RU2553557C2 - Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease - Google Patents
Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2553557C2 RU2553557C2 RU2013131335/10A RU2013131335A RU2553557C2 RU 2553557 C2 RU2553557 C2 RU 2553557C2 RU 2013131335/10 A RU2013131335/10 A RU 2013131335/10A RU 2013131335 A RU2013131335 A RU 2013131335A RU 2553557 C2 RU2553557 C2 RU 2553557C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rabbit
- disease
- virus
- pseudomonas aeruginosa
- rabbits
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся разработкой и конструированием вакцинных препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.The invention relates to the field of veterinary medicine, in particular to a method for manufacturing a vaccine associated against pseudomoniasis and viral hemorrhagic disease of rabbits and can be used in research and production institutions involved in the development and construction of vaccines, as well as in enterprises of the biological industry.
Известен способ получения поливалентной вакцины против кишечных инфекций (патент РФ на изобретение №2080875 от 18.03.92, МКИ А61 К39/125, 39/135). Данный способ получения поливалентной вакцины включает раздельное выращивание культур Salmonella typhi, Salmonella paratyphi В, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, отделение биомассы от питательной среды, экстракцию антигенов проводят водно-солевым раствором при птуттелировании в присутствии антибиотика и мелкораздробленного стекла в течение 1-1,5 ч, полученные экстракты центрифугируют, очистке подвергают супернатанты и после смешивания получают целевой продукт в виде смеси клеточных стенок, содержащих О-антигены используемых культур, со жгутиками, содержащими Н-антигены, и растворимыми Vi-антигенами сальмонелл. Технология получения данной вакцины очень сложная и для профилактики инфекционных болезней кроликов не рекомендуется.A known method of obtaining a multivalent vaccine against intestinal infections (RF patent for the invention No. 2080875 of 03/18/92, MKI A61 K39 / 125, 39/135). This method of obtaining a multivalent vaccine involves the separate cultivation of cultures of Salmonella typhi, Salmonella paratyphi B, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, the separation of biomass from the nutrient medium, the extraction of antigens is carried out with saline in the presence of antibiotic and finely divided glass for 1–1,5 glass h, the extracts obtained are centrifuged, supernatants are purified and after mixing the desired product is obtained in the form of a mixture of cell walls containing O-antigens of the cultures used, with flagella containing H-anti genes, and soluble Salmonella Vi antigens. The technology for producing this vaccine is very complex and is not recommended for the prevention of rabbit infectious diseases.
Известен способ получения ассоциированной вакцины для профилактики инфекций, вызываемых условно-патогенными бактериями (патент РФ на изобретение №2035189 от 02.01.86, МКИ А61К 39/125, 39/135). Данный способ включает раздельное выделение протективных антигенов, из штамма Staphylococcus aureus №Б - 243 выделяют цитоплазматический антиген, из токсинопродуцирующего штамма Pseudomonas aeruginosa НИИЭМ №PA - 7 получают анатоксин синегнойной палочки, из клинических штаммов Proteus mirabilis №6, 8, 40, 508, 1115, 4641 выделяют растворимые антигены путем контролируемого протеолиза, полученные антигены смешивают в физрастворе из расчета содержания их в 1 мл вакцины 0,15-0,2 мг белка, 15-30 мкг белка, 10-20 мкг белка соответственно и в смесь дополнительно добавляют коммерческий стафилококковый анатоксин и гидроокись алюминия в количестве 5-10 ЕС и 1-2 мг соответственно. Технология получения вакцины очень сложная, для профилактики кроликов не применяется.A known method of producing an associated vaccine for the prevention of infections caused by opportunistic bacteria (RF patent for the invention No. 2035189 from 02.01.86, MKI A61K 39/125, 39/135). This method involves the separate isolation of protective antigens, the cytoplasmic antigen is isolated from the Staphylococcus aureus strain No. B-243, the Pseudomonas aeruginosa strain NIIEM No. PA-7 is obtained from the toxin producing strain of Pseudomonas aeruginosa, from clinical strains of Proteus mirabilis No. 6, 8, 15, 15, 8, 40 4641 isolate soluble antigens by controlled proteolysis, the resulting antigens are mixed in saline based on their content in 1 ml of the vaccine 0.15-0.2 mg of protein, 15-30 μg of protein, 10-20 μg of protein, respectively, and commercial stafil coccal toxoid and aluminum hydroxide in an amount of 5-10 EU and 1-2 mg, respectively. The technology for producing the vaccine is very complicated; it is not used for rabbit prophylaxis.
Известен способ изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и энтерококковой инфекции нутрий (патент РФ №2388489, 10.05.2010), включающий проведение отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей, раздельно выращивают культуры Pseudomonas aeruginosa и Enterococcus faecalis в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,5%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 ч, смешивают культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают. Полученная вакцина не применяется для профилактики кроликов.A known method of manufacturing a vaccine associated against pseudomoniasis and enterococcal infection of nutrias (RF patent No. 2388489, 05/10/2010), including the selection of affected organs from fallen nutrias from the local epizootic focus, from which the suspension is prepared, is plated on differential diagnostic media, clean is isolated cultures of pathogens, cultures of Pseudomonas aeruginosa and Enterococcus faecalis are separately grown in meat and peptone broth with glucose added to 0.2% concentration with a titer of 4-5 billion microbial cells in 1 cm 3 , inactive They are added by adding formalin to a 0.4-0.5% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours, the cultures are mixed in equal proportions, then a solution of aluminum hydroxide is added in an amount of 20% by volume, carefully mix, pack and seal. The resulting vaccine is not used to prevent rabbits.
Известен способ изготовления бивалентной вакцины против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (патент РФ на изобретение №2064304 от 27.07.96, МКИ А61 К 39/275). Данный способ предусматривает раздельное выращивание вакцинного вируса миксоматоза кроликов в культуре клеток куриных фибробластов с активностью не ниже 104,0 ИД50/см3, замораживают-оттаивают, смешивают с инактивированной суспензией печени кроликов, зараженной вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, в соотношении 1:1, стабилизируют полученную смесь защитной средой при соотношении 10:1, фасуют и лиофилизируют после замораживания при минус 55±5°С в течение 10±2 ч путем выдерживания материала при температуре от минус 50±5°С до 0°С в течение 31±1 ч и затем от 0°С до плюс 20±1°С Па и досушивают в течение 3±1 ч. Данный способ позволяет получать бивалентную вакцину против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Технология получения данной вакцины очень сложная.A known method of manufacturing a bivalent vaccine against myxomatosis and viral hemorrhagic disease of rabbits (RF patent for the invention No. 2064304 from 07/27/96, MKI A61 K 39/275). This method involves the separate cultivation of the rabbit myxomatosis vaccine virus in chicken fibroblast cell culture with an activity of at least 10 4.0 ID 50 / cm 3 , frozen, thawed, mixed with an inactivated rabbit liver suspension infected with a virulent rabbit hemorrhagic virus virus, in a ratio of 1: 1, stabilize the mixture with a protective medium at a ratio of 10: 1, pack and lyophilize after freezing at minus 55 ± 5 ° C for 10 ± 2 hours by holding the material at a temperature of minus 50 ± 5 ° C to 0 ° for 31 ± 1 hours and then 0 ° C to plus 20 ° C ± 1 Pa, and finally dried for 3 ± 1 hours. This method allows to obtain a bivalent vaccine against myxomatosis and rabbit hemorrhagic disease virus. The technology for this vaccine is very complex.
Техническим результатом изобретения является получение безвредной, специфичной, высокоиммуногенной ассоциированной вакцины для защиты кроликов против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни, путем введения новых инактивированных возбудителей, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияние.The technical result of the invention is to obtain a harmless, specific, highly immunogenic associated vaccine for the protection of rabbits against pseudomonosis and viral hemorrhagic disease, by introducing new inactivated pathogens, components, eliminating the negative and side effects.
Технический результат достигается тем, что в способе изготовления вакцины, ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов, включающем отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их псевдомонозом и вирусной геморрагической болезнью из местного эпизоотического очага, выделение чистых культур возбудителей болезней, для чего проводят раздельное выращивание культур Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни кроликов, далее для получения возбудителя псевдомоноза культуру Pseudomonas aeruginosa выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром не менее 4 млрд. микробных клеток в 1 см3 в течение 12-24 часов при температуре 37°С; для получения вируса геморрагической болезни кроликов заражают вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью не менее 103 ЛД50/см3, проводят отбор печени от павшего кролика, ее измельчение и гомогенизацию, доводят полученную массу физраствором до 10-15%-ной суспензии, затем проводят экстракцию вируса при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов, декантацию надосадочной жидкости, добавляют физраствор в соотношении 1:1, фильтруют, инактивируют культуры путем внесения формалина 0,1-0,4%-ной концентрации и выдерживают при температуре 37°С в течение 48-96 часов, после этого смешивают инактивированные культуры Pseudomonas aeruginosa и вирусной геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему смеси, тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.The technical result is achieved by the fact that in the method of manufacturing a vaccine associated against pseudomoniasis and viral hemorrhagic disease of rabbits, including the selection of affected organs from dead rabbits during the disease with their pseudomonosis and viral hemorrhagic disease from a local epizootic focus, the isolation of pure cultures of pathogens is carried out, for which separate cultivation of cultures of Pseudomonas aeruginosa and the virus of hemorrhagic disease of rabbits, then to obtain the causative agent of pseudomonosis culture of Pseudomonas ae ruginosa is grown in meat and peptone broth with the addition of glucose to a 0.2% concentration with a titer of at least 4 billion microbial cells in 1 cm 3 for 12-24 hours at a temperature of 37 ° C; to obtain the virus of hemorrhagic disease of rabbits, they infect a virulent virus of hemorrhagic disease of rabbits isolated from an epizootic foci with an infectious activity of at least 10 3 LD 50 / cm 3 , the liver is taken from the fallen rabbit, its grinding and homogenization, the resulting mass is brought with saline to 10-15 % suspension, then the virus is extracted at a temperature of 4-6 ° C for 10-12 hours, the supernatant is decanted, saline is added in a ratio of 1: 1, filtered, culture is inactivated by applying the formal 0.1-0.4% concentration and kept at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours, then inactivated cultures of Pseudomonas aeruginosa and viral hemorrhagic rabbit disease are mixed in equal proportions, then a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20 % by volume of the mixture, mix thoroughly, pack and seal.
Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что в отличие от известных способов проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их псевдомонозом и вирусной геморрагической болезнью из местного эпизоотического очага; раздельно выращивают культуры Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни кроликов; для получения возбудителя псевдомоноза культуру Pseudomonas aeruginosa выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром не менее 4 млрд. микробных клеток в 1 см3 в течение 12-24 часов при температуре 37°С, для получения вируса геморрагической болезни заражают вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью не менее 103 ЛД50/см3, проводят отбор печени от павшего кролика, которую после измельчения, гомогенизации экстрагируют вирус из 10-15%-ной суспензии печени при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов при периодическом перемешивании, а после инактивации формалином и выдержки инактивированные культуры Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни кроликов смешивают в равных соотношениях и вносят раствор гидроокиси алюминия.The novelty of the proposed proposal is due to the fact that, in contrast to known methods, the selection of affected organs from dead rabbits during the period of their disease with pseudomoniasis and viral hemorrhagic disease from a local epizootic focus is carried out; separate cultures of Pseudomonas aeruginosa and rabbit hemorrhagic disease virus are grown; to obtain the causative agent of pseudomonosis, a culture of Pseudomonas aeruginosa is grown in meat and peptone broth with glucose added to 0.2% concentration with a titer of at least 4 billion microbial cells in 1 cm 3 for 12-24 hours at a temperature of 37 ° C, to obtain the virus hemorrhagic disease of at least 10 3 LD 50 / cm 3, carried out liver selection fallen from a rabbit infected with a virulent rabbit haemorrhagic disease virus isolated from epizootic outbreak with infectious activity, which, after grinding, homogenization extracted virus from 10-15% strength sous Penzov liver at a temperature of 4-6 ° C for 10-12 hours with occasional stirring, and after inactivation with formalin and extracts inactivated Pseudomonas aeruginosa culture and rabbit hemorrhagic disease virus were mixed in equal proportions and is made of aluminum hydroxide solution.
Инактивируют культуры возбудителей формалином до 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 48-96 часов и смешивают чистые культуры в равных соотношениях, что позволяет полностью подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Добавление гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему культуры позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 кроликов обеспечить у привитых формирование напряженного иммунитета против двух инфекций.The pathogen cultures are inactivated with formalin to a 0.1-0.4% final concentration at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours and pure cultures are mixed in equal proportions, which allows to completely suppress pathogenicity and maintain high immunogenicity against pseudomonosis and viral hemorrhagic rabbit disease. The addition of aluminum hydroxide in an amount of 20% to the volume of the culture allows 12-15 days after a single injection of 1 cm 3 rabbits to provide the vaccinated with the formation of intense immunity against two infections.
Способ обеспечивает получение безвредной, высокоиммуногенной, специфичной вакцины для защиты кроликов от псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов.The method provides a harmless, highly immunogenic, specific vaccine for protecting rabbits from pseudomonosis and viral hemorrhagic rabbit disease.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.According to the patent and scientific and technical literature, no similar set of features has been found that allows us to judge the inventive step of the claimed technical solution.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (СТО 00495549-0044-2007); ассоциированная вакцина против пастереллеза и вирусной геморрагической болезни кроликов (ТУ утверждены 30.09.94 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена 27.05.94 г.); вакцина против геморрагической болезни кроликов тканевая инактивированная гидроокись алюминиевая СТО 00495549-0005-2006.As for the criterion of "industrial applicability", the components that make up the vaccine are known and widely used in veterinary practice in the manufacture of inactivated vaccines: the associated vaccine against myxomatosis and rabbit viral hemorrhagic disease (STO 00495549-0044-2007); the associated vaccine against pasteurellosis and viral hemorrhagic disease of rabbits (TU approved September 30, 1994; instructions for the manufacture and control of this vaccine approved May 27, 1994); vaccine against rabbit hemorrhagic disease tissue inactivated aluminum hydroxide STO 00495549-0005-2006.
Методы выделения и характеристика микроорганизмов рода Pseudomonas описаны в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии», авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр. 259-261; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных», авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: «ИзограФъ», 2005, на стр. 522-525.Methods of isolation and characterization of microorganisms of the genus Pseudomonas are described in the "Workshop on Veterinary Microbiology and Immunology", authors: Kostenko TS, Rodionova VB, Skorodumov DI, M .: Kolos, 2001, p. 259-261; in the reference book “Microbiological diagnosis of animal bacterial diseases”, authors: Skorodumov DI, Subbotin VV, Sidorov MA, Kostenko TS, M .: “IzograF”, 2005, p. 522- 525.
Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88; в книге «Вирусная геморрагическая болезнь кроликов», авторы: Шевченко А.А., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Власова Т.А. М.: «Две Короны», 1995, 48 с.; в книге «Болезни кроликов», авторы: Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. М.: «Аквариум», 2002, стр. 42-57.Methods of isolation and characterization of rabbit viral hemorrhagic disease are described in the "Guidelines for the laboratory diagnosis of rabbit viral hemorrhagic disease", approved by the State Administration for Agriculture of the USSR on 12.28.88; in the book "Viral hemorrhagic disease of rabbits", authors: Shevchenko AA, Vishnyakov I.F., Bakulov I.A., Vlasova T.A. M .: “Two Crowns”, 1995, 48 p .; in the book “Rabbit Diseases”, authors: Shevchenko A.A., Shevchenko L.V., Litvinov A.M. M .: "Aquarium", 2002, p. 42-57.
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что сначала проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их псевдомонозом и вирусной геморрагической болезнью из местного эпизоотического очага. Затем выделяют чистые культуры возбудителей болезней, для чего проводят раздельное выращивание культур Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни кроликов. Далее для получения возбудителя псевдомоноза культуру Pseudomonas aeruginosa выращивают в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром не менее 4 млрд. микробных клеток в 1 см3 в течение 12-24 часов при температуре 37°С. Для получения вируса геморрагической болезни кроликов заражают вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью не менее 103 ЛД50/см3, проводят отбор печени от павшего кролика, ее измельчение и гомогенизацию, доводят полученную массу физраствором до 10-15%-ной суспензии. Затем проводят экстракцию вируса при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов, декантацию надосадочной жидкости, добавляют физраствор в соотношении 1:1, фильтруют. Инактивируют культуры путем внесения формалина 0,1-0,4%-ной концентрации и выдерживают при температуре 37°С в течение 48-96 часов. После этого смешивают инактивированные культуры Pseudomonas aeruginosa и вирусной геморрагической болезни кроликов в равных соотношениях. Затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему смеси, тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.The essence of the proposed method lies in the fact that first they select the affected organs from the dead rabbits during the period of the disease with their pseudomonosis and viral hemorrhagic disease from the local epizootic focus. Pure cultures of pathogens are then isolated, for which separate cultures of Pseudomonas aeruginosa and rabbit hemorrhagic disease are carried out. Further, to obtain the causative agent of pseudomonosis, a culture of Pseudomonas aeruginosa is grown in meat and peptone broth with glucose added to 0.2% concentration with a titer of at least 4 billion microbial cells in 1 cm 3 for 12-24 hours at a temperature of 37 ° C. To obtain the hemorrhagic disease virus, rabbits are infected with a virulent rabbit hemorrhagic disease virus isolated from an epizootic foci with an infectious activity of at least 10 3 LD 50 / cm 3 , liver is collected from the fallen rabbit, its grinding and homogenization, the resulting mass is adjusted with saline to 10-15 % suspension. Then the virus is extracted at a temperature of 4-6 ° C for 10-12 hours, the supernatant is decanted, saline is added in a ratio of 1: 1, filtered. Inactivate the culture by introducing formalin 0.1-0.4% concentration and incubated at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours. After that, inactivated cultures of Pseudomonas aeruginosa and rabbit viral hemorrhagic disease are mixed in equal proportions. Then make a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume of the mixture, mix thoroughly, pack and seal.
Пример конкретного осуществления способа изготовления вакцины.An example of a specific implementation of the method of manufacturing a vaccine.
Для изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их псевдомонозом и вирусной геморрагической болезнью, из которых приготавливают суспензию и проводят лабораторные исследования с целью выделения чистых культур возбудителей.For the manufacture of a vaccine associated with pseudomoniasis and viral hemorrhagic disease of rabbits, the selection of affected organs from dead rabbits during the period of illness with their pseudomonosis and viral hemorrhagic disease is carried out, from which a suspension is prepared and laboratory studies are carried out in order to isolate pure cultures of pathogens.
Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя псевдомоноза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий, окрашивают их по методу Грама. При микроскопии препаратов под иммерсионной системой микроскопа видны прямые или изогнутые палочки размером 1,5-3,0 мкм, располагающиеся одиночно, парами, в виде цепочек, окрашенные в розовый цвет, характерные для Pseudomonas aeruginosa.To determine the morphology and tinctorial properties of the causative agent of pseudomonosis, fingerprint smears are prepared from the affected organs of the fallen nutria, and they are stained using the Gram method. During microscopy of preparations, under the immersion system of the microscope, straight or curved sticks 1.5–3.0 μm in size are visible, located singly, in pairs, in the form of chains, colored in pink, characteristic of Pseudomonas aeruginosa.
Для определения культуральных свойств возбудителя псевдомоноза делают посевы выделенной культуры из патматериала в мясопептонный бульон, в чашки Петри с мясопептонным агаром (МПА), кровяной МПА и селективную среду, содержащую цетилтриметил аммония бромид, на которой другие псевдомонады не растут. Через 24 часа инкубирования в термостате при температуре 37°С наблюдают поверхностную серебристо-белую пленку в МПБ, характерный признак и помутнение среды. В чашках Петри с кровяным МПА наблюдают рост сероватых, полупрозрачных колоний, окруженных зеленоватой зоной гемолиза, что характерно для Pseudomonas aeruginosa.To determine the cultural properties of the causative agent of pseudomonosis, cultures of the selected culture are made from the material in the meat peptone broth, in Petri dishes with meat peptone agar (MPA), blood MPA and selective medium containing cetyltrimethyl ammonium bromide, on which other pseudomonads do not grow. After 24 hours of incubation in a thermostat at a temperature of 37 ° C, a surface silver-white film in BCH is observed, a characteristic sign and turbidity of the medium. In Petri dishes with blood MPA, growth of grayish, translucent colonies surrounded by a greenish hemolysis zone is observed, which is typical for Pseudomonas aeruginosa.
Для получения вирусного сырья при изготовлении вакцины используют не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов, массой не менее 1,5 кг, заражают их вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл3. Через 48-72 часа кролики погибают, от павших берут печень в целофановые пакеты, замораживают, измельчают ножницами и на гомогенизаторе. Полученное сырье доводят физраствором (рН 7,2) до 10-15%-ной суспензии, затем экстрагируют вирус при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов, периодически перемешивая, декантируют надосадочную жидкость, к осадку добавляют физраствор 1:1, перемешивают. Для освобождения от клеточного детрита проводили фильтрование через два слоя стерильной марли. Затем отфильтрованное биосырье сливают в емкость и проводят инактивацию внесением формалина 0,1-0,4%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-96 часов при периодическом перемешивании, затем смешивают инактивированные антигены в равных соотношениях, вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему и тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.To obtain viral raw materials in the manufacture of the vaccine, rabbits weighing at least 1.5 kg not vaccinated against viral hemorrhagic disease are used, they are infected with a virulent rabbit hemorrhagic disease virus isolated from an epizootic foci with an infectious activity of 10 3 LD 50 / ml 3 . After 48-72 hours, the rabbits die, from the fallen take the liver into cellophane bags, freeze, grind with scissors and on a homogenizer. The resulting raw material was adjusted with saline (pH 7.2) to a 10-15% suspension, then the virus was extracted at 4-6 ° C for 10-12 hours, stirring occasionally, the supernatant was decanted, 1: 1 saline was added to the precipitate. are mixed. To get rid of cellular detritus, filtration was performed through two layers of sterile gauze. Then the filtered bio-raw material is poured into a container and inactivation is carried out by adding formalin of 0.1-0.4% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours with periodic stirring, then inactivated antigens are mixed in equal proportions, a solution is introduced aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume and mix thoroughly, packaged and sealed.
Таким образом, использование для изготовления вакцины ассоциированной против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов чистых культур возбудителей Pseudomonas aeruginosa и вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага, позволяет получать специфичную, высокоиммуногенную ассоциированную вакцину для защиты от этих двух опасных инфекционных болезней псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Раздельное выращивание возбудителей позволяет получать концентрацию Pseudomonas aeruginosa не менее 4 млрд. в 1 см3 в течение 12-14 часов инкубирования и вируса геморрагической болезни кроликов с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл3. Использование формалина для инактивации в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации позволяет в течение 48-96 часов при температуре 37°С подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность в течение 12 месяцев хранения.Thus, the use of pure cultures of the pathogens Pseudomonas aeruginosa and viral hemorrhagic disease of rabbits isolated from the local epizootic foci for the preparation of a vaccine for the association of pseudomonosis and viral hemorrhagic disease of rabbits allows obtaining a specific, highly immunogenic associated vaccine to protect against these two dangerous infectious diseases of pseudomonosis and viral hemorrhagic disease of rabbits. Separate growth of pathogens allows to obtain a concentration of Pseudomonas aeruginosa of at least 4 billion in 1 cm 3 for 12-14 hours of incubation and the virus of hemorrhagic disease of rabbits with infectious activity of 10 3 LD 50 / ml 3 . The use of formalin for inactivation in 0.1-0.4% final concentration allows to suppress pathogenicity for 48-96 hours at a temperature of 37 ° C and maintain high immunogenicity for 12 months of storage.
Вакцина, полученная заявляемым способом, прошла апробацию. Кроликам вводили однократно в дозе 1 см3 полученную вакцину, и через 12-15 суток у привитых кроликов формирование напряженного иммунитета против псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов, продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). После однократного введения кроликам внутримышечно не вызывает у них поствакцинальных осложнений.The vaccine obtained by the claimed method, has been tested. The rabbits were injected with the vaccine once in a dose of 1 cm 3 , and after 12-15 days in vaccinated rabbits the formation of intense immunity against pseudomonosis and rabbit viral hemorrhagic disease lasting at least 9 months (observation period). After a single injection, rabbits do not intramuscularly cause post-vaccination complications.
Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.The proposed method is simple to implement, affordable and is industrially applicable.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013131335/10A RU2553557C2 (en) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013131335/10A RU2553557C2 (en) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013131335A RU2013131335A (en) | 2015-01-20 |
| RU2553557C2 true RU2553557C2 (en) | 2015-06-20 |
Family
ID=53280523
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013131335/10A RU2553557C2 (en) | 2013-07-08 | 2013-07-08 | Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2553557C2 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2064304C1 (en) * | 1992-12-28 | 1996-07-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Method of preparing bipartial vaccine against myxomatosis and viral hemorrhagic disease in rabbit |
| US20030211114A1 (en) * | 1998-05-06 | 2003-11-13 | Hodges Robert S. | Vaccine for Pseudomonas aeruginosa |
| EP2034012A1 (en) * | 2007-09-05 | 2009-03-11 | Laboratorios Ovejero, S.A. | Vaccine against viral rabbit hemorrhagic disease |
| RU2388489C1 (en) * | 2008-11-05 | 2010-05-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias |
-
2013
- 2013-07-08 RU RU2013131335/10A patent/RU2553557C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2064304C1 (en) * | 1992-12-28 | 1996-07-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии | Method of preparing bipartial vaccine against myxomatosis and viral hemorrhagic disease in rabbit |
| US20030211114A1 (en) * | 1998-05-06 | 2003-11-13 | Hodges Robert S. | Vaccine for Pseudomonas aeruginosa |
| EP2034012A1 (en) * | 2007-09-05 | 2009-03-11 | Laboratorios Ovejero, S.A. | Vaccine against viral rabbit hemorrhagic disease |
| RU2388489C1 (en) * | 2008-11-05 | 2010-05-10 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013131335A (en) | 2015-01-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mahony et al. | Stable L-forms of Clostridium perfringens and their growth on glass surfaces | |
| RU2429012C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2452511C1 (en) | Attenuated strain of serotype 2 african swine fever virus for developing diagnostic and vaccine preparations | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2388489C1 (en) | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| RU2553556C1 (en) | Vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2553557C2 (en) | Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2429880C1 (en) | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits | |
| RU2316345C1 (en) | Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
| RU2288002C1 (en) | Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias | |
| RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2406532C1 (en) | Method of producing associated vaccine against streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2406530C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against streptococcosis, pseudomonosis and enterococcal infection of nutrias | |
| RU2388487C1 (en) | Method for preparing vaccine against pseudomonosis of nutrias | |
| RU2443774C1 (en) | Method for producing associated colibacillosis, streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine | |
| RU2531054C1 (en) | Associated pseudomonosis and rabbit viral haemorrhagic disease vaccine | |
| RU2496518C1 (en) | Method for producing associated salmonellosis, escherichiosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine | |
| RU2325183C1 (en) | Production method of animal colibacillosis vaccine | |
| US3843451A (en) | Microorganism production | |
| RU2707289C1 (en) | Method for producing vaccine associated with colibacillosis, streptococcus and pseudomonosis of bovine animals | |
| RU2301077C1 (en) | Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria | |
| RU2404801C1 (en) | Method for manufacturing of vaccine against colibacteriosis of rabbits | |
| RU2301076C1 (en) | Method for preparing mixed vaccine against streptococcosis and enterococcus infection in nutria |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150718 |