RU2585114C2 - Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток и способ ее получения - Google Patents
Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток и способ ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2585114C2 RU2585114C2 RU2014131235/15A RU2014131235A RU2585114C2 RU 2585114 C2 RU2585114 C2 RU 2585114C2 RU 2014131235/15 A RU2014131235/15 A RU 2014131235/15A RU 2014131235 A RU2014131235 A RU 2014131235A RU 2585114 C2 RU2585114 C2 RU 2585114C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- folic acid
- amount
- complex
- reducing agent
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims abstract description 96
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 75
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 48
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 claims abstract description 48
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 claims abstract description 48
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims abstract description 37
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims abstract description 22
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 5
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 claims description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 4
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 4
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 4
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims description 2
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 48
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 17
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 17
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 description 12
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 5
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 description 5
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 description 4
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000002573 colposcopy Methods 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 2
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 2
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 150000002224 folic acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005461 lubrication Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002977 intracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 1
- 208000002741 leukoplakia Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- -1 radionuclides Substances 0.000 description 1
- 230000002468 redox effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/006—Biological staining of tissues in vivo, e.g. methylene blue or toluidine blue O administered in the buccal area to detect epithelial cancer cells, dyes used for delineating tissues during surgery
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/302—Stain compositions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/70—Mechanisms involved in disease identification
- G01N2800/7023—(Hyper)proliferation
- G01N2800/7028—Cancer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к композиции детектирующих агентов для живых клеток, в частности для эпителиальных опухолевых клеток; композиция содержит 0-5% фолиевой кислоты, 0-10% комплекса фолиевой кислоты, 0,01-5% метиленового синего, 0,1-10% углеводного восстановителя, 2-6% уксусной кислоты и 3-95% воды. Также настоящее изобретение относится к способу получения композиции детектирующих агентов и наборам, содержащим композицию детектирующих агентов. 3 н. и 18 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к композиции детектирующих агентов, в частности к композиции детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток, основанной на изменении цвета. Изобретение также относится к способу получения композиции детектирующих агентов и набору, включающему композицию детектирующих агентов.
Уровень техники
В настоящее время способы прижизненного окрашивания человеческих эпителиальных опухолевых клеток в основном включают способы, основанные на тесте на ацетопобеление, йодном тесте, тесте с толуидиновым синим, на окрашивании метиленовым синим, окрашивании гематоксилином и т.п.
В частности, в тесте на ацетопобеление смазывают цервикальную/вагинальную эпителиальную ткань раствором уксусной кислоты, например 3~5% раствором уксусной кислоты, и наблюдают, после ожидания в течение некоторого времени, имеется ли на смазанной эпителиальной ткани какой-либо ацетобелый реагирующий участок. Если какой-либо ацетобелый участок имеется, такая эпителиальная ткань предположительно содержит опухолевые клетки. Однако хотя такой метод имеет высокую чувствительность, его специфичность недостаточна, поскольку кроме опухолевых клеток некоторые воспалительные клетки также могут вызывать ацетопобеление, давая, таким образом, ложные положительные результаты. Кроме того, специфичность такого способа сильно зависит от уровня квалификации и опыта оператора.
Механизм йодного теста представляет собой взаимодействие с гликогеном. Он включает смазывание эпителиальных тканей шейки матки раствором Люголя и детекцию путем наблюдения окрашенных йодом эпителиальных клеток, при этом нормальный эпителий становится красно-коричневым или черным, в то время как анормальный эпителий становится густо-горчично-желтым или желтовато-коричневым. Однако если имеется воспаление эпителия, такие области могут не окрашиваться йодом или показывать бесцветную нагрузку. Следовательно, йодный тест имеет плохую специфичность в отношении окрашивания эпителиальных клеток[1].
Способы с применением толуидинового синего могут вызывать окрашивание обломков ядер нейтрофилов и бактерий, что приводит к высокой ложной положительной оценке. Также трудно окрашивать раковые клетки и лейкоплакию с поверхностной кератинизацией, которая имеет тенденцию вызывать ложный отрицательный результат[2].
После окрашивания эпителиальных тканей гематоксилином для наблюдения необходим микроскоп с большим увеличением и сложным управлением и высокими требованиями к компетентности и опыту оператора, а также длительное время проверки.
Сродство между метиленовым синим и раковыми клетками делает злокачественные ткани склонными к синему окрашиванию. Сообщается, что его использование для in situ отбора биопсийных проб эпителиальных тканей пищевода имеет эффект улучшения положительной оценки биопсии[3]. Однако в данной области техники не сообщается о комбинации изменения цвета при окислительно-восстановительной реакции метиленового синего с фолиевой кислотой или комплексом фолиевой кислоты таким образом, чтобы быстро найти и обнаружить эпителиальные опухолевые клетки с помощью окрашивания и реакции с изменением цвета.
Композиция для детекции эпителиальных опухолевых клеток, в частности опухолевых клеток цервикальной/вагинальной эпителиальной ткани, путем окрашивания и изменения цвета, которая имеет высокую чувствительность, высокую специфичность и является простой и быстрой в действии, крайне необходима в данной области техники.
Раскрытие изобретения
Автор изобретения обнаружил, что анормальные эпителиальные ткани могут быть быстро и четко окрашены специфически за счет связывания фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты с избыточно экспрессированным рецептором фолиевой кислоты в опухолевых клетках, эндоцитоза и изменения цвета метиленового синего в окислительно-восстановительной реакции с фазой восстановления метиленового синего, участвующего в окислительно-восстановительной системе опухолевых клеток, причем посредством этого их отличают от нормальных тканей, и за счет изменения цвета композиции по изобретению быстро становится видно, являются ли испытываемые клетки ткани опухолевыми клетками, причем посредством этого обеспечивается быстрое, простое, точное и чувствительное установление местонахождения и детекция анормальных эпителиальных тканей и тем самым завершается изобретение. Композиция детектирующих агентов по изобретению имеет высокую чувствительность, высокую специфичность, проста в работе и имеет короткое время проверки, и оператор не нуждается в технической подготовке. Кроме того, метиленовый синий как агент, широко применяемый в клинической практике, имеет то преимущество, что он эффективен, безопасен, дешев и легко доступен, позволяя тем самым композиции и способу по изобретению также обладать такими преимуществами.
Следовательно, изобретение относится к композиции детектирующих агентов, включающей следующие компоненты (в мас. %):
| фолиевая кислота | 0-5 |
| комплексы фолиевой кислоты | 0-10 |
| метиленовый синий | 0,01-5 |
| углеводный восстановитель | 0,1-10 |
| уксусная кислота | 2-6 |
| вода | 3-95 |
В предпочтительном воплощении вышеуказанной композиции детектирующих агентов количество фолиевой кислоты предпочтительно составляет 0-4,5%, предпочтительнее 0-1%.
В другом предпочтительном воплощении количество комплекса фолиевой кислоты предпочтительно составляет 0-8%, предпочтительнее 0-1%.
В еще одном предпочтительном воплощении количество метиленового синего предпочтительно составляет 0,05-4,5%, предпочтительнее 0,05-0,5%.
В еще одном предпочтительном воплощении количество уксусной кислоты составляет предпочтительно 3-5%.
Углеводный восстановитель, используемый в композиции детектирующих агентов по изобретению, включает различные углеводы и их производные, предпочтительно глюкозу, фруктозу, галактозу, гексозу, лактозу, мальтозу и их производные и т.п.
Другой аспект изобретения относится к способу получения детектирующего агента по изобретению, включающему или состоящему из следующих стадий, по порядку:
(a) растворение фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты в водном растворителе в вышеуказанных мас. % с образованием раствора,
(b) добавление, перемешивание и растворение метиленового синего в растворе (а) в вышеуказанных мас. %,
(c) добавление углеводного восстановителя в раствор (b) в вышеуказанных мас. %,
(d) перемешивание раствора, полученного на стадии (с), в течение 30 минут,
(e) добавление, перемешивание и растворение уксусной кислоты в растворе (d) в вышеуказанных мас. %, и
все вышеуказанные стадии проводят при нормальных температуре и давлении.
В предпочтительном аспекте детектирующий агент по изобретению или детектирующий агент, полученный способом по изобретению, применяют для детекции эпителиальных опухолевых клеток.
Изобретение также относится к способу детекции поражения эпителиальной ткани, включающему:
(a) нанесение агентов по изобретению, детектирующих живые клетки, на поверхность эпителиальной ткани субъекта с помощью носителя;
(b) наблюдение за изменением цвета на носителе; и
(c) определение по изменению цвета, имеется ли поражение в испытываемой эпителиальной ткани.
В предпочтительном воплощении способ детекции поражения эпителиальной ткани также включает:
(d) наблюдение за тем, вызывается ли реакция ацетопобеления на участке поверхности эпителиальной ткани, на которую нанесен детектирующий живые клетки агент по изобретению.
В предпочтительном воплощении в способе детекции поражения эпителиальной ткани в соответствии с изобретением наблюдение на стадии (b) выполняют визуально.
В предпочтительном воплощении в способе детекции поражения эпителиальной ткани в соответствии с изобретением наблюдение и определение на стадиях (b) и (с) проводят, основываясь на следующих стандартах: отсутствие изменения цвета носителя указывает на отсутствие поражения эпителиальной ткани; изменение цвета носителя на светло-голубовато-зеленый указывает на отсутствие анормального поражения эпителиальной ткани; изменение цвета носителя на темно-голубовато-зеленый/черновато-зеленый/пурпурно-черный указывает на анормальное поражение эпителиальной ткани. Кроме того, если цвет носителя изменяется на черновато-зеленый/пурпурно-черный, с согласия пациента, если наблюдение за пациентом не может быть обеспечено, для проверки на патологию может быть отобран с помощью биопсии образец участка в эпителиальной ткани с реакцией ацетопобеления.
В предпочтительном воплощении анормальное поражение представляет собой новообразование (≥CIN II) и канцерогенез внутри эпителиальной ткани.
Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток по изобретению может быть введена с использованием различных способов. Способы введения включают смазывание и другие способы. Введение может быть выполнено с использованием носителя, который включает, без ограничений, впитывающие ватные тампоны, марлю, микрокапсулы, целлюлозные мембраны, фильтровальную бумагу, наноматериалы, аэрогель и т.п.
Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток по изобретению может быть введена в эпителиальные ткани различных мест, которые включают, но не ограничиваются указанным, эпителиальные ткани шейки матки, влагалища, ротовой полости, пищевода, эпителиальные ткани желудочно-кишечного тракта и т.п.
Все проценты, включенные в изобретение, являются массовыми процентами, если не указано иное.
Осуществление изобретения
В клинических исследованиях показано, что рецепторы фолиевой кислоты избыточно экспрессируются на поверхности большинства опухолевых клеток, в то время как в нормальных клетках они присутствуют только в небольшом количестве. Следовательно, фолиевая кислота и комплексы фолиевой кислоты (производные фолиевой кислоты) могут служить в качестве опухолеспецифических таргетинговых молекул для диагностики и лечения онкозаболеваний[4, 5].
В изобретении термин «комплекс фолиевой кислоты» определяется как комплекс, образованный при связывании молекулы фолиевой кислоты с одним или с несколькими другими компонентами, при этом карбоксильная группа фолиевой кислоты связывается с одним или несколькими другими компонентами путем присоединения или сопряжения. Один или несколько других компонентов могут представлять собой, например, лекарственные средства, радионуклиды, красители, гены, проявляющие вещества и т.п. Примерами комплекса фолиевой кислоты являются комплекс фолиевая кислота-митомицин и комплекс фолиевая кислота-DTPA и т.п. В композиции и способе по изобретению фолиевая кислота и/или комплекс фолиевой кислоты могут быть введены одновременно или могут быть применены по отдельности. Комплекс фолиевой кислоты, используемый в композиции детектирующих агентов, описанной в изобретении, включает конъюгаты фолиевой кислоты, образованные путем присоединения различных низкомолекулярных соединений к фолиевой кислоте, которые включают, но не ограничиваются указанным, конъюгаты фолиевая кислота-γ-цистеин, (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоат и т.п.
Количество фолиевой кислоты в композиции по изобретению составляет 0-5 мас. %, предпочтительно 0-4,5 мас. %, 0-4 мас. %, 0-3,5 мас. %, 0-3 мас. %, 0-2,5 мас. %, 0-2 мас. %, 0-1,5 мас. %, предпочтительнее 0-1 мас. %. Количество комплекса фолиевой кислоты в композиции по изобретению составляет 0-10 мас. %, предпочтительно 0-8 мас. %, 0-7 мас. %, 0-6 мас. %, 0-5 мас. %, 0-4 мас. %, 0-3 мас. %, 0-2 мас. %, предпочтительнее 0-1 мас. %.
Метиленовый синий представляет собой краситель, широко применяемый в клинической практике. Его механизм окрашивания и изменения цвета в первую очередь основан на различии в его цветах в окисленном состоянии и восстановленном состоянии. Конкретно, метиленовый синий в восстановленном состоянии бесцветный, в то время как водный раствор метиленового синего в окисленном состоянии показывает синий цвет. Кроме того, окисленный метиленовый синий, когда присутствует в композиции по изобретению, также может проявить голубовато-зеленый, черновато-зеленый (коричневато-зеленый) и пурпурно-черный цвет. Биологический краситель метиленовый синий имеет высокое сродство к раковым клеткам и меланину[7], окислительно-восстановительное свойство которых вызывает различные изменения в цветовом спектре метиленового синего в окисленном и восстановленном состояниях опухолевых тканей. Такие изменения цвета могут быть непосредственно идентифицированы быстрым визуальным наблюдением.
Вообще антиокислительная способность опухолевых тканей значительно усиливается по сравнению с нормальными тканями. Однако значительный окислительный стресс еще существует в таких опухолевых тканях[6]. Окислительный стресс указывает на окислительное поражение ткани, которое представляет собой период скрытого патологического развития ткани. Хотя восстановительное свойство опухолевых клеток усиливается, их окислительно-восстановительный баланс по-прежнему склонен к окислению, если опухолевые клетки не находятся в состоянии апоптоза или в заторможенном состоянии. Поэтому во внутриклеточной среде таких живых клеток метиленовый синий в композиции по изобретению окисляется, показывая зеленый, голубовато-зеленый, черновато-зеленый и пурпурно-черный цвет окисленного состояния.
В композиции по изобретению комплекс фолиевой кислоты и небольшое количество фолиевой кислоты могут образовывать с метиленовым синим комплекс фолиевая кислота-метиленовый синий. Из-за связывания между молекулой фолиевой кислоты и рецептором фолиевой кислоты, избыточно экспрессированным на поверхности опухолевых клеток, комплекс фолиевая кислота-метиленовый синий может легче проникнуть в клетки при содействии уксусной кислоты и высвободить метиленовый синий в восстановленном состоянии. Кроме того, в опухолевых клетках при окислительном стрессе метиленовый синий быстро окисляется и таким образом генерирует изменение цвета. При различной степени злокачественности опухоли метиленовый синий изменяет цвет на темно-голубовато-зеленый, черновато-зеленый и пурпурно-черный, в то время как при наличии воспалительного поражения, разрастания по типу «цветной капусты» (заражение вирусом HPV) или поражения CIN I цвет метиленового синего зеленый или светло-голубовато-зеленый.
Термин «углеводный восстановитель» в изобретении относится к любому редуцирующему углеводу, его производным или их комбинациям. Углевод включает, но не ограничивается указанным, моносахарид, дисахарид или полисахарид. Конкрентно углеводный восстановитель может представлять собой глюкозу, фруктозу, галактозу, гексозу, лактозу, мальтозу и т.п. «Производное углевода», описанное в изобретении, определяется как производные, такие как полисахарид, гликопротеин, органическая кислота и т.п., образованные полимеризацией, этерификацией, окислением и т.п. углеводов. Количество углеводного восстановителя в композиции и способе по изобретению составляет 0,1-10%, предпочтительно 0,3-8%, 0,1-3% и 0,05-1%.
Углеводный восстановитель в композиции и способе по изобретению восстанавливает метиленовый синий в окисленном состоянии до бесцветного метиленового синего в восстановленном состоянии. Фолиевая кислота и/или комплекс фолиевой кислоты связываются с рецептором фолиевой кислоты на поверхности опухолевой клетки. В кислой среде с рН 5,0-5,5 фолиевая кислота и/или комплекс фолиевой кислоты опосредует интернализацию и высвобождение метиленового синего в восстановленном состоянии в цитозоль. Метиленовый синий в восстановленном состоянии участвует в окислительном стрессе опухолевых тканей. Метиленовый синий в восстановленном состоянии переходит в окислительное состояние. Между тем осмотическое давление внутриклеточной жидкости увеличивается, заставляя метиленовый синий в окисленном состоянии высвобождаться из клеток и немедленно показывать различные изменения цвета. Такой высвободившийся метиленовый синий может присоединиться к носителю для введения по изобретению, тем самым сразу же заставляя композицию на носителе показывать изменение цвета. Конкретно цвет композиции меняется от светло-желтовато-коричневого до темно-голубовато-зеленого, черновато-зеленого и пурпурно-черного. Между тем опухолевые клетки имеют увеличенные ядра и повышенное содержание ядерного белка, которые осаждаются и коагулируются уксусной кислотой, вызывая переходный ответ, при котором анормальная эпителиальная ткань видна как ацетобелый чувствительный участок, который может обеспечить установление местоположения для отбора патологического образца анормальной эпителиальной ткани.
Термин «уксусная кислота», используемый в изобретении, обозначает этановую кислоту. Композиция по изобретению включает 2-6 мас. % уксусной кислоты. Уксусная кислота, используемая в композиции по изобретению и в способе ее получения, обеспечивает кислотный рН, предпочтительно рН 5,0-5,5. Кроме того, использование уксусной кислоты помогает композиции по изобретению быстро проникать в клетку, таким образом взаимодействуя с содержимым клетки так, что способствует развитию окраски. Кроме того, как упоминалось выше, после того как метиленовый синий - компонент, который используют для демонстрации изменения цвета, высвобождается из клетки, реакция ацетопобеления, вызываемая уксусной кислотой на анормальной эпителиальной ткани, дополнительно обеспечивает основу для установления местоположения анормальной эпителиальной ткани.
Клетки, которые могут быть окрашены композицией по изобретению, представляют собой опухолевые клетки, предпочтительно эпителиальные опухолевые клетки. Указанные эпителиальные ткани включают, но не ограничивается указанным, эпителий шейки матки, эпителий влагалища, эпителий желудочно-кишечного тракта, эпителий ротовой полости и т.п. Такие клетки могут поступать из образцов биопсии ткани.
Клетки по изобретению могут быть получены от субъектов-млекопитающих, указанные млекопитающие включают человека, но не ограничиваются им.
Изобретение дополнительно иллюстрируется приведенными ниже примерами и сравнительными примерами. В нижеследующих примерах и сравнительных примерах в качестве объекта для проверки используют эпителиальную ткань шейки матки, и результаты проверки на патологию тканей шейки матки используют в качестве стандарта для сравнения, чувствительность используют для иллюстрации степени детекции детектирующего агента: чем выше чувствительность, тем сильнее способность к обнаружению анормальной эпителиальной ткани; и специфичность используют для иллюстрации точности детектирующего агента: чем выше специфичность, тем выше соответствие между обнаруженной анормальной эпителиальной тканью и результатами проверки на патологию.
В изобретении чувствительность и специфичность определяют и вычисляют следующим образом:
Чувствительность = число истинно положительных результатов/(число истинно положительных результатов + число ложноотрицательных результатов)·100%,
Специфичность = число истинно отрицательных результатов/(число истинно отрицательных результатов + число ложноположительных результатов)·100%.
Пример 1
При нормальных температуре и давлении каждый их различных компонентов, определенных в приведенной ниже таблице 1, растворяют по отдельности в водном растворителе, к раствору добавляют биологический детектирующий агент метиленовый синий, перемешивают и растворяют с последующим добавлением глюкозы как восстановителя и перемешиванием в течение 30 минут, затем добавляют аналитически чистую уксусную кислоту, перемешивают, смешивают и получают композицию детектирующих агентов. В композицию детектирующих агентов погружают большой тампон и композицию наносят мазком на эпителиальную ткань шейки матки. Тампон немедленно извлекают и сразу наблюдают изменение цвета тампона. Если цвет тампона светло-желтовато-коричневый, это указывает на отсутствие поражения эпителиальной ткани; если цвет тампона светло-голубовато-зеленый, это указывает на воспалительное поражение, разрастание по типу «цветной капусты» (заражение вирусом HPV) или поражение CIN I; если цвет тампона темно-голубовато-зеленый, черновато-зеленый и пурпурно-черный, это указывает на наличие анормального поражения CIN II или выше. Между тем рекомендуется кольпоскопия для отбора живых тканей из нескольких мест для гистопатологического исследования, и затем проверяют чувствительность и специфичность детектирующего агента с использованием результатов гистопатологического тестирования в качестве стандарта. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Пример 2
Повторяют способ примера 1 с использованием различных компонентов, количества которых указаны в следующей далее таблице 1, за исключением того, что вместо фолиевой кислоты используют комплекс фолиевой кислоты фолиевая кислота-γ-цистеин. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Пример 3
Повторяют способ примера 1 с использованием различных компонентов, количества которых указаны в следующей далее таблице 1, за исключением того, что в водном растворителе совместно растворяют фолиевую кислоту и комплекс фолиевой кислоты и (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоата. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Пример 4
Повторяют способ примера 1 с использованием различных компонентов, количества которых указаны в следующей далее таблице 1, за исключением того, что в водном растворителе совместно растворяют фолиевую кислоту и комплекс фолиевой кислоты и (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоата и вместо восстановителя глюкозы используют восстановитель производное гексозы. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Сравнительный пример 1
При нормальных температуре и давлении в 95 мл дистиллированной воды при перемешивании добавляют 5 мл уксусной кислоты и получают 5% раствор уксусной кислоты. В раствор погружают большой ватный тампон и раствор наносят мазком на эпителиальную ткань шейки матки. После ожидания в течение одной минуты наблюдают наличие или отсутствие ацетобелого участка на эпителиальной ткани вблизи границы плоскоклеточной колонки шейки матки и осматривают ее границу, толщину, цвет и наблюдают время ответа. Если имеется ацетобелый участок с четкой границей, это указывает на повреждение CIN I или выше. Проводят кольпоскопию для отбора живых тканей из нескольких мест для гистопатологического исследования и затем проверяют чувствительность и специфичность 5% раствора уксусной кислоты, используя результаты гистопатологического тестирования в качестве стандарта. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Сравнительный пример 2
При нормальных температуре и давлении 10 г йодида калия растворяют в 100 мл дистиллированной воды, к раствору добавляют 5 г йода, перемешивают и растворяют и получают йодный раствор Люголя. В раствор погружают большой ватный тампон и раствор наносят мазком на эпителиальную ткань шейки матки и наблюдают, окрашивается ли эпителиальная ткань йодом. Нормальный эпителий показывает красновато-коричневый или черный цвет, в то время как анормальный эпителий показывает густо-горчично-желтый или желтовато-коричневый цвет. Проводят кольпоскопию для отбора живых тканей из нескольких мест для гистопатологического исследования и затем проверяют чувствительность и специфичность йодного раствора Люголя с использованием результатов гистопатологического тестирования в качестве стандарта. Результаты тестирования приводятся в таблице 1.
Из приведенной выше таблицы 1 можно видеть, что все примеры с применением композиции детектирующих агентов по настоящему изобретению имеют значительные преимущества по чувствительности и специфичности по сравнению с детектирующими агентами в сравнительных примерах, что указывает, что композиция по изобретению может быть чувствительной и может специфически использоваться для детекции анормальной эпителиальной ткани.
Литература
1. Qiao Youlin, Zhang Wenhua, Zhao Fanghui, Pan Qinjing, Li Ling, "Screen, Early Diagnosis, and Early Treatment Solutions for Cervical Cancer", July, 2003.
2. Mashberg A., J. Amer. Dent. Assoc., 1983, 106-112.
3. Canto M.I., Setrakian S., Willis J. et al., Methylene blue-directed biopsies improve detection intestinal metaplasia and dysplasia in Barrett′s esophagus [J]. Gastrointest. Endosc., 2000, 5:560.
4. Zhao X.B., Lee R.J., Tumor-selective targeted delivery of genes and antisen seo ligo deoxyribonuc leo tides via the folate receptor [J]. Adv. Drug Deliv. Rev., 2004, 56(8): 191-193.
5. Reddy J.A., Allagadda Vm., Leamon C.P., Targeting therapeutic and imaging agents to folate receptor positive tumors [J]. Current Pham. Biotech., 2005, 6, 131-150.
6. Wu Chenheng, "Oxidative and Reductive States of Malignant Tumor Tissues: First Exploration of the Relation between Change of Antioxidation Capacity and Apoptosis and Mechanism Therefore", April 26, 2005.
7. Link E.M., Blower P.J., Costa D.C. et al,, Early detection of melanoma metastases with radioiodinated methylene blue [J]. Eur. J. Nuclear Med., 1998, 25(9): 1322.
8. Leamon C.P., Deprince R.B., Hendren R.W., Folate-mediated drug delivery: effect of alternative conjugation chemistry [J]. Drug Target., 1999, 7: 157-169.
9. Leamon C.P., Cooper S.R., Hardee G.E., Folate-liposome-mediated antisense oligodeoxynucleotide targeting to cancer cells: evaluation in vitro and vivo [J]. Bioconjug. Chem., 2003, 14: 738-747.
Claims (21)
1. Композиция детектирующих агентов, включающая следующие компоненты, мас. %:
фолиевая кислота 0-5%
комплекс фолиевой кислоты 0-10%
метиленовый синий 0,01-5%
углеводный восстановитель 0,1-10%
уксусная кислота 2-6%
вода 3-95%
и в которой количество фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты не равно 0.
и в которой количество фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты не равно 0.
2. Композиция по п. 1, в которой количество фолиевой кислоты составляет 0-4,5%, предпочтительно 0-1%.
3. Композиция по п. 1 или 2, в которой количество комплекса фолиевой кислоты составляет 0-8%, предпочтительно 0-1%.
4. Композиция по п. 3, в которой количество комплекса фолиевой кислоты составляет 0-8%, предпочтительно 0-1%.
5. Композиция по пп. 1, 2 или 4, в которой количество метиленового синего составляет 0,05-4,5%, предпочтительно, 0,05-0,5%.
6. Композиция по п. 3, в которой количество метиленового синего составляет 0,05-4,5%, предпочтительно 0,05-0,5%.
7. Композиция по пп. 1, 2, 4 или 6, в которой углеводный восстановитель выбирают из углеводов и их производных.
8. Композиция по п. 3, в которой углеводный восстановитель выбирают из углеводов и их производных.
9. Композиция по п. 5, в которой углеводный восстановитель выбирают из углеводов и их производных.
10. Композиция по п. 7, в которой углеводный восстановитель выбирают из глюкозы, фруктозы, галактозы, гексозы, лактозы, мальтозы и их производных.
11. Композиция по п. 8 или 9, в которой углеводный восстановитель выбирают из глюкозы, фруктозы, галактозы, гексозы, лактозы, мальтозы и их производных.
12. Композиция по любому из пп. 1, 2, 4, 6, 8, 9 или 10, в которой количество уксусной кислоты составляет 3-5%.
13. Композиция по п. 3, в которой количество уксусной кислоты составляет 3-5%.
14. Композиция по п. 5, в которой количество уксусной кислоты составляет 3-5%.
15. Композиция по п. 7, в которой количество уксусной кислоты составляет 3-5%.
16. Композиция по п. 11, в которой количество уксусной кислоты составляет 3-5%.
17. Способ получения композиции детектирующих агентов по любому из пп. 1-16, характеризующийся тем, что включает следующие стадии:
(a) растворение фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты в водном растворителе;
(b) добавление, перемешивание и растворение метиленового синего в вышеуказанном растворе;
(c) добавление в раствор углеводного восстановителя;
(d)) перемешивание раствора в течение 30 минут;
(e) добавление уксусной кислоты при перемешивании,
причем все вышеуказанные стадии проводят при нормальной температуре и давлении.
(a) растворение фолиевой кислоты и/или комплекса фолиевой кислоты в водном растворителе;
(b) добавление, перемешивание и растворение метиленового синего в вышеуказанном растворе;
(c) добавление в раствор углеводного восстановителя;
(d)) перемешивание раствора в течение 30 минут;
(e) добавление уксусной кислоты при перемешивании,
причем все вышеуказанные стадии проводят при нормальной температуре и давлении.
18. Набор для детекции эпителиальных опухолевых клеток, включающий композицию детектирующих агентов по любому из пп. 1-16 и, при необходимости, носитель, предпочтительно, носитель выбирают из впитывающих ватных тампонов, марли, микрокапсул, целлюлозных мембран, фильтровальной бумаги, наноматериалов и аэрогеля.
19. Композиция детектирующих агентов по п. 1, в которой комплекс фолиевой кислоты представляет собой комплекс фолиевая кислота - γ-цистеин, (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоат.
20. Способ по п. 17, в котором комплекс фолиевой кислоты представляет собой комплекс фолиевая кислота - γ-цистеин, (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоат.
21. Набор по п. 18, в котором комплекс фолиевой кислоты представляет собой комплекс фолиевая кислота - γ-цистеин, (R)-2-(2-(R)-3,4-дигидрокси-5-карбонил-2,5-дигидрофуран)-2-гидроксиэтил-4-(6-(2-амино-4-карбонил-3,4-дигидроптеридин)метиламино)бензоат.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110449270.7 | 2011-12-29 | ||
| CN201110449270.7A CN103185713B (zh) | 2011-12-29 | 2011-12-29 | 用于上皮组织肿瘤细胞的检测剂组合物及其制备方法 |
| PCT/CN2012/087880 WO2013097771A1 (zh) | 2011-12-29 | 2012-12-28 | 用于上皮组织肿瘤细胞的检测剂组合物及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014131235A RU2014131235A (ru) | 2016-02-20 |
| RU2585114C2 true RU2585114C2 (ru) | 2016-05-27 |
Family
ID=48676995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014131235/15A RU2585114C2 (ru) | 2011-12-29 | 2012-12-28 | Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток и способ ее получения |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9939355B2 (ru) |
| EP (1) | EP2799073B1 (ru) |
| JP (1) | JP6040258B2 (ru) |
| KR (1) | KR101576940B1 (ru) |
| CN (2) | CN105510321A (ru) |
| AU (1) | AU2012361342B2 (ru) |
| BR (1) | BR112014015935B1 (ru) |
| CA (1) | CA2860484C (ru) |
| HK (2) | HK1187106A1 (ru) |
| MX (1) | MX364536B (ru) |
| RU (1) | RU2585114C2 (ru) |
| WO (1) | WO2013097771A1 (ru) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014101134A1 (zh) * | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Yan Wenguang | 叶酸衍生物及其制备方法和应用 |
| CN103483872B (zh) * | 2013-09-30 | 2015-08-19 | 青岛农业大学 | 用于肿瘤组织细胞的染色剂组合物及其制备方法 |
| CN103808551A (zh) * | 2013-10-15 | 2014-05-21 | 深圳市华中生物药械有限公司 | 用于上皮组织病变细胞检测的诊断试剂及制备工艺及棉签 |
| EP3155972A4 (en) * | 2014-06-10 | 2018-01-31 | Sang Young Ryu | Device and method for self-collecting vaginal sample for human papilloma virus examination |
| CN104483472B (zh) * | 2014-12-19 | 2016-03-30 | 武汉大学 | 一种用于宫颈癌变细胞检测的诊断试剂及其制备方法 |
| CN104483473B (zh) * | 2014-12-31 | 2016-03-02 | 广州市微米生物科技有限公司 | 用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂及制备和检测方法 |
| CN105199430B (zh) * | 2015-11-05 | 2017-03-22 | 济宁博联生物科技有限公司 | 一种上皮组织染色剂及其制备方法 |
| CN105571922A (zh) * | 2015-12-10 | 2016-05-11 | 浙江检康生物技术股份有限公司 | 一种上皮组织病变细胞特殊染色试剂及制备工艺 |
| KR101988240B1 (ko) * | 2017-02-27 | 2019-06-12 | 주식회사 디알나노 | 피부질환에 사용되는 메틸렌 블루 복합체 및 이의 용도 |
| CN108148887A (zh) * | 2018-01-18 | 2018-06-12 | 陕西高源体外诊断试剂有限公司 | 用于检测微生物感染的染色剂组合物及其制备方法 |
| CN108303416A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-07-20 | 青岛浩铂生物科技有限公司 | 一种上皮组织染色液试剂盒及其制备方法 |
| CN108287240A (zh) * | 2018-01-29 | 2018-07-17 | 青岛浩铂生物科技有限公司 | 基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂及制备方法 |
| CN109187145A (zh) * | 2018-08-23 | 2019-01-11 | 杭州元研细胞生物科技有限公司 | 一种用于宫颈癌早筛的诊断染色液及其制备方法 |
| CN113514455A (zh) * | 2021-06-29 | 2021-10-19 | 广州朗坤生物科技有限公司 | 检测上皮组织脱落细胞表面叶酸受体表达的方法及试剂盒 |
| CN113702363A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-11-26 | 辽宁钰航生物医疗科技有限公司 | 一种叶酸染色液及其制备方法 |
| CN117804876B (zh) * | 2024-03-01 | 2024-05-10 | 德州国科医疗科技有限公司 | 一种叶酸受体介导上皮组织细胞染色液及其制备方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001064110A1 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-07 | Zila, Inc. | Method for detecting and killing epithelial cancer cells |
| CN1372637A (zh) * | 2000-06-30 | 2002-10-02 | 日拉公司 | 亚甲蓝诊断剂及上皮癌检测的诊断方法 |
| WO2002007693A1 (en) * | 2000-07-20 | 2002-01-31 | Zila, Inc. | Improved diagnostic method for detecting dysplastic epithelial tissue |
| AU2005302851B2 (en) * | 2004-11-12 | 2012-02-23 | Organoflush B.V. | Composition for cold preservation and perfusion of organs |
| CN101261279B (zh) * | 2008-04-11 | 2012-07-04 | 四川大学 | 子宫内膜癌诊断试剂、试剂盒及防治药物 |
| CA2745766C (en) * | 2009-03-19 | 2018-07-03 | Kaneka Corporation | Method, kit and device for detecting nucleic acid |
| CN102221526A (zh) * | 2011-03-09 | 2011-10-19 | 叶欣 | 用于筛选口腔内膜细胞早期病变的组合试剂及其使用方法 |
-
2011
- 2011-12-29 CN CN201510990766.3A patent/CN105510321A/zh active Pending
- 2011-12-29 CN CN201110449270.7A patent/CN103185713B/zh active Active
-
2012
- 2012-12-28 BR BR112014015935A patent/BR112014015935B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-12-28 MX MX2014008030A patent/MX364536B/es active IP Right Grant
- 2012-12-28 RU RU2014131235/15A patent/RU2585114C2/ru active
- 2012-12-28 US US14/369,460 patent/US9939355B2/en active Active
- 2012-12-28 KR KR1020147021072A patent/KR101576940B1/ko active IP Right Grant
- 2012-12-28 JP JP2014547705A patent/JP6040258B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-28 EP EP12861189.4A patent/EP2799073B1/en active Active
- 2012-12-28 WO PCT/CN2012/087880 patent/WO2013097771A1/zh active Application Filing
- 2012-12-28 CA CA2860484A patent/CA2860484C/en active Active
- 2012-12-28 AU AU2012361342A patent/AU2012361342B2/en not_active Ceased
-
2013
- 2013-12-31 HK HK13114413.5A patent/HK1187106A1/zh not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-02-17 HK HK15101751.0A patent/HK1201194A1/xx not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ZHAO, X.B. and LEE, R.J. Tumor-srlective targeted delivery of genes and antisense oligodeoxyribonucleotides via the folate receptor. ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS. 2004, vol. 56, p. 1193-1204. CANTO MI et al. Methylene blue-directed biopsies improve detection intestinal metaplasia and dysplasia in Barrett's esophagus. GASTROINTESTINAL ENDOSCOPY. 2000, vol. 51, no. 5, p. 560-568. GUELRUD, M. and HERRERA, I. Acetic acid improves idintification of remmant islands of Barrett's epitelium after endoscopic therapy. GASTROINTESTINAL ENDOSCOPY, 1998, vol. 47, no. 6 p. 512-515. TAKEO K ET AL: "Separation of monoclonal antibodies from antihapten antisera by two-dimensional affinity elecrtophoresis", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY, ELSEVIER SCIENCE PUBLISHED B.V., NL, vol. 597, no. 1-2, 24.04.1992, p. 365-376. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2860484C (en) | 2016-11-01 |
| AU2012361342A1 (en) | 2014-07-24 |
| MX364536B (es) | 2019-04-29 |
| KR20140107639A (ko) | 2014-09-04 |
| JP6040258B2 (ja) | 2016-12-07 |
| WO2013097771A1 (zh) | 2013-07-04 |
| AU2012361342B2 (en) | 2015-08-27 |
| CA2860484A1 (en) | 2013-07-04 |
| CN103185713A (zh) | 2013-07-03 |
| HK1201194A1 (en) | 2015-08-28 |
| RU2014131235A (ru) | 2016-02-20 |
| BR112014015935A2 (pt) | 2017-06-13 |
| US9939355B2 (en) | 2018-04-10 |
| CN103185713B (zh) | 2015-12-09 |
| BR112014015935A8 (pt) | 2017-07-04 |
| BR112014015935B1 (pt) | 2020-05-05 |
| EP2799073A1 (en) | 2014-11-05 |
| JP2015508489A (ja) | 2015-03-19 |
| US20140377796A1 (en) | 2014-12-25 |
| HK1187106A1 (zh) | 2014-03-28 |
| MX2014008030A (es) | 2014-10-24 |
| KR101576940B1 (ko) | 2015-12-11 |
| CN105510321A (zh) | 2016-04-20 |
| EP2799073A4 (en) | 2015-07-15 |
| EP2799073B1 (en) | 2018-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2585114C2 (ru) | Композиция детектирующих агентов для эпителиальных опухолевых клеток и способ ее получения | |
| Rosenthal et al. | Safety and tumor specificity of cetuximab-IRDye800 for surgical navigation in head and neck cancer | |
| Nakajima et al. | Real-time monitoring of in vivo acute necrotic cancer cell death induced by near infrared photoimmunotherapy using fluorescence lifetime imaging | |
| US20170314056A1 (en) | Method of using near infrared fluorescent dyes for imaging and targeting cancers | |
| JP6019500B2 (ja) | 蛍光標識されたｌ−グルコース誘導体を用いたがん細胞を検出するための方法及び該誘導体を含むがん細胞のイメージング剤 | |
| US11285224B2 (en) | Compositions and methods for assessing gut function | |
| WO2006074129A2 (en) | Agents for therapy efficacy monitoring and deep tissue imaging | |
| Huang et al. | CT/NIRF dual-modal imaging tracking and therapeutic efficacy of transplanted mesenchymal stem cells labeled with Au nanoparticles in silica-induced pulmonary fibrosis | |
| CN107238524B (zh) | 一种改良型特殊染色诊断液 | |
| CN105199430B (zh) | 一种上皮组织染色剂及其制备方法 | |
| CN103483872A (zh) | 用于肿瘤组织细胞的染色剂组合物及其制备方法 | |
| Duan et al. | Role of near-infrared heptamethine cyanine dye IR-783 in diagnosis of cervical cancer and its mechanism | |
| KR20130085294A (ko) | 림프노드 탐지용 형광 고분자 나노젤 및 이를 이용한 림프노드 확인 방법 | |
| Kim et al. | Molecular imaging of colorectal tumors by targeting colon cancer secreted protein-2 (CCSP-2) | |
| Karunakaran et al. | Elucidating Raman image-guided differential recognition of clinically confirmed grades of cervical exfoliated cells by dual biomarker-appended SERS-tag | |
| Pan et al. | Ratiometric nanoprobe for circulating tumor cell detection and intracellular hydrogen peroxide evaluation in colorectal cancer patients | |
| Dong et al. | Accurate imaging in the processes of formation and inhibition of drug-induced liver injury by an activable fluorescent probe for ONOO− | |
| KR20180131102A (ko) | 신호대 배경비 향상을 위한 전하 균형 형광 조영제 및 이를 이용한 영상화 방법 | |
| JP2011209068A (ja) | 生体試料の調製法 | |
| Günel et al. | Nanoparticle Systems in Cell Culture Studies |