RU2429880C1 - Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits - Google Patents
Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits Download PDFInfo
- Publication number
- RU2429880C1 RU2429880C1 RU2010114396/15A RU2010114396A RU2429880C1 RU 2429880 C1 RU2429880 C1 RU 2429880C1 RU 2010114396/15 A RU2010114396/15 A RU 2010114396/15A RU 2010114396 A RU2010114396 A RU 2010114396A RU 2429880 C1 RU2429880 C1 RU 2429880C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rabbits
- suspension
- vaccine
- cultures
- concentration
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу изготовления ассоциированной вакцины против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся разработкой и конструированием вакцинных препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.The invention relates to the field of veterinary medicine, in particular to a method for the manufacture of an associated vaccine against streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease, and can be used in research and production institutions involved in the development and construction of vaccines, as well as in enterprises of the biological industry.
Известен способ получения поливалентной вакцины против кишечных инфекций (патент РФ на изобретение №2080875 от 18.03.92, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ получения поливалентной вакцины включает раздельное выращивание культур Salmonella typhi, Salmonella paratyphi В, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, отделение биомассы от питательной среды, экстракцию антигенов проводят водно-солевым раствором при шуттелировании в присутствии антибиотика и мелкораздробленного стекла в течение 1-1,5 ч, полученные экстракты центрифугируют, очистке подвергают супернатанты и после смешивания получают целевой продукт в виде смеси клеточных стенок, содержащих О-антигены используемых культур, со жгутиками, содержащими Н-антигены, и растворимыми Vi-антигенами сальмонелл. Технология получения данной вакцины очень сложная и для профилактики инфекционных болезней кроликов не рекомендуется.A known method of obtaining a multivalent vaccine against intestinal infections (RF patent for the invention No. 2080875 of 03/18/92, MKI A61K 39/125, 39/135). This method of obtaining a multivalent vaccine involves the separate cultivation of cultures of Salmonella typhi, Salmonella paratyphi B, Shigella Flexneria, Shigella Sonne, the separation of biomass from the nutrient medium, the extraction of antigens is carried out with saline in water in the presence of antibiotic and finely divided glass for 1-1.5 h, the extracts obtained are centrifuged, supernatants are purified and after mixing the desired product is obtained in the form of a mixture of cell walls containing O-antigens of the cultures used, with flagella containing H-antigens veins, and soluble Vi-antigens of Salmonella. The technology for producing this vaccine is very complex and is not recommended for the prevention of rabbit infectious diseases.
Известен способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099083 от 30.09.94, МКИ A61K 39/125, 39/135). Данный способ предусматривает раздельное выращивание в жидкой питательной среде с добавлением глюкозы штаммов Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП, Pasteurella multocida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в течение 18-24 часов, полученные культуральные среды подвергают замораживанию-оттаиванию, отделяют жидкие фракции, инактивируют 0,3-0,4%-ным раствором формалина, объединяют их в равных соотношениях по объему и последовательно вносят гидроокись алюминия. Данный способ позволяет получать вакцину против стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Технология получения данной вакцины сложная, после введения животным вызывает поствакцинальные осложнения (воспаление, абсцессы, хромоту).A known method of obtaining a vaccine against streptococcosis and pasteurellosis nutria (RF patent for the invention No. 2099083 from 09/30/94, MKI A61K 39/125, 39/135). This method involves separate cultivation in a liquid nutrient medium with the addition of glucose of the strains of Streptococcus zooepidemicus VGNKI No. K-DEPT, Pasteurella multocida VGNKI No. 2394 and Pasteurella multocida VGNKI No. 1015 for 18-24 hours, the obtained culture media are subjected to freezing-thawing, the liquid is separated , inactivate with 0.3-0.4% formalin solution, combine them in equal proportions by volume and sequentially introduce aluminum hydroxide. This method allows to obtain a vaccine against streptococcosis and pasteurellosis nutria. The technology for producing this vaccine is complex, after administration to animals it causes post-vaccination complications (inflammation, abscesses, lameness).
Известен способ изготовления бивалентной вакцины против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (патент РФ на изобретение №2064304 от 27.07.96, МКИ A61K 39/275). Данный способ предусматривает раздельное выращивание вакцинного вируса миксоматоза кроликов в культуре клеток куриных фибробластов с активностью не 104,0 ИД 50/см3 замораживают-оттаивают, смешивают с инактивированной суспензией печени кроликов, зараженной вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, в соотношении 1:1, стабилизируют полученную смесь защитной средой при соотношении 10:1, фасуют и лиофилизируют после замораживания при минус 55±5°С в течение 10±2 ч путем выдерживания материала при температуре от минус 50±5°С до 0°С в течение 31±1 ч и затем от 0°С до плюс 20±1°С и досушивают в течение 3±1 ч.A known method of manufacturing a bivalent vaccine against myxomatosis and viral hemorrhagic disease of rabbits (RF patent for the invention No. 2064304 from 07/27/96, MKI A61K 39/275). This method involves the separate cultivation of the rabbit myxomatosis vaccine virus in a chicken fibroblast cell culture with an activity of not 10 4.0 ID 50 / cm 3, frozen, thawed, mixed with an inactivated rabbit liver suspension infected with a virulent rabbit hemorrhagic disease virus, in a 1: 1 ratio, stabilize the mixture with a protective medium at a ratio of 10: 1, pack and lyophilize after freezing at minus 55 ± 5 ° C for 10 ± 2 hours by holding the material at a temperature of minus 50 ± 5 ° C to 0 ° C for of 31 ± 1 hours and then 0 ° C to + 20 ± 1 ° C and finally dried for 3 ± 1 hours.
Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности способа изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, путем введения новых возбудителей, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияние.The technical solution to the problem of the invention is to remedy these shortcomings, in particular, to increase the specificity, efficiency of the method for manufacturing the vaccine associated against streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits by introducing new pathogens, components, eliminating the negative and side effects.
Поставленная задача достигается тем, что способ изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, включающий получение антигенов, инактивацию, внесение адъюванта, отличается тем, что проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей, раздельно выращивают культуры Streptococcus pneumoniae в мясо-пептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3, приготавливают 10-15%-ную суспензию печени кроликов, павших от заражения вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, раздельно инактивируют путем внесения формалина до 0,1-0,4%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 72-96 часов, смешивают культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.This object is achieved in that a method of manufacturing a vaccine associated against streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits, including the production of antigens, inactivation, the introduction of adjuvant, is characterized in that the affected organs are selected from the dead rabbits from the local epizootic focus, from which the suspension is prepared, and the culture is made on differential diagnostic media, pure cultures of pathogens are isolated, cultures of Streptococcus pneumoniae are separately grown in meat-peptone broth with added glucose cm to 0.2% concentration with a titer of 5.4 billion microbial cells per 1 cm 3, prepared by 10-15% suspension of rabbit liver died from infection with a virulent rabbit haemorrhagic disease virus, inactivated by introducing separately formalin to 0 , 1-0.4% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 72-96 hours, mix the cultures in equal proportions, then add a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume, mix thoroughly, pack and seal.
Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что в отличие от известных способов проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания, гибели их от стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, приготавливают суспензию, выделают чистые культуры возбудителей посевом на дифференциально-диагностические среды. Используют при раздельном выращивании чистой культуры Streptococcus pneumoniae в мясо-пептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2% и получают концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 см3. Для получения специфичного вирусного сырья кроликов заражают вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из местного эпизоотического очага, проводят экстрагирование вируса из 10-15%-ной суспензии печени павших кроликов при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов при периодическом перемешивании и освобождение от клеточного детрита фильтрованием через два слоя марли, что позволяет увеличить выход вирусного сырья в два-три раза. Инактивируют культуры возбудителей раздельно формалином до 0,1-0,4%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов и смешивают инактивированные культуры в равных соотношениях, что позволяет полностью подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Добавление гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему культуры позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 кроликов обеспечить у привитых формирование напряженного иммунитета против двух инфекционных болезней. Способ обеспечивает получение безвредной, высокоиммуногенной, специфичной вакцины для защиты кроликов от стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.The novelty of the proposed proposal is due to the fact that, in contrast to known methods, the selection of affected organs from dead rabbits during the disease period, their death from streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits is carried out, a suspension is prepared, pure cultures of pathogens are sown on differential diagnostic media. Used for separate cultivation of a pure culture of Streptococcus pneumoniae in meat-peptone broth with the addition of glucose up to 0.2%, a microbial cell concentration of at least 4-5 billion in 1 cm 3 is obtained. To obtain specific viral raw materials, rabbits are infected with the rabbit hemorrhagic disease virus isolated from the local epizootic foci, the virus is extracted from a 10-15% suspension of the liver of dead rabbits at a temperature of 4-6 ° C for 10-12 hours with periodic stirring and release from cell detritus by filtration through two layers of gauze, which allows to increase the yield of viral raw materials in two to three times. The pathogens are inactivated separately by formalin to 0.1-0.4% final concentration at 37 ° C for 72-96 hours and inactivated cultures are mixed in equal proportions, which allows to completely suppress pathogenicity and maintain high immunogenicity against streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits. The addition of aluminum hydroxide in an amount of 20% to the culture volume allows 12-15 days after a single injection of 1 cm 3 rabbits to ensure the formation of intense immunity against two infectious diseases in vaccinated. The method provides a harmless, highly immunogenic, specific vaccine for protecting rabbits from streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.According to the patent and scientific and technical literature, no similar set of features has been found that allows us to judge the inventive step of the claimed technical solution.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов (СТО 00495549-0044-2007); ассоциированная вакцина против пастереллеза и вирусной геморрагической болезни кроликов (ТУ утверждены 30.09.94 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена 27.05.94 г.); ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят, ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят, ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г.; вакцина против геморрагической болезни кроликов тканевая инактивированная гидроокисьалюминиевая СТО 00495549-0005-2006.As for the criterion of "industrial applicability", the components that make up the vaccine are known and widely used in veterinary practice in the manufacture of inactivated vaccines: the associated vaccine against myxomatosis and rabbit viral hemorrhagic disease (STO 00495549-0044-2007); associated vaccine against pasteurellosis and viral hemorrhagic disease of rabbits (TU approved on September 30, 94; instructions for the manufacture and control of this vaccine approved on May 27, 94); associated vaccine against salmonellosis, pasteurellosis and enterococcal infection of piglets, TU 10.09-62-90, approved on 01.08.90, instructions for the manufacture and control of this vaccine approved by the General Directorate of Veterinary Medicine on 16.07.90; vaccine against enterococcal infection of calves, lambs and piglets, TU 10.09-91-90, approved 15.12.90; vaccine against rabbit hemorrhagic disease tissue inactivated aluminum hydroxide STO 00495549-0005-2006.
Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.90-95.Methods of isolation and characterization of streptococci are presented in the Methodological Instructions for the Laboratory Diagnosis of Animal Streptococcosis, approved on September 25, 1990 by the General Directorate of Veterinary Medicine with the State Inspectorate under the State Commission of the USSR Council of Ministers for Food and Procurement, as well as in the reference book “Identifier of zoopathogenic microorganisms” Professor Sidorov M.A., Moscow. - Kolos, 1995, pp. 90-95.
Методы выделения и характеристика вирусной геморрагической болезни кроликов описаны в «Методических указаниях по лабораторной диагностике вирусной геморрагической болезни кроликов», утвержденных ГУВ Госагропрома СССР 28.12.88.г; в книге «Вирусная геморрагическая болезнь кроликов», авторы: Шевченко А.А., Вишняков И.Ф., Бакулов И.А., Власова Т.А. М.: «Две Короны», 1995, 48 с.; в книге «Болезни кроликов», авторы: Шевченко А.А., Шевченко Л.В., Литвинов A.M. М.: «Аквариум», 2002, стр.42-57.Methods of isolation and characterization of rabbit viral hemorrhagic disease are described in the "Guidelines for the laboratory diagnosis of rabbit viral hemorrhagic disease", approved by the State Administration for Agriculture of the USSR on 12/28/08; in the book "Viral hemorrhagic disease of rabbits", authors: Shevchenko AA, Vishnyakov I.F., Bakulov I.A., Vlasova T.A. M .: “Two Crowns”, 1995, 48 p .; in the book “Rabbit Diseases”, authors: Shevchenko A.A., Shevchenko L.V., Litvinov A.M. M .: "Aquarium", 2002, p. 42-57.
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что проводят отбор пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей инфекционных болезней стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов, раздельно выращивают чистую культуру возбудителя Streptococcus pneumoniae в мясо-пептонном бульоне с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3, а вирусом геморрагической болезни кроликов заражают кроликов, которые погибают через 48-72 ч. Затем приготавливают 10-15%-ную суспензию из печени павших кроликов от зараженных вирусом геморрагической болезни кроликов, инактивируют раздельно путем внесения формалина до 0,1-0,4%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-96 часов, смешивают инактивированные культуры в равных соотношениях, затем вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему, тщательно смешивают, фасуют и укупоривают.The essence of the proposed method lies in the fact that they carry out the selection of affected organs from dead rabbits from the local epizootic focus, prepare a suspension, make inoculation on differential diagnostic media, isolate pure cultures of infectious diseases of streptococcosis and viral hemorrhagic rabbit disease, separately cultivate a pure culture of Streptococcus pathogen pneumoniae in meat-peptone broth supplemented with glucose to 0.2% concentration with a titer of 4.5 billion microbial cells per 1 cm 3, and virus hemorrhages In case of rabies disease, rabbits are infected, which die after 48-72 hours. Then, a 10-15% suspension from the liver of dead rabbits from rabbits infected with the hemorrhagic disease virus is prepared, inactivated separately by adding formalin to 0.1-0.4% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours, mixed inactivated cultures in equal proportions, then add a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume, mix thoroughly, pack and seal.
Пример конкретного осуществления способа изготовления вакциныAn example of a specific implementation of the method of manufacturing a vaccine
Для изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов проводят отбор пораженных органов от павших кроликов в период заболевания их стрептококкозом и вирусной геморрагической болезнью, из которых приготавливают суспензию, и проводят лабораторные исследования с целью выделения чистых культур возбудителей.To produce a vaccine associated with streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits, the selection of affected organs from dead rabbits during the disease of their streptococcosis and viral hemorrhagic disease, from which a suspension is prepared, is carried out and laboratory studies are performed to isolate pure cultures of pathogens.
Для определения морфологии и тинкториальных свойств возбудителя стрептококкоза готовят мазки - отпечатки из пораженных органов павших нутрий, путем прикосновения обезжиренным стеклом к свежему разрезу пораженной ткани и последующей фиксацией над пламенем спиртовки окрашивают их по методу Грама. При микроскопии препаратов под иммерсионной системой микроскопа наблюдают мелкие кокки в виде цепочек, окрашенные в фиолетовый цвет, характерные для рода Streptococcus. Для определения культуральных свойств возбудителя делают посевы выделенной культуры из патматериала в мясо-пептонный бульон с добавлением глюкозы до 0,2%-ной конечной концентрации и 10% инактивированной сыворотки лошади (МПБ) в чашки Петри с мясо-пептонным агаром (МПА) с добавлением глюкозы до 0,2%-ной конечной концентрации и 5% дефибринированной крови кролика. Через 18-20 часов инкубирования в термостате при температуре 37°С наблюдают в МПБ рост в виде диффузного помутнения среды. В чашках Петри с кровяным МПА наблюдают рост мелких росинчатых, слегка мутноватых с ровными краями колоний, окруженных зеленоватой зоной гемолиза, что характерно для Streptococcus pneumoniae.To determine the morphology and tinctorial properties of the causative agent of streptococcosis, smears are prepared - prints from the affected organs of the fallen nutria, by staining with a fat-free glass to a fresh section of the affected tissue and subsequent fixation over the flame of an alcohol lamp, they are stained using the Gram method. Microscopy of preparations under the immersion microscope system observed small cocci in the form of chains, colored in purple, characteristic of the genus Streptococcus. To determine the cultural properties of the pathogen, crops of the isolated culture are made from the material in the meat-peptone broth with glucose up to 0.2% final concentration and 10% inactivated horse serum (MPB) in Petri dishes with meat-peptone agar (MPA) with the addition of glucose up to 0.2% final concentration and 5% defibrinated rabbit blood. After 18-20 hours of incubation in a thermostat at a temperature of 37 ° C, growth in the form of diffuse turbidity of the medium is observed in the BCH. In petri dishes with blood MPA, growth of small dewy, slightly turbid with flat edges of colonies surrounded by a greenish hemolysis zone is observed, which is typical for Streptococcus pneumoniae.
Для дифференциации стрептококков от стафилококков используют каталазную пробу. При постановке каталазной пробы на предметное стекло наносят каплю свежеприготовленного 3%-ного раствора перекиси водорода. Бактериологической петлей снимают одну колонию исследуемой культуры и растирают ее в капле перекиси водорода. Стафилококки в отличие от стрептококков образуют каталазу и вызывают пенообразование. Для предварительной идентификации стрептококков и энтерококков баккультуру высевают в пробирки с 10%, 40% желчи, с 6,5% хлористого натрия, с углеводами (раффинозой, сорбитом, маннитом), учитывают рост в жидкой среде и гемолиз на МПА с кровью.To differentiate streptococci from staphylococci, a catalase test is used. When staging a catalase sample, a drop of a freshly prepared 3% hydrogen peroxide solution is applied to a glass slide. Bacteriological loop remove one colony of the studied culture and rub it in a drop of hydrogen peroxide. Staphylococci, in contrast to streptococci, form catalase and cause foaming. For preliminary identification of streptococci and enterococci, the culture is seeded in test tubes with 10%, 40% bile, with 6.5% sodium chloride, with carbohydrates (raffinose, sorbitol, mannitol), growth in a liquid medium and hemolysis on MPA with blood are taken into account.
В результате в пробирках с желчью наблюдают диффузный рост баккультуры, отмечают ферментацию маннита. На МПА с кровью наблюдают неполный гемолиз эритроцитов с образованием вокруг колоний зеленоватой зоны, что характерно для стрептококков группы D.As a result, diffuse growth of baculture is observed in test tubes with bile, fermentation of mannitol is noted. On blood MPA, incomplete hemolysis of red blood cells is observed with the formation of a greenish zone around the colonies, which is typical for group D streptococci.
Для установления серогрупповой принадлежности стрептококков используют стрептококковые групповые преципитирующие сыворотки. Серогрупповую принадлежность стрептококков определяют в реакции преципитации (РП) в капиллярах. Патогенность подтверждают биопробой на молодых белых мышках.To establish the serogroup affiliation of streptococci, streptococcal group precipitating serums are used. The serogroup affiliation of streptococci is determined in the precipitation reaction (RP) in the capillaries. Pathogenicity is confirmed by bioassay on young white mice.
Выращивание чистой культуры возбудителя проводят в мясо-пептонном бульоне. Для заражения берут 1-2 см3 культуру Streptococcus pneumoniae, засевают 80-100 мл жидкой питательной среды и выращивают при 37°С в течение 12-14 часов. Концентрацию микробных клеток в бактериальной массе определяют по стандарту мутности и разводят стерильной дистиллированной водой до концентрации 4-5 млрд в 1 см3.The cultivation of a pure culture of the pathogen is carried out in meat-peptone broth. For infection, take 1-2 cm 3 culture of Streptococcus pneumoniae, inoculate 80-100 ml of liquid nutrient medium and grow at 37 ° C for 12-14 hours. The concentration of microbial cells in the bacterial mass is determined according to the turbidity standard and diluted with sterile distilled water to a concentration of 4-5 billion in 1 cm 3 .
Для получения вирусного сырья при изготовлении вакцины используют не привитых против вирусной геморрагической болезни кроликов массой не менее 1,5 кг, заражают их вирулентным вирусом геморрагической болезни кроликов, выделенным из эпизоотического очага с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл. Через 48-72 часа кролики погибают, от павших берут печень в целлофановые пакеты, замораживают, измельчают ножницами и на гомогенизаторе. Полученное сырье доводят физраствором (pH 7,2) до 10-15%-ной суспензии, затем экстрагируют вирус при температуре 4-6°С в течение 10-12 часов, периодически перемешивая, декантируют надосадочную жидкость, к осадку добавляют физраствор 1:1, перемешивают. Для освобождения от клеточного детрита проводили фильтрование через два слоя стерильной марли. Затем отфильтрованное вирусное сырье, баксырье сливают в емкость и проводят инактивацию внесением формалина 0,1-0,4%-ной конечной концентрации, выдерживают при температуре 37°С в течение 48-96 часов при периодическом перемешивании, затем смешивают инактивированные антигены в равных соотношениях, вносят раствор гидроокиси алюминия в количестве 20% к объему и тщательно перемешивают, фасуют и укупоривают.To obtain viral raw materials in the manufacture of the vaccine, rabbits weighing at least 1.5 kg not vaccinated against viral hemorrhagic disease are used, they are infected with a virulent rabbit hemorrhagic disease virus isolated from an epizootic foci with an infectious activity of 10 3 LD 50 / ml. After 48-72 hours, the rabbits die, they take the liver from the fallen in plastic bags, freeze it, grind it with scissors and on a homogenizer. The resulting raw material was adjusted with saline (pH 7.2) to a 10-15% suspension, then the virus was extracted at 4-6 ° C for 10-12 hours, stirring occasionally, the supernatant was decanted, 1: 1 saline was added to the precipitate. are mixed. To get rid of cellular detritus, filtration was performed through two layers of sterile gauze. Then the filtered viral raw materials, bakery raw materials are poured into the container and inactivation is carried out by adding formalin of 0.1-0.4% final concentration, kept at a temperature of 37 ° C for 48-96 hours with periodic stirring, then inactivated antigens are mixed in equal proportions , add a solution of aluminum hydroxide in an amount of 20% by volume and mix thoroughly, pack and seal.
Таким образом, использование для изготовления вакцины ассоциированной против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов чистых культур возбудителей Streptococcus pneumoniae и вирусной геморрагической болезни кроликов, выделенных из местного эпизоотического очага, позволяет получать специфичную, высокоиммуногенную ассоциированную вакцину для защиты от этих двух опасных инфекционных болезней стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Раздельное выращивание возбудителей позволяет получать концентрацию Streptococcus pneumoniae не менее 4 млрд в 1 см3 в течение 12-14 часов инкубирования и вируса геморрагической болезни кроликов с инфекционной активностью 103 ЛД50/мл. Использование формалина для инактивации в 0,1-0,4%-ной конечной концентрации позволяет в течение 48-96 часов при температуре 37°С подавить патогенность и сохранить высокую иммуногенность в течение 12 месяцев хранения. Адсорбирование двух антигенов на гидроокиси алюминия позволяет через 12-15 суток после однократного введения в дозе 1 см3 обеспечить у привитых кроликов формирование напряженного иммунитета против стрептококкоза и вирусной геморрагической болезни кроликов продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). После однократного введения кроликам внутримышечно не вызывает у них поствакцинальных осложнений.Thus, the use of pure cultures of Streptococcus pneumoniae pathogens and rabbit viral hemorrhagic disease isolated from the local epizootic foci for the preparation of a vaccine for streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits allows the preparation of a specific, highly immunogenic associated vaccine to protect against these two dangerous infectious diseases of streptococcosis and viral hemorrhagic disease of rabbits. Separate growth of pathogens allows to obtain a concentration of Streptococcus pneumoniae of at least 4 billion in 1 cm 3 during 12-14 hours of incubation and the rabbit hemorrhagic disease virus with an infectious activity of 10 3 LD 50 / ml. The use of formalin for inactivation in 0.1-0.4% final concentration allows to suppress pathogenicity for 48-96 hours at a temperature of 37 ° C and maintain high immunogenicity for 12 months of storage. Adsorption of two antigens on aluminum hydroxide allows 12-15 days after a single dose of 1 cm 3 to ensure in vaccinated rabbits the formation of intense immunity against streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease lasting at least 9 months (observation period). After a single injection, rabbits do not intramuscularly cause post-vaccination complications.
Предложенный способ прост в исполнении, доступен и является промышленно применимым.The proposed method is simple to implement, affordable and is industrially applicable.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010114396/15A RU2429880C1 (en) | 2010-04-12 | 2010-04-12 | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010114396/15A RU2429880C1 (en) | 2010-04-12 | 2010-04-12 | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2429880C1 true RU2429880C1 (en) | 2011-09-27 |
Family
ID=44804043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010114396/15A RU2429880C1 (en) | 2010-04-12 | 2010-04-12 | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2429880C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2496518C1 (en) * | 2012-05-03 | 2013-10-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method for producing associated salmonellosis, escherichiosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine |
-
2010
- 2010-04-12 RU RU2010114396/15A patent/RU2429880C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2496518C1 (en) * | 2012-05-03 | 2013-10-27 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method for producing associated salmonellosis, escherichiosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2429012C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against colibacteriosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2388489C1 (en) | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias | |
| US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
| RU2687488C1 (en) | Poly-strain formolated vaccine against calves pneumonia streptococcal etiology | |
| RU2429880C1 (en) | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| RU2316345C1 (en) | Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
| RU2288002C1 (en) | Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias | |
| RU2443774C1 (en) | Method for producing associated colibacillosis, streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine | |
| RU2301077C1 (en) | Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria | |
| RU2429879C1 (en) | Associated streptococcosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine | |
| RU2406532C1 (en) | Method of producing associated vaccine against streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2406530C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against streptococcosis, pseudomonosis and enterococcal infection of nutrias | |
| RU2496518C1 (en) | Method for producing associated salmonellosis, escherichiosis and rabbit viral hemorrhagic disease vaccine | |
| RU2707289C1 (en) | Method for producing vaccine associated with colibacillosis, streptococcus and pseudomonosis of bovine animals | |
| RU2650628C1 (en) | Method of obtaining vaccine associated with colibacillosis, streptococcosis and enterococcal infection of calves and piglets | |
| RU2553557C2 (en) | Method of manufacturing vaccine, associated against pseudomonosis and viral rabbit haemorrhagic disease | |
| RU2301076C1 (en) | Method for preparing mixed vaccine against streptococcosis and enterococcus infection in nutria | |
| RU2531054C1 (en) | Associated pseudomonosis and rabbit viral haemorrhagic disease vaccine | |
| RU2338554C2 (en) | Method of manufacturing of vaccine associated against colibacillosis, salmonellosis and enterococcus infections of nutrias | |
| RU2292911C1 (en) | Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and streptococcosis in nutrias | |
| RU2296583C1 (en) | Vaccine, associated against nutria salmonellosis and enterococcus infection | |
| RU2404801C1 (en) | Method for manufacturing of vaccine against colibacteriosis of rabbits | |
| RU2722668C1 (en) | Method of producing inactivated vaccine against pulmonary diseases of young animals of productive animals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120413 |