Таким образом, в данной области существует необходимость в новых иммуногенах ВИЧ-1, способных индуцировать более эффективную продукцию nAb.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к способу быстрого отбора иммуногенов (RIS), которые могут вызывать высокую активность nAb при использовании их в качестве B-клеточных иммуногенов. Способ включает: i) случайную мутацию нуклеотидной кодирующей последовательности представляющего интерес эпитопа дикого типа с получением библиотеки вариантов указанного эпитопа, ii) тестирование библиотеки с использованием антитела или его частей, в отношении которых известна аффинность к эпитопу дикого типа, и iii) отбор вариантов эпитопа, которые повышают аффинность антитела. Предпочтительно, эпитоп представляет собой эпитоп ВИЧ. Более предпочтительно, эпитоп представляет собой эпитоп Env.
Во втором варианте осуществления изобретение относится к нуклеотидным последовательностям и пептидам, получаемым способом RIS, таким как нуклеотидные последовательности SEQ ID NO:1 и SEQ ID NO:3.
В третьем варианте осуществления изобретение относится к применению нуклеотидных последовательностей и пептидов, получаемых способом RIS, для профилактики и лечения заболеваний, индуцируемых полностью или частично под действием представляющего интерес эпитопа дикого типа. Предпочтительно, заболевание представляет собой СПИД или заболевание, вызываемое инфекцией ВИЧ.
В четвертом варианте осуществления изобретение относится к диагностическому применению способа RIS.
Краткое описание чертежей
Фигура 1. Последовательность мутантов, идентифицированных способом RIS по изобретению. Верхняя последовательность соответствует аминокислотам 121-160 полипептида gp160 AC10. Последовательности соответствующих областей в выделенных клонах показаны в виде точек, где аминокислота является такой же, как аминокислота в gp160 AC10 или соответствует аминокислоте в этих положениях, где последовательность мутанта отличается от последовательности дикого типа.
Фигура 2. Предполагаемое взаимодействие между антителом 4E10 и конкретным мутантом LR1-C1. Показаны одиннадцать замен аминокислот во всем гене env, включая потерю 3 потенциальных N-связанных участков гликозилирования. Мутация C131Y является особенно релевантной, т.к. такая замена устраняет нативную дисульфидную связь между C131 и C157, разрушая структуру петли V1/V2.
Фигура 3. Для вириона LR1-C1, идентифицированного способом RIS по изобретению, показано повышение аффинности к антителу с нейтрализующей активностью широкого спектра действия 4E10. На графике показано титрование связывания вирионов с планшетами, покрытыми антителом 4E10, которое определено добавлением возрастающего количества изолята AC10 дикого типа и изолята LR1-C1 к планшетам, покрытым антителом 4E10 или без обработки. На диаграмме показано 4-кратное повышение аффинности антитела 4E10 к LR1-C1 по сравнению с вариантом дикого типа.
Фигура 4. Для вириона LR1-C1, идентифицированного способом RIS по изобретению с использованием антитела 4E10, не показана повышенная аффинность к другим антителам с нейтрализующей активностью широкого спектра действия. На графике показано титрование связывания вирионов с планшетами, покрытыми антителами 2F5 (панель A), 2G12 (панель B) или b12 (панель C), что определено при добавлении возрастающего количества изолята AC10 дикого типа, изолята LR1-C1 или вирионов, несущих делецию в гене env, к планшетам, покрытым антителами или без обработки.
Фигура 5. Выравнивание SEQ ID NO:31 с последовательностью HXB2 AC10 дикого типа. SEQ ID NO:31 обладает аффинностью к антителу PG16. Модифицированная последовательность содержит две мутации: i) N203S в потенциальном участке гликозилирования и ii) G604E в области антигенной детерминанты gp41.
Подробное описание изобретения
A. Способ быстрого отбора иммуногенов (RIS)
Изобретение относится к новому подходу оптимизации белка оболочки (Env) ВИЧ-1 в качестве иммуногена. В этом подходе учитывают зависимость способности эпитопа индуцировать антитела от его присутствия на вирионе. Способ основан на отборе вариантов с повышенной аффинностью к nAb широкого спектра действия из библиотеки вирионов со случайно мутировавшими белками оболочки.
Согласно изобретению полноразмерный ген env штамма АС10 ВИЧ используют для создания библиотеки случайно мутировавших оболочек с помощью способа ПЦР. Клонирование осуществляли в окружении pNL4-3 и получали вирионы посредством временной трансфекции в клетки 293T. Отбор вирусов с повышенной аффинностью в отношении nAb 4E10 широкого спектра проводили с помощью улучшенного анализа захвата вириона в растворе. РНК экстрагировали из захваченной популяции вируса и проводили ПЦР с обратной транскрипцией с получением гена env из соответствующих вирусов для дальнейшего секвенирования и клонирования обратно в окружение pNL4-3. После одного круга отбора выделяли оболочку с 4-кратной повышенной аффинностью в отношении антитела 4E10. См. примеры.
Таким образом, в первом аспекте изобретение относится к способу идентификации иммуногенов, способных индуцировать антитела с нейтрализующей активностью против полипептида, который включает:
i) приведение в контакт антитела с нейтрализующей активностью, специфичного для указанного полипептида, с библиотекой рекомбинантных вирусов, где каждый из указанных рекомбинантных вирусов содержит рандомизированный ген, кодирующий вариант указанного полипептида и экспрессирующий указанный полипептид,
ii) отделение членов библиотеки рекомбинантных вирусов, которые связываются с антителом с нейтрализующей активностью, от членов, которые не связываются, по их способности связываться с антителом с нейтрализующей активностью и
iii) определение последовательности вариантов полипептидов, обнаруженных среди членов библиотеки рекомбинантных вирусов, отобранных на стадии (ii).
Как используется в настоящем описании термин "иммуноген" обозначает вещество, которое способно индуцировать приобретенный иммунный ответ у индивидуума, где указанный приобретенный иммунный ответ способен индуцировать иммунный ответ, со значительным вовлечением патогенных агентов, которые обладают общими иммунологическими свойствами с иммуногеном.
Термин "индукция", когда относится к иммунному ответу, как используют в настоящем изобретении, относится к специфическому контролю или к влиянию на активность иммунного ответа и включает активацию иммунного ответа, стимуляцию иммунного ответа, усиление иммунного ответа и/или изменение иммунного ответа (например, посредством индукции типа иммунного ответа, который в свою очередь изменяет преобладающий тип иммунного ответа у индивидуума от одного типа иммунного ответа, который является вредным или неэффективным, на другой тип, который является благоприятным и защитным).
Термин "антитело с нейтрализующей активностью" представляет собой любое антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которое связывается с патогеном и нарушает способность патогена инфицировать клетку и/или вызывать заболевания у индивидуума. Как правило, используемые в способе по настоящему изобретению антитела с нейтрализующей активностью связываются с поверхностью патогена и ингибируют или уменьшают инфекцию патогеном по меньшей мере на 99 процентов, по меньшей мере на 95 процентов, по меньшей мере на 90 процентов, по меньшей мере на 85 процентов, по меньшей мере на 80 процентов, по меньшей мере на 75 процентов, по меньшей мере на 70 процентов, по меньшей мере на 60 процентов, по меньшей мере на 50 процентов, по меньшей мере на 45 процентов, по меньшей мере на 40 процентов, по меньшей мере на 35 процентов, по меньшей мере на 30 процентов, по меньшей мере на 25 процентов, по меньшей мере на 20 процентов или по меньшей мере на 10 процентов по сравнению с инфекцией патогеном в отсутствии указанных антител(а) или в присутствии отрицательного контроля. Затем nAb можно тестировать для определения, обладают ли они нейтрализующей активность или активностью BNAb, используя любой из описанных в настоящем описании способов. Если антитела с нейтрализующей активностью или BNAb были индуцированы у животного, кроме человека, то CDR могут быть перенесены из каркаса, не являющегося каркасом человека, в каркас человека с получением антитела, подходящего для введения человеку. Способы определения, является ли антитело антителом nAb, описаны в данной области. См. Li M, et al., J. Virol., 2005, 79:10108-10125, Wei X, et al., Nature 2003, 422:307-312 и Montefiori D., Curr. Protoc. Immunol. 2005, Jan, Chapter 12:Unit 12.11. Эти способы основаны на определении снижения экспрессии репортерного гена после одного круга вирусной инфекции, используя получающую клеточную линию и вирус, который кодирует репортерный ген.
Как используется в настоящем изобретении термин "вирус" обозначает небольшой инфекционный агент, который может реплицироваться только внутри живых клеток различных организмов. Неограничивающие примеры семейств вирусов, которые можно использовать в способе по настоящему изобретению, включают Adenoviridae, вирусы подобные африканской лихорадке свиней, Arenaviridae, Arterivirus, Astroviridae, Baculoviridae, Birnaviridae, Bunyaviridae, Caliciviridae, Circoviridae, Coronaviridae, Deltavirus, Filoviridae, Flaviviridae, Hepadnaviridae, Hepeviridae, Herpesviridae, Orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, Picomaviridae, Poxyviridae, Reoviridae, Retroviridae и Rhabdoviridae.
A.1 Стадия приведения в контакт
На первой стадии способ по изобретению включает приведение в контакт антитела с нейтрализующей активностью, специфичного в отношении полипептида, находящегося на поверхности указанного вируса, с библиотекой рекомбинантных вирусов, где каждый из указанных рекомбинантных вирусов содержит рандомизированный ген, кодирующий вариант указанного полипептида, находящегося на поверхности вируса.
Как используется в настоящем описании термин "библиотека" относится к различным коллекциям или смесям полинуклеотидов, содержащим полинуклеотиды, кодирующие различные рекомбинантные полипептиды. Размер и сложность библиотеки, которую используют в способах по настоящему изобретению, могут изменяться. Например, способы по изобретению можно использовать для скрининга библиотеки с до 500000 различных членов или библиотеки с 1×106, 1×108 или более членов. Характерные библиотеки вирусов содержат от 1×108 до 1×1013 членов, и такие библиотеки могут быть скринированы способами по изобретению. Безусловно, такие библиотеки являются предпочтительными, хотя понятно, что способы также можно без труда использовать для скрининга гораздо меньших библиотек (например, библиотек с количеством членов от 1000 до 50000, от 50 до 1000 или от 100 до 500, или от 10 до 100, или от 5 до 100). Разнообразие вариантов в библиотеке можно получать посредством мутагенеза генов, кодирующих варианты на уровне триплетов ДНК, таким образом, что отдельные кодоны становятся мозаичными (например, с помощью праймеров частично рандомизированной последовательности в реакции ПЦР).
Когда речь идет о библиотеках молекул в настоящем описании, то этот термин можно использовать для обозначения библиотеки на уровне нуклеиновых кислот или белков (т.е. до или после экспрессии). Однако понятно, что такие библиотеки экспрессии должны быть предоставлены на уровне белков для того, чтобы отобрать взаимодействующих связывающихся партнеров. Таким образом, для того, чтобы стадия приведения в контакт (a) успешно прошла, необходимо, чтобы библиотеки были представлены на уровне белков (хотя исходно они могут быть представлены на уровне нуклеиновых кислот).
В предпочтительном варианте осуществления полипептид, против которого используют антитела с нейтрализующей активностью в стадии (i), экспрессируется в вирусе. В предпочтительном варианте осуществления полипептид находится "на поверхности вируса". В описании настоящего изобретения этот термин относится к любому полипептиду, который является доступным для реагентов, таких как антитела, без необходимости разрушения структуры вируса. Понятно, что расположенный на поверхности полипептид может быть капсидным полипептидом в случае безоболочечных вирусов или полипептидом оболочки в случае оболочечных вирусов. В предпочтительном варианте осуществления находящийся на поверхности вируса полипептид является полипептидом оболочки.
Для получения библиотеки рекомбинантных вирусов можно конструировать любой белок вирусной оболочки, где каждый из указанных рекомбинантных вирусов содержит рандомизированный ген, кодирующий вариант указанного полипептида. Характерные антигены включают антигены, выбранные из гемагглютинина вируса гриппа, гликопротеина G респираторно-синцитиального вируса человека, корового белка, белка матрикса или другого белка вируса денге, гемагглютинина вируса кори, гликопротеина gB вируса простого герпеса 2 типа, полиовируса I VP1, гликопротеинов оболочки или капсида ВИЧ-1 или ВИЧ-II, поверхностного антигена гепатита B, дифтерийного токсина, эпитопа 24M стрептококков, гонококкового пилина, g50 (gpD) вируса псевдобешенства, вируса псевдобешенства II (gpB), вируса псевдобешенства gIII (gpC), гликопротеина H вируса псевдобешенства, гликопротеина E вируса псевдобешенства, гликопротеина 195 трансмиссивного гастроэнтерита, белка матрикса инфекционного гастроэнтерита, гликопротеина 38 ротавируса свиньи, капсидного белка парвовируса свиньи, защитного антигена Serpulinahydodysenteriae, гликопротеина 55 вирусной диареи крупного рогатого скота, гемагглютинин-нейраминидазы вируса болезни Ньюкасла, гемагглютинина свиного грипп, нейраминидазы свиного гриппа, вируса ящура, вируса холеры свиней, вируса инфлюэнца свиней, вируса африканской лихорадки свиней, Mycoplasma liyopneutiioniae, вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, гликопротеина E вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, гликопротеина G, вируса инфекционного ларинготрахеита, гликопротеина G или гликопротеина I вируса инфекционного ларинготрахеита, гликопротеина вируса Ла Кросс, вируса диареи новорожденных телят, вируса венесуэльского энцефалита лошадей, вируса Пунта-Торо, вируса лейкоза мышей, вируса опухоли молочной железы мышей, корового белка вируса гепатита B и поверхностного антигена или его фрагмента или производного вируса гепатита B, антигена вируса гриппа лошадей или вируса герпеса лошадей, включая нейраминидазу вируса гриппа лошадей типа A/Alaska 91, нейраминидазу вируса гриппа лошадей типа A/Miami 63, нейраминидазу вируса гриппа лошадей типа A/Kentucky 81, гликопротеина B вируса герпеса лошадей типа 1 и гликопротеина D вируса герпеса лошадей типа 1, антигена респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота или вируса парагриппа крупного рогатого скота, белка прикрепления (BRSV G) респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота, слитого белка (BRSV F) респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота, нуклеокапсидного белка (BRSV N) респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота, слитого белка вируса парагриппа типа 3 крупного рогатого скота, гемагглютинин-нейраминидазы вируса парагриппа типа 3 крупного рогатого скота, гликопротеина 48 и гликопротеина 53 вируса вирусной диареи крупного рогатого скота.
Предпочтительно, библиотека рекомбинантных вирусов представляет собой библиотеку ретровируса. Термин "ретровирус" означает любой РНК-вирус, который реплицируется в клетке-хозяине с помощью фермента обратной транскриптазы с образованием ДНК из его генома РНК и который относится к семейству Retroviridae.
Термин "ретровирус" используют в настоящем описании в его общепринятом значении, и, как правило, он включает класс вирусов, в которых генетический материал представляет собой одноцепочечную РНК, и которые используют обратную транскриптазу для транскрипции вирусной РНК в ДНК в хозяине. Ретровирусы, как предусмотрено в настоящем описании, могут, в частности, принадлежать к семейству вирусов Retroviridae, более конкретно, к подсемействам Oncovirinae, Lentivirinae или Spumavirinae, ретровирусы, как предусмотрено в настоящем описании, могут быть патогенными. Последовательности env могут быть получены из любого известного ретровируса, включая, но не ограничиваясь ими, ВИЧ, MuLV, SMRV, SFV, HPV, MMTV, SRV, HTLV-I, HTLV-II, BLV, BIV, SIV, вирус висны, EIAV, FIV и EIAV, и из любого вируса подсемейства ретровирусов (например, Oncovirinae, Lentivirinae или Spumavirinae). Многие клоны ретровирусов, включая клоны ВИЧ-1, являются хорошо охарактеризованными и доступными.
В частности, в настоящем описании предусмотрены ретровирусы, инфицирующие животных, более предпочтительно, ретровирусы теплокровных животных, еще более предпочтительно, позвоночных животных, еще более предпочтительно, млекопитающих, еще более предпочтительно, приматов и, наиболее предпочтительно, людей. Особенно предпочтительными в настоящем описании являются ретровирусы человека, включая, но ими не ограничиваясь, ВИЧ-1, ВИЧ-2, HTLV-I и HTLV-2. Общепринятые хранилища информации последовательности ВИЧ (и других ретровирусов) включают GenBank, EMBL, DDBJ и NCBI. Хорошо охарактеризованные клоны ВИЧ-1 включают HXCB2, ВИЧ-1-MN и ВИЧ-1-MN-ST.1. См. Hall L, et al., J. Virol., 1992, 66(9):5553-5560.
В предпочтительном варианте осуществления библиотека рекомбинантных вирусов представляет собой библиотеку вирусов ВИЧ, получаемых при рандомизации по меньшей мере одного поверхностного полипептида. Сокращение "ВИЧ" используют в настоящем описании для обозначения вирусов иммунодефицита человека в общем, и оно включает все типы и/или штаммы вируса иммунодефицита человека 1 (ВИЧ-1) и вируса иммунодефицита человека 2 (ВИЧ-2) и является синонимичным более старым терминам для ВИЧ, таким как HTL VIII и LAV.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления различные члены библиотеки ВИЧ являются рандомизированными по гену env. Как используется в настоящем изобретении термин ген env относится к полинуклеотиду вирусного генома, который кодирует белок оболочки ВИЧ. Как используется в настоящем изобретении термины "полипептид Env" или "полипептид оболочки" относятся к молекуле, получаемой из белка оболочки ВИЧ. Белок оболочки ВИЧ представляет собой гликопротеин приблизительно 160 кДа (gp160). При вирусной инфекции клетки-хозяина gp160 расщепляется протеазами клетка-хозяина с образованием gp120 и интегрального мембранного белка gp41.
"Полипептид gp120" представляет собой молекулу, получаемую из области gp120 полипептида Env. Зрелые полипептиды gp120 дикого типа содержат приблизительно 500 аминокислот в своей первичный последовательности. Gp120 является сильно N-гликозилированным, что обуславливает кажущуюся молекулярную массу 120 кДа. Аминокислотная последовательность gp120 приблизительно составляет 511 аминокислот. Gp120 содержит пять относительно консервативных доменов (C1-C5), диспергированных с пятью вариабельными доменами (V1-V5). Вариабельные домены содержат много аминокислотных замен, вставок и делеций. "Полипептид gp120" содержит отдельные субъединицы и мультимеры. Участок gp41 закреплен (и пронизывает) мембранный бислой вириона, тогда так сегмент gp120 выступает в окружающую среду. Рецептор-связывающий домен gp120 расположен на N-концевой половине белка. За ним следует пролин-богатая область (PRR), которая, как предполагают, действует как шарнирная область или инициатор взаимодействия связывания рецептора с комплексом слияния. C-конец gp120 является высококонсервативным и взаимодействует с gp41. Примерные последовательности полипептидов gp160 дикого типа являются доступными. См. номера доступа GeneBank AAB05604 и AAD12142.
Рандомизацию гена env можно проводить по полной последовательности гена env или, предпочтительно, по части гена env, которая соответствует кодирующей области gp120, т.к. она представляет собой молекулу, которая взаимодействует с рецептором на клетки-мишени и которая является лучшим кандидатом для связывания с антителами с нейтрализующей активностью. Кроме того, рандомизацию области гена env, кодирующей gp120 можно проводить по полной последовательности, или она может быть направленной к одному или более доменам полипептида gp120. Таким образом, способ RIS по изобретению предусматривает использование библиотеки ВИЧ, получаемой рандомизацией в любой из консервативных петель (C1-C5) gp120, в любой из вариабельных петель (V1-V5) в gp120 или в предпочтительной комбинации консервативных областей и вариабельных петель. В предпочтительном варианте осуществления рандомизацию проводят по всему гену env. В другом варианте осуществления рандомизацию проводят в области гена env, соответствующей gp120. В другом варианте осуществления рандомизацию проводят в областях гена env, соответствующих областям V1 и/или V2 gp120.
Для введения мутации в молекулу нуклеиновой кислоты можно использовать любые способы мутагенеза. См. Sambrook J, et al., “Molecular Cloning. A Laboratory Manual” (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, US, 1989), Bishop T, et al., “Nucleic Acid and Protein Sequence. A Practical Approach” (IRL Press, Oxford, England, 1987), Reznikoff W, Ed., “Maximizing Gene Expression” (Butterworths Publishers, Stoneham, MA, US, 1987), Davis L, et al., “Basic Methods in Molecular Biology” (Elsevier Science Publishing Co., New York, NY, US, 1986), Schleef M, Ed., “Plasmid for Therapy and Vaccination” (Wiley-VCH Verlag GmbH, Weinheim, Germany 2001), Adereth Y, et al., Biotechniques 2005, 38:864-868, Allan J, et al., Biotechniques 1995; 18:746-750, Bubeck A, et al., J. Virol. 2004, 78:8026-8035, Doran B, патентная публикация США 20070111201, Locher C, et al., DNA Cell Biol. 2005; 24:256-263, Vasl J, et al., Biotechniques 2004; 37:726-730, Weiss G, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000; 97:8950-8954, и Delcourt M, US 6924112. Стратегии мутагенеза включают случайный мутагенез, Ala-сканирующий мутагенез, сайт-специфический мутагенез и химерную рекомбинацию. Наборы и службы для проведения мутагенеза являются коммерчески широкодоступными.
Термин "антитела с нейтрализующей активностью" включает подкласс BNAb. Как используется в настоящем изобретении под "антителом с нейтрализующей активностью с широким спектром действия" или "BNAb" понимают антитело, получаемое любым способом, которое при доставке в эффективной дозе можно использовать в качестве терапевтического средства для профилактики или лечения инфекции ВИЧ или СПИД, против более 7 штаммов ВИЧ, предпочтительно, более 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более штаммов ВИЧ. Подходящие антитела с нейтрализующей активностью, которые можно использовать в способе RIS по настоящему изобретению включают, но ими не ограничиваются, антитела, направленные против мембрано-проксимального внешнего региона (MPER), антитела, направленные против участка связывания CD4, и антитела, направленные против гликанов с высоким содержанием маннозы. В предпочтительных вариантах осуществления антитела с нейтрализующей активностью, которые можно использовать в способе RIS по настоящему изобретению включают одно или более антител, выбранных из группы, состоящей из:
a) антитела 4E10, которое распознает сегмент эктодомена gp41, прилежащего к вирусной мембране. См. Cardoso R, et al., Immunity, 2005, 22:163-173, номер доступа PHSL 90091703, каталожный номер NIH ARRRP 10091 и Katinger H, et al., US 5753503;
b) антитела 2F5, которое распознает сегмент эктодомена gp41, прилежащего к вирусной мембране. См. Ofek G. et al., J. Virol., 2004, 78:10724-10737, номер доступа PHSL 90.091704, каталожный номер NIH ARRRP 1475 и Katinger, выше;
c) антитела, описанного в EP 0822941, связывающегося с двумя различными антигенными детерминантами ВИЧ-1, где антигенные детерминанты представляют собой фрагменты gp160 и соответствуют аминокислотным последовательностям 79-184 и 326-400 процессированного gp120 изолята ВИЧ-1 BH10. См. номера доступа PHSL 95032240 и 95032241;
d) 2G12, которое распознает углеводороды на внешней поверхности gp120 (mAb 2G12). См. Trkola A, et al., J. Virol., 1996, 70:1100-1108, номер доступа EACC 93091517 и NIH ARRRP каталожный номер 1476;
e) антитела b12, которое распознает участок связывания CD4. См. Burton D, et al., Science, 1994, 266: 1024-1027, каталожный номер NIH ARRRP 2640 и Burton D, et al., EP 0675904; и
f) антител с нейтрализующей активностью PG9, PG16, PG20, PGG14 и PGC14. См. Chan-Hui P, et al., WO2010107939.
Способы определения, является ли антитело антителом nAb, описаны в данной области. Некоторые из этих способов основаны на определении уменьшение эффекта антитела, экспрессии репортерного гена после одного круга вирусной инфекции с использованием получающей клеточной линии, которая кодирует репортерный ген. См. Li, 2005, Wei, 2003, Montefiori, 2005, выше и Alvin C. WO2009117661.
Нейтрализующую способность антител для применения по настоящему изобретению можно охарактеризовать IC50 (т.е. концентрацией антитела, которая вызывает 50% снижение инфекции клетки-мишени). Предпочтительно, антитела с нейтрализующей активностью для применения по настоящему изобретению обладают IC50 2 мкг/мл или менее (менее 0,15 мкг/мл, менее 0,125 мкг/мл, менее 0,10 мкг/мл, менее 0,075 мкг/мл, менее 0,05 мкг/мл, менее 0,025 мкг/мл, менее 0,02 мкг/мл, менее 0,015 мкг/мл, менее 0,0125 мкг/мл, менее 0,01 мкг/мл, менее 0,0075 мкг/мл, менее 0,005 мкг/мл или менее 0,004 мкг/мл (концентрация антитела 10-8 или менее, предпочтительно, 10-9 M или менее, предпочтительно, 10-10 M или менее, т.е. 10-11 M, 10-12 M, 10-13 M или менее). Это означает, что для 50 процентной нейтрализации клинического изолята ВИЧ in vitro необходимы только очень низкие концентрации антитела. Активность может быть измерена стандартным анализом нейтрализации, как описано в данной области.
Стадию приведения в контакт проводят в условиях, достаточных для того, чтобы члены библиотеки рекомбинантных вирусов, которые способны специфически связываться с антителами с нейтрализующей активностью, фактически связывались с указанными антителами.
Как используется в настоящем изобретении термин "специфически связываться" (или его производные) относится к взаимодействию между связывающимися парами (например, двумя белками или соединениями). В некоторых вариантах осуществления константа аффинности взаимодействия составляет не более 10-6 моль/литр, не более 10-7 моль/литр или не более 10-8 моль/литр. В основном фраза "специфически связывается" относится к специфическому связыванию одного соединения с другим, где уровень связывания, как измерено стандартным анализом (например, иммунологическим анализом), является статистически значимо выше контрольного фонового значения анализа.
Условия во время стадии приведения в контакт специалист в данной области может определять общепринятым способом. Примерные условия "приведения в контакт" могут включать инкубацию в течение от 15 минут до 4 часов (например, один час при 4°C, 37°C или при комнатной температуре). Однако их можно изменять при необходимости в зависимости, например, от природы взаимодействующих партнеров по связыванию. Образец можно необязательно и, предпочтительно, подвергать аккуратному встряхиванию, перемешиванию или вращению. Кроме того, можно добавлять другие соответствующие реагенты, такие как блокирующие средства, для снижения неспецифического связывания. Например, можно использовать 1-4 процентный BSA или другое подходящее блокирующее средство (например, молоко). Следует понимать, однако, что специалист может изменять и адаптировать условия для приведения в контакт в зависимости от цели способа скрининга. Например, если температура инкубации, например, составляет комнатную температуру или 37°C, это может повышать возможность идентификации связывающих средств, которые являются стабильными в этих условиях (например, в случае инкубации при 37°C, связывающие средства, которые являются стабильными в условиях, встречающихся в организме человека). Такое свойство может быть чрезвычайно полезным, если один или оба партнера по связыванию представляют собой кандидат для применения в некоторых видах терапевтического применения (например, антитело). Такие адаптации входят в компетенцию специалиста.
В предпочтительном варианте осуществления антитело с нейтрализующей активностью, используемое на стадии приведения в контакт, можно иммобилизовать на твердой подложке различными способами, известными специалистам в данной области, которые подробно описаны в патентной и научной литературе. Твердая подложка может представлять собой любое известное специалистам в данной области вещество, для которого известно, что на нем можно фиксировать антитело. Например, твердая подложка может представлять собой стенку тестового планшета для микротитрования или нитроцеллюлозный фильтр, или другую подходящую мембрану. Альтернативно, подложка может представлять собой гранулу или диск, такой как из стекла, стеклопластика, латекса или пластикового материала, такого как полистирол или поливинилхлорид. Подложка также может представлять собой магнитную частицу или волоконный оптический сенсор. См. Jorgenson R, et al., US 5359681.
Антитело можно иммобилизовать на твердой подложке различными способами, известными специалисту в данной области, которые подробно описаны в патентной и научной литературе. В контексте настоящего изобретения иммобилизация включает нековалентную связь, такую как адсорбция, и ковалентное связывание (которое может представлять собой прямую связь между антигеном и функциональными группами на подложке или может представлять собой связь посредством перекрестносшивающего средства). Предпочтительной является иммобилизация посредством адсорбции в лунке планшета для микротитрования или на мембране. В таких случаях адсорбцию можно получать приведением в контакт антитела в подходящем буфере с твердой подложкой в течение подходящего количества времени. Время приведения в контакт зависит от температуры, но, как правило, составляет приблизительно от 1 часа до 1 суток. В одном из вариантов осуществления приведение в контакт лунки пластикового планшета для микротитрования (такого как из полистирола или поливинилхлорида) с количеством антитела в диапазоне приблизительно от 10 нг приблизительно до 1 мкг и, предпочтительно, приблизительно 100-200 нг является достаточным для иммобилизации подходящего количества полипептида.
Ковалентное связывание антитела с твердой подложкой можно также получать сначала взаимодействием подложки с бифункциональным реагентом, который взаимодействует с подложкой и функциональной группой, такой как гидроксильная группа или аминогруппа, на антителе. Например, антитело можно ковалентно связывать с подложками, содержащими соответствующее полимерное покрытие, с использованием бензохинона или путем конденсации альдегидной группы на подложке с амином и активным водородом на партнере по связыванию хорошо известными способами.
Альтернативно, вместо иммобилизации антитела с нейтрализующей активностью ковалентно или нековалентно на подложке в изобретение предусмотрена возможность иммобилизации антитела посредством связывания с первым специфическим к Fc антителом или фрагментом антитела против Fc, который предварительно иммобилизовали на подложке. В дополнение к облегчению иммобилизации антитела первое антитело располагает антитело с нейтрализующей активностью так, чтобы повышать процент иммобилизованного антитела, которое является активным для связывания с членами вирусной библиотеки. Например, иммобилизацию можно проводить сначала приведением в контакт антитела, которое иммобилизовали на твердой подложке, как правило, в лунке планшета для микротитрования, с библиотекой, таким образом, чтобы обеспечить тем вирусам в библиотеке, которые обладают аффинностью к образцу антитела с нейтрализующей активностью, связывание с иммобилизованным антителом. Затем удаляют несвязавшийся образец из иммобилизованных комплексов антитело-вирус. Более конкретно, после того, как антитело иммобилизуют на подложке, как описано выше, как правило, оставшиеся участки связывания белка на подложке являются блокированными.
A.2 Стадия разделения
На второй стадии способ RIS по изобретению включает отделение тех членов библиотеки рекомбинантных вирусов, которые связываются с антителом с нейтрализующей активностью, от членов, которые не связываются, на основании их способности связываться с антителом с нейтрализующей активностью.
Указанная стадия разделения может относиться к физическому разделению (например, на гранулах или FACS) или удалению твердой фазы из реакционной смеси, или может относиться к стадии, в которой твердую фазу подвергают одной или более стадиям промывания для удаления других компонентов реакционной смеси. В вариантах осуществления, где проводят физическое разделение или удаление твердой фазы, предпочтительно, затем твердую фазу также подвергают одной или более стадиям промывания.
Стадии промывания можно проводить любым подходящим образом в зависимости от природы твердой фазы и взаимодействующих партнеров по связыванию, связанных с ней. Специалисту в данной области хорошо известны подходящие способы промывания твердых фаз в форме частиц. Например, если твердая фаза является фазой в форме частиц, то стадии промывания можно проводить центрифугированием частиц в таких условиях, что они образуют осадок при удалении супернатанта. Затем частицы можно ресуспендировать в подходящей водной среде (например, в той же среде, используемой на стадии приведения в контакт). Жесткость промываний (или фактически стадии приведения в контакт) можно модифицировать добавлением подходящих реагентов, хорошо известных специалисту в данной области (например, Tween), например, для снижения фонового или неспецифического связывания. Такие стадии осаждения и ресуспендирования представляют собой одно промывание. Можно проводить любое подходящее число промываний. Однако если твердая фаза представляет собой ферромагнетик, тогда подходящим способом проводят стадии промывания, применяя магнитное поле к сосуду, в котором проводили стадию приведения в контакт, удаляя супернатант и ресуспендируя твердую фазу в подходящей водной среде. Такие стадии магнитного разделения и ресуспендирования представляют собой одну стадию промывания, и можно проводить любое подходящее число промываний. Если твердая подложка не является на основе частиц (например, представляет собой плоскую поверхность, такую как пластина, чашка или фильтр), то специалисту в данной области также известны подходящие способы промывания таких твердых фаз.
Следует отметить, что также как и описанные выше необязательные стадии промывания в способе RIS одну или более стадий промывания также можно проводить на любой другой подходящей стадии. Например, одну или более стадий промывания твердых фаз также можно проводить после того, как проводят любую стадию иммобилизации, например, для удаления антител с нейтрализующей активностью, которые не связались с твердой фазой. Фактически такие стадии промывания являются предпочтительными. Также, одну или более стадий промывания можно проводить на твердых фазах в другие подходящие моменты времени во время проведения способа удаления, например, несвязавшихся молекул. Специалист в данной области может легко определять число необходимых промываний.
После того как удаляют компоненты реакционной смеси, которые слабо связываются или неспецифически связываются с антителами с нейтрализующей активностью, в заключении проводят стадию разделения, элюируя те члены библиотеки рекомбинантных вирусов, которые связались специфически с антителами с нейтрализующей активностью. В зависимости от типа иммобилизации указанную стадию элюирования можно проводить любым подходящим способом, таким как, например, с использованием щелочного детергента или аналогичного средства, которое разрывает нековалентные связи, с последующей нейтрализацией, предоставляя возможность взаимодействующим партнерам повторно сворачиваться и связываться друг с другом. В случае биотиновых меток, как правило, содержащие такие метки конструкции библиотеки конструируют так, чтобы они содержали своего рода участок расщепления, такой как участок протеазы, участок распознавания рестрикционного фермента или расщепляемую S-S линкерную группу, которую можно открывать дитиотреитолом (DTT). Также можно использовать TEA. Участок расщепления, такой как описанный выше участок, можно использовать с любым типом метки для обеспечения или облегчения элюирования.
Высвобождение вирусов из антитела с нейтрализующей активностью в результате стадии элюирования можно проводить, как правило, определяя наличие одного или более полипептидов вируса в супернатанте. В предпочтительном варианте осуществления анализируемый полипептид представляет собой капсидный полипептид вируса. Когда используют библиотеку ВИЧ, в частности, неограничивающие примеры белков ВИЧ, которые могут быть подходящими для использования в вариантах осуществления, представленных в настоящем описании, включают белки gag ВИЧ p53, p24, p17, p7, p6, p2 или p1, гликопротеины env ВИЧ gp120, gp41 или gp160, ферменты ВИЧ, включая интегразу (p31), обратную транскриптазу (p51 или p66), РНКазу H (p15), протеазу (p10), белки nef ВИЧ (p25/p27), белок vif ВИЧ p23, белок rev ВИЧ p19, белок vpr ВИЧ (p12/p10), белок vpu ВИЧ (p16) или белки tat ВИЧ (p16/p14). В предпочтительном варианте осуществления полипептид ВИЧ, анализируемый для того, чтобы выяснить эффективно ли элюируется отобранный вирус из антитела с нейтрализующей активностью, представляет собой p24.
Как используется в настоящем изобретении термин "p24 ВИЧ" относится к продукту гена области gag ВИЧ, охарактеризованного как обладающий кажущейся относительной молекулярной массой приблизительно 24000 Дальтон. Термин "p24 ВИЧ" также относится к модификациям и фрагментам p24, обладающим иммунологической активностью p24.
P24 может быть измерен ферментативными иммунологическими анализами, тогда как для детекции связывания p24 необходима предварительная обработка кислотой для диссоциации комплекса. Хотя способы изменяются в зависимости от производителей, в тестах антигена p24 ВИЧ используют способ ELISA с модификациями для детекции антигена, а не антитела. В характерном анализе, таком как типа "антитело-сэндвич", специфическое моноклональное антитело против p24 ВИЧ является связанным с твердой фазой (лункой планшета для микротитрования или полистирольными гранулами), действует, "захватывая" вирусный антиген в образце при добавлении. Для разрушения вирионов добавляют детергент (например, Triton X100), и если антиген содержится в среде, антиген свяжется с моноклональным антителом на твердой фазе.
A.3 Стадия детекции
На третьей стадии способ RIS по изобретению включает определение последовательности указанного вариантного пептида, находящегося на поверхности вируса на тех членах библиотеки, которые отобраны на стадии (ii).
После того как один или более наборов взаимодействующих членов вирусной библиотеки отобрали или выделили способами по изобретению, их подвергают дополнительному анализу. Для указанного дополнительного анализа или применений, как правило, кандидатные партнеры по связыванию необходимо отделять, удалять, выделять или элюировать из антитела с нейтрализующей активностью и дополнительно экспрессировать или продуцировать. Таким образом, способ по настоящему изобретению дополнительно включает стадию, где указанные члены вирусной библиотеки, способные специфически взаимодействовать с антителом с нейтрализующей активностью, отделяют, удаляют, элюируют или, предпочтительно, выделяют или экспрессируют, или продуцируют раздельно друг от друга. Указанный дополнительный анализ, как правило, включает выделение индивидуальных взаимодействующих членов библиотеки путем выделения РНК из связавшихся вирусов, обратную транскрипцию вирусной РНК в кДНК и клонирование указанной кДНК в подходящий вектор экспрессии.
После того как ДНК, кодирующую партнеры по связыванию, клонируют в подходящий вектор экспрессии, можно секвенировать ДНК, кодирующую партнер по связыванию, или можно экспрессировать белок в растворимой форме и подвергать соответствующим исследованиям связывания для дальнейшей характеристики кандидатов на уровне белков. Соответствующие исследования связывания зависят от природы партнеров по связыванию и включают, но не ограничиваются ими, ELISA, фильтрационные анализы скрининга, FACS или иммунофлуоресцентные анализы, измерение аффинности BiaCore или другие способы количественного определения константы связывания, окрашивание срезов ткани или клеток и другие иммуногистохимические способы. Такие способы хорошо описаны в литературе, и для анализа выбранных вариантов белка оболочки можно использовать один или более из них.
Как указано выше, в данной области известны подходящие способы анализа индивидуальных взаимодействующих партнеров по связыванию. Один из предпочтительных способов представляет собой секвенирование генетического материала вирусов библиотеки, которые специфически связываются с антителом с нейтрализующей активностью.
Как правило, в случае ретровирусов, которые в качестве генетического материала содержат РНК, стадия детекции включает выделение РНК, обратную транскрипцию РНК с получением одноцепочечной кДНК, обработку одноцепочечной ДНК с получением двухцепочечной ДНК и клонирование двухцепочечной кДНК в выбранный вектор и секвенирование кДНК.
Обратную транскрипцию проводят известными специалисту способами и можно проводить изотермически, а также с использованием термостабильной РНК-полимеразы в присутствии РНК-зависимой ДНК-полимераза, включая, но ими не ограничиваясь, AMV, клонированный AMV, MMLV, SuperscriptII, ReverTraAce, обратную транскриптазу Tth, обратную транскриптазу гепатита B, обратную транскриптазу вируса мозаики цветной капусты, бактериальную обратную транскриптазу и Thermoscript. Используемые в настоящем изобретении ферменты включают такие, которые обладают сниженной, по существу сниженной или полностью удаленной активностью РНКазы H. Под ферментом с "по существу пониженной активностью РНКазы H" подразумевают фермент, который обладает менее приблизительно 20%, предпочтительно, менее приблизительно 15%, 10% или 5% и, наиболее предпочтительно, менее приблизительно 2% активности РНКазы H соответствующего фермента дикого типа или РНКазы H+, такого как обратные транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (M-MLV) дикого типа, вируса миелобластоза птиц (AMV) или вируса саркомы Рауса (RSV). Активность РНКазы H любого фермента можно определять различными известными анализами. См. Kotewicz M, et al., Nucl. Acids Res., 1988, 16:265-277, Gerard G, et al., Focus 1992, 14(5):91-93 и Kotewicz M, et al., US 5244797. Особенно предпочтительные полипептиды для применения в изобретении включают, но не ограничиваются ими, обратную транскриптазу M-MLV, обратную транскриптазу RSV, обратную транскриптазу AMV, обратную транскриптазу RAV (Раус-связанного вируса), обратную транскриптазу MAV (связанного с миелобластозом вируса) и обратную транскриптазу ВИЧ. См. Kotewicz M, et al., US 5244797 и Gerard G, et al., WO1998047912. Однако специалисту в данной области следует понимать, что в композициях, способах и наборах по изобретению можно эквивалентно использовать любой фермент, способный продуцировать молекулу ДНК из молекулы рибонуклеиновой кислоты (т.е. обладающий активностью обратной транскриптазы).
Одноцепочечную кДНК можно обрабатывать таким образом, чтобы получать известным в данной области способом двухцепочечную ДНК. Предпочтительно, конверсию одноцепочечной кДНК в двухцепочечную ДНК проводят способами амплификации in vitro, такими как полимеразная цепная реакция (ПЦР), лигазная цепная реакция (LCR), амплификация на основе последовательности нуклеиновой кислоты (NASBA), амплификация с замещением цепей (SDA), опосредованная транскрипцией амплификация (TMA), технология разветвленной ДНК (bDNA), амплификация ДНК с помощью линкера (LADA), амплификация с использованием репликазы Q-бета (Q-бета), изотермическая амплификация с формированием петель (LAMP) и способ амплификации по типу катящегося кольца (RCAT) или другие способы ферментативной амплификации in vitro. Стадию амплификация проводят с использованием праймеров, соответствующих последовательностям адаптерных областей. Получаемую двухцепочечную ДНК можно очищать с использованием колонки для очистки, электромагнитных гранул, к которым присоединяют праймер, или посредством электрофореза на агарозном геле.
Получаемую двухцепочечную ДНК затем можно встраивать известными в данной области способами в выбранный вектор. В предпочтительном варианте осуществления используемые на стадии ПЦР-амплификации праймеры содержат в своих 5'-областях участки-мишени для рестрикционных эндонуклеаз, которые образуют совместимые концы с концами, содержащимися в выбранном векторе. Участки-мишени эндонуклеазы обеспечивают образование липких концов, которые можно использовать для клонирования полинуклеотидов в подходящие векторы.
Стадию секвенирования можно проводить любыми известными способами секвенирования, такими как химическое секвенирование (по Максаму-Гилберту), дидезокси-секвенирование по Сэнгеру, пиросеквенирование, секвенирование с детекцией флуоресценции и секвенирование ДНК с использованием масс-спектрометрии.
B. Иммуногенные полипептиды, полинуклеотиды, векторы и клетки-хозяева
Способ быстрого отбора иммуногенов (RIS) по настоящему изобретению обеспечивает идентификацию полипептидов, которые представляют собой варианты полипептида, находящегося на поверхности вируса, и которые являются кандидатами для индукции антител с нейтрализующей активностью и, таким образом, для их применения в качестве иммуногенных композиций или вакцин. Таким образом, в другом аспекте изобретение относится к полипептидам, идентифицируемым способом по изобретению.
Термин "полипептид", который используют взаимозаменяемо с белком в настоящем описании, относится к цепочке аминокислот любой длины, где различные аминокислоты связаны друг с другом посредством пептидных связей или дисульфидных мостиков.
В конкретном случае, где вирус, отобранный способом по изобретению, представляет собой ретровирус, полипептид представляет собой вариант белка оболочки. В предпочтительном варианте осуществления ретровирус представляет собой ВИЧ, и полипептид по настоящему изобретению представляет собой вариант gp120.
Идентифицированный способом RIS по изобретению полипептид, предпочтительно, содержит по меньшей мере мутацию в области, выбранной из группы, состоящей из константной области C1, вариабельной области V1, вариабельной области V2, константной области C2, константной области C5 и эктодомена gp41.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в константной области C1 представляет собой мутацию в положении 88. В более предпочтительном варианте осуществления мутированный остаток в положении 88 представляет собой Asp. В еще более предпочтительном варианте осуществления мутация в константной области C1 представляет собой мутацию N88D.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в вариабельной области V1 представляет собой мутацию в одном или более положений, выбранных из группы, состоящей из положений 131, 132 и 138. В более предпочтительном варианте осуществления мутированные остатки в положениях 131, 132 и 138 в области V1 представляют собой Y, N и/или G, соответственно. В еще более предпочтительном варианте осуществления мутация в области V1 представляет собой C131Y, T132N и/или D138G.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в вариабельной области V2 представляет собой мутацию в одном или более положений, выбранных из группы, состоящей из положений 160 и 187. В более предпочтительном варианте осуществления мутированные остатки в области V2 представляют собой Y в положении 160 и/или Asp в положении 187. В еще более предпочтительном варианте осуществления мутация в области V2 представляет собой N160Y и/или N191D.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в константной области C2 представляет собой мутацию в положении 219. В более предпочтительном варианте осуществления мутированный остаток в положении 219 в области C2 представляет собой Val. В еще более предпочтительном варианте осуществления мутация в области C2 представляет собой I219V.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в константной области C5 представляет собой мутацию в одном или более положений, выбранных из группы, состоящей из положений 479 и 507. В более предпочтительном варианте осуществления мутированные остатки в положениях 479 и 507 в области C5 представляют собой Ile и Trp, соответственно. В еще более предпочтительном варианте осуществления мутация в области C5 представляет собой M475I и/или R507W.
В более предпочтительном варианте осуществления вариант gp120 или его фрагмент по изобретению несет мутации C131Y, T132N, D138G и N160Y.
В более предпочтительном варианте осуществления вариант gp120 или его фрагмент по изобретению несет мутации N88D, C131Y, T132N, D138G, N160Y, N191D, A226V, M479I, R507W и Y647N.
В другом варианте осуществления вариант gp120 или его фрагмент по изобретению несет мутации N203S и G604E.
В более предпочтительном варианте осуществления мутация в эктодомене gp41 представляет собой T643N.
Нумерация указанных выше положений относится к последовательности белка-предшественника gp160, кодируемого геном env (SEQ ID NO:1) изолята AC10HXb2 ВИЧ, проиллюстрированного в SEQ ID NO:2, который кодируется геном env, проиллюстрированным в SEQ ID NO:1. См. Li, 2005, выше и номер доступа NCBI AY835446.
В предпочтительном варианте осуществления иммуногенный полипептид по изобретению содержит полипептид env изолята LR1-C1 (SEQ ID NO:4), кодируемый полинуклеотидом SEQ ID NO:3, или его фрагмент. Изолят LR1-C1 содержит мутации N88D, C131Y, T132N, D138G, T132N, N160Y, N191D, A226V, M479I, R507W и Y647N в отношении нумерации SEQ ID NO:2.
В предпочтительном варианте осуществления иммуногенный полипептид по изобретению содержит полипептид env клона 10, выделяемого с использованием антитела PG16 (SEQ ID NO:31), или его фрагмент. Для модифицированной последовательности показаны мутации N203S и G604E.
В предпочтительном варианте осуществления иммуногенный вариант gp120 по изобретению или его фрагмент содержит последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, и SEQ ID NO:31.
Хотя мутанты gp120, обладающие повышенной аффинностью по отношению к антителам с нейтрализующей активностью, определяемые в настоящем описании, выделяли из изолята AC10 ВИЧ (номер доступа NCBI AY835446 и ген env, показанный в SEQ ID NO:1), следует понимать, что иммуногенные полипептиды по настоящему изобретению можно получать из других изолятов ВИЧ, заменой соответствующих положений в гене env указанных других изолятов ВИЧ. Соответствующие положения в других изолятах ВИЧ можно определять без каких-либо трудностей с использованием любого подходящего для выравнивания последовательностей алгоритма.
Способы выравнивания последовательностей для сравнения хорошо известны в данной области. Оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения можно проводить, например, алгоритмом локальной гомологии Смита-Уотермана, алгоритмом гомологичного выравнивания Нидлмана-Вунша, способом поиска сходства Пирсона-Липмана, компьютеризированными реализациями этих алгоритмов или выравниванием ручным способом и визуальной проверкой. См. Smith T., Waterman M., Adv. Appl. Math. 1981, 2:482-489, Needleman S., Wunsch C., J. Mol. Biol., 1970, 48:443-453, Pearson W., Lipman D., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85:2444-2448, программы GAP, BESTFIT, FASTA и TFASTA, пакет программного обеспечения Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, Madison, WI, US, Ausubel F. et al., Eds, "Short Protocols in Molecular Biology", 4th Ed. (John Wiley and Sons, Inc., New York, NY, US).
"Фрагмент" представляет собой уникальный участок полинуклеотида, кодирующего полипептид оболочки ВИЧ-1 по настоящему изобретению более короткой длины, чем исходная последовательность. Аналогично, термин "фрагмент" относится к полипептиду оболочки ВИЧ-1 по настоящему изобретению, содержащему вплоть до полной длины определенной пептидной последовательности минус один аминокислотный остаток и кодирующую его нуклеотидную последовательность. Например, фрагмент может содержать от 5 до 2500 смежных нуклеотидов или аминокислотных остатков. Длина используемого в качестве фрагмент зонда, праймера, антигена, терапевтической молекулы или для других целей фрагмента может составлять по меньшей мере 5, 10, 15, 16, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 100, 150, 250, 500 или по меньшей мере 700 смежных нуклеотидов или аминокислотных остатков. Фрагменты, предпочтительно, можно выбирать из определенных участков молекулы. Например, полипептидный фрагмент может содержать определенные длины смежных аминокислот, выбранных из первых 250 или 500 аминокислот (или первых 25 процентов или 50 процентов) полипептида, как показано в определенной указанной последовательности. Понятно, что эти длины являются примерными, и любая длина, которая основана на описании, включая список последовательностей, таблицы и фигуры, может входить в настоящие варианты осуществления.
Настоящее изобретение относится к конструкциям нуклеиновой кислоты, содержащим полинуклеотидные последовательности, которые кодируют антигенные полипептиды gp120 ВИЧ-1. Эти полинуклеотиды включают последовательности ДНК, кДНК и РНК, которые кодируют полипептид, представляющий интерес.
Термин "полинуклеотид", как используют в настоящем изобретении, относится к полимеру, образованному различным числом мономеров, где мономеры представляют собой нуклеотиды, включая рибонуклеотиды и дезоксирибонуклеотиды. Полинуклеотиды включают мономеры, модифицированные метилированием, а также немодифицированные формы. Термины "полинуклеотид" и "нуклеиновая кислота" в настоящем изобретении используют взаимозаменяемо, и они включают мРНК, кДНК и рекомбинантные полинуклеотиды. Как используют в настоящем изобретении, полинуклеотиды не ограничены полинуклеотидами, к которым они принадлежат по природе, а включают полинуклеотиды, содержащие неприродные нуклеотидные аналоги и внутринуклеотидные связи.
Способы манипуляции и встраивания нуклеиновых кислот по настоящему изобретению в векторы хорошо известны в данной области. См. Sambrook, 1989, выше и Ausubel F. et al., Eds., "Short Protocols in Molecular Biology", 4th Ed. (John Wiley and Sons, Inc., New York, NY, US, 2002).
Как правило, конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды gp120 по изобретению, представляют собой плазмиды. Однако для репликации нуклеиновых кислот можно использовать другие векторы (например, вирусные векторы, фаг, космиды). В контексте настоящего изобретения конструкции нуклеиновой кислоты, как правило, представляют собой векторы экспрессии, которые содержат промоторную последовательность, которая облегчает эффективную транскрипцию встроенной генетической последовательности. Вектор экспрессии, как правило, содержит участок начала репликации, промотор, а также конкретные последовательности нуклеиновой кислоты, которые обеспечивают возможность отбора по фенотипу трансформированных клеток.
В более общем смысле, полинуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды gp120 по настоящему изобретению, могут быть функционально связанными с любым промотором и/или энхансером, способным стимулировать экспрессию нуклеиновой кислоты после введения в клетку-хозяина. Промотор представляет собой ряд контролирующих последовательностей нуклеиновой кислоты, который направляет транскрипцию нуклеиновой кислоты. Промотор содержит обязательные последовательности нуклеиновой кислоты (которые могут находиться) вблизи участка начала транскрипции, такие как в случае промотора полимеразы II типа (элемента TATA). Промотор также может содержать дистальный энхансер или репрессорные элементы, которые могут располагаться на расстоянии в несколько тысяч пар оснований от участка начала транскрипции. Включены как конститутивные, так и индуцибельные промоторы. См. Bitter G. et al., Meth. Enzymol. 1987, 153:516-544.
Для получения таких конструкций нуклеиновой кислоты полинуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды gp120, встраивают в подходящий вектор экспрессии, такой как плазмидный вектор экспрессии. Способы получения полинуклеотидных последовательностей, кодирующих полипептиды gp120, и манипулирования с ними in vitro хорошо известны специалистам в данной области. См. Sambrook, 1989 и Ausubel, 2002, выше.
Полинуклеотидные последовательности, кодирующие иммуногенный полипептид gp120, можно встраивать в вектор экспрессии, включая, но, не ограничиваясь ими, плазмиду, вирус или другой носитель, который можно обрабатывать таким образом, чтобы обеспечивать встраивание или включение последовательностей, и можно экспрессировать в прокариотах или эукариотах. Хозяева могут включать микробные, дрожжевые организмы, организмы насекомых и млекопитающих. Способы экспрессии последовательностей ДНК, содержащих эукариотические или вирусные последовательности, в прокариота хорошо известны в данной области. В данной области известны биологически функциональные вирусные и плазмидные ДНК векторы, способные к экспрессии и репликации в хозяине.
Трансформацию клетки-хозяина рекомбинантной ДНК можно проводить общепринятыми способами, которые хорошо известны специалистам в данной области. В случае, если хозяин является прокариотическим, таким как E. coli, компетентные клетки, которые способны к поглощению ДНК, могут быть получены из клеток, получаемых после фазы экспоненциального роста и затем обработанных способом CaCl2 с использованием хорошо известных в данной области способов. Альтернативно, можно использовать MgCl2 или RbCl. Трансформацию также можно проводить после получения протопласта клетки-хозяина при желании или посредством электропорации.
Когда хозяин представляет собой эукариота, можно использовать такие способы трансфекции ДНК, как копреципитаты фосфатом кальция, общепринятые механические способы, такие как микроинъекция, электропорация, введение плазмиды, инкапсулированной в липосомы или вирусные векторы. Эукариотические клетки также можно совместно трансформировать полинуклеотидными последовательностями, кодирующими иммуногенный полипептид gp120, и второй чужеродной молекулой ДНК, кодирующей селектируемый фенотип, такой как ген тимидинкиназы простого герпеса. Другой способ заключается в использовании эукариотического вирусного вектора, такого как вирус 40 обезьяны (SV40) или вирус папилломы крупного рогатого скота, для временной инфекции или трансформации эукариотических клеток и экспрессии белка. См. Gluzman Y, Ed., "Eukaryotic Viral Vectors" (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, US, 1982).
C. Антитела
Варианты gp120 и их фрагменты по настоящему изобретению также можно использовать для индукции антител, способных распознавать и нейтрализовать ВИЧ, когда вирус или его частицы содержатся в биологической жидкости индивидуума. Таким образом, в другом аспекте изобретение относится к антителу, которое специфически связывается с иммуногенным полипептидом по изобретению.
Как используют в настоящем изобретении, термин "антитело" относится к мономерному или мультимерному белку, который содержит по меньшей мере один полипептид, обладающий активностью связывания определенного антигена и содержащий все или часть вариабельной области легкой или тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина. Антитела по изобретению включают, но не ограничиваются ими, моноклональные антитела, моноспецифические антитела, поликлональные антитела, полиспецифические антитела, диатела, триатела, тетратела, антитела человека, гуманизированные антитела, камелизированные антитела, химерные антитела, одноцепочечные антитела, антитела с одним доменом, фрагменты Fab, фрагменты F(ab'), фрагменты F(ab')2, фрагменты Fv (т.е. наименьшие функциональные модули антитела), одноцепочечные Fv (scFv), стабилизированные дисульфидом Fv (dsFv), Fd, VH, VL, Vα, Vβ и антиидиотипические (антитела против Id) антитела (например, антитела против Id к антителам по изобретению), интратела и эпитопсвязывающие фрагменты любого из указанных выше. В некоторых вариантах осуществления антитела представляют собой моноклональные антитела. В других вариантах осуществления антитела представляют собой фрагменты Fv, содержащие VH и VL области.
Эти антитела могут быть получены общепринятыми способами с использованием пептидов по настоящему изобретению. См. Kieber-Emmons T, et al., WO1991004273. Например, поликлональные антитела могут быть получены, общепринято стимулируя иммунную систему выбранного животного одним или обоими из указанных выше пептидов или поливалентными конструкциями, обеспечивая то, что иммунная система продуцирует свойственные ей антитела, и собирая эти антитела из крови или другой биологической жидкости животного. Поликлональные антитела с высоким титром могут быть получены с использованием поливалентных конструкций, описанных выше в качестве антигенов. Получаемые антитела способны связываться с выбранным антигеном HTV, как только он появляется в биологических жидкостях инфицированного индивидуума.
Дополнительно, пептиды по настоящему изобретению также можно использовать для получения антител, которые можно использовать в качестве матриц для получения антиидиотипических антител, содержащих "внутренний образ" нейтрализующей эпитопной структуры, содержащейся в пептидной последовательности. Эти антитела, поликлональные или моноклональные, затем можно использовать в составах вакцин или при активной иммунотерапии. Таким образом, настоящее изобретение также относится к моноклональным или поликлональным антителам, которые несут пептиды "внутреннего образа", а также к способам получения таких антител. См. Kieber-Emmons, выше.
В случае если желательно получать и использовать моноклональные антитела (MAb) для композиций и способов по настоящему изобретению, могут быть получены гибридомные клеточные линии, экспрессирующие желаемые MAb, хорошо известными общепринятыми способами с использованием доступных линий опухолевых клеток. См. Kohler G, Milstein C., Nature, 1975, 256(5517):495-497.
Рекомбинантные антитела могут быть получены известными способами их получения. См. Huse W, et al., Science, 1989, 246:1275-1281. Желаемые антитела с высоким титром также могут быть получены, применяя известные рекомбинантные способы в отношении моноклональных или поликлональных антител, индуцируемых этими антигенами. См. Amit R. et al., Science, 1986, 233:747-753, Queen C, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 86:10029-10033, Riechmann L. et al., Nature, 1988, 332:323-327 и Barbas C., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89:4457-4461 и Winter P., GB 2188638.
D. Иммуногенные композиции, способные индуцировать антитела с нейтрализующей активностью
Вариантные полипептиды gp120 и молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды вариантов gp120, описываемые в настоящем описании, можно использовать в качестве иммуногенов или для получения иммуногенов для индукции иммунного ответа (иммуногенные композиции) против gp120 или экспрессирующего gp120 вируса для профилактики, уменьшения или борьбы, например, с инфекцией ВИЧ-1 или связанными с ней симптомами. После введения терапевтически эффективного количества описываемых терапевтических композиций можно наблюдать за индивидуумом в отношении инфекции ВИЧ-1, симптомов, связанных с инфекцией ВИЧ-1 или того и другого. Таким образом, в другом аспекте изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей вариантный полипептид gp120 ВИЧ-1 или его иммуногенный фрагмент по изобретению, кодирующий указанный полипептид полинуклеотид или вектор экспрессии, содержащий указанный полинуклеотид.
Подходящие иммуногенные фрагменты gp120, подходящие для использования в иммуногенных композициях, включают пептиды относительно малого размера, такого как приблизительно размером от 5 до 100 аминокислот, например, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 15, приблизительно 20, приблизительно 25, приблизительно 30, приблизительно 40, приблизительно 50, приблизительно 60, приблизительно 70, приблизительно 80, приблизительно 90 или приблизительно 100. Таким образом, в качестве иммуногенов можно использовать фрагменты (например, эпитопы или другие антигенные фрагменты) полипептида gp120, такого как любой из описываемых в настоящем описании полипептидов gp120 или его фрагмент.
Термин "иммуногенная композиция" относится к композиции, которая индуцирует иммунный ответ, который продуцирует антитела или клеточно-опосредованные иммунные ответы против конкретного иммуногена. Инъецируемые композиции могут быть получены, например, в виде жидких растворов, суспензий и эмульсий. Термин "антигенная композиция" относится к композиции, которую может распознавать иммунная система хозяина. Например, антигенная композиция содержит эпитопы, которые могут быть распознаны гуморальными (например, антителом) и/или клеточными (например, T-лимфоцитами) компонентами иммунной системы хозяина.
Термин "вакцина" относится к иммуногенной композиции для введения in vivo хозяину, который может представлять собой примата, в частности, являющегося человеком хозяина, для обеспечения защиты от заболевания, в частности, вирусного заболевания.
Иммуногенные композиции по изобретению являются подходящими для лечения или профилактики заболеваний, вызываемых инфекцией ВИЧ. В дополнительном аспекте изобретение относится к пептиду, нуклеиновой кислоте, вектору, иммуногенной композиции или вакцине по изобретению для применения при лечении или профилактики заболевания, обусловленного инфекцией ВИЧ-1. Альтернативно, изобретение относится к применению пептида, нуклеиновой кислоты, вектора, иммуногенной композиции или вакцины по изобретению для получения лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, обусловленного инфекций ВИЧ-1. Альтернативно, изобретение относится к способу для лечения или профилактики заболевания у индивидуума, обусловленного инфекцией ВИЧ-1, который включает введение указанному индивидууму пептида, нуклеиновой кислоты, вектора или иммуногенной композиции, или вакцины по изобретению.
Термин "лечение", как используют где-либо в настоящем описании, включает любой тип терапии, которая направлена на прекращение, профилактику, улучшение состояния и/или снижения подверженности клиническому состоянию, как описано в настоящем описании. В предпочтительном варианте осуществления термин лечение относится к профилактическому лечению (т.е. терапии для уменьшения подверженности клиническому состоянию, нарушению или состоянию, как определено в настоящем описании).
Таким образом, как используется в настоящем изобретении "лечение", "лечащий" и т.п. относятся к получению желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта, включающего любое лечение патологического состояния или нарушения у млекопитающего, включая человека. Эффект может быть профилактическим в отношении полного или частичного предотвращения нарушения или его симптома и/или может быть терапевтическим в отношении частичного или полного излечения нарушения и/или неблагоприятного воздействия, обусловленного нарушением. Другими словами, "лечение" включает (1) профилактику возникновения или повторного возникновения нарушения у индивидуума, (2) ингибирование нарушения, такое как задержка его развития, (3) купирование или прекращение нарушения или по меньшей мере симптомов, связанных с ним, таким образом, что хозяин больше не страдает от нарушения или его симптомом, таким образом, вызывая регрессию нарушения или его симптомов, например, восстанавливая или корригируя потерю, отсутствие или дефектную функцию, или стимулируя неэффективный процесс, или (4) облегчение, уменьшение или улучшение состояния нарушения или связанных с ним симптомов, где улучшение состояния используют в широком смысле для обозначения по меньшей мере восстановления величины параметра, такого как воспаление, боль и/или иммунодефицитного состояния.
Термины "предотвращать", "предотвращающий" и "профилактики", как используется в настоящем изобретении, относятся к снижению частоты возникновения патологических клеток у животного. Предотвращение может быть полным (например, полное отсутствие патологических клеток у индивидуума). Профилактика также может быть частичной так, что, например, частота возникновения патологических клеток у индивидуума составляет менее чем та, которая возникнет без настоящего изобретения. Предотвращение также относится к уменьшению подверженности клиническому состоянию.
Иммуногенные композиции по изобретению могут дополнительно содержат фармацевтически приемлемый носитель.
"Фармацевтически приемлемый носитель", "фармацевтически приемлемый разбавитель" или "фармацевтически приемлемый эксципиент", или "фармацевтически приемлемый носитель", используемые в настоящем описании взаимозаменяемо, относятся к нетоксическому твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему веществу или составу вспомогательного средства любого общепринятого типа. Фармацевтически приемлемый носитель является по существу нетоксичным для реципиентов в применяемых дозах и концентрациях и является совместимым с другими ингредиентами состава. Например, носитель для содержащего полипептиды состава обычно не содержит окислители и другие соединения, для которых известно, что они являются вредными для полипептидов. Подходящие носители включают, но не ограничиваются ими, воду, декстрозу, глицерин, физиологический раствор, этанол и их сочетания. Носитель может содержать дополнительные средства, такие как увлажняющее средство или эмульгаторы, средства для буферирования pH или адъюванты, которые усиливают эффективность состава. Адъюванты можно, например, выбирать из группы, состоящей из: AlK(SO4)2, AlNa(SO4)2, AlNH4(SO4), диоксида кремния, алюминия, Al(OH)3, Ca3(PO4)2, каолина, углерода, гидроксида алюминия, мурамилдипептидов, N-ацетил-мурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-DMP), N-ацетил-норнурамил-L-аланил-D-изоглутамин (CGP 11687, также обозначаемый как нор-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксфосфорилокси)этиламин (CGP 19835A, также обозначаемый как MTP-PE), RIBI (MPL+TDM+CWS) в 2 процентной эмульсии сквален/Tween-80®, липополисахаридов и их различных производных, включая липид A, полного адъюванта Фрейнда (FCA), неполных адъювантов Фрейнда, Merck Adjuvant 65, полинуклеотидов (например, поли-IC и поли-AU-кислот), воска D из Mycobacterium, tuberculosis, веществ, обнаруженных в Corynebacterium parvum, Bordetella pertussis и представителях рода Brucella, Titermax, ISCOMS, Quil A, ALUN, производных липида A, производныех холерного токсина, производных HSP, производных LPS, синтетических пептидных матриц или GMDP, интерлейкина 1, интерлейкина 2, Montanide ISA-51 и QS-21, олигонуклеотида CpG, поли I:C и GM-CSF. См. Hunter R., US 5554372 и Jager E., Knuth A., WO 1997028816.
Вариантный полипептид gp120 по изобретению можно ковалентно связывать с носителем, который представляет собой иммуногенную макромолекулу, с которой может связываться антигенная молекула. При связывании с носителем связанный полипептид становится более иммуногенным. Носители выбирают так, чтобы повышать иммуногенность связанной молекулы и/или индуцировать более высокие титры антител против носителя, которые являются эффективными с диагностической, аналитической и/или терапевтической точки зрения. Ковалентное связывание молекулы с носителем может обеспечивать повышенную иммуногенность и T-клеточную зависимость. См. Pozsgay V. et al., PNAS, 1999, 96:5194-5197, Lee S. et al., J. Immunol., 1976, 116:1711-1718 и Dintzis R. et al., PNAS, 1976, 73:3671-3675. Подходящие носители включают полимерные носители, которые могут представлять собой природные (например, полисахариды, полипептиды или белки из бактерий или вирусов), полусинтетические или синтетические вещества, содержащие одну или более функциональных групп, к которым можно присоединять реакционноспособную составную группу. Также в качестве носителей можно использовать бактериальные продукты и вирусные белки (например, поверхностный антиген и коровый антиген гепатита B), а также белки от высших организмов, такие как гемоцианин морского блюдца, гемоцианин мечехвоста, эдестин, сывороточные альбумины млекопитающих и иммуноглобулины млекопитающих. Дополнительные бактериальные продукты для применения в качестве носителей включают белки и другие продукты бактериальной стенки (например, клеточные стенки и липополисахарид (LPS) стрептококков или стафилококков).
Настоящее изобретение дополнительно относится к профилактики или уменьшению симптомов, связанных с инфекцией ВИЧ. Такие симптомы включают симптомы, связанные с малой симптоматической фазой инфекции ВИЧ, включая, например, опоясывающий лишай, кожную сыпь и инфекцию ногтей, стоматиты, рецидивирующую инфекцию носа и горла, и потерю массы. Кроме того, дополнительные симптомы, связанные с основной симптоматической фазой инфекции ВИЧ, включают, например, пероральную и вагинальную молочницу (Candida), персистирующую диарею, потерю массы, персистирующий кашель, реактивированный туберкулез и рецидивирующие инфекции герпеса, такие как герпетические лихорадки (простой герпес). Симптомы развернутой клинической картины СПИД, которые можно лечить в соответствии с настоящим изобретением, включают, например, диарею, тошноту и рвоту, молочницу и стоматиты, персистирующие рецидивирующие вагинальные инфекции и рак шейки матки, персистирующую генерализованную лимфаденопатию (PGL), тяжелые кожные инфекции, бородавки и трихофитоз, респираторные инфекции, пневмонию, в частности,, Pneumocystis carinii pneumonia (PCP), опоясывающий герпес (или опоясывающий лишай), проблемы нервной системы, такие как боли, онемение или "покалывание" в руках и ступнях, неврологические расстройства, саркому Капоши, лимфому, туберкулез и другие оппортунистические инфекции.
Положительное воздействие пептидов, нуклеиновых кислот и векторов по изобретению включает, например, предотвращение или замедление первоначальной инфекции индивидуума, подвергающегося воздействию ВИЧ, снижение вирусной нагрузки у индивидуума, инфицированного ВИЧ, продление бессимптомной фазы инфекции ВИЧ, поддержание низких вирусных нагрузок у инфицированных ВИЧ пациентов, у которых уровни вируса понизились вследствие антиретровирусной терапии (ART), увеличение уровней CD4 T-клеток или снижение уменьшения CD4 T-клеток, специфичных и неспецифичных к ВИЧ-1 у не получавших медикаментозного лечения пациентов и у пациентов, получавших лечение ART, увеличение общего здоровья или качества жизни индивидуума со СПИД и увеличение продолжительности жизни индивидуума со СПИД. Клиницист может сравнивать эффект иммунизации с состоянием пациента до лечения или с предполагаемым состоянием пациента, не получавшего лечение, для определения, является ли лечение эффективным в отношении ингибирования СПИД.
Иммуногенную композицию можно вводить любыми средствами, известными специалисту в данной области, такими как посредством внутримышечной, подкожной или внутривенной инъекции и перорального, назального или анального введения. См. Banga A., "Parenteral Controlled Delivery of Therapeutic Peptides and Proteins" в Therapeutic Peptides and Proteins (Technomic Publishing Co., Inc., Lancaster, PA, US, 1995). Для увеличения времени, в течение которого пептид или белок является доступным для стимуляции ответа, пептид или белок можно предоставлять в виде имплантата, инъекции на масляной основе или в виде системы твердых частиц. Система твердых частиц может представлять собой микрочастицу, микрокапсулу, микросферу, нанокапсулу или аналогичную частицу. См. Banga, 1995, выше. Показано, что носитель на основе частиц на основе синтетического полимера действует как адъювант, усиливая иммунный ответ в дополнение к обеспечению контролируемого высвобождения. Для индукции иммунного ответа в качестве адъювантов также можно использовать соли алюминия.
Иммуногенные композиции можно получать в стандартной лекарственной форме, подходящей для индивидуального введения точных доз. При пульсовых дозах обеспечивают болюсное введение иммуногенной композиции, которая содержит описываемый иммуноген, с последующим периодом времени, где индивидууму не вводят описываемый иммуноген, с последующим вторым болюсным введением. Терапевтически эффективное количество иммуногенной композиция можно вводить в однократной дозе или в многократных дозах, например, ежесуточно в течение курса лечения. В конкретных неограничивающих примерах пульсовые дозы иммуногенной композиции, которая содержит описываемый иммуноген, вводят в течение суток, в течение недели или в течение месяца.
Иммуногенные композиции можно вводить в тех случаях, когда эффект (такой как уменьшение признаков, симптома или результатов лабораторных исследований инфекции ВИЧ-1) является желательным. Как правило, доза является достаточной для лечения или уменьшения симптомов или признаков заболевания, не вызывая неприемлемой токсичности у индивидуума. Можно применять системное или локальное введение.
Эффективные для терапевтического применения количества могут зависеть от тяжести заболевания и возраста, массы, общего состояния пациента и других клинических факторов. Таким образом, конечное определение подходящей схемы лечения проводит лечащий клиницист. Как правило, дозирования, используемые in vitro могут представлять собой пригодное руководство в отношении количеств, пригодных для введения in situ фармацевтической композиции, и для определения эффективных дозировок для лечения конкретных нарушений можно использовать модели на животных. См. Gilman R. et al., Eds., Goodman and Gilman's: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed. (Pergamon Press, New York, NY, US, 1990) and Gennaro A., Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (Mack Publishing Co., Easton, PA, US, 1990). Как правило, диапазон доз для полипептида gp120 составляет приблизительно от 0,1 мкг/кг массы тела приблизительно до 100 мг/кг массы тела. Другие подходящие диапазоны включают дозы приблизительно от 1 мкг/кг до 10 мг/кг массы тела. В одном из примеров доза составляет приблизительно от 1,0 мкг приблизительно до 50 мг, например, от 1 мкг до 1 мг, такая как 1 мг пептида на индивидуума. Схема дозирования может изменяться от ежедневного до такого редкого, как один раз в год в зависимости от клинических факторов, таких как чувствительность индивидуума к пептиду и темпа его заболевания. Таким образом, индивидуум может получать первую дозу описываемой терапевтической молекулы, а затем получать вторую дозу (или даже больше доз) через некоторый момент(ы) времени, такой как по меньшей мере через одни сутки, такой как по меньшей мере через одну неделю.
Описываемые в настоящем описании фармацевтические композиции можно получать и вводить в единицах дозирования. Твердые единицы дозирования включают таблетки, капсулы, трансдермальные системы доставки и суппозитории. Введение терапевтического количества можно проводить однократным введением в форме отдельной единицы дозирования или в виде нескольких меньших единиц дозирования, а также многочисленными введениями дробных доз в конкретные интервалы времени. Подходящие однократные или дробные дозы включают, но не ограничиваются ими, приблизительно 0,01, 0,1, 0,5, 1, 3, 5, 10, 15, 30 или 50 мкг белка/кг/сутки.
Конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующие описываемые в настоящем описании антигенные полипептиды gp120, используют, например, в комбинации в виде фармацевтических композиций (лекарственных средств) для применения в терапевтических, например, профилактических схемах лечения (таких как вакцины) и вводят индивидуумам (например, являющимся приматами индивидуумам, таким как являющиеся человеком индивидуумы) для индукции иммунного ответа против одного или более типов или штаммов ВИЧ. Например, описываемые в настоящем описании композиции можно вводить являющемуся человеком (или не являющемуся человеком) индивидууму до инфицирования ВИЧ для ингибирования инфекции или репликации вируса. Таким образом, описанные выше фармацевтические композиции можно вводить индивидууму для индукции протективного иммунного ответа против ВИЧ. Для индукции иммунного ответа терапевтически эффективное (например, иммунологически эффективное) количество конструкций нуклеиновой кислоты вводят индивидууму, такому как человек (или не являющегося человеком) индивидуум.
Иммунизация конструкциями нуклеиновой кислоты хорошо известна в данной области и описана, например, см. Robinson H. et al., US 5643578 (в котором описаны способы иммунизации позвоночных введением ДНК, кодирующей желаемый антиген, для индукции клеточно-опосредованного или гуморального ответа), Weiner D. et al., US 5593972 и Weiner D. et al., US 5817637 (в которых описана функционально связанная кодирующая антиген последовательность нуклеиновой кислоты с регуляторными последовательностями, обеспечивающими экспрессию) и Urban R. et al., US 5880103 (в котором описано несколько способов доставки нуклеиновых кислот, кодирующих иммуногенные пептиды или другие антигены, в организм). Способы включают липосомную доставку нуклеиновых кислот (или самих синтетических пептидов), и иммуностимулирующие конструкции или ISCOMS® отрицательно заряженные клеткообразные структуры размером 30-40 нм, образуемые спонтанно при смешивании холестерина и QUILA® (сапонина).
Для введения молекул нуклеиновой кислоты gp120 нуклеиновую кислоту можно доставлять внутриклеточно, например, посредством экспрессии соответствующим вектором экспрессии нуклеиновой кислоты, который вводят таким образом, чтобы он становился внутриклеточным, таким образом, как с использованием ретровирусного вектора, прямой инъекцией, с использованием бомбардировки микрочастицами (например, генная пушка, Biolistic, Dupont Corp, Delware, DE, US), покрытия липидами, рецепторами клеточной поверхности или средствами трансфекции, или ее введением в связанном состоянии с подобным гомеобоксу пептидом, для которого известно, что он проникает в ядро. См. Morgan J. et al., US 4980286 и Joliot A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88:1864-1868. Настоящее изобретение относится ко всем формам доставки нуклеиновой кислоты, включая синтетические олигомеры, голую ДНК, плазмиду и вирус, встроенные или невстроенные в геном.
В другом подходе применения нуклеиновых кислот для иммунизации иммуногенный полипептид gp120 также может экспрессироваться ослабленными вирусными хозяевами или векторами, или бактериальными векторами. Для экспрессии пептида или белка можно использовать рекомбинантный вирус осповакцины, аденосвязанный вирус (AAV), вирус герпеса, ретровирус или другие вирусные векторы, таким образом, индуцируя ответ CTL. Например, векторы на основе вируса осповакцины и способы, подходящие в протоколах иммунизации TB, представляют другие потенциальные носители для пептидов по изобретению. См. Paoletti E. et al., US 4722848 и Stover C. et al., Nature, 1991; 351:456-460.
В одном из примеров используют вирусный вектор. Эти векторы включают, но не ограничиваются ими, аденовирус, вирус герпеса, вирус осповакцины или РНК-вирус, такой как ретровирус. В одном из примеров ретровирусный вектор представляет собой производное ретровируса мышей или птиц. Примеры ретровирусных векторов, в которые можно встраивать один чужеродный ген, включают, но не ограничиваются ими: вирус лейкоза мышей Молони (MoMuLV), вирус саркомы мышей Харви (HaMuSV), вирус опухоли молочной железы мышей (MuMTV) и вирус саркомы Рауса (RSV). Когда индивидуум является человеком, можно использовать вектор, такой как вирус лейкоза гиббонов (GaLV). Ряд дополнительных ретровирусных векторов может встраивать многие гены. Все эти векторы могут переносить или встраивать ген селектируемого маркера, таким образом, что трансдуцированные клетки можно идентифицировать и получать. Путем встраивания последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид gp120, в вирусный вектор совместно с другим геном, который кодирует, например, лиганд рецептора по поверхности клетки-мишени, вектор с этого момента становится специфически направленным. Ретровирусные векторы можно конструировать специфически направленными, связывая, например, с сахаром, гликолипидом или белком. Предпочтительную направленность проводят с использованием антитела для направления ретровирусного вектора. Специалистам в данной области известны, или они могут без труда установить без излишнего экспериментирования конкретные полинуклеотидные последовательности, которые можно встраивать в ретровирусный геном или связывать с вирусной оболочкой для обеспечения специфической направленной доставки ретровирусного вектора, содержащего полинуклеотид, кодирующий полипептид gp120.
Подходящие составы конструкций нуклеиновой кислоты содержат водные и неводные растворы, изотонические стерильные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы и бактериостатические средства, и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспендирующие средства, солюбилизаторы, сгущающие средства, стабилизаторы и консерванты. Составы могут находиться в однодозовых или многодозовых запечатанных контейнерах, таких как ампулы и флаконы, и их можно хранить в высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии, где необходимо только добавить стерильный жидкий носитель, например, воду, непосредственно перед применением. Получаемые для немедленного применения растворы и суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток. Предпочтительно, носитель представляет собой забуференный физиологический раствор. Более предпочтительно, композицию для применения в способе по изобретению формулируют для защиты конструкций нуклеиновой кислоты от повреждений до введения. Например, композицию можно формулировать, чтобы снижать потерю аденовирусных векторов на устройствах, используемых для получения, хранения или введения вектора экспрессии, таких как стеклянная тара, шприцы или иглы. Композиции можно формулировать, чтобы уменьшать чувствительность к свету и/или чувствительность к температуре компонентов. Для этой цели композиция, предпочтительно, содержит фармацевтически приемлемый жидкий носитель, такой как, например, описанные выше носители, и стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из полисорбата 80, L-аргинина, поливинилпирролидона, трегалозы и их сочетаний.
При терапевтических применениях индивидууму вводят терапевтически эффективное количество композиции перед или после воздействия или инфекции ВИЧ. При введении перед воздействием терапевтическое применение можно обозначать как профилактическое введение (такое как в форме вакцины). Однократные или многократные введения композиций проводят в зависимости от дозы и частоты, которая необходима и переносится индивидуумом. В одном из вариантов осуществления дозу вводят однократно в виде болюса, а в другом варианте осуществления можно вводить периодически до достижения терапевтического результата, такого как защитный иммунный ответ. Как правило, доза является достаточной для лечения или уменьшения симптомов или признаков заболевания, не вызывая неприемлемую токсичность у индивидуума. Можно применять системное или местное введение.
В отношении вакцин нуклеиновых кислот совместно с конструкциями нуклеиновой кислоты, кодирующими полипептиды gp120, можно вводить природные или синтетические иммуностимулирующие композиций, которые связываются и стимулируют рецепторы, участвующие во врожденном иммунитете. Например, средства, которые стимулируют определенные Toll-подобные рецепторы (такие как TLR7, TLR8 и TLR9), можно вводить в комбинации с конструкциями нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептиды gp120. В некоторых вариантах осуществления конструкцию нуклеиновой кислоты вводят в комбинации с иммуностимулирующими олигонуклеотидами CpG.
Конструкции нуклеиновой кислоты, кодирующие полипептиды gp120, можно вводить in vivo в виде плазмид на основе “голой” ДНК. Векторы ДНК можно вводить в желаемые клетки-хозяева известными в данной области способами, включая, но, не ограничиваясь ими, трансфекцию, электропорацию (например, чрескожную электропорацию), микроинъекцию, трансдукцию, слияние клеток, DEAE декстран, осаждение фосфатом кальция, использование генной пушки или использование переносчика вектора ДНК. См. Wu C. et al., J. Biol. Chem., 1992, 267:963-967, Wu C. and Wu G., Biol. Chem., 1988, 263:14621-14624 и Williams R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88:2726-2730. Способы формулирования и введения “голой” ДНК в мышечную ткань млекопитающих также известны. См. Felgner P. et al., US 5580859 и US 5589466. Другие молекулы также могут быть подходящими для облегчения трансфекции нуклеиновой кислоты in vivo, такие как катионные олигопептиды, пептиды, получаемые из связывающих ДНК белков, или катионные полимеры. См. Bazile D. et al., WO 1995021931 и Byk G. et al., WO1996025508.
Другой хорошо известный способ, который можно использовать для встраивания конструкций нуклеиновой кислоты, кодирующей иммуногены gp120, в клетки-хозяева представляет собой бомбардировку частицами (также известную как биолистическая трансформация). Биолистическую трансформацию, как правило, проводят по одному из нескольких путей. Один из общепринятых способов включает проталкивание инертных или биологически активных частиц в клетки. См. Sanford J, et al., US 4945050, US 5036006 и US 5100792.
Альтернативно, вектор можно встраивать in vivo с помощью липофекции. Применение катионных липидов может способствовать инкапсулированию отрицательно заряженных нуклеиновых кислот, а также может способствовать слиянию с отрицательно заряженными клеточными мембранами. См. Felgner P., Ringold G., Science, 1989, 337:387-388. Описаны особенно подходящие липидные соединения и композиции для переноса нуклеиновых кислот. См. Felgner P, et al., US 5459127, Behr J. et al., WO1995018863 и Byk G., WO 1996017823.
Как и в случае с иммуногенным полипептидом для индукции иммунного ответа против ВИЧ композиции нуклеиновой кислоты можно вводить в виде однократной дозы или можно вводить в виде многократных доз, разделенных временными интервалами. Например, для оптимизации иммунного ответа индивидууму можно вводить в течение нескольких недель, нескольких месяцев или даже нескольких лет две дозы или три дозы, или четыре дозы, или пять доз, или шесть доз или более.
Предпочтительным может быть введение описываемых в настоящем описании иммуногенных композиций совместно с другими средствами, такими как белки, пептиды, антитела и другие средства против ВИЧ. Примеры таких терапевтических средств против ВИЧ включают нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как абакавир, AZT, диданозин, эмтрицитабин, ламивудин, ставудин, тенофовир, зальцитабин, зидовудин и т.п., ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как делавирдин, эфавиренз, невирапин, ингибиторы протеаз, такие как ампренавир, атазанавир, индинавир, лопинавир, нелфинавир осампренавир, ритонавир, саквинавир, типранавир и т.п., и ингибиторы слияния белков, такие как энфувиртид и т.п. В определенных вариантах осуществления иммуногенные композиции вводят одновременно с другими терапевтическими средствами против ВИЧ. В определенных вариантах осуществления иммуногенные композиции вводят последовательно с другими терапевтическими средствами против ВИЧ, таким образом, как до или после другого средства. Специалисту в данной области известно, что последовательное введение может означать введение непосредственно сразу или через подходящий период времени, такой как часы, сутки, недели, месяцы или годы.
E. Способы детекции антител против ВИЧ в биологическом образце и способы детекции ответа антитела с нейтрализующей активностью
Описываемые в настоящем изобретении иммуногены являются подходящими для идентификации в образце пациента антител, специфических к указанным иммуногенам. Вследствие того, что иммуногены по настоящему изобретению специфически связываются с антителами с нейтрализующей активностью, иммуногены можно использовать для выявления пациентов, у которых индуцированы антитела с нейтрализующей активностью. Таким образом, антитела могут быть подходящими при определении персонализированной терапии в зависимости от того, выявляют ли у пациента антитела с нейтрализующей активностью или не выявляют. Таким образом, в другом аспекте изобретение относится к способу детекции в образце специфических к вирусу антител с нейтрализующей активностью, включающему:
i) приведение в контакт указанного образца с полипептидом по изобретению и
ii) детекцию образования иммунного комплекса между указанным полипептидом.
Термины и выражения "антитела с нейтрализующей активностью", "вирус", "полипептид" более подробно описаны выше.
В предпочтительном варианте осуществления вирус представляет собой ВИЧ, и полипептид представляет собой вариантный полипептид gp120 или его иммуногенной фрагмент, как определено выше. В более предпочтительном варианте осуществления образец получают у пациента, инфицированного ВИЧ-1, или у реципиента вакцины против СПИД.
Можно использовать любой из широкого спектра форматов анализа в соответствии со способами по настоящему изобретению. Такие форматы могут быть гетерогенными или гомогенными, последовательными или одновременными, конкурентными или неконкурентными. См. Peterson M, et al., US 5563036, Cheng A, et al., US 5627080, Lee J, et al., US 5633141, Peterson M, et al., US 5679525, Draetta G, et al., US 5691147, Lucas F, et al., US 5698411, Yan C, et al., US 5747352, Davidson R., US 5811526, Oh C, et al., US 5851778 и Landrum E, et al., US 5976822. Такие анализы можно оформлять, чтобы они являлись количественными, для определения концентрации или количества антитела против ВИЧ, или их можно оформлять, чтобы они были качественными для определения наличия или отсутствия антитела к ВИЧ. Дополнительные описания иммунологических анализов, которые можно адаптировать для применения в соответствии с принципами настоящего изобретения, доступны в научной литературе. См. Gnann J, et al., Methods Enzymol. 1989; 178:693-714, Dopel S, et al., Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1991; 29:331-337, Manocha M, et al., Immunol. Lett. 2003; 85(3):275-278), Brattegaard K, et al., AIDS 1995; 9(6):656-657, Beristain C, et al., J. Clin. Lab. Anal. 1995; 9:347-350, Modrow S, et al., J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 1989; 2:141-148, Gueye-Ndiaye A, et al., AIDS 1993; 7:475-481, Sabatier J, et al., AIDS 1989; 3:215-220, Sommerfelt M, et al., Expert Opin. Biol. Ther. 2004; 4:349-361, Alcaro M, et al., Curr. Protein Pept. Sci. 2003; 4:285-290, Smith R, et al., Arch. Pathol. Lab. Med. 1990; 114:254-258, Petrov R, et al., Biomed. Sci. 1990; 1:239-244, Zolla-Pazner S, Nat. Rev. Immunol. 2004; 4:199-210, Baillou A, et al., J. Clin. Microbiol. 1991; 29:1387-1391, and McGaughey G, et al., Curr. HIV Res. 2004; 2:193-204.
Способы гетерогенного иммунологического анализа, как правило, включают использование вещества твердой фазы, с которым связывается продукт, и их можно адаптировать, чтобы они предусматривали связывание неиммобилизованных антигенов и антител (т.е. жидкофазный иммунологический анализ). Продукт реакции отделяют от избыточного образца, реагентов анализа и других веществ, удаляя твердую фазу из реакционной смеси (например, промыванием). Один из типов твердофазных иммунологических анализов, которые можно использовать в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой сэндвич-иммуноанализ. В сэндвич-анализе чем больше аналита содержится в образце, тем большее количество метки содержится на твердой фазе. Как правило, такой тип формата анализа является предпочтительным, в частности, для визуализации низких концентраций аналита, т.к. появление метки на твердой фазе легче детектировать.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения пептид по настоящему изобретению, который специфически взаимодействует с антителом к ВИЧ, является связанным с твердой подложкой (т.е. иммобилизованным), и его инкубируют при контактировании с биологическим образцом, который тестируют на наличие антитела к ВИЧ. Для уменьшения неспецифического связывания можно добавлять блокирующее средство.
Как будет понятно, пептид можно инкубировать с биологическим образцом в несвязанном состоянии, а затем связывать с твердой подложкой (т.е. иммобилизовать). Затем, предпочтительно, тщательно обрабатывать подложки (например, промыванием) по существу для удаления антител не-ВИЧ, которые могут содержаться, но которым не удалось связаться со связанным пептидом. Следовательно, при такой обработке образуется иммунный комплекс между пептидом и антителом к ВИЧ.
Затем, предпочтительно, добавляют меченное с возможностью детектирования вторичное антитело (способное связываться с исходным антителом (например, антителом против IgG человека)) и инкубируют подложку в условиях, достаточных для обеспечения возможности вторичного антитела связываться с любым антителом к ВИЧ, которое может содержаться. Затем подложку, предпочтительно, тщательно обрабатывают (например, промыванием) по существу для удаления любого несвязанного вторичного антитела. Если в тестируемом образце содержится антитело против ВИЧ, то два антитела образуют иммунный комплекс с иммобилизованным пептидом (т.е. сэндвич вторичное антитело/антитело к ВИЧ/иммобилизованный пептид). В таком анализе связанное с подложкой детектируемое вторичное антитело является показателем того, что в тестируемом образце содержится антитело против ВИЧ. См. Schuurs A. et al., US 3791932 и US 4016043 и Pankratz T. et al., US 5876935. Вторичное антитело может представлять собой природный иммуноглобулин, выделяемый у видов, не принадлежащих человеку (например, антитело мыши против IgG человека, антитело козы против IgG человека, антитело козы против IgM человека), или его можно получать рекомбинантно или синтетически. Оно может представлять собой интактный иммуноглобулин или фрагмент иммуноглобулина (например, FAb, F[Ab]2). При желании можно применять другие связывающиеся молекулы (способные связываться с антителами к ВИЧ) совместно или вместо таких вторичных антител. Например, антитела к ВИЧ можно биотинилировать и вторичное антитело можно заменять меченым авидином или стрептавидином.
Для устранения стадии разделения без связывания и уменьшения времени и оборудования, необходимых для химического анализа связывания, можно альтернативно применять гомогенный формат анализа. В таких анализах один компонент из связывающейся пары может еще быть иммобилизованным, однако наличие второго компонента связывающейся пары детектируют без разделения без связывания. Примеры гомогенных оптических способов представляют собой способ EMIT (Syva, Sunnyvale, CA, US), который осуществляют посредством детекции гашения флуоресценции, способ лазерной нефелометрии латекс-агглютинации от Behringwerke (Marburg, DE), который осуществляют посредством детекции изменений рассеяния света, способ латекс-агглютинации LPIA (Mitsubishi Chemical Industries, Tokyo, JP), способ деполяризации флуоресценции TDX (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, US) и способ переноса энергии флуоресценции (Cis Bio International, Paris, FR). Любой из таких анализов можно адаптировать для применения в соответствии с задачами настоящего изобретения.
Анализ связывания по настоящему изобретению можно конфигурировать в виде конкурентного анализа. В конкурентном анализе, чем больше содержится антитела к ВИЧ в тестируемом образце, тем меньше количество метки, содержащейся на твердой фазе.
Аналогично сэндвич-анализу конкурентный анализ можно проводить, предоставляя различное количество меченого антитела к ВИЧ и определяя, содержит ли тестируемая жидкость антитело к ВИЧ, которое конкурирует с меченым антителом за связывание с подложкой. В таком конкурентном анализе количество захваченного меченого антитела является обратно пропорциональным количеству аналита, содержащегося в тестируемом образце. В данной области описаны некоторые анализы такого рода. См. Smith D, et al., US 4401764, Clagett J, et al., US 4,746,631, Li C, et al., US 4661444, Chieregatt E, et al., GB 2084317, Mochida E, et al., US 4185084, Sadeh D, et al., US 4243749, Lucas F, et al., US 5698411, Landrum, выше, Leuvering J, US 4313734, Gribnau T, et al., US 4373932, и Baugher B, et al., US 5501985. Предпочтительным является использование ферментов (в частности, щелочной фосфатазы, бета-галактозидазы, пероксидазы хрена или уреазы) в качестве детектируемой метки (т.е. ферментного иммунологического анализа или EIA).
Наличие ферментативной метки можно детектировать с использованием хромогенных субстратов (включая такие, которые испускают или поглощают флуоресцентный, УФ, видимый спектр света) в ответ на катализ ферментной меткой. Более предпочтительно, можно применять химические метки (например, метки на основе коллоидного золота, латексных гранул).
Детекцию метки можно проводить с использованием множественных детекторов, широкополосных фильтров, решеток или спектрально различных флуоресцирующих средств. См. Ward D. et al., US 5759781. Особенно предпочтительно, в качестве ферментной метки использовать пероксидазу, в частности, совместно с хромогенным субстратом 3,3',5,5'-тетраметилбензидином (TMB), OPD или ABTS. В случае мечения антител пероксидазой в качестве фермента, можно применять способ на основе периодата или описанный способ, в котором партнеры являются связанными гетеробифункциональным реагентом. См. Nakane P. et al., J. Histochem. Cytochem., 1974, 22:1084-1090. В иммунологических анализах по настоящему изобретению можно применять любую из широкого спектра твердых подложек. Подходящие вещества для твердой подложки представляют собой синтетические, такие как полистирол, поливинилхлорид, полиамид, или другие синтетические полимеры, природные полимеры, такие как целлюлоза, а также дериватизированные природные полимеры, такие как ацетат целлюлозы или нитроцеллюлоза, и стекло, в частности, стекловолокно. Подложка может находиться в форме гранул, палочек, трубочек и планшетов для микроанализа или микротитрования. Аналогично, подходящими являются пластинчатые структуры, такие как полоски бумаги, небольшие пластины и мембраны. Поверхность носителей может быть проницаемой и непроницаемой для водных растворов.
Несмотря на то, что указанное выше описание относится к анализу наличия антител к ВИЧ в биологических образцах, которые представляют собой жидкости (например, сыворотки, кровь, мочу, слюну, панкреатический сок, цереброспинальную жидкость, семенную жидкость), следует понимать, что в анализах по настоящему изобретению аналогично можно использовать любой жидкий биологический образец (например, экстракты ткани или биопсии, экстракты кала, мокроты). Наиболее предпочтительно, анализируемый биологический образец представляет собой сыворотку или плазму.
Вследствие того, что иммуногены по настоящему изобретению способны индуцировать продукцию антител с нейтрализующей активностью с широким спектром действия, эти иммуногены также можно использовать для детекции ответа антитела с нейтрализующей активностью на патоген у пациента. Таким образом, в другом аспекте изобретение относится к способу детекции ответа антитела с нейтрализующей активностью против инфекции вирусом у индивидуума, включающему детекцию у указанного индивидуума наличия антител с нейтрализующей активностью способом детекции антител с нейтрализующей активностью по изобретению, где наличие антител с нейтрализующей активностью у указанного индивидуума по сравнению с контрольным индивидуумом является показателем ответа антитела с нейтрализующей активностью на указанную инфекцию вирусом у указанного индивидуума.
В предпочтительном варианте осуществления вирус представляет собой ВИЧ, и где полипептид представляет собой вариантный полипептид gp120 или его фрагмент по изобретению. В более предпочтительном варианте осуществления образец получают у инфицированного ВИЧ-1 пациента или у реципиента вакцины против СПИД.
Общие способы
1. Реагенты
Использовали следующие реагенты:
a) Плазмиды. Плазмиду pNL4.3 получали от National Institutes of Health AIDS Research and Reference Reagent Program (NIH ARRRP, NIH, Bethesda, MD, US). Плазмиду pcDNA 3.1 получали от Invitrogen (Carslbad, CA, US).
b) Изолят ВИЧ-1. Использовали первичный изолят ВИЧ-1 типа B, AC-10, (NeutNet consortium, Milan, IT).
c) Клеточные линии. Клетки TZM-bl (CD4+ CXCR4+ CCR5+) получали из хранилища NIH (NIH, Bethesda, Maryland, US). Клетки 293T и TZM-bl содержали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM), содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 20 мМ L-глутамина, 100 ед. пенициллина/мл и 100 мкг стрептомицина/мл.
d) Антитела. Использовали моноклональные антитела (MAb) к Env-ВИЧ-1 с широким спектром нейтрализующей активности (специфичности эпитопа указаны в скобках) (NIH ARRRP, NIH, Bethesda, MD, US, Polymun AG, Vienna, AT). Они включали: 4E10 (мембрано-проксимального внешнего региона, MPER), 2F5 (MPER), b12 (CD4 участок связывания), 2G12 (гликаны с высоким содержанием маннозы gp120) и PG16 (вирусные шипики gp120).
2. Случайный мутагенез in vitro
Мутации вводили в env AC-10 ВИЧ-1 с использованием набора Genemorph II Random Mutagenesis (Stratagene, La Jolla, CA, US). Библиотеку химерных вирионов ВИЧ получали посредством переноса случайно мутировавших оболочек в плазмиды pNL4-3 и pcDNA3.1. Перенос был опосредованным введением в участки рестрикции сохраняющих последовательность вируса и расщепляющих ферментов XbaI и NotI (New England Biolabs, Ipswich, MA, US).
3. Клонирование и получение библиотеки
Продукты ПЦР клонировали в векторы pNL4.3 и pcDNA3.1 с использованием набора Rapid DNA Ligation (Roche Applied Science, Indianapolis, IN) по инструкциям производителя. Рекомбинантные векторы pNL4.3 и pcDNA3.1 встраивали в компетентные клетки MAX Efficiency® Stbl2™ и компетентные клетки MAX Efficiency® DH5αТМ (Invitrogen, Carslbad, CA, US), соответственно, и амплифицировали в течение ночи (ON) при 30°C при перемешивании в объеме 3 мл. Несколько трансформаций проводили одновременно для предотвращения потери разнообразия и смешивали друг с другом при увеличенном масштабе амплификации (250 мл, 30°C, в течение ночи при перемешивании). После инкубации высевали 20 мкл и выделяли плазмидную ДНК с использованием PureYieldTM Plasmid Maxiprep System (Promega, Madison, WI, US). Оба продукта в дальнейшем расщепляли XbaI и NotI для подтверждения наличия гена env. В случае положительного результата, клоны секвенировали и/или использовали для трансфекции. Вирусы получали с помощью временной совместной трансфекции клеток 293T с использованием конструкций pNL4.3. Супернатанты клеточных культур, содержащие вирионы собирали на 2 сутки после трансфекции и концентрировали вирионы с использованием центрифужного ультрафильтрационного устройства Amicon®. Вирионы ресуспендировали в фосфатно-солевом буфере (PBS).
4. Анализ захвата вирионов
Лунки планшета для микротитрования покрывали поликлональными антителами против Fc (5 мкг/мл в 100 мкл PBS) в течение ночи при 4°C. Лунки блокировали 3% бычьим сывороточным альбумином (BSA) в PBS в течение 1 часа при 37°C. В лунки планшета для микротитрования добавляли 100 мкл вируса (1000 нг/мл) из библиотеки. В соответствующие лунки добавляли 5 мкл иммобилизованного MAb (100 нг/мл) и инкубировали планшет при 37°C при перемешивании (450 об./мин.). После инкубации в течение 2 часов лунки промывали PBS шесть раз, и эквиваленты вируса p24 количественно определяли твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA) или экстрагировали РНК с использованием набора High Pure Viral RNA (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, US) по инструкциям производителя.
5. Амплификация РНК env ВИЧ-1 вложенной ПЦР с обратной транскрипцией
Выделенную РНК env ВИЧ-1 амплифицировали полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией (ПЦР с обратной транскрипцией) с использованием набора RT-PCR (GeneAmp® Gold RNA PCR Reagent Kit, Applied Biosystems, Carlsbad, CA, US) и Expand High Fidelity PCR System (Roche Applied Science, Indianapolis, IN). Для реакции ПЦР с обратной транскрипцией использовали матрицу РНК объемом 8 мкл и РНК обратно транскрибировали с использованием праймера 102 (обратного) при 50°C в течение 20 минут. Область env амплифицировали с использованием праймеров 101 (прямого) и 104 (обратного) из объема 5 мкл кДНК с последующей вложенной ПЦР с использованием праймеров 179 (прямого) и 180 (обратного) с использованием объема 2 мкл матрицы. См. таблицу 1. Условия обеих амплификаций ПЦР env являлись следующими: i) 1 цикл 94°C в течение 2 минут, ii) 35 циклов 94°C в течение 2 минут, 55°C в течение 1 минуты и 72°C в течение 3 минут, iii) 1 цикл 72°C в течение 7 минут и iv) остановка при 4°C. Получаемый ампликон (2583 п.н.) подвергали электрофорезу совместно с маркером молекулярной массы 1 т.п.н. в 1,0% агарозном геле, окрашенным красителем для геля SYBR® Safe DNA.
6. Клонирование и секвенирование гена env
Продукты ПЦР предшествующей стадии клонировали в векторы pNL4.3 и pcDNA3.1, как описано выше. Компетентные клетки Stbl2 и DH5α трансформировали этими плазмидами, как показано выше. Плазмидную ДНК выделяли с использованием набора QIAprep Spin Miniprep (Qiagen, Valencia, CA, US) и в дальнейшем расщепляли XbaI и NotI для подтверждения наличия гена env. Env-положительные клоны секвенировали с использованием BigDye® Terminator v3.1 и праймеров 183 (прямого), 185 (прямого), 186 (прямого), 190 (обратного), 192 (обратного) и 193 (обратного). См. таблицу 1.
7. Анализ последовательности
Выравнивание нуклеотидных последовательностей проводили с использованием программы CLUSTAL W (EMBL-EBI, http://www.ebi.ac.uk/FTP/, февраль 2011 года) и приложений программы Contig Assembly (CAP), интегрированных в BioEdit версии 7.0.9.0, а затем редактировали вручную. См. Thompson J. et al., Nucl. Acids Res., 1994, 22(22):673-4680 и Huang X., Genomics, 1992, 14(1):18-25.
Таблица 1 Последовательности праймера и локализация гена. Локализация гена основана на геноме HXB2 ВИЧ-1 (номер доступа GenBank K03455). 1Wei X. et al., Antimicrob. Agents Chemother., 2002, 46(6):1896-1905. |
|||
Идентификатор праймера | Последовательность | Локализация в геноме | SEQ ID NO: |
101 | TAGAGCCCTGGAAGCATCCAGGAAG | 5853-5877 | 5 |
102 | TTGCTACTTGTGATTGCTCCATGT | 8936-8913 | 6 |
104 | AGCTGGATCCGTCTCGAGATACTGCTCCCACCC | 8916-8882 | 7 |
179 | GTAGTACATGTAATGCAACC | 6050-6069 | 8 |
180 | AGCTCGTCTCATTCTTTCCC | 8865-8846 | 9 |
183 | CCAATTCCCATACATTATTGTGC | 6858-6880 | 10 |
185 | GGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGC | 7794-7817 | 11 |
186 | GAGTTAGGCAGGGATACTCACC | 8344-8365 | 12 |
190 | GCCAGGACTCTTGCCTGGAGCTG | 7969-7947 | 13 |
192 | CTTGTATTGTTGTTGGGTC | 7135-7117 | 14 |
193 | CATGGCTTTAGGCTTTGATCCC | 6580-6559 | 15 |
8. Получение рекомбинантных вирусов
Клоны, экспрессирующие гликопротеины оболочки, специфические к 4E10 с соответствующими мутациями (потеря потенциальных участков гликозилирования и изменение архитектуры петель V1/V2) амплифицировали в течение ночи в объеме 250 мл при 30°C при перемешивании. Плазмидную ДНК выделяли с использованием PureYield™ Plasmid Maxiprep System (Promega, Madison, WI, US) и использовали для временной совместной трансфекции клеток 293T. Содержащие псевдовирус супернатанты собирали через двое суток после трансфекции. Уровень p24 количественно определяли ELISA.
9. Анализы связывания
Связывание MAb (4E10, 2F5, 2G12, b12 и PG16) с интактными вирионами определяли анализом захвата, описанным выше. Сначала вирус инкубировали с BMAb в растворе для облегчения связывания вирус-BMAb. Затем комплексы вирус-BMAb, захватываемые антителами к FC, предварительно иммобилизованными на планшете. Иммобилизованные вирус-BMAb лизировали 1% Triton-X в PBS. p24 в лизатах вируса количественно определяли ELISA, как описано выше. Конструкцию pNL4.3 ΔEnv использовали в качестве отрицательного контроля. Повышение аффинности связывания определяли сравнением с вирусом AC-10 дикого типа.
Все указанные выше в настоящем описании публикации, таким образом, включены в качестве ссылки в полном объеме.
Несмотря на то, что указанное выше изобретение описано более подробно для ясности и понимания, специалисту в данной области следует понимать из прочтения этого описания, что можно проводить различные изменения в форме и деталях, не выходя за рамки объема изобретения и прилагаемой формулы изобретения.
Claims (7)
1. Полипептид, способный индуцировать антитела с нейтрализующей активностью против ВИЧ-1, содержащий вариант gp120 ВИЧ-1, где полипептид имеет последовательность SEQ ID NO: 4.
2. Полинуклеотид, кодирующий полипептид по п. 1.
3. Полинуклеотид по п. 2, содержащий последовательность SEQ ID NO: 3.
4. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п. 2 или 3.
5. Клетка-хозяин для экспрессии полипептида по п. 1, содержащая вектор экспрессии по п. 4.
6. Иммуногенная композиция или вакцина для лечения или предотвращения заболевания, вызываемого инфекцией ВИЧ, содержащая терапевтически эффективное количество полипептида по п. 1, полинуклеотида по п. 2 или 3 или вектора экспрессии по п. 4 и фармацевтически приемлемый носитель.
7. Применение полипептида по п. 1, полинуклеотида по п. 2 или 3, вектора экспрессии по п. 4 или иммуногенной композиции или вакцины по п. 6 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, вызываемого инфекцией ВИЧ.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161446595P | 2011-02-25 | 2011-02-25 | |
EP11382051A EP2492279A1 (en) | 2011-02-25 | 2011-02-25 | Rapid immunogen selection method using lentiviral display |
EP11382051.8 | 2011-02-25 | ||
US61/446,595 | 2011-02-25 | ||
PCT/EP2012/053185 WO2012113921A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-02-24 | Rapid selection method for hiv gp-120 variants |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2013143295A RU2013143295A (ru) | 2015-03-27 |
RU2603732C2 true RU2603732C2 (ru) | 2016-11-27 |
Family
ID=44246584
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013143295/10A RU2603732C2 (ru) | 2011-02-25 | 2012-02-24 | Способ быстрого отбора вариантов gp-120 вич |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9605030B2 (ru) |
EP (2) | EP2492279A1 (ru) |
JP (1) | JP6140614B2 (ru) |
KR (1) | KR20140025356A (ru) |
CN (1) | CN103459410B (ru) |
AU (1) | AU2012219418C1 (ru) |
CA (1) | CA2827967A1 (ru) |
CY (1) | CY1119638T1 (ru) |
DK (1) | DK2678351T3 (ru) |
ES (1) | ES2651124T3 (ru) |
HR (1) | HRP20171697T1 (ru) |
HU (1) | HUE035432T2 (ru) |
IL (1) | IL228094A0 (ru) |
LT (1) | LT2678351T (ru) |
ME (1) | ME03045B (ru) |
MX (1) | MX348459B (ru) |
PL (1) | PL2678351T3 (ru) |
PT (1) | PT2678351T (ru) |
RS (1) | RS56707B1 (ru) |
RU (1) | RU2603732C2 (ru) |
SI (1) | SI2678351T1 (ru) |
WO (1) | WO2012113921A1 (ru) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2492279A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-08-29 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Rapid immunogen selection method using lentiviral display |
EP2698377A1 (en) * | 2012-08-17 | 2014-02-19 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Enhanced rapid immunogen selection method for HIV gp120 variants |
CN104697830B (zh) * | 2015-02-10 | 2018-06-15 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 用于hiv检测的酸性处理剂、样本预处理方法、试剂盒及检测方法 |
CN107988428B (zh) * | 2017-11-10 | 2021-04-06 | 杭州众测生物科技有限公司 | 虾虹彩病毒(siv)的raa恒温荧光检测方法及试剂 |
JP2019153618A (ja) * | 2018-02-28 | 2019-09-12 | 株式会社ジャパンディスプレイ | 光センサ装置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2237065C2 (ru) * | 2002-10-03 | 2004-09-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Иммуногенная библиотека химерных пептидов, мимикрирующая генетическое многообразие гипервариабельного района v3 белка оболочки gp120 вируса иммунодефицита человека |
Family Cites Families (58)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154600B (nl) | 1971-02-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van specifiek bindende eiwitten en hun corresponderende bindbare stoffen. |
US4016043A (en) | 1975-09-04 | 1977-04-05 | Akzona Incorporated | Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies |
JPS604422B2 (ja) | 1976-10-07 | 1985-02-04 | 持田製薬株式会社 | 抗原の定量方法 |
IL51667A (en) | 1977-03-16 | 1979-10-31 | Miles Yeda Ltd | Immunoassay for the determination of a hapten |
NL7807532A (nl) | 1978-07-13 | 1980-01-15 | Akzo Nv | Metaal-immunotest. |
NL8000173A (nl) | 1980-01-11 | 1981-08-03 | Akzo Nv | Toepassing van in water dispergeerbare, hydrofobe kleurstoffen als label in immunochemische testen. |
US4401764A (en) | 1980-02-07 | 1983-08-30 | Technicon Instruments Corporation | Immunoassays employing labeled reagent and a conjugate having two binding sites |
GB2084317B (en) | 1980-09-30 | 1984-01-18 | Erba Farmitalia | Antigen-linked competitive enzymeimmunoassay |
US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
US4661444A (en) | 1984-03-29 | 1987-04-28 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Homogeneous immunoassays employing double antibody conjugates comprising anti-idiotype antibody |
US5036006A (en) | 1984-11-13 | 1991-07-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US5100792A (en) | 1984-11-13 | 1992-03-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues |
US4945050A (en) | 1984-11-13 | 1990-07-31 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor |
US4746631A (en) | 1985-05-09 | 1988-05-24 | Ultra Diagnostics Corporation | Immunoassay method, device, and test kit |
US4980286A (en) | 1985-07-05 | 1990-12-25 | Whitehead Institute For Biomedical Research | In vivo introduction and expression of foreign genetic material in epithelial cells |
US5585279A (en) | 1986-01-23 | 1996-12-17 | Davidson; Robert S. | Time-resolved luminescence binding assays using a fluorescent transition metal label other than ruthenium |
GB8607679D0 (en) | 1986-03-27 | 1986-04-30 | Winter G P | Recombinant dna product |
US5554372A (en) | 1986-09-22 | 1996-09-10 | Emory University | Methods and vaccines comprising surface-active copolymers |
EP0310361A3 (en) | 1987-09-30 | 1989-05-24 | Beckman Instruments, Inc. | Tridentate conjugate and method of use thereof |
DE3855134T2 (de) | 1987-11-13 | 1996-10-02 | Hermann Katinger | Monoklonale menschliche antikörper gegen hiv-i |
US5244797B1 (en) | 1988-01-13 | 1998-08-25 | Life Technologies Inc | Cloned genes encoding reverse transcriptase lacking rnase h activity |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
AU6523590A (en) | 1989-09-22 | 1991-04-18 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Novel peptides associated with the cd4 binding region of gp120 and their methods of use |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
WO1991017764A1 (en) * | 1990-05-16 | 1991-11-28 | Dana Farber Cancer Institute | Immunogenic peptides, antibodies and uses thereof relating to cd4 receptor binding |
ES2089057T3 (es) | 1990-07-18 | 1996-10-01 | Abbott Lab | Un reactivo sustituto de un analito para uso en metodos de ensayo de fijacion especifica, dispositivos y kits. |
US5783415A (en) | 1991-03-29 | 1998-07-21 | Genentech, Inc. | Method of producing an IL-8 receptor polypeptide |
US5643578A (en) | 1992-03-23 | 1997-07-01 | University Of Massachusetts Medical Center | Immunization by inoculation of DNA transcription unit |
EP0671926B1 (en) | 1992-08-11 | 2002-11-13 | President And Fellows Of Harvard College | Immunomodulatory peptides |
EP0675904B1 (en) | 1992-09-30 | 2003-03-05 | The Scripps Research Institute | Human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus |
US5359681A (en) | 1993-01-11 | 1994-10-25 | University Of Washington | Fiber optic sensor and methods and apparatus relating thereto |
US5593972A (en) | 1993-01-26 | 1997-01-14 | The Wistar Institute | Genetic immunization |
FR2714830B1 (fr) | 1994-01-10 | 1996-03-22 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations. |
FR2715847B1 (fr) | 1994-02-08 | 1996-04-12 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucléiques, préparation et utilisations. |
US5563036A (en) | 1994-04-29 | 1996-10-08 | Tularik, Inc. | Transcription factor-DNA binding assay |
AU2587795A (en) | 1994-05-20 | 1995-12-18 | Tularik Inc. | Epstein-barr virus transcription factor binding assay |
US5747352A (en) | 1994-05-23 | 1998-05-05 | Beckman Instruments, Inc. | Reagents and methods for the rapid and quantitative assay of pharmacological agents |
US5691147A (en) | 1994-06-02 | 1997-11-25 | Mitotix, Inc. | CDK4 binding assay |
US5627080A (en) | 1994-07-29 | 1997-05-06 | Beckman Instruments, Inc. | Detergent-facilitated immunoassay for the rapid and quantitative assay of pharmacological agents |
FR2727679B1 (fr) | 1994-12-05 | 1997-01-03 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux agents de transfection et leurs applications pharmaceutiques |
FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1997-03-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
MX9708008A (es) | 1995-04-19 | 1998-03-31 | Polymun Scient Immunbio Forsch | Anticuerpos monoclonales contra vih-1 y vacunas hechas de los mismos. |
US5698411A (en) | 1995-05-18 | 1997-12-16 | Coulter Corporation | Method for determining activity of enzymes in metabolically active whole cells |
US5976822A (en) | 1995-05-18 | 1999-11-02 | Coulter International Corp. | Method and reagent for monitoring apoptosis and distinguishing apoptosis from necrosis |
US5759781A (en) | 1995-12-22 | 1998-06-02 | Yale University | Multiparametric fluorescence in situ hybridization |
US6096313A (en) | 1996-02-09 | 2000-08-01 | Ludwig Institute For Cancer Research | Compositions containing immunogenic molecules and granulocyte-macrophage colony stimulating factor, as an adjuvant |
US5876935A (en) | 1997-01-08 | 1999-03-02 | Dade Behring Inc. | Luminescent specific binding assay |
EP2251347A3 (en) | 1997-04-22 | 2011-02-23 | Life Technologies Corporation | Methods for the production of ASLV reverse transcriptases composed of multiple subunits |
US6924112B1 (en) | 1997-12-04 | 2005-08-02 | Biomethodes S.A.R.L. | Cloning method by multiple-digestion, vectors for implementing same and applications |
US6762031B2 (en) * | 2000-06-16 | 2004-07-13 | University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey | Targeting viral vectors to specific cells |
CA2419822C (en) * | 2000-08-14 | 2011-02-08 | Gary J. Nabel | Modifications of hiv env, gag, and pol enhance immunogenicity for genetic immunization |
CN1339319A (zh) | 2000-08-18 | 2002-03-13 | 清华大学 | 一种治疗艾滋病的药物及其制备方法 |
US20070111201A1 (en) | 2001-04-30 | 2007-05-17 | Benjamin Doranz | Reverse transfection of cell arrays for structural and functional analyses of proteins |
CA2539325C (en) * | 2003-09-17 | 2016-03-22 | Duke University | Consensus/ancestral immunogens |
WO2009117661A2 (en) | 2008-03-20 | 2009-09-24 | United States Department Of The Army, As Represented By The Secretary Of The Army, On Behalf Of The Walter Reed Army Institute Of Research | Carrier neutralization assay |
SI3260136T1 (sl) | 2009-03-17 | 2021-05-31 | Theraclone Sciences, Inc. | Humani imunodeficientni virus (HIV)-nevtralizirajoča protitelesa |
WO2011109511A2 (en) * | 2010-03-02 | 2011-09-09 | International Aids Vaccine Initiative | Novel hiv-1 envelope glycoprotein |
EP2492279A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-08-29 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Rapid immunogen selection method using lentiviral display |
-
2011
- 2011-02-25 EP EP11382051A patent/EP2492279A1/en not_active Withdrawn
-
2012
- 2012-02-24 EP EP12705689.3A patent/EP2678351B1/en active Active
- 2012-02-24 CN CN201280016904.2A patent/CN103459410B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-24 DK DK12705689.3T patent/DK2678351T3/en active
- 2012-02-24 RS RS20171235A patent/RS56707B1/sr unknown
- 2012-02-24 KR KR1020137025232A patent/KR20140025356A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-02-24 AU AU2012219418A patent/AU2012219418C1/en not_active Ceased
- 2012-02-24 ME MEP-2017-270A patent/ME03045B/me unknown
- 2012-02-24 JP JP2013554913A patent/JP6140614B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-24 MX MX2013009757A patent/MX348459B/es active IP Right Grant
- 2012-02-24 HU HUE12705689A patent/HUE035432T2/en unknown
- 2012-02-24 ES ES12705689.3T patent/ES2651124T3/es active Active
- 2012-02-24 US US14/000,924 patent/US9605030B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-24 SI SI201231116T patent/SI2678351T1/en unknown
- 2012-02-24 RU RU2013143295/10A patent/RU2603732C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-02-24 WO PCT/EP2012/053185 patent/WO2012113921A1/en active Application Filing
- 2012-02-24 CA CA2827967A patent/CA2827967A1/en not_active Abandoned
- 2012-02-24 PL PL12705689T patent/PL2678351T3/pl unknown
- 2012-02-24 LT LTEP12705689.3T patent/LT2678351T/lt unknown
- 2012-02-24 PT PT127056893T patent/PT2678351T/pt unknown
-
2013
- 2013-08-22 IL IL228094A patent/IL228094A0/en unknown
-
2017
- 2017-11-06 HR HRP20171697TT patent/HRP20171697T1/hr unknown
- 2017-11-30 CY CY20171101255T patent/CY1119638T1/el unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2237065C2 (ru) * | 2002-10-03 | 2004-09-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" | Иммуногенная библиотека химерных пептидов, мимикрирующая генетическое многообразие гипервариабельного района v3 белка оболочки gp120 вируса иммунодефицита человека |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BHATTACHARYYA S. et al., Design of a non-glycosylated outer domain-derived HIV-1 gp120 immunogen that binds to CD4 and induces neutralizing antibodies, J. Biol. Chem., 2010, v.285, n.35, p.27100-27110. LI M et al., Human immunodeficiency virus type 1 env clones from acute and early subtype B infections for standardized assessments of vaccine-elicited neutralizing antibodies, J.Virol., 2005, v.79, n.16, p.10108-10125. SCHILLING K. et al., P05-01. Generation of a HI-viral packaging cell line as scaffolding for a lentiviral display system, Retrovirology, 2009, v.6, Suppl. 3, P77. RALF WAGNER, Immunogen design and gene delivery, 01.01.2006, найдено в интернет [28.01.2016] по адресу: https://www.wagner-lab.de/research/immunogen-desingn.html. SA-FILHO D. et al., Characterization of the full-length human immunodeficiency virus-1 genome from recently infected subjects in Brazil, AIDS Res Hum Retroviruses, 2007, v.23, n.9, p.1087-1094, последовательность к статье, размещенная в БД GenBank под N * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2012219418B2 (en) | 2017-05-25 |
CA2827967A1 (en) | 2012-08-30 |
AU2012219418C1 (en) | 2017-10-05 |
RS56707B1 (sr) | 2018-03-30 |
PL2678351T3 (pl) | 2018-03-30 |
JP2015508279A (ja) | 2015-03-19 |
JP6140614B2 (ja) | 2017-05-31 |
EP2678351B1 (en) | 2017-09-13 |
EP2492279A1 (en) | 2012-08-29 |
MX2013009757A (es) | 2013-12-02 |
KR20140025356A (ko) | 2014-03-04 |
RU2013143295A (ru) | 2015-03-27 |
ME03045B (me) | 2018-10-20 |
CN103459410B (zh) | 2016-05-25 |
PT2678351T (pt) | 2017-12-11 |
NZ614753A (en) | 2015-10-30 |
IL228094A0 (en) | 2013-09-30 |
EP2678351A1 (en) | 2014-01-01 |
CN103459410A (zh) | 2013-12-18 |
LT2678351T (lt) | 2018-01-25 |
AU2012219418A1 (en) | 2013-09-19 |
HRP20171697T1 (hr) | 2018-01-26 |
DK2678351T3 (en) | 2017-12-04 |
CY1119638T1 (el) | 2018-04-04 |
ES2651124T3 (es) | 2018-01-24 |
US20140037667A1 (en) | 2014-02-06 |
SI2678351T1 (en) | 2018-01-31 |
HUE035432T2 (en) | 2018-05-02 |
US9605030B2 (en) | 2017-03-28 |
WO2012113921A1 (en) | 2012-08-30 |
MX348459B (es) | 2017-06-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kothe et al. | Ancestral and consensus envelope immunogens for HIV-1 subtype C | |
Bures et al. | Regional clustering of shared neutralization determinants on primary isolates of clade C human immunodeficiency virus type 1 from South Africa | |
AU2009213045B2 (en) | Nucleotide sequences of HIV-1 type (or subtype) O retrovirus antigens | |
US8173767B2 (en) | Synthetic peptide vaccines for HIV: the CBD epitope as an effective immunogen to elicit broadly neutralizing antibodies against HIV | |
Diomede et al. | Passively transmitted gp41 antibodies in babies born from HIV-1 subtype C-seropositive women: correlation between fine specificity and protection | |
RU2603732C2 (ru) | Способ быстрого отбора вариантов gp-120 вич | |
Wang et al. | Vaccine with bacterium‐like particles displaying HIV‐1 gp120 trimer elicits specific mucosal responses and neutralizing antibodies in rhesus macaques | |
Cham et al. | Neutralization and infectivity characteristics of envelope glycoproteins from human immunodeficiency virus type 1 infected donors whose sera exhibit broadly cross-reactive neutralizing activity | |
Ishii et al. | Sendai virus particles carrying target virus glycoproteins for antibody induction | |
US9682137B2 (en) | Mutant human and simian immunodeficiency virus ENV proteins with reduced immunosuppressive properties | |
Zhang et al. | Mimotopes selected by biopanning with high-titer HIV-neutralizing antibodies in plasma from Chinese slow progressors | |
US20030215793A1 (en) | Complete genome sequence of a simian immunodeficiency virus from a wild chimpanzee | |
US20130164316A1 (en) | Genetic signatures in hiv-1 subtype c envelope glycoproteins | |
EP2698377A1 (en) | Enhanced rapid immunogen selection method for HIV gp120 variants | |
NZ614753B2 (en) | Rapid selection method for hiv gp-120 variants | |
Chaitaveep et al. | Neutralization breadth and potency of serum derived from recently human immunodeficiency virus type 1-infected Thai individuals | |
US9636396B2 (en) | Mutant human and simian immunodeficiency virus ENV proteins with reduced immunosuppressive properties | |
Blattner et al. | Broadly Neutralizing HIV Antibodies Define a Glycan-Dependent Epitope on the Prefusion Conformation of gp41 on Cleaved Envelope Trimers |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180225 |