RU2301077C1 - Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria - Google Patents

Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria Download PDF

Info

Publication number
RU2301077C1
RU2301077C1 RU2006102834/13A RU2006102834A RU2301077C1 RU 2301077 C1 RU2301077 C1 RU 2301077C1 RU 2006102834/13 A RU2006102834/13 A RU 2006102834/13A RU 2006102834 A RU2006102834 A RU 2006102834A RU 2301077 C1 RU2301077 C1 RU 2301077C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
streptococcosis
salmonellosis
nutria
cultures
coli
Prior art date
Application number
RU2006102834/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Людмила Васильевна Шевченко (RU)
Людмила Васильевна Шевченко
Александр Алексеевич Шевченко (RU)
Александр Алексеевич Шевченко
Анна Александровна Шевченко (RU)
Анна Александровна Шевченко
Елена Александровна Шевченко (RU)
Елена Александровна Шевченко
Original Assignee
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" filed Critical Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет"
Priority to RU2006102834/13A priority Critical patent/RU2301077C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2301077C1 publication Critical patent/RU2301077C1/en

Links

Classifications

    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiology.
SUBSTANCE: invention relates to a method for preparing harmless, specific, highly immune, inactivated, mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria wherein method involves using antigens, inactivation and addition of adjuvant. Method involves selection of damaged organs from dead nutrias in local epizootic focus and preparing suspension from these organs followed by inoculation in differential diagnostic media. Pure cultures of coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis pathogens are isolated. Cultures Escherichia coli, Salmonella typhimurium and Streptococcus pneumoniae are grown separately in beef-extract broth with addition of 0.2% of glucose and with titer value 4-5 billions microbial cells/1 cm3. Inactivation is carried out by addition of formalin in the final concentration 0.4-0.6%. Then cultures are kept at temperature 37°C for 72-96 h and mixed their in equal ratio. Then aluminum hydroxide solution is added in the amount 20% to volume, stirred thoroughly, packaged and sealed. Method provides preparing harmless, immunogenic and highly specific vaccine.
EFFECT: improved preparing method.
1 tbl, 1 ex

Description

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к способу изготовления вакцин, и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся конструированием биопрепаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.The invention relates to veterinary medicine, in particular to a method for manufacturing vaccines, and can be used in research and production institutions involved in the design of biological products, as well as in enterprises of the biological industry.

Известен способ получения поливалентной вакцины против кишечных инфекций (патент РФ на изобретение №2080875 от 18.03.92, МКИ А61К 39/125, 39/135). Данный способ получения поливалентной вакцины включает раздельное выращивание культур Salmonella typhi, Salmonella paratyphi B, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, отделение биомассы от питательной среды, экстракцию антигенов проводят водно-солевым раствором при шуттелировании в присутствии антибиотика и мелкораздробленного стекла в течение 1-1,5 ч, полученные экстракты центрифугируют, очистке подвергают супернатанты и после смешивания получают целевой продукт в виде смеси клеточных стенок, содержащих O-антигены используемых культур, со жгутиками, содержащими Н-антигены, и растворимыми Vi-антигенами сальмонелл. Технология получения данной вакцины очень сложная и для профилактики инфекционных болезней нутрий не применяется.A known method of obtaining a multivalent vaccine against intestinal infections (RF patent for the invention No. 2080875 from 03/18/92, MKI AK61K 39/125, 39/135). This method of obtaining a multivalent vaccine involves the separate cultivation of cultures of Salmonella typhi, Salmonella paratyphi B, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, the separation of biomass from the nutrient medium, the extraction of antigens is carried out with water-saline solution by shuttling in the presence of an antibiotic and finely divided glass for 1-1.5 h, the extracts obtained are centrifuged, supernatants are purified and after mixing the desired product is obtained in the form of a mixture of cell walls containing O-antigens of the cultures used, with flagella containing H-antigen nas, and soluble Salmonella Vi antigens. The technology for producing this vaccine is very complex and is not used to prevent infectious diseases of nutria.

Известен способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099083 от 30.09.94, МКИ А61К 39/125, 39/135). Данный способ предусматривает раздельное выращивание в жидкой питательной среде с добавлением глюкозы штаммов Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в течение 18-24 часов, полученные культуральные среды подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкие фракции, инактивируют 0,3-0,4%-ным раствором формалина, объединяют их в равных соотношениях по объему и последовательно вносят гидроокись алюминия. Данный способ позволяет получать вакцину против стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Технология получения данной вакцины сложная. Такая вакцина после применения у животных вызывает поствакцинальные осложнения, длительность иммунитета 6 месяцев. Эта вакцина позволяет защитить нутрий только от стрептококкоза и пастереллеза.A known method of obtaining a vaccine against streptococcosis and pasteurellosis nutria (RF patent for the invention No. 2099083 from 09/30/94, MKI AK61K 39/125, 39/135). This method provides for separate cultivation in a liquid nutrient medium with the addition of glucose of the strains of Streptococcus zooepidemicus VGNKI No. K-DEPH, Pasteurella multosida VGNKI No. 2394 and Pasteurella multocida VGNKI No. 1015 for 18-24 hours, the obtained culture mediums are subjected to freezing-thawing, the liquid is separated , inactivate 0.3-0.4% formalin solution, combine them in equal proportions by volume and sequentially make aluminum hydroxide. This method allows to obtain a vaccine against streptococcosis and pasteurellosis nutria. The technology for producing this vaccine is complex. Such a vaccine after use in animals causes post-vaccination complications, the duration of immunity is 6 months. This vaccine protects nutria only from streptococcosis and pasteurellosis.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности способа изготовления вакцины против колибактериоза, сльмонеллеза и стрептококкоза у нутрий путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.The technical solution of the problem of the invention is to remedy these shortcomings, in particular, to increase the specificity, efficiency of the method of manufacturing a vaccine against colibacteriosis, slammonellosis and streptococcosis in nutrias by introducing new pure cultures of pathogens, components, excluding negative and side effects.

Решение задачи достигается тем, что способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающий получение антигенов, инактивацию, внесение адъюванта, заключается в том, что проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, раздельно выращивают культуры Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов, смешивают культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.The solution to the problem is achieved by the fact that a method of manufacturing a vaccine associated against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis of nutria, including the production of antigens, inactivation, the introduction of an adjuvant, consists in the selection of affected organs from fallen nutria from the local epizootic focus, from which a suspension is prepared, made sowing on differential diagnostic media, pure cultures of pathogens of colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis are isolated, cultures of Escherichia coli, Sal are separately grown monella typhimurium, Streptococcus pneumoniae in meat and peptone broth with glucose up to 0.2% concentration with a titer of 4-5 billion microbial cells in 1 cm 3 , inactivate by adding formalin to 0.4-0.6% final concentration , kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours, mix the cultures in equal proportions, then add a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume, mix thoroughly, pack and seal.

Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что в отличие от известных способов проводят отбор пораженных органов от павших нутрий в период заболевания и гибели нутрий от колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, приготавливают суспензию из патологического материала, выделают чистые культуры возбудителей посевом на дифференциально-диагностические среды. Используют при раздельном выращивании чистых культур Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae мясопептонный бульон с добавлением глюкозы до 0,2% и получают концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 см3. Инактивируют культуры возбудителей формалином до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов и смешивают чистые культуры в равных соотношениях, что позволяет полностью подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза. Добавление гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему культуры позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 нутриям обеспечить у привитых формирование напряженного иммунитета против двух инфекций. Способ обеспечивает получение безвредной, высокоиммуногенной, более специфичной вакцины для защиты нутрий от колибактериоза сальмонеллеза и стрептококкоза.The novelty of the proposed proposal is due to the fact that, in contrast to the known methods, they carry out the selection of the affected organs from fallen nutria during the disease and the death of the nutria from colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis, prepare a suspension of pathological material, isolate pure cultures of pathogens by sowing on differential diagnostic media. Used for separate cultivation of pure cultures of Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Streptococcus pneumoniae, meat and peptone broth with glucose added up to 0.2% and a microbial cell concentration of at least 4-5 billion in 1 cm 3 is obtained. The pathogen cultures are inactivated by formalin to a 0.4-0.6% final concentration at 37 ° C for 72-96 hours and pure cultures are mixed in equal proportions, which allows to completely suppress pathogenicity and maintain high immunogenicity against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis. The addition of aluminum hydroxide in an amount of 20% to the volume of the culture allows 12-15 days after a single injection at a dose of 1 cm 3 nutria to provide the vaccinated with the formation of intense immunity against two infections. The method provides a harmless, highly immunogenic, more specific vaccine for protecting nutria from colibacillosis of salmonellosis and streptococcosis.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.According to the patent and scientific and technical literature, no similar set of features has been found that allows us to judge the inventive step of the claimed technical solution.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.80 г.; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96 г.; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г.; инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины поливалентной гидроокисьалюминиевой против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, утвержденная ГУВ МСХ СССР 26.04.1984 г. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.With regard to the criterion of "industrial applicability", the components that make up the vaccine are known and widely used in veterinary practice in the manufacture of inactivated vaccines: formolvac vaccine against paratyphoid (salmonellosis) calves TU 46-21-166-75, approved 10.05.75 g ., instructions for the manufacture and control of this vaccine approved by the General Directorate of Veterinary of the Ministry of Agriculture of the USSR 03/28/80; vaccine against paratyphoid (salmonellosis) piglets TU 46-21-952-74, approved July 15, 74, instructions for the manufacture and control of this vaccine approved by the General Directorate of Veterinary of the Ministry of Agriculture of the USSR 10.23.96; associated vaccine against salmonellosis, pasteurellosis and enterococcal infection of piglets TU 10.09-62-90, approved on 08.18.90, the instruction for the manufacture and control of this vaccine was approved by the General Directorate of Veterinary Medicine on 16.07.90; vaccine against enterococcal infection of calves, lambs and piglets TU 10.09-91-90, approved 15.12.90; instructions for the manufacture and control of polyvalent aluminum hydroxide formol vaccine against colibacteriosis (Escherichiosis) of piglets, calves and lambs, approved by the GUV of the Ministry of Agriculture of the USSR on 04/26/1984, however, these vaccines are not used for nutria.

Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». Москва, ВО «Агропромиздат», 1990 г., а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва - Колос, 1995, стр.201-204, в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.222-231.Methods of isolation and characterization of salmonella are described in the guidelines "Laboratory diagnosis of salmonella in humans and animals, the detection of salmonella in feed, food and environmental objects." Moscow, VO "Agropromizdat", 1990, as well as in the reference book "Determinant of zoopathogenic microorganisms" edited by Professor Sidorov MA, Moscow - Kolos, 1995, pp. 201-204, in the "Workshop on Veterinary Microbiology and Immunology" Authors: Kostenko TS, Rodionova VB, Skorodumov DI, M .: Kolos, 2001, pp. 222-231.

Методы выделения чистой культуры возбудителя колибактериоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 г. №13-7-2/2117 Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва - Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.219-222.Methods for isolating a pure culture of the causative agent of colibacteriosis and characteristics are described in the “Methodological guidelines for the bacteriological diagnosis of colibacteriosis (Escherichiosis) of animals”, approved on July 27, 2000 No. 13-7-2 / 2117 by the Department of Veterinary Medicine of the Ministry of Agriculture of the Russian Federation, describes the characteristics of Escherichia in the reference book “Determinant of zoopathogenic microorganisms "edited by Professor Sidorov MA, Moscow - Kolos, 1995, pp. 169-201, as well as in the" Workshop on Veterinary Microbiology and Immunology "authors: Kostenko TS, Rodionova VB, Skorodumov D .I., M .: "Ear", 2001, on pages 219-222.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.90-95.Methods of isolation and characterization of streptococci are presented in the Methodological Instructions for the Laboratory Diagnosis of Animal Streptococcosis, approved on September 25, 1990 by the General Directorate of Veterinary Medicine with the State Inspectorate under the State Commission of the USSR Council of Ministers for Food and Procurement, as well as in the reference book “Identifier of zoopathogenic microorganisms” Professor Sidorov M.A., Moscow. - Kolos, 1995, pp. 90-95.

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей инфекционных болезней колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, раздельно выращивают чистые культуры Escherichia coli, Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae в мясопептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов, смешивают культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему культуры, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.The essence of the proposed method lies in the fact that they carry out the selection of the affected organs from fallen nutria from the local epizootic focus, prepare a suspension of pathological material, make inoculation on differential diagnostic media, isolate pure cultures of pathogens of infectious diseases of colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis, clean cultures are separately grown. Escherichia coli, Salmonella typhimurium and Streptococcus pneumoniae in meat and peptone broth with glucose added to 0.2% concentration with a titer of 4-5 billion microbial cells in 1 cm 3 , inactivate by adding formalin to 0.4-0.6% of the final concentration, incubated at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours, mix the cultures in equal proportions, then add a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20 % to the volume of culture, mix thoroughly, pack and seal.

Пример конкретного осуществления способа изготовления вакцины.An example of a specific implementation of the method of manufacturing a vaccine.

Для изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий проводят отбор пораженных органов от павших нутрий в период заболевания их колибактериозом, сальмонеллезом и стрептококкозом, из которых приготавливают суспензию, и проводят бактериологические исследования с целью выделения чистых культур возбудителей.For the manufacture of a vaccine associated against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis, nutria, the affected organs are selected from fallen nutria during the period of their disease with colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis, from which a suspension is prepared, and bacteriological studies are carried out in order to isolate pure cultures of pathogens.

Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя колибактериоза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий путем прикосновения обезжиренным стеклом к свежему разрезу пораженной ткани и последующей фиксации над пламенем спиртовки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают толстые палочки с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, что характерно для Е.coli.To determine the morphology and tinctorial properties of the causative agent of colibacteriosis, fingerprint smears are prepared from the affected organs of the fallen nutrias by touching a fresh cut of the affected tissue with defatted glass and subsequent fixation over the flame of the spirit lamp, they are stained using the Gram method. When microscopying the preparations under the immersion system of the microscope, thick sticks with rounded red ends, located singly, are observed, which is typical for E. coli.

Для определения культуральных свойств возбудителя колибактериоза нутрий E.coli делают посевы выделенной культуры из патологического материала в мясопептонный бульон (МПБ), на среду Эндо, на мясопептонный агар (МПА) и инкубируют в термостате при 37°С в течение 16-24 часов. На чашках Петри с МПА выростают влажные колонии с ровными краями и гладкой поверхностью серого цвета. В пробирках с МПБ наблюдали равномерное помутнение питательной среды с небольшим осадком, разбивающимся при встряхивании. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдают рост колоний малиново-красного цвета с розовым ободком диаметром 2-3 мм, характерных для Е.coli.To determine the cultural properties of the causative agent of colibacteriosis of E. coli nutria, the selected culture is inoculated from pathological material into meat-peptone broth (MPB), Endo medium, meat-peptone agar (MPA) and incubated in an incubator at 37 ° C for 16-24 hours. On Petri dishes with MPA, wet colonies grow with smooth edges and a smooth gray surface. In test tubes with BCH, a uniform turbidity of the nutrient medium was observed with a small precipitate breaking upon shaking. In Petri dishes, on Endo medium, the growth of raspberry-red colonies with a pink rim of 2-3 mm in diameter, characteristic of E. coli, is observed.

При определении биохимической активности чистых баккультур проводят посевы на дифференциально-диагностические среды с различным набором компонентов. Для Е.coli характерно расщепление глюкозы и лактозы с образованием кислоты и газа, выделение индола, отсутствие уреазы.When determining the biochemical activity of pure bacultures, crops are made on differential diagnostic media with a different set of components. E. coli is characterized by the breakdown of glucose and lactose with the formation of acid and gas, the release of indole, and the absence of urease.

Патогенность чистых выделенных культур определяют путем внутрибрюшинного заражения белых мышей массой 14-18 г. Через 2-4 суток наблюдения все зараженные лабораторные животные погибают при 100% сохранности в контроле. Для подтверждения специфичности гибели мышей из паренхиматозных органов павших мышей приготавливают мазки-отпечатки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании под иммерсионной системой микроскопа в препаратах видны толстые палочки с закругленными концами красного цвета, расположенные одиночно, характерные для Е.coli. Серологическую типизацию кишечной палочки проводят в реакции агглютинации с набором типоспецифических сывороток по общепринятой методике в пробирках.The pathogenicity of pure isolated cultures is determined by intraperitoneal infection of white mice weighing 14-18 g. After 2-4 days of observation, all infected laboratory animals die at 100% safety in the control. To confirm the specificity of the death of mice from the parenchymal organs of the fallen mice, fingerprints are prepared and stained using the Gram method. When microscoping under the immersion system of the microscope, thick sticks with rounded red ends, located singly, characteristic of E. coli, are visible in the preparations. Serological typification of Escherichia coli is carried out in an agglutination reaction with a set of type-specific sera according to the standard technique in test tubes.

В реакции агглютинации исследуемая культура кишечной палочки реагирует с колисывороткой и виден хлопьевидный осадок (положительный результат) при отрицательном контроле.In the agglutination reaction, the test culture of Escherichia coli reacts with colic serum and a flocculent precipitate (positive result) is visible with a negative control.

Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя сальмонеллеза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают тонкие палочки красного цвета, расположенные одиночно, характерные для рода Salmonella.To determine the morphology and tinctorial properties of the pathogen of salmonellosis, fingerprint smears are prepared from the affected organs of the fallen nutria, and they are stained using the Gram method. When microscopying the preparations under the immersion system of the microscope, thin red rods are observed, located singly, characteristic of the genus Salmonella.

Для определения культуральных свойств возбудителя сальмонеллеза нутрий делают посевы выделенной культуры из патологического материала в мясопептонный бульон (МПБ), на дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, висмутсульфитный агар), на мясопептонный агар (МПА) и инкубируют в термостате при 37°С в течение 16-24 часов. На чашках Петри с МПА выростают гладкие, прозрачные, бесцветные колонии с ровными краями. В пробирках с МПБ наблюдают диффузное помутнение питательной среды. В чашках Петри, на среде Эндо наблюдают прозрачные бесцветные колонии, на среде Левина - голубоватые, на висмутсульфитном агаре - черные колонии с характерным металлическим блеском, что характерно для рода Salmonella.To determine the cultural properties of the causative agent of salmonellosis nutria, the selected culture is inoculated from pathological material into meat-peptone broth (MPB), on differential diagnostic media (Endo, Levina, bismuth sulfite agar), on meat-peptone agar (MPA) and incubated in an incubator at 37 ° C in within 16-24 hours. Smooth, transparent, colorless colonies with even edges grow on Petri dishes with MPA. In test tubes with BCH, diffuse turbidity of the nutrient medium is observed. Transparent colorless colonies are observed in Petri dishes, on Endo medium, bluish on Levin medium, black colonies with a characteristic metallic luster on bismuth sulphite agar, which is typical for the genus Salmonella.

При определении биохимической активности чистых культур проводят посевы на дифференциально-диагностические среды с различным набором углеводов и компонентов.When determining the biochemical activity of pure cultures, crops are sown on differential diagnostic media with a different set of carbohydrates and components.

Выделенная чистая культура возбудителя сальмонеллеза, характерная для представителей рода сальмонелл, ферментирует глюкозу, маннит, не утилизирует лактозу, сахарозу, не расщепляет мочевину, не образует индол, не разжижает желатину.The isolated pure culture of the pathogen of salmonellosis, characteristic of representatives of the genus Salmonella, ferments glucose, mannitol, does not utilize lactose, sucrose, does not break down urea, does not form indole, and does not dilute gelatin.

Патогенность и специфичность чистой выделенной культуры определяют путем внутрибрюшинного заражения белых мышей массой 14-18 г. Через 2-4 суток наблюдения все зараженные лабораторные животные погибают при 100% сохранности в контроле. Для подтверждения специфичности гибели белых мышей из паренхиматозных органов павших мышей готовят мазки-отпечатки, окрашивают их по методу Грама. При микроскопировании под иммерсионной системой микроскопа наблюдают тонкие палочки красного цвета, расположенные одиночно, характерные для рода Salmonella.The pathogenicity and specificity of the pure isolated culture is determined by intraperitoneal infection of white mice weighing 14-18 g. After 2-4 days of observation, all infected laboratory animals die at 100% safety in the control. To confirm the specificity of the death of white mice from the parenchymal organs of fallen mice, fingerprints are prepared and stained using the Gram method. When microscoping under the immersion system of the microscope, thin red rods are observed, located singly, characteristic of the genus Salmonella.

Для установления серотиповой принадлежности выделенной чистой культуры Salmonella ставят реакцию агглютинации (РА) на стекле по общепринятой методике. Выделенную чистую культуру проверяют с О-комплексными и монореценторными О- и Н-агглютинирующими сыворотками в реакции агглютинации. Для этого выделенную чистую культуру выращивают на скошенном МПА в течение 18-24 ч при температуре 37°С. РА на стекле ставят с каждой из О-комплексных сывороток последовательно до получения положительного результата с двумя сыворотками. Положительный результат РА наблюдают в виде с трудом разбивающихся хлопьев с выделенной культурой Salmonella typhimurium.To establish the serotypic affiliation of the isolated pure Salmonella culture, an agglutination reaction (RA) was placed on glass according to the generally accepted method. The isolated pure culture was tested with O-complex and monorecentric O- and H-agglutinating sera in the agglutination reaction. To do this, the selected pure culture is grown on a beveled MPA for 18-24 hours at a temperature of 37 ° C. RA on glass is placed with each of the O-complex sera in series until a positive result with two sera is obtained. A positive RA result is observed in the form of hard-breaking flakes with an isolated culture of Salmonella typhimurium.

Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя стрептококкоза готовят мазки-отпечатки из пораженных органов павших нутрий, окрашивают их по методу Грама. При микроскопии препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают мелкие кокки в виде цепочек, окрашенные в фиолетовый цвет, характерные для рода Streptococcus. Для определения культуральных свойств возбудителя делают посевы выделенной культуры из патматериала в мясопептонный бульон с добавлением глюкозы до 0,2%-ной конечной концентрации и 10% инактивированной сыворотки лошади (МПБ), в чашки Петри с мясопептонным агаром (МПА) с добавлением глюкозы до 0,2%-ной конечной концентрации и 5% дефибринированной крови кролика. Через 18-20 часов инкубирования в термостате при температуре 37°С наблюдают в МПБ рост в виде диффузного помутнения среды. В чашках Петри с кровяным МПА наблюдают рост мелких росинчатых, слегка мутноватых с ровными краями колоний, окруженных зеленоватой зоной гемолиза, что характерно для Streptococcus pneumoniae.To determine the morphology and tinctorial properties of the causative agent of streptococcosis, fingerprint smears are prepared from the affected organs of the fallen nutria, and they are stained using the Gram method. Microscopy of preparations under the immersion microscope system observed small cocci in the form of chains, colored in purple, characteristic of the genus Streptococcus. To determine the cultural properties of the pathogen, crops of the isolated culture are made from the material in the meat and peptone broth with glucose up to 0.2% final concentration and 10% inactivated horse serum (MPB), in Petri dishes with meat peptone agar (MPA) with glucose up to 0 , 2% final concentration and 5% defibrinated rabbit blood. After 18-20 hours of incubation in a thermostat at a temperature of 37 ° C, growth in the form of diffuse turbidity of the medium is observed in the BCH. In petri dishes with blood MPA, growth of small dewy, slightly turbid with flat edges of colonies surrounded by a greenish hemolysis zone is observed, which is typical for Streptococcus pneumoniae.

Для дифференциации стрептококков от стафилококков используют каталазную пробу. При постановке каталазной пробы на предметное стекло наносят каплю свежеприготовленного 3%-ного раствора перекиси водорода. Бактериологической петлей снимают одну колонию исследуемой культуры и растирают ее в капле перекиси водорода. Стафилококки, в отличие от стрептококков, образуют каталазу и вызывают пенообразование. Для предварительной идентификации стрептококков и энтерококков баккультуру высевают в пробирки с 10%, 40% желчи, с 6,5% хлористого натрия, с углеводами (раффинозой, сорбитом, маннитом), учитывают рост в жидкой среде и гемолиз на МПА с кровью.To differentiate streptococci from staphylococci, a catalase test is used. When staging a catalase sample, a drop of a freshly prepared 3% hydrogen peroxide solution is applied to a glass slide. Bacteriological loop remove one colony of the studied culture and rub it in a drop of hydrogen peroxide. Staphylococci, unlike streptococci, form catalase and cause foaming. For preliminary identification of streptococci and enterococci, the culture is seeded in test tubes with 10%, 40% bile, with 6.5% sodium chloride, with carbohydrates (raffinose, sorbitol, mannitol), growth in a liquid medium and hemolysis on MPA with blood are taken into account.

В результате в пробирках с желчью наблюдают диффузный рост баккультуры, отмечают ферментацию маннита. На МПА с кровью наблюдают неполный гемолиз эритроцитов с образованием вокруг колоний зеленоватой зоны, что характерно для стрептококков группы D.As a result, diffuse growth of baculture is observed in test tubes with bile, fermentation of mannitol is noted. On blood MPA, incomplete hemolysis of red blood cells is observed with the formation of a greenish zone around the colonies, which is typical for group D streptococci.

Для установления серогрупповой принадлежности стрептококков используют стрептококковые групповые преципитирующие сыворотки. Серогрупповую принадлежность стрептококков определяют в реакции преципитации (РП) в капиллярах. Патогенность подтверждают биопробой на молодых белых мышках.To establish the serogroup affiliation of streptococci, streptococcal group precipitating serums are used. The serogroup affiliation of streptococci is determined in the precipitation reaction (RP) in the capillaries. Pathogenicity is confirmed by bioassay on young white mice.

Выделенные таким образом чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae используют для получения баксырья. Выращивание чистых культур возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза проводят раздельно в мясопептонном бульоне.Pure cultures of Escherichia coli colibacteriosis, Salmonella salmonella typhimurium salmonellosis and Streptococcus pneumoniae streptococcosis pathogens isolated in this way are used to produce bakery. The cultivation of pure cultures of pathogens of colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis is carried out separately in meat and peptone broth.

При получении чистой культуры возбудителя колибактериоза для заражения берут 1-2 см3 свежей культуры E.coli, засевают 80-100 см3 жидкой питательной среды и выращивают при 37°С в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту мутности и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 5-6 млрд. в 1 см3. Инактивацию полученного баксырья проводят внесением формалина 0,5-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов при периодическом перемешивании.Upon receipt of a pure culture of the causative agent of colibacteriosis, 1-2 cm 3 of fresh E. coli culture are taken for infection, 80-100 cm 3 of liquid nutrient medium are inoculated and grown at 37 ° C for 12-14 hours. The concentration of microbial cells in the bacterial mass is determined according to the turbidity standard and diluted with sterile distilled water to a concentration of 5-6 billion in 1 cm 3 . The inactivation of the obtained raw materials is carried out by introducing formalin of 0.5-0.6% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours with periodic stirring.

При получении чистой культуры возбудителя сальмонеллеза для заражения берут 5 см3 свежей чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium на 1000 см3 мясопептонной питательной среды с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации и выращивают при 37°С в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту мутности и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 4-5 млрд. в 1 см3. Инактивацию полученного баксырья проводят внесением формалина 0,4-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов при периодическом перемешивании.Upon receipt of a pure culture of the pathogen of salmonellosis for infection, take 5 cm 3 fresh pure culture of the pathogen of salmonellosis Salmonella typhimurium per 1000 cm 3 meat-peptone nutrient medium with the addition of glucose to 0.2% concentration and grown at 37 ° C for 12-14 hours. The concentration of microbial cells in the bacterial mass is determined according to the turbidity standard and diluted with sterile distilled water to a concentration of 4-5 billion in 1 cm 3 . The inactivation of the obtained raw materials is carried out by introducing formalin of 0.4-0.6% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours with periodic stirring.

При получении чистой культуры возбудителя стрептококкоза для заражения берут 5 см3 чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae на 1000 см3 жидкой питательной среды с добавлением 0,2% глюкозы и выращивают при 37°С в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 4-5 млрд. в 1 см3. Инактивацию баксырья проводят раздельно внесением формалина 0,4-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов при периодическом перемешивании, смешивают инактивированные баккультуры в равных соотношениях. Затем к смеси баккультур добавляют раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему и тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.Upon receipt of a pure culture of the causative agent of streptococcosis for infection, take 5 cm 3 of a pure culture of the causative agent of streptococcosis Streptococcus pneumoniae per 1000 cm 3 of liquid nutrient medium with the addition of 0.2% glucose and grown at 37 ° C for 12-14 hours. The concentration of microbial cells in the bacterial mass is determined according to the standard and diluted with sterile distilled water to a concentration of 4-5 billion in 1 cm 3 . Inactivation of bakery is carried out separately by adding formalin of 0.4-0.6% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours with periodic stirring, inactivated baculture is mixed in equal proportions. Then, a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume is added to the mixture of bacultures and thoroughly mixed, packaged and sealed.

Таким образом, использование для изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, колибактериоза и стрептококкоза нутрий чистых культур возбудителей Escherichia coli, Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae, выделенных из местного эпизоотического очага, позволяет получать более специфичную, высокоиммуногенную, ассоциированную вакцину для защиты от этих трех опасных инфекционных болезней: колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Раздельное выращивание возбудителей с содержанием 0,2% глюкозы позволяет получать концентрацию бактериальных клеток не менее 4 млрд. в 1 см3 в течение 12-14 часов инкубирования. Использование формалина для инактивации в 0,4-0,6%-ной конечной концентрации позволяет в течение 72-96 часов при температуре 37°С подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность в течение 12 месяцев хранения. Адсорбирование трех антигенов на гидроокиси алюминия позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 нутриям обеспечить у привитых нутрий формирование напряженного иммунитета против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). После однократного введения нутриям внутримышечно не вызывает у них поствакцинальных осложнений (таблица).Thus, the use of pure cultures of Escherichia coli, Salmonella typhimurium, and Streptococcus pneumoniae pathogens isolated from the local epizootic foci for the preparation of a vaccine associated with salmonellosis, colibacteriosis, and streptococcosis of nutria allows obtaining a more specific, highly immunogenic, associated vaccine to protect against these three dangerous : colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis nutria. Separate growth of pathogens with a content of 0.2% glucose allows to obtain a concentration of bacterial cells of at least 4 billion in 1 cm 3 during 12-14 hours of incubation. The use of formalin for inactivation in 0.4-0.6% of the final concentration allows to suppress pathogenicity for 72-96 hours at a temperature of 37 ° C and maintain high immunogenicity for 12 months of storage. The adsorption of three antigens on aluminum hydroxide allows 12-15 days after a single injection of 1 cm 3 nutria to provide the vaccinated nutria with the formation of intense immunity against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis lasting at least 9 months (observation period). After a single administration to nutria, intramuscularly does not cause post-vaccination complications in them (table).

Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.The proposed method is simple to implement, affordable and is industrially applicable.

Таблица
Сравнительная характеристика изготовления вакцины по предлагаемому способу и прототипу
Table
Comparative characteristics of the manufacture of the vaccine according to the proposed method and prototype
№ п/пNo. p / p Отличительные признакиFeatures ПрототипPrototype Предлагаемый способThe proposed method 1.one. ВозбудителиPathogens Штаммы Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ № К-ДЕП, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015Strains of Streptococcus zooepidemicus VGNKI No. K-DEPT, Pasteurella multosida VGNKI No. 2394 and Pasteurella multocida VGNKI No. 1015 Чистые баккультуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очагаPure bacterial cultures of Escherichia coli colibacteriosis, Salmonella typhimurium salmonellosis and Streptococcus pneumoniae streptococcosis isolated from local epizootic foci 2.2. подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкую фракциюsubjected to freezing-thawing, the liquid fraction is separated Обязательно проводитсяNecessarily carried out Не проводитсяNot carried out 3.3. Инактивация бактериальной массыInactivation of the bacterial mass 0,3-0,4%-ный раствор формалина выдерживают в течение 44-50 ч0.3-0.4% formalin solution is incubated for 44-50 hours 0,4-0,6%-ной концентрации формалина в течение 72-96 часов при температуре 37°С0.4-0.6% formalin concentration for 72-96 hours at a temperature of 37 ° C 4.four. АдъювантAdjuvant 3%-ный раствор гидроокиси алюминия в количестве 10% к объему3% solution of aluminum hydroxide in an amount of 10% by volume гидроокись алюминия 20% к объемуaluminum hydroxide 20% by volume 5.5. Поствакцинальные осложненияPost-vaccination complications У нутрий после введения вакцины хромата, воспалительные процессыIn nutria, after administration of the chromate vaccine, inflammatory processes НетNo 6.6. Длительность иммунитетаImmunity duration 6 мес6 months 9 мес9 months

Таким образом, данные таблицы показывают преимущества предлагаемого способа изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий по сравнению с имеющимся прототипом.Thus, these tables show the advantages of the proposed method for the manufacture of a vaccine associated against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis of nutria in comparison with the existing prototype.

Claims (1)

Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, заключающийся в том, что проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза, раздельно выращивают культуры Escherichia coli, Salmonella typhimurium и Streptococcus pneumoniae в мясо-пептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3, инактивируют путем внесения формалина до 0,4-0,6%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 ч, смешивают культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.A method of manufacturing a vaccine associated against colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis of nutria, which consists in the selection of affected organs from fallen nutria from the local epizootic focus, from which the suspension is prepared, inoculation on differential diagnostic media, pure cultures of causative agents of colibacteriosis, salmonellosis and streptococcosis, cultures of Escherichia coli, Salmonella typhimurium and Streptococcus pneumoniae are separately grown in meat-peptone broth with glucose added to 0.2% concentration with t Trom 4-5 billion microbial cells per 1 cm 3, inactivated by formalin making up 0.4-0.6% strength final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours, cultures were mixed in equal proportions, then make a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume, mix thoroughly, pack and seal.
RU2006102834/13A 2006-01-31 2006-01-31 Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria RU2301077C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006102834/13A RU2301077C1 (en) 2006-01-31 2006-01-31 Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006102834/13A RU2301077C1 (en) 2006-01-31 2006-01-31 Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2301077C1 true RU2301077C1 (en) 2007-06-20

Family

ID=38314262

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006102834/13A RU2301077C1 (en) 2006-01-31 2006-01-31 Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2301077C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2443775C1 (en) * 2010-06-29 2012-02-27 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" Associated colibacillosis, streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2443775C1 (en) * 2010-06-29 2012-02-27 Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" Associated colibacillosis, streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2429012C1 (en) Method of manufacturing associated vaccine against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets
RU2388489C1 (en) Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias
RU2316345C1 (en) Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias
RU2301077C1 (en) Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria
RU2538158C1 (en) Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle
RU2288002C1 (en) Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias
Tairov et al. Cultural, biochemical, and pathogenic properties of Escherichia coli isolated from birds
RU2432174C1 (en) Method for producing colibacillosis anatoxin
RU2309767C1 (en) Method for manufacturing vaccine against pseudomonosis in swine
RU2338554C2 (en) Method of manufacturing of vaccine associated against colibacillosis, salmonellosis and enterococcus infections of nutrias
RU2292915C1 (en) Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and colibacteriosis in nutrias
RU2292911C1 (en) Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and streptococcosis in nutrias
RU2429880C1 (en) Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits
RU2406532C1 (en) Method of producing associated vaccine against streptococcosis and staphylococcosis of cattle
RU2292914C1 (en) Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and enterococcal infection in nutrias
RU2301076C1 (en) Method for preparing mixed vaccine against streptococcosis and enterococcus infection in nutria
RU2406530C1 (en) Method of manufacturing associated vaccine against streptococcosis, pseudomonosis and enterococcal infection of nutrias
RU2707289C1 (en) Method for producing vaccine associated with colibacillosis, streptococcus and pseudomonosis of bovine animals
RU2443774C1 (en) Method for producing associated colibacillosis, streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine
RU2496518C1 (en) Method for producing associated salmonellosis, escherichiosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine
RU2279891C1 (en) Method for production of vaccine against coypu salmonellosis
RU2288005C1 (en) Method for preparing vaccine against colibacteriosis in nutrias
RU2404801C1 (en) Method for manufacturing of vaccine against colibacteriosis of rabbits
RU2804137C1 (en) Streptococcus pneumoniae strain serotype 19f
RU2221864C2 (en) Bacterium strain klebsiella pneumoniae deposited in vgnki at = 23 mgavmib-dep for producing vaccine against klebsiellosis in agriculture young stock

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080201