RU2491955C2 - Активные растворимые изоформы нейрегулина, несущие посттрансляционные модификации - Google Patents
Активные растворимые изоформы нейрегулина, несущие посттрансляционные модификации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2491955C2 RU2491955C2 RU2010124429/15A RU2010124429A RU2491955C2 RU 2491955 C2 RU2491955 C2 RU 2491955C2 RU 2010124429/15 A RU2010124429/15 A RU 2010124429/15A RU 2010124429 A RU2010124429 A RU 2010124429A RU 2491955 C2 RU2491955 C2 RU 2491955C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- neuregulin
- isoform
- nrg
- treatment
- disease
- Prior art date
Links
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 title claims abstract description 71
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 title claims abstract description 71
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 title abstract description 8
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 title description 12
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 title description 11
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 102000048238 Neuregulin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 41
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 108010017305 cimaglermin Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 claims abstract description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 4
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 claims description 16
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 13
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 10
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 9
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 claims description 8
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 8
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 claims description 8
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims description 8
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 claims description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims description 6
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000007087 memory ability Effects 0.000 claims description 5
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 101001109800 Homo sapiens Pro-neuregulin-1, membrane-bound isoform Proteins 0.000 claims description 4
- 229960004170 clozapine Drugs 0.000 claims description 4
- QZUDBNBUXVUHMW-UHFFFAOYSA-N clozapine Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=NC2=CC(Cl)=CC=C2NC2=CC=CC=C12 QZUDBNBUXVUHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 4
- 102000055650 human NRG1 Human genes 0.000 claims description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 4
- 229960005017 olanzapine Drugs 0.000 claims description 4
- KVWDHTXUZHCGIO-UHFFFAOYSA-N olanzapine Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=NC2=CC=CC=C2NC2=C1C=C(C)S2 KVWDHTXUZHCGIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003943 catecholamines Chemical class 0.000 claims description 3
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 claims description 3
- 102000040125 5-hydroxytryptamine receptor family Human genes 0.000 claims description 2
- 108091032151 5-hydroxytryptamine receptor family Proteins 0.000 claims description 2
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 claims description 2
- 102000015554 Dopamine receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108050004812 Dopamine receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 2
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 claims description 2
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 claims description 2
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003543 catechol methyltransferase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000002825 dopamine reuptake Effects 0.000 claims description 2
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 claims description 2
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 claims description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229940124604 anti-psychotic medication Drugs 0.000 claims 1
- BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N memantine Chemical compound C1C(C2)CC3(C)CC1(C)CC2(N)C3 BUGYDGFZZOZRHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960004640 memantine Drugs 0.000 claims 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 claims 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 42
- 230000015654 memory Effects 0.000 abstract description 16
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000019771 cognition Effects 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 53
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 39
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 31
- PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine Chemical compound C1N(C)CCC(C=2C=CC=CC=2)=C1 PLRACCBDVIHHLZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 102100040896 Growth/differentiation factor 15 Human genes 0.000 description 23
- 101000893549 Homo sapiens Growth/differentiation factor 15 Proteins 0.000 description 23
- 101000653754 Rattus norvegicus Sphingosine 1-phosphate receptor 5 Proteins 0.000 description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 20
- 238000012549 training Methods 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 17
- 230000013016 learning Effects 0.000 description 17
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 230000006977 prepulse inhibition Effects 0.000 description 11
- LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N haloperidol Chemical compound C1CC(O)(C=2C=CC(Cl)=CC=2)CCN1CCCC(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LNEPOXFFQSENCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 9
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 9
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- KWTSXDURSIMDCE-QMMMGPOBSA-N (S)-amphetamine Chemical compound C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 KWTSXDURSIMDCE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 8
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 7
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 238000012347 Morris Water Maze Methods 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 229940025084 amphetamine Drugs 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 230000023105 myelination Effects 0.000 description 7
- CFFZDZCDUFSOFZ-UHFFFAOYSA-N 3,4-Dihydroxy-phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 CFFZDZCDUFSOFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 6
- 102100040999 Catechol O-methyltransferase Human genes 0.000 description 6
- 108020002739 Catechol O-methyltransferase Proteins 0.000 description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 5
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 5
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 5
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 5
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 5
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 229960003878 haloperidol Drugs 0.000 description 5
- 208000013403 hyperactivity Diseases 0.000 description 5
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 5
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 5
- 101100405240 Homo sapiens NRG1 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000004868 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108090001041 N-Methyl-D-Aspartate Receptors Proteins 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 4
- 229940005529 antipsychotics Drugs 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 4
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 4
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 3
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 3
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102100022661 Pro-neuregulin-1, membrane-bound isoform Human genes 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000003693 atypical antipsychotic agent Substances 0.000 description 3
- 229940127236 atypical antipsychotics Drugs 0.000 description 3
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N homovanillic acid Chemical compound COC1=CC(CC(O)=O)=CC=C1O QRMZSPFSDQBLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 3
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 3
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000031836 visual learning Effects 0.000 description 3
- CEUORZQYGODEFX-UHFFFAOYSA-N Aripirazole Chemical compound ClC1=CC=CC(N2CCN(CCCCOC=3C=C4NC(=O)CCC4=CC=3)CC2)=C1Cl CEUORZQYGODEFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 2
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 2
- 102000047174 Disks Large Homolog 4 Human genes 0.000 description 2
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 102000004286 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000895 Hydroxymethylglutaryl CoA Reductases Proteins 0.000 description 2
- 231100000111 LD50 Toxicity 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 102000019315 Nicotinic acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 2
- 108050006807 Nicotinic acetylcholine receptors Proteins 0.000 description 2
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 2
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000561 anti-psychotic effect Effects 0.000 description 2
- VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N apomorphine Chemical compound C([C@H]1N(C)CC2)C3=CC=C(O)C(O)=C3C3=C1C2=CC=C3 VMWNQDUVQKEIOC-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 2
- 229960004046 apomorphine Drugs 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 229960004372 aripiprazole Drugs 0.000 description 2
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 230000003371 gabaergic effect Effects 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 2
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 2
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 2
- 238000001419 two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N (-)-Nicotine Chemical compound CN1CCC[C@H]1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 241000487918 Acacia argyrodendron Species 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 208000007415 Anhedonia Diseases 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 230000007082 Aβ accumulation Effects 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 101150071146 COX2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100114534 Caenorhabditis elegans ctc-2 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical group [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 206010008120 Cerebral ischaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 101710188026 Dihydropyrimidinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000005611 Dysbindin Human genes 0.000 description 1
- 108010045061 Dysbindin Proteins 0.000 description 1
- 102100020767 Dystrophin-related protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- -1 GABAergic Chemical compound 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010019070 Hallucination, auditory Diseases 0.000 description 1
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 1
- 101000589450 Homo sapiens Poly(ADP-ribose) glycohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022913 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 1
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100022397 Nitric oxide synthase, brain Human genes 0.000 description 1
- 101710111444 Nitric oxide synthase, brain Proteins 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 101150000187 PTGS2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920005372 Plexiglas® Polymers 0.000 description 1
- 102100032347 Poly(ADP-ribose) glycohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 1
- 108010041216 Sirtuin 2 Proteins 0.000 description 1
- 108050001083 Sphingosine 1-phosphate receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000011011 Sphingosine 1-phosphate receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009056 active transport Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 101150060088 ampp gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000648 anti-parkinson Effects 0.000 description 1
- 229940035678 anti-parkinson drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000939 antiparkinson agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000035045 associative learning Effects 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004641 brain development Effects 0.000 description 1
- 208000025698 brain inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 206010008118 cerebral infarction Diseases 0.000 description 1
- 235000011222 chang cao shi Nutrition 0.000 description 1
- 238000013098 chemical test method Methods 0.000 description 1
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000002638 denervation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 229960000632 dexamfetamine Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 108010093091 dystrophin-related protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 230000000706 effect on dopamine Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000063 excitotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 230000000848 glutamatergic effect Effects 0.000 description 1
- 108010084091 heregulin beta1 Proteins 0.000 description 1
- 238000011327 histological measurement Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000002197 limbic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020121 low-fat milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007372 neural signaling Effects 0.000 description 1
- 239000003176 neuroleptic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000878 neurological injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000017511 neuron migration Effects 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 229960002715 nicotine Drugs 0.000 description 1
- SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N nicotine Natural products CN1CCCC1C1=CC=CN=C1 SNICXCGAKADSCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000706 no observed effect level Toxicity 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000036278 prepulse Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000003772 serotonin uptake inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000006403 short-term memory Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008625 synaptic signaling Effects 0.000 description 1
- 230000015883 synaptic transmission, dopaminergic Effects 0.000 description 1
- 230000024587 synaptic transmission, glutamatergic Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1883—Neuregulins, e.g.. p185erbB2 ligands, glial growth factor, heregulin, ARIA, neu differentiation factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
- A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
- A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/4756—Neuregulins, i.e. p185erbB2 ligands, glial growth factor, heregulin, ARIA, neu differentiation factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/485—Epidermal growth factor [EGF], i.e. urogastrone
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение касается растворимых изоформ нейрегулина-1, представляющих собой посттрансляционные модификации. Предложено применение нейрегулина-1β для изготовления медикамента для лечения неврологических заболеваний (вариант - для усиления памяти и когнитивной способности), где изоформа нейрегулина-1β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (pI) в пределах от 5 до 9,5, и варианты соответствующих способов лечения. Предложена фармацевтическая композиция для лечения неврологических заболеваний, включающая рекомбинантную растворимую изоформу нейрегулина-1β, где изоформа нейрегулина-1β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и pI в пределах от 5 до 9,5 и дополнительный медикамент для лечения неврологических заболеваний. Она может использоваться в качестве лекарства при когнитивных неврологических заболеваниях, в частности шизофрении, болезни Альцгеймера и Паркинсона. Показан четкий и благотворный нейрозащитный эффект заявленной рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1β, при этом, в отличие от контрольных нейролептиков, не наблюдалось отрицательных эффектов. 5 н. и 9 з.п. ф-лы, 12 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение касается растворимых в физиологических растворах изоформ нейрегулина-1, представляющих собой посттрансляционные модификации или сплайс-варианты нейрегулина-1, в качестве лекарства при когнитивных неврологических заболеваниях, в частности шизофрении, болезнях Альцгеймера и Паркинсона.
Уровень техники
Нейрегулины (NRG) оказались ключевыми регуляторами синаптической передачи сигналов. Эти трансмембранные белки кодируются четырьмя генами (nrg-1, -2, -3 и -4), а их разнообразие еще больше возрастает посредством альтернативного сплайсинга РНК и употребления промоторов, в частности, посредством посттрансляционных модификаций типа протеолитического процессинга, что ведет к высвобождению растворимых изоформ из мембраносвязанных целых белков. Кроме того, есть данные о фосфорилировании и гликозилировании (Buonanno and Fischbach, 2001). Они характеризуются различными внеклеточными доменами и являются лигандами тирозиновых киназ рецепторов ErbB, которые имеют отношение к нисходящим процессам нейровоспаления и транскрипции генов (Holbro and Hynes, 2004). В частности, растворимые изоформы NRG-1 получаются из трансмембранной формы NRG путем протеолитического расщепления при электрической стимуляции и впоследствии секретируются в качестве зависимых от активности синаптических модуляторов (Ozaki et al., 2004).
Укороченная изоформа NRG-1, предположительно β1, содержащая N-концевой внеклеточный домен (ECD) целого мембранного белка, как оказалось, коррелирует с обучением и памятью (Schillo et al., 2005а; WO 03/014156). Функциональные исследования показали, что NRG-1 непосредственно регулирует субъединичный состав NMDA-рецепторов (Ozaki et al., 1997; Eilam et al., 1998). Кроме того, было показано, что фрагменты NRG-1 этого типа обладают нейрозащитными свойствами in vivo через антиапоптические эффекты (Xu et al., 2005а; Xu et al, 2005b; Xu et al., 2004).
Совсем недавно стало ясно, что NRG-1 играет важную роль при неврологических заболеваниях человека вследствие NRG-зависимой регуляции NMDA-рецепторов (Schrattenholz and Soskic, 2006) и последующих нисходящих явлений типа экцитотоксичности, нейровоспаления и апоптоза (см. сводку на фиг.1). Есть результаты, показывающие, что NRG-1 играет важную роль при целом ряде заболеваний от бокового амиотрофического склероза, болезни Альцгеймера и Паркинсона до инсульта и шизофрении (Britsch, 2007).
Такое фундаментальное значение NRG-1 означает, что наряду с нейрозащитной и положительной ролью в когнитивном обучении и памяти NRG-1 является важным нейротрофическим фактором при регенерации нервной ткани после различных повреждений, в целом ряде специфических участков и типов клеток мозга. Очевидно, он является важным фактором для поддержания и восстановления целостности нейронных цепей; нейрозащитным фактором, играющим роль в правильной регенерации после утраты функции, а также в реализации зависимой от активности пластичности нейронов.
Интерес к нейрегулину-1β еще более значительно возрос, когда Kastin et al., 2004 показали, что нейрегулин-1β может проходить через гематоэнцефалический барьер. Это открыло перспективы терапевтического применения нейрегулина-1β.
Последние исследования засвидетельствовали масштабность применения в нейрозащите. Независимо в двух публикациях было показано, что нейрегулин-1 также является субстратом ВАСЕ (β-секретазы, β-амилоид-конвертазы), что означает важность нейрегулина-1 при болезни Альцгеймера (Glabe, 2006; Schubert, 2006).
Более того, оказалось, что в шванновских клетках нейрегулин-1 повышает транскрипцию 3-гидрокси-3-метилглутарил-СоА-редуктазы - фермента, лимитирующего скорость биосинтеза холестерина в шванновских клетках (Pertusa et al, 2007). Это имеет далеко идущие для тех заболеваний, при которых поражается миелиновая оболочка, напр., шизофрении и множественного склероза, или нарушений когнитивных функций, при которых задействованы так называемые "богатые холестерином островки" (Schrattenholz and Soskic, 2006). Окружающие шванновские клетки аксоны экспрессируют рецепторы NRG-1 - ErbB2/ErbB3 и растворимый NRG-1α и -1β в физиологических условиях. После денервации зрелые шванновские клетки теряют контакты с аксонами, изменяют свою морфологию, перестают экспрессировать NRG-1β и усиливают экспрессию NRG-1α и ErbB2/ErbB3 (Geuna et al., 2007; Karoutzou et al., 2007).
Кроме того, исследования по генетической эпидемиологии свидетельствуют о четкой связи нейрегулина-1 с шизофренией и болезнью Альцгеймера, в частности ее психотическими формами (Farmer et al., 2007).
Некоторые последние генетические анализы населения показали, что определенные SNP NRG-1 связаны с болезнью Альцгеймера и шизофренией (Go et al., 2005; Scolnick et al., 2006; Ross et al., 2006; Meeks et al., 2006; Farmer et al., 2007). Значение этих данных связано с другими белками функционального комплекса, содержащего NRG, который изображен на фиг.1 (рецептор ErbB: Benzel et al., 2007; Thomson et al., 2007; Hahn et al., 2006). Также есть данные об участии NRG-1 во множественном склерозе (Esper et al., 2006).
Имеются результаты, свидетельствующие о том, что молекулярный механизм связи между аллелями риска NRG-1 и шизофренией может включать понижающую регуляцию никотиновых ацетилхолиновых рецепторов подтипа α7 (Mathew et al., 2007).
Раскрытие изобретения
В соответствии с настоящим изобретением оказалось, что рекомбинантные растворимые β-изоформы нейрегулина-1 проявляют фармацевтическую эффективность у животных на моделях обучения и памяти, шизофрении, болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона. После внутривенного введения β-изоформы нейрегулина-1 действовали в концентрациях, значительно меньших, чем концентрации контрольных медикаментов.
Итак, первый аспект настоящего изобретения составляет применение рекомбинантных растворимых изоформ нейрегулина-1 для изготовления медикамента для лечения неврологических заболеваний, в частности когнитивных неврологических заболеваний.
Другой аспект настоящего изобретения составляет фармацевтическая композиция или набор, включающий: (i) рекомбинантную растворимую изоформу нейрегулина-1 и (И) другой медикамент, в особенности для лечения неврологических заболеваний, в частности когнитивных неврологических заболеваний.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет применение рекомбинантных растворимых изоформ нейрегулина-1 для изготовления медикамента для усиления памяти и когнитивной способности.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет способ лечения неврологических заболеваний, включающий введение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 в фармацевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом субъекту.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет способ усиления памяти и когнитивной способности, включающий введение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 в фармацевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом субъекту.
Следующий аспект настоящего изобретения составляет совместное введение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 вместе с другим медикаментом.
Осуществление изобретения
В соответствии с настоящим изобретением растворимые изоформы нейрегулина-1 оказались эффективными при лечении неврологических заболеваний, в частности таких заболеваний, как психотические расстройства типа шизофрении, биполярного психоза и депрессии, нейродегенеративных заболеваний типа болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, множественного склероза (MS) или бокового амиотрофического склероза (ALS), эпилепсии или неврологических повреждений типа инсульта, травматических повреждений головного и спинного мозга. Предпочтительным является лечение шизофрении, в частности когнитивных аспектов шизофрении, болезни Паркинсона и болезни Альцгеймера. Кроме того, изобретение также касается применения рекомбинантных растворимых изоформ нейрегулина-1 для усиления памяти и когнитивной способности, в частности для уменьшения и/или торможения потери памяти и когнитивной способности при таких неврологических заболеваниях, как болезнь Альцгеймера и шизофрения.
Рекомбинантная растворимая изоформа нейрегулина-1 предпочтительно является изоформой нейрегулина-1 человека, т.е. рекомбинантной изоформой, содержащей первичную аминокислотную последовательность природной изоформы нейрегулина-1 человека либо последовательность, идентичную ей по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95% и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 98%), исходя из общей длины рекомбинантной изоформы.
Растворимая рекомбинантная изоформа нейрегулина-1 по настоящему изобретению предпочтительно содержит по крайней мере часть внеклеточного домена соответствующего нейрегулина-1, например, по крайней мере часть внеклеточного домена нейрегулина человека, например, нейрегулина-1β человека.
Рекомбинантная растворимая изоформа нейрегулина по настоящему изобретению предпочтительно имеет длину вплоть до 250 аминокислот, например, от 150 до 250 аминокислот.Молекулярная масса изоформы нейрегулина предпочтительно составляет примерно от 15 до 35 кДа, в особенности от 25 до 32 кДа при измерении, напр., методом электрофореза в SDS-полиакриламиде (PAGE). Рекомбинантная растворимая изоформа нейрегулина-1, в частности рекомбинантная β-изоформа нейрегулина-1, имеет изоэлектрическую точку (pI) примерно от 4 до 9,5, предпочтительно от 4 до 6. Изоформа может представлять собой немодифицированный полипептид, состоящий из немодифицированной последовательности аминокислот, либо модифицированный полипептид, у которого модификация может заключаться в фосфорилировании, гликозилировании, метилировании, миристилировании, окислении или любой комбинации из них. В особенно предпочтительном воплощении изоформа нейрегулина-1 содержит по меньшей мере один фосфорилированный аминокислотный остаток. Кроме того, настоящее изобретение охватывает конъюгирование с гетерологичными молекулами, как-то молекулами полиалкиленоксидов, в частности молекулами полиэтиленгликоля.
Рекомбинантные растворимые изоформы можно вводить любым способом, при котором достигается эффективная доставка в намеченную ткань, напр., нервную систему, в частности центральную нервную систему, как-то головной и/или спинной мозг. Как оказалось, фармацевтически эффективных концентраций изоформ нейрегулина можно достичь при системном введении. Например, изоформы можно вводить посредством инъекции или вливания, напр., посредством внутривенной инъекции. Изоформы предпочтительно вводятся в количестве от 0,1 до 5000 нг/кг массы тела, особенно в количестве от 2 до 1000 нг/кг массы тела, более предпочтительно в количестве от 3 до 600 нг/кг массы тела подлежащего лечению субъекта, в зависимости от типа и тяжести подлежащего лечению заболевания. В других воплощениях настоящего изобретения растворимые изоформы также можно вводить местно, напр., путем прямого введения в центральную нервную систему, напр., в спинной и/или головной мозг. Также можно рассматривать и введение при более высоких дозировках вплоть до 500 мкг/кг при внутрибрюшинных или подкожных инъекциях либо при помощи ингаляционных устройств. Предпочтительно подлежащим лечению субъектом является млекопитающее, более предпочтительно больной человек.
Растворимые рекомбинантные изоформы нейрегулина-1 можно вводить как единственное лекарство, т.е. в виде монотерапии, либо как комбинированное лекарство, т.е. в комбинации с другим лекарством, подходящим для лечения неврологических заболеваний. Примерами других лекарств являются соединения, влияющие на метаболизм катехоламинов, ингибиторы ацетилхолинэстеразы, ингибиторы МАО-В или СОМТ, блокаторы мембранных каналов, агонисты либо антагонисты дофаминовых или серотониновых рецепторов, ингибиторы обратного захвата катехоламинов либо серотонина, или любые антипсихотические медикаменты типа клозапина или оланзапина либо препараты типа габапентина, в частности при лечении болезни Альцгеймера или Паркинсона, шизофрении, биполярного психоза, депрессии и других неврологических заболеваний. Дополнительными примерами других медикаментов являются нейрозащитные средства, как-то ингибиторы PARP-1, напр., приведенные в WO 2006/008118 и WO 2006/008119, которые включены в настоящее изобретение путем ссылки.
Итак, одно воплощение настоящего изобретения касается комбинирования рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1, описанной в настоящем изобретении, с медикаментом для лечения психотических расстройств, как-то шизофрении, биполярного психоза и депрессии, напр., оланзапином или клозапином. Другое воплощение касается комбинирования рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 с медикаментом для лечения нейродегенеративных заболеваний, как-то болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, MS или ALS. Следующее воплощение касается комбинирования рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 с медикаментом для лечения неврологических повреждений, как-то инсульта, травматических повреждений головного или спинного мозга.
Комбинированная терапия может осуществляться путем совместного введения рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 и другого медикамента в виде фармацевтической композиции или набора, при этом индивидуальные медикаменты вводятся по отдельности или вместе.
Изоформа нейрегулина-1 может представлять собой изоформу нейрегулина I типа, II типа, III типа, IV типа, V типа или VI типа, предпочтительно β-изоформу нейрегулина-1, α-изоформу нейрегулина-1 либо изоформу происходящего из сенсорных и моторных нейронов фактора (SMDF), в особенности β-изоформу нейрегулина-1, более предпочтительно β-изоформу нейрегулина-1 человека.
β-Изоформы нейрегулина-1 подвергаются активному транспорту через гематоэнцефалический барьер. Отличная биодоступность нейрегулина-1β в мозге после внутривенного/внутрибрюшинного введения, как это видно из примеров, открывает путь для терапевтического применения NRG-1β.
Сочетание его антиапоптических, стабилизирующих миелин и противовоспалительных свойств, наряду с прямым взаимодействием с ВАСЕ, открывает перспективы для лечения инсульта, болезни Альцгеймера, MS и шизофрении, а также других неврологических заболеваний.
Как изложено выше, настоящая заявка охватывает применение немодифицированных и модифицированных изоформ нейрегулина-1, в частности β-изоформ нейрегулина-1. Имеются данные, что такие посттрансляционные модификации, как протеолитический процессинг, фосфорилирование и гликозилирование происходят на определенных аминокислотных остатках нейрегулина-1, в частности его внеклеточного домена. В частности, были сообщения о высвобождении растворимых фрагментов нейрегулина-1 (Buonanno and Fischbach, 2001; Fischbach, 2007). Также сообщалось о возможном окислении (Nadri et al., 2007).
Авторы настоящего изобретения получили данные о том, что предпочтительные физиологически активные β-изоформы нейрегулина-1 содержат внеклеточный домен нейрегулина-1β или его часть, которая подвергалась посттрансляционной модификации. Предпочтительно изоформы подвергались модификации путем фосфорилирования, при этом подвергались фосфорилированию боковые цепи 1, 2, 3 или больше аминокислотных остатков, в частности боковые цепи остатков, содержащих ОН-группу, как-то Tyr, Ser или Thr. Предпочтительные сайты фосфорилирования находятся в положении аминокислот 79-82, 133-136 и/или 158-161 (номенклатура согласно Falquet et al., 2002). Другие сайты фосфорилирования находятся в положении аминокислот 12-14, 30-32 и/или 85-87. Потенциальные сайты других модификаций - это сайты амидирования, предпочтительно находящиеся в положениях 22-25 и/или 30-33, сайты гликозилирования в положениях 150-153, 156-159 и/или 204-207 и сайты миристилирования, предпочтительно находящиеся в положениях 94-99, 149-154, 168-173, 175-180 и/или 202-207 согласно номенклатуре Falquet et al., 2002.
Далее следует разъяснение существенности экспериментальных данных в соответствии с настоящей заявкой в отношении предпочтительных медицинских показаний.
Шизофрения
Шизофрения является серьезным и вызывающим инвалидность психическим расстройством с такими симптомами, как слуховые галлюцинации, нарушение мышления и мания, аволиция, ангедония, притупленность и апатия. Эпидемиологические, клинические, нейропсихологические и нейрофизиологические исследования дали существенные данные о том, что в патогенезе этого расстройства важную роль играют нарушения развития мозга и текущей нейропластичности (Arnold et al., 2005).
Предполагается, что шизофрения включает нарушение дофаминергической нейротрансмиссии, но главную роль, видимо, играет модуляция дофаминергической системы под действием глутаматергической нейротрансмиссии. Такой взгляд подтверждается генетическими данными о том, что гены нейрегулина и дисбиндина оказывают функциональное влияние на глутаматергическую систему (Muller and Schwarz, 2006). Все больше становится ясно, что некоторые участки, которые, вероятно, содержат гены (включая гены нейрегулинов), способствующие шизофрении, также имеют отношение к биполярным аффективным расстройствам, что подтверждается двумя последними работами (Farmer et al., 2007; Owen et al., 2007).
Нейрегулин-1, который является геном подверженности к психозам, оказывает эффекты на миграцию нейронов, прорастание аксонов и миелинизацию, что могло бы объяснить данные об аномальных анатомических и функциональных связях при шизофрении и биполярном психозе (Mcintosh et al., 2007).
Имеется все возрастающий объем данных о генетической связи нейрегулина-1 с шизофренией (обзор: Farmer et al., 2007). В этой связи существенным является усиление нейрегулином-1 глутаматной, ГАМКергической и никотиновой нейротрансмиссии (Fischbach, 2007; Woo et al., 2007; Li et al., 2007), а также причастность к воспалению мозга (Hanninen et al., 2007).
Предполагается, что при этом заболевании задействована и регуляция 3-гидрокси-3-метилглутарил-СоА-редуктазы - фермента, лимитирующего скорость биосинтеза холестерина (Pertusa et al., 2007), что важно для миелинизации.
Тот факт, что среди генетических факторов риска, общих для шизофрении, биполярного психоза и депрессии, важную роль играет NRG-1, привел к предположению о том, что вовлеченные в эти психозы гены типа NRG-1 могли бы послужить основой для классификации, исходящей из биологии, а не симптомов, и привести к новым стратегиям лечения этих сложных заболеваний мозга (Blackwood et al, 2007; Bertram et al., 2007).
Экспериментальные данные настоящей заявки свидетельствуют об эффективности применения растворимой рекомбинантной β-изоформы нейрегулина-1 на экспериментальной модели шизофрении.
Болезнь Альцгеймера
Первоначальные исследования авторов изобретения показали, что нейрегулин-1β снижается на посмертных срезах гиппокампа в мозге больных при болезни Альцгеймера по сравнению с подобранными по возрасту контролями (Sommer et al., 2004), при этом существует четкая положительная корреляция между растворимым фрагментом нейрегулина-1 и показателями обучения при тестировании в радиальном лабиринте (Sommer et al., 2004).
Во многих работах засвидетельствована роль NRG-1 в зависимых от активности синаптических изменениях (Xie et al, 2006; Kwon et al, 2005; Rimer et al, 2005; Bao et al., 2004; Yang et al., 2005), важных для обучения и памяти (Ozaki et al., 1997; Ozaki et al., 2004; Golub et al., 2004; Schillo et al., 2005b). Как показано ниже, фрагмент NRG-1β, содержащий внеклеточный домен, четко связан с обучением животных на поведенческой модели. Снижение экспрессии этого белка на посмертных срезах мозга в области гиппокампа (отвечающего за формирование кратковременной памяти) у больных при болезни Альцгеймера по сравнению с подобранными по возрасту контролями могло бы свидетельствовать об отсутствии связанной с памятью синаптической активности на участках с еще здоровыми на вид нейронами.
Самые последние открытия (Hu et al., 2006; Glabe, 2006; Schubert, 2006) показали, что NRG-1 подвергается процессингу ферментом ВАСЕ1 (=β-секретаза), который способствует образованию скоплений β-амилоида в мозге людей с болезнью Альцгеймера, что объясняет связь с болезнью Альцгеймера, а его сопутствующая роль в образовании миелина связана с нейротрофическими свойствами NRG-1 (Hu et al., 2006; Glabe, 2006; Schubert, 2006). Фермент BACE1 (расщепляющий белок-предшественник амилоида по β-связи фермент-1) необходим для отщепления β-амилоида из большего предшественника, причем окончательное отщепление после расщепления ферментом ВАСЕ1 производит содержащий пресенилин комплекс γ-секретазы с высвобождением β-амилоида.
Расщепление NRG секретазами имеет важное значение для миелинизации нервов. Как и белок-предшественник амилоида, нейрегулин-1 тоже расщепляется β-секретазой. Протеолитическое расщепление β-секретазой нейрегулина-1 имеет важное значение для миелинизации периферических нервов шванновскими клетками. Препараты, мишенью которых является β-секретаза, могут повлиять на развитие и функционирование периферических нервов.
Первоначальное наблюдение было сделано группой Haass (Willem et al., 2006), обнаружившей, что для миелинизации также необходим фермент ВАСЕ1. Миелинизация периферических нервов происходит в раннем периоде жизни, поэтому неясно, как ингибирование ВАСЕ1 могло бы повлиять на старых животных. Есть данные о том, что ВАСЕ1 также играет роль и в миелинизации центральной нервной системы. У трансгенных животных, дефектных по ВАСЕ1, отмечались дефекты миелина в периферических нервах.
Также в связи с нейродегенерацией и болезнью Альцгеймера существенным является недавнее открытие усиления нейрегулином-1 глутаматной, ГАМКергической и никотиновой нейротрансмиссии (Fischbach, 2007; Woo et al., 2007; Li et al., 2007).
Экспериментальные данные настоящей заявки свидетельствуют об эффективности применения растворимой рекомбинантной β-изоформы нейрегулина-1 на экспериментальной модели болезни Альцгеймера.
Инсульт, травматическое повреждение мозга
Ряд связанных с инсультом экспериментов in vivo при независимых внешних исследованиях в США показал нейрозащитное действие нейрегулина-1, которое само по себе является антиапоптическим (Xu et al., 2004, 2005 и 2006; Guo et al., 2006).
NRG-1 уменьшает повреждение нейронов и улучшает неврологический исход после окклюзии средней церебральной артерии (распространенная модель инсульта) (Xu et al., 2005b; Xu et al., 2004, Xu et al., 2006; Guo et al., 2006).
В том же самом исследовании терапевтической эффективности рекомбинантного NRG-1 человека и механизма уменьшения повреждений мозга при ишемии/реперфузии оказалось, что NRG действует антиапоптически. NRG-1 (3,0 нг/кг) вводили интраваскулярно за 10 мин до окклюзии средней церебральной артерии (МСАО) и последующей очаговой ишемии мозга в течение 90 мин и реперфузии в течение 24 ч.
Данные настоящего изобретения свидетельствуют о том, что введение рекомбинантных растворимых изоформ нейрегулина-1 в низких концентрациях оказывает существенный фармакологический эффект и поэтому предполагается эффективным на моделях инсульта и травматического повреждения мозга.
Далее настоящая заявка раскрывается более подробно на фигурах и примерах, приведенных ниже.
Краткое описание фигур
Фиг.1. В различных обзорах и многочисленных исследовательских статьях о нейрегулине-1 показано ключевое функциональное положение NRG-1 как вышележащего регуляторного начала механизмов, играющих важную роль при нейродегенеративных заболеваниях, неврологических заболеваниях, а также физиологических функциях.
NRG являются ключевыми компонентами функциональных комплексов, состоящих как минимум из нейрегулинов (NRG), тирозиновых киназ рецепторов (рецепторов ErbB), гепарансульфатных протеогликанов (HSPG) и NMDA-рецепторов (NMDAR), которые собираются в кратковременные и зависимые от активности комплексы в богатых холестерином (СНО) микродоменах мембран. Для взаимодействия с белками субсинаптического каркаса посредством посттрансляционных модификаций (PSD-95, при взаимодействии с некоторыми фосфорилированными доменами типа PDZ- или SH-доменов на белках-партнерах) особенно важно формирование кальциевых сигналов. Комплекс PSD-95 непосредственно регулирует провоспалительные ферменты типа синтазы оксида азота (NOS, причем iNOS - индуцибельный, a nNOS - нейрональный фермент) и Сох-2 (циклооксигеназы-2), которые оказывают свои эффекты в сложном взаимодействии со связанными с ними, но необязательно нижележащими механизмами с участием таких NAD+ - зависимых ферментов, как PARP-1 (полимераза поли-АЭР-рибозы) и Sir-2 (сиртуин-2); PARG - это гликогидролаза поли-АБР-рибозы, фермент который дополняет и антагонистичен PARP-1, a HDAC - это деацетилазы гистонов, общий класс ферментов, который включает Sir-2. МРТР - митохондриальная пора с переходной проницаемостью. DRP-2 - родственный дигидропиримидиназе белок-2. Также и другие важные мембранные белки, как-то некоторые никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (nAChRα7), ГАМКА-рецепторы (GABAAR), белок-предшественник амилоида (АРР) и протеазы (PS), временно встраиваются в липидные островки и приобретают другие функциональные свойства за пределами своего обычного фосфолипидного (PL) окружения (см. подробности в Schrattenholz and Soskic, 2006).
Фиг.2. Сводка из экспериментов по обучению в водном лабиринте Морриса. Животные, получавшие суточную дозу в 3 нг/кг (внутривенно) растворимого внеклеточного домена нейрегулина-1β (ECD NRG-1β) обучались значительно лучше, чем животные, получавшие носитель. IAE - посещения внутренней области; IAEF - частота посещений внутренней области; TS - время, проведенное во внутренней области; DT - расстояние, пройденное во внутренней области.
Фиг.3. Уменьшение под действием ECD NRG-1β вызванной амфетамином гиперактивности - общепринятой модели шизофрении. Концентрации составляли от 15 до 600 нг/кг (внутривенное введение за 15 мин до введения амфетамина). Положительный контроль включал 0,125 мг/кг галоперидола.
В то время, как галоперидол, подобно другим типичным и нетипичным антипсихотическим средствам (нейролептикам), обычно снижает активность ниже контрольного уровня (указан пунктиром с пометкой veh/veh, синим цветом для пересечений, красным для вставаний на задние лапки), вызванное ECD NRG-1β снижение асимптотически приближается к контрольным уровням активности, но не вызывает дальнейшего снижения. Низкие эффективные концентрации ECD NRG-1β и отсутствие отрицательных эффектов (т.е. снижения активности ниже контрольных уровней носителя) - таковы замечательные свойства на этой модели. Эффекты значимы, р<0,05.
Фиг.4. Сводка из опытов по обучению мышей APPPS на модели церебрального амилоидоза и болезни Альцгеймера в водном лабиринте Морриса. Животные, получавшие суточную дозу ECD NRG-1β 200 нг/кг внутрибрюшинно, обучались значительно лучше, чем животные, получавшие носитель. IAE - посещения внутренней области; IAEF - частота посещений внутренней области; TS - время, проведенное во внутренней области; DT - расстояние, пройденное во внутренней области.
Фиг.5. Количественное определение дофамина и его метаболитов методом ВЭЖХ. Помеченные звездочкой столбцы имеют высокую значимость. Обозначения:
S: | физраствор (контроль) |
аМ: | острое введение МРТР |
aMN: | острое введение МРТР и ECD NRG-1β |
aN: | острое введение ECD NRG-1β |
сМ: | хроническое введение МРТР |
cMN: | хроническое введение МРТР и ECD NRG-1β |
cN: | хроническое введение ECD NRG-1β |
Фиг.6. Метаболизм дофамина под действием МАО-В и СОМТ.
Фиг.7. Воздействие МРТР ведет к значительной потере дофаминергических нейронов в черной субстанции (substantia nigra) (аМРТР, р=0,0005; сМРТР, р=0,0075). Внутрибрюшинное введение 20 нг/кг ECD NRG-1β вызывает возвращение к норме (aNR-МРТР, р=0,57, т.е. не отличается от контроля с носителем) либо четкое и значимое улучшение повреждений от МРТР (cNR-MPTP, р=0,0097); на хронической модели (5 дней подряд вводили по 20 нг/кг ECD NRG-1β внутрибрюшинно) также отмечался значимый эффект на число дофаминергических нейронов (cNR, р=0,0002). Обозначения:
NaCl: | физраствор (контроль) |
аМРТР: | острое введение МРТР |
aNR-MPTP: | острое введение МРТР и ECD NRG-1β |
aNR: | острое введение ECD NRG-1Р |
сМРТР: | хроническое введение МРТР |
cNR-MPTP: | хроническое введение МРТР и ECD NRG-1β |
cNR: | хроническое введение ECD NRG-1β |
Фиг.8. Два репрезентативных снимка 2D-вестерн-блоттинга белков головного мозга мышей APPPS, окрашенных на нейрегулин-1β. Представлено одно подвергавшееся обработке животное с хорошим обучением (вверху) и не подвергавшееся обработке с плохим обучением (внизу).
Цифры в верхней части означают значения pI на 2D-геле.
Фиг.9. В эксперименте по вестерн-гибридизации сравнивали содержание ECD-фрагмента NRG-1β на посмертном материале коры головного мозга при болезни Альцгеймера и в контроле.
Фиг.10. В этих экспериментах методом двумерного электрофореза в полиакриламидном геле (2Д-ПАГ) показано, что кислая изоформа ECD NRG-1β со значением pI 5-5,5 и молекулярной массой 25-32 кДа четко снижается в головном мозге при болезни Альцгеймера.
ПРИМЕРЫ
Общая часть
Во всех дальнейших экспериментах использовали фрагменты нейрегулина-1β, содержащие только внеклеточный домен (ECD) из всего транскрипта гена nrg-1 человека. Они имели молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектрические точки между 5 и 9,5 в зависимости от степени фосфорилирования и/или гликозилирования.
Физиологически активная форма β-изоформы нейрегулина-1 имеет значение pI около 5,5 (большинство экспериментов проводили с коммерчески доступной изоформой, полученной в Е. coli, имеющей молекулярную массу 26 кДа и значение pi примерно 9,0).
Эта изоформа представляет собой рекомбинантный растворимый фрагмент NRG-1β человека, состоящий из первых 245 аминокислот NRG-1β, который приобретали у фирмы R&D Systems, Inc. (кат. №377-HB-CF). Далее он будет именоваться ECD NRG-1β. Эта активная изоформа имеет значение pi примерно 9,0.
Также тестировали соответствующий фрагмент NRG-1β в 8 кДа, содержащий только домен EGF, который приобретали у фирмы R&D Systems, Inc. (кат.№396-НВ). Этот фрагмент тоже оказался нейрозащитным in vitro и in vivo, но он не был исследован подробно из-за более сильных пролиферативных свойств, что вызывало опасения насчет канцерогенности.
Пример 1. Первичные токсикологические данные свидетельствуют, что NRG-1β (ECD) не оказывает отрицательных эффектов в испытаниях на острую токсичность и мутагенность in vitro
- Отсутствие острой внутривенной токсичности на крысах. Все животные дожили до конца периода исследования, в ходе исследования. Вес тела животных был в пределах того, что обычно отмечается для этой линии и этого возраста. При вскрытии не было обнаружено макроскопических явлений. Медиана летальной дозы NRG-1β (ECD) после однократного внутривенного введения самкам крыс при наблюдении за период в 14 дней составила: LD50 (самки крыс): более 5000 нг/кг массы тела.
- Ежедневное внутривенное введение нейрегулина на протяжении 7 дней в дозах 50, 200 и 600 нг/кг массы тела в день не вызывало преждевременной смертности. Не отмечалось никаких клинических признаков. Обработка не влияла на потребление пищи и прирост массы тела. Уровень отсутствия наблюдаемых эффектов (NOEL) составил 600 нг/кг массы тела в день.
- При определении на локусе тимидинкиназы в клетках лимфомы мыши на линии клеток L5178Y согласно Директиве OECD по тестированию химических веществ №476 "Испытание на генные мутации в клетках млекопитающих in vitro" NRG-1β (ECD) оказался немутагенным.
- При испытании на хромосомные аберрации на клетках китайского хомячка V79 согласно Директиве OECD по тестированию химических веществ №473 NRG-1β (ECD) не вызывал структурных аберраций хромосом.
Более того, ни в одном из экспериментов на животных, проводившихся насчет эффективности (некоторые из них продолжались по несколько месяцев с ежедневным внутривенным введением), никогда не наблюдалось отрицательных эффектов NRG-1β (ECD).
Введение NRG-1β (ECD) животным на различных моделях осуществлялось путем внутривенных (iv) или внутрибрюшинных (ip) инъекций; концентрации составляли от 3 до 600 нг/кг.
Пример 2. Обучение и память: пространственное обучение с применением ECD NRG-1β и без него
Методы
В водном лабиринте Морриса оценивается пространственное обучение. При этом животные должны плавать в наполненном водой бассейне и найти спасательную платформу, погруженную в воду чуть ниже поверхности. Платформа должна находиться вдали от стенок лабиринта, а животные должны иметь опорные точки, видимые из поверхности воды, которые позволяют оценить местоположение, но недостаточно близки к мишени и поэтому не способствуют ассоциативному обучению. Животных обучают тому, что спасение приходит только через платформу, что означает, что всех животных, не нашедших платформу, направляют на нее и дают им отдохнуть перед тем, как удалить из установки. Следовательно, одной из самых важных опорных точек для мыши является человек-оператор.
Целью эксперимента является определение двух ключевых параметров, связанных с пространственным запоминанием у мышей:
- скорости, с которой мыши учатся снова найти платформу,
- способности к сохранению информации на короткий срок (в пределах сеанса обучения или в течение ночи).
Животные
Исследование проводилось на двух группах мышей APP/PS (Meyer-Luehmann et al., 2006; Radde et al, 2006), одна из которых ежедневно получала дозу ECD NRG-1β, а другая получала ложную обработку в качестве контроля. Каждая группа состояла из 8 самцов в 9-недельном возрасте к началу первой серии экспериментов.
Первая серия начиналась с двумя подгруппами из 8 подвергавшихся и 8 не подвергавшихся обработке мышей на 42-й неделе и продолжалась в течение 15 дней. Другие серии идентичных экспериментов проводились через 6, 12 недель и т.д.
Для второй пары подгрупп (8 подвергавшихся и 8 не подвергавшихся обработке 9-недельных самцов) такая же серия экспериментов начиналась на 48-й неделе, так что эксперименты с этими подгруппами отстояли от опытов с первыми подгруппами ровно на 6 недель.
Установка
Способность к обучению у подвергавшихся и не подвергавшихся обработке мышей APP/PS оценивали на круговом водном лабиринте Морриса, который должен быть достаточно большим, чтобы обеспечить пространство для поиска без обессиливания мыши. Нужно принимать самые строгие меры к тому, чтобы поддерживать экспериментальную обстановку как можно более неизменной на протяжении всех экспериментов.
В настоящем исследовании использовали бассейн диаметром 120 см, который ставили в лаборатории в точно воспроизводимом положении, всегда с одинаковой ориентацией. В фиксированном положении в бассейн помещали белую, полупрозрачную, круговую платформу диаметром 15, 10 или 5 см, которая доходит чуть ниже поверхности воды (так что она невидима для мышей), на которую животные могут залезать - что является единственным способом выйти из воды. Чтобы облегчить залезание, платформа имеет сетчатое покрытие для захвата (см. фиг.11).
Для того, чтобы проводить спасательную процедуру в разведочных испытаниях, как изложено ниже, платформа снабжена механизмом, позволяющим поднимать или опускать ее автоматически без прямого вмешательства оператора. Таким образом, в зависимости от ее высоты, платформа доступна или недоступна плавающим мышам: "платформа по требованию" (Buresova et al., 1985).
Местоположение платформ всегда находится в кольцеобразном, концентрическом участке бассейна с внутренним и внешним диаметром ~40 см и ~80 см, соответственно. Определяются четыре квадранта таким образом, чтобы платформа занимала центральную часть одного из них (квадранта мишени). Более подробно о размерах и положении платформ см. ниже.
Для того, чтобы положение платформы было всегда одинаковым на протяжении всей серии экспериментов, на дне бассейна прочно закрепляется гнездо, на которое можно посадить платформу с минимальным пространственным допуском. Сверху на платформе, в самом центре, имеется еще одна опора для (проксимального) ориентира, выступающего из воды, который хорошо виден на видеозаписи, а также виден мышам, плавающим в бассейне. Для проверки положения платформы нужно делать краткую видеозапись без животных, но со вставленным на платформу ориентиром после каких бы то ни было манипуляций с платформой или видеокамерой.
Вода делается непрозрачной с помощью сухого молока с низким содержанием жира. Температура воды должна быть достаточно холодной, чтобы поощрять поиск выхода, но не настолько холодной, чтобы животные страдали или выбивались из сил. В качестве хорошего компромисса температура воды отслеживается в начале каждого эксперимента и доводится с помощью теплой воды либо кусочков льда до 18°С. Между отдельными опытами температура регулируется по мере необходимости.
Устанавливаются 4 дистальных ориентира (различных простых геометрических форм и разных цветов, высотой ~20 см) на ~20 см выше бортика бассейна, по одному в каждом квадранте. Принимаются меры к тому, чтобы каждый ориентир находился точно в том же самом месте на протяжении всех экспериментов. Весь бассейн закрывается белой полупрозрачной занавеской. Освещение неяркое и рассеянное.
Над центром бассейна в точно вертикальном положении прочно закрепляется видеокамера с тем, чтобы бассейн полностью попадал в кадр. Видеозаписи делаются при разрешении системы PAL (720×576 пикселей, 25 кадров в секунду), как минимум. Видеоснимки оценивают с помощью автоматической системы слежения, которая позволяет безупречно регистрировать передвижения животных во времени.
Мышей запускают в воду с помощью специального приспособления, которое насаживается на палку с тем, чтобы они попадали в воду точно в заданных местах по периметру бассейна без захода оператора в будку, состоящую из полупрозрачной занавески.
План экспериментов
В каждом сеансе мышей запускают в бассейн в заданных местах и дают поплавать в течение 60 сек. Траектории передвижения животных регистрируются видеосистемой слежения и вычисляются параметры, из которых можно сделать выводы о способности животных к обучению (прежде всего это время до попадания мыши на платформу в первый раз = "латентность спасения"; более подробно см. ниже). Если мыши удается найти платформу, то ее оставляют там отдохнуть на короткое время (~15 сек). В противном случае, после 60 сек плавания, оператор направляет мышь на платформу и дает отдохнуть в течение ~15 сек. После этого оператор вынимает ее, слегка просушивает и возвращает в помещение либо готовит к следующему заплыву.
В каждый день экспериментов проводится одно испытание на одну мышь ранним утром. Каждое испытание состоит из двух последовательных заплывов, начинающихся из двух разных квадрантов, но ни в коем случае не из квадранта мишени. Точные места запуска в воду (и положения платформ, если применимо) распределяются случайным образом для каждого заплыва в каждый день, но не отличаются между индивидуальными мышами в этот день.
Если окажется, что мыши обучаются слишком медленно, то можно увеличить количество заплывов за одно испытание или испытаний за день (и наоборот). Кроме того, у многих линий мышей молодые животные обучаются очень быстро, так что через 4 или 5 дней обучения латентность спасения становится постоянной на уровне всего лишь нескольких секунд, равным образом у подвергавшихся и не подвергавшихся обработке животных. Однако для статистической оценки было бы лучше, если бы кривая латентности спасения в зависимости от дней обучения не насыщалась, а монотонно снижалась. Поэтому принимается такой план эксперимента, в котором подлежащая решению задача усложняется с продвижением обучения. В заранее установленные дни платформу заменяют на меньшую, при этом координаты центра платформы остаются такими же. То, когда нужно поменять платформы, определяется независимым образом для каждой серии экспериментов и должно зависеть от результатов предыдущей серии.
В каждой серии экспериментов мышам задают выполнение трех различных видов заданий.
- Плавание к месту по ориентиру. Платформа обозначается ориентиром, а мышь может плавать до тех пор, пока не найдет платформу. По этой методике проверяется ассоциативное обучение, и она служит для разбивки мышей на две экспериментальные группы, у которых способности к обучению как можно более близки. Кроме того, во второй и последующих сериях экспериментов плавание по ориентиру способствует стиранию воспоминаний о положении платформы в предыдущих сериях.
- Нахождение скрытой платформы - обучение. Платформа невидима для мыши и находится в том же самом положении, что и в предыдущем заплыве. Это задание дает возможность наблюдать успехи мыши в воспроизведении точного местоположения скрытой платформы ("пространственное обучение").
- Разведочный поиск - испытание. В этом задании платформа "по требованию" максимально погружается под поверхность, а мышь может свободно плавать в поисках платформы. В разведочном испытании оценивается абсолютное воспоминание (воспроизведение в памяти), которое в данном контексте можно интерпретировать и как убежденность, непоколебимость или уверенность в местоположении платформы. Традиционный подход к интерпретации этого эксперимента состоит в том, что животные, которые прочно зафиксировали местоположение платформы, будут более настойчиво вести поиск в ограниченном месте и поэтому будут проводить больше времени в ближайшей к платформе зоне.
При разведочном поиске существует опасность того, что неспособность найти платформу может уменьшить побуждения к плаванию в зону платформы. Для того, чтобы свести к минимуму эти раздражения, условия спасения человеком должны оставаться одинаковыми с тем, чтобы было определенное пространственное постоянство, несмотря на отсутствие платформы. Поэтому после 60 сек плавания платформу поднимают до уровня чуть ниже поверхности, а оператор направляет мышь туда и дает отдохнуть в течение ~15 сек перед тем, как вынуть ее из установки.
Во все дни разведочного испытания проводится только один заплыв.
Приблизительно за 60 минут до каждого испытания мыши получают суточную дозу ECD NRG-1β в 5 нг/кг (суспендирован в сыворотке мышей Black 6 и вводится внутривенно в объеме 20 мкл на мышь) либо 20 мкл носителя.
В 1 день первой серии экспериментов все мыши в исследовании получают только ложную обработку. После этого мышей определяют в группу нейрегулина и контрольную группу таким образом, чтобы распределение латентности спасения совпадало в обоих группах.
В каждой серии экспериментов придерживаются следующей хронологии:
1-й день: поиск платформы по ориентиру, при этом платформа размером 10 см и ее положение меняется при каждом заплыве.
2-й день: поиск платформы по ориентиру, при этом платформа размером 10 см и ее положение меняется при каждом заплыве.
3-й день: поиск платформы по ориентиру, при этом платформа размером 10 см и ее положение меняется при каждом заплыве.
4-й день: поиск платформы по ориентиру, при этом платформа размером 10 см и ее положение такое же, как последнее в 3-й день.
5-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 15 см и то же самое положение.
6-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 15 см и то же самое положение.
7-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 15 см и то же самое положение.
8-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 10 см и то же самое положение.
9-й день: разведочный поиск.
10-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 10 см и то же самое положение.
11-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 10 см и то же самое положение.
12-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 5 см и то же самое положение.
13-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 5 см и то же самое положение.
14-й день: поиск скрытой платформы, при этом платформа размером 5 см и то же самое положение.
15-й день: разведочный поиск.
Может оказаться, что нужно заставить забыть положение платформы из предыдущей серии экспериментов, позволяя мышам свободно плавать в течение нескольких дней без платформы.
Скорость обучения оценивается путем отслеживания каждой сессии обучения/тестирования и регистрации успеха животных в нахождении платформы, а также эволюции стратегии поиска от плавания вдоль бортика бассейна до отхода от бортика для поиска в центральной зоне, в которой находится платформа.
Измеряемые параметры
Из видеозаписей животных извлекается траектория передвижения каждой мыши и выводится в виде серии координат х, у и время для дальнейшей обработки. Нужно принимать меры для надежной идентификации начальной точки каждой траектории и избежания ошибок при отслеживании. Одновременно вычисляется целый ряд параметров, из которых можно сделать выводы о способности животных к обучению (см. ниже). Регистрация параметров прекращается после 60 сек или когда мышь найдет платформу (что из этого произойдет раньше).
Для определения параметров, рассчитываемых из записей траекторий животных, установлены следующие зоны (см. фиг.12):
Для того, чтобы сделать процесс оценки как можно более гибким, используют 4 концентрические зоны мишени (проходящие вокруг платформы) диаметром от 5,5 до 30 см. Параметры, рассчитываемые из записей траекторий животных, включают:
- общее пройденное расстояние
- средняя общая скорость
- количество заходов в центр бассейна
- время, проведенное в центре бассейна
- латентность до первого захода в центр бассейна
- расстояние, пройденное до первого захода в центр бассейна
- количество заходов во внутреннюю область
- время, проведенное во внутренней области
- расстояние, пройденное во внутренней области
- латентность до первого захода во внутреннюю область
-расстояние, пройденное до первого захода во внутреннюю область
а также для каждой из зон 1-4 мишени и квадранта мишени:
- количество заходов в зону
- время, проведенное в зоне
- расстояние, пройденное в зоне
- латентность до первого захода в зону
- расстояние, пройденное до первого захода в зону
- расстояние от начала траектории до ближайшей точки в зоне
- среднее расстояние от зоны при выходе за пределы зоны
- минимальное расстояние от зоны при выходе за пределы зоны
- время до минимального расстояния от зоны при выходе за пределы зоны
- время приближения к зоне
- время удаления от зоны
- время передвижения к зоне
- время передвижения от зоны количество заходов головы в зону
- время, проведенное головой в зоне расстояние, пройденное головой в зоне
- латентность до первого захода головы в зону
- среднее расстояние головы от зоны при выходе за пределы зоны
- минимальное расстояние головы от зоны при выходе за пределы зоны
- начальная ошибка курса
- средняя ошибка курса
- количество выходов из зоны
По каждому дню эксперимента проводится статистическое сравнение значений параметров прогресса обучения в подвергавшихся обработке и не подвергавшихся группах между собой.
При изучении записей траекторий индивидуальных мышей наблюдатель может придти к весьма реалистическому пониманию уверенности животных при нахождении платформы, которая не полностью отражается в значениях измеряемых параметров. Поэтому записи траекторий также изучаются вручную и дается оценка воспроизведению животными в памяти положения платформы.
Результаты
Животные, получавшие суточную дозу ECD NRG-1β в 5 нг/кг внутривенно за 30 мин до обучения, оказались значительно лучше по параметрам обучения, чем животные в группе, получавшей носитель.
Нейрегулин не только улучшал обучение, но получавшие его животные также развивали более продвинутые стратегии поиска. Во внутреннюю область бассейна заходило больше подвергавшихся обработке животных (11 против 7, р=0,019), заход во внутреннюю область происходил чаще (2,17 против 0,92 раз, р=0,02), проведенное время и пройденное расстояние во внутренней области увеличились (6,51 сек против 2,13 сек, р=0,09; и 0,64 м против 0,25 м, р=0,031, соответственно).
Результаты экспериментов по обучению в водном лабиринте Морриса приведены на фиг.2.
Пример 3. Шизофрения: вызванная амфетамином гиперактивность у крыс
Методы
Метод, которым выявляется антипсихотическое и антипаркинсоническое действие, следует описанному Costall et al., 1978, и в нем используется измеритель активности, аналогичный описанному Boissier and Simon, 1966.
Амфетамин вызывает гиперактивность в этой тест-ситуации. Гиперактивности противостоят классические и нетипичные антипсихотическое вещества, которые действуют на дофаминергические системы на лимбическом уровне, и это усиливается антипаркинсоническими препаратами.
Крысам вводится d-амфетамин (3 мг/кг внутрибрюшинно) и их немедленно помещают в измеритель активности.
Измеритель активности состоит из 12 крытых клеток из плексигласа (40×25×25 см), содержащихся в затемненном шкафу. Каждая клетка снабжена двумя комплектами фотоэлементов на каждом конце клетки, на высоте 3 см от пола, для измерения передвижений каждого животного (по одному на клетку) из одного конца клетки к другому. На высоте 20 см от пола устанавливаются два дополнительных комплекта фотоэлементов для регистрации вставания на задние лапки. Показатели активности и вставания на задние лапки регистрируются компьютером с интервалом в 10 минут и суммируются за период 30 минут.
Исследовали по 15 крыс на группу. Тестирование проводилось слепым методом.
Исследуемое вещество оценивали в 8 дозах, которые вводили внутривенно за 15 минут до амфетамина, и сравнивали с контрольной группой носителя. Эксперимент также включал контрольную группу, не получавшую амфетамин.
В качестве вещества для сравнения использовали галоперидол (0,125 мг/кг внутривенно), который вводили при таких же экспериментальных условиях.
Таким образом, эксперимент включал 16 групп.
Данные анализировали путем сравнения получавших обработку групп с соответствующим контролем с помощью непарного t-критерия Стьюдента.
Результаты
Как видно из фиг.3, ECD NRG-1β дозозависимым образом ингибирует вызванную амфетамином гиперактивность у животных на модели шизофрении.
Явным образом эти эксперименты показывают замечательные свойства ECD NRG-1β:
- Представленные на фиг.3 эффекты наиболее сильно выражены во второй половине эксперимента (минуты 20-40). В первые 20 минут обнаруживается лишь небольшой эффект, так что замедленное действие указывает на дополнительный процессинг белка.
- Эффективные концентрации ECD NRG-1β, которые использовались при этом, в 200-1000 раз меньше, чем концентрации, в которых применяются типичные контрольные нейролептики типа галоперидола (125 мкг/кг).
- В противоположность галоперидолу, клозапину, оланзапину и др., при этом не наблюдалось отрицательных эффектов, а именно: ECD NRG-1β не снижал активность тестируемых животных ниже контрольного уровня носителя.
Пример 4. Шизофрения: преимпульсное торможение
Грызуны с нокаутом nrg-1 проявляют существенное нарушение преимпульсного торможения (PPI), что связывает nrg-1 с шизофренией. PPI широко используется как некий суррогат психоза на животных моделях и считается эндофенотипом шизофрении. После всестороннего генотипирования оказалось, что миссенс-мутации при полиморфизме по несинонимичным одиночным нуклеотидам на nrg-1 (rs3 924999) оказывают нейрофизиологические эффекты на PPI как при шизофрении, так и в контрольных здоровых популяциях (Hong et al., 2007). Мы протестировали действие ECD NRG-1β на PPI. Полученные результаты можно изложить следующим образом.
При 105 децибелах (дБ) ECD NRG-1β проявлял общую тенденцию к восстановлению PPI (+26%, +23% и +36% при 150, 300 и 600 нг/кг, соответственно), хотя эффект не достигал статистической значимости и не наблюдался при 115 дБ. Он не оказывал влияния на спонтанные движения в отсутствие раздражителя при 150 или 300 нг/кг, но значительно уменьшал спонтанные движения в отсутствие раздражителя при 600 нг/кг (-20% и -29% по усредненной и пиковой интенсивности, соответственно, р<0,05, что аналогично арипипразолу). ECD NRG-1β не оказывал влияния на реакцию на преимпульс сам по себе.
Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии значительных эффектов на вызванные апоморфином нарушения PPI для Propsyl00 в диапазоне доз 150-300 нг/кг и уменьшении спонтанных движений, а также тенденции к восстановлению PPI при 600 нг/кг внутривенно в испытании на преимпульсное торможение (PPI) у крыс (нарушения, вызванные апоморфином).
В этой серии экспериментов контрольное вещество - арипипразол обладал слабой, но значимой активностью при 3 мг/кг внутрибрюшинно, но не при 10 мг/кг внутрибрюшинно в том же самом испытании.
В целом и при использовавшихся условиях ECD NRG-1β как будто влияет на PPI при высоких концентрациях около 600 нг/кг. Эти результаты неожиданно открывают новое понимание последних нейробиологических исследований, указывающих на ген nrg-1 как один из ведущих рассматриваемых генов при шизофрении.
Пример 5. Обучение и память у животных на модели болезни Альцгеймера (на мышах APPPS dt)
Эксперименты на животных по обучению и памяти с применением растворимого внеклеточного домена нейрегулина-1β (ECD NRG-1β) или без него в условиях водного лабиринта Морриса, описанные выше для нормальных мышей, были повторены на двойных трансгенных мышах (мышах APPPS) как модели церебрального амилоидоза (Meyer-Luehmann et al., 2006; Radde et al., 2006).
При этом опять животные, получавшие суточную дозу ECD NRG-1β (в данном случае 200 нг/кг внутрибрюшинно) за 30 мин до обучения, оказались значительно лучше по параметрам обучения, чем животные в группе, получавшей носитель.
Нейрегулин не только улучшал обучение, но получавшие его животные также развивали более продвинутые стратегии поиска. Во внутреннюю область бассейна заходило больше подвергавшихся обработке животных (12 против 7, р=0,009), заход во внутреннюю область происходил чаще (2,0 против 0,7 раз, р=0,03), проведенное время и пройденное расстояние во внутренней области увеличились (5,3 сек против 2,1 сек, р=0,09; и 0,7 м против 0,3 м, р=0,025, соответственно).
Результаты экспериментов по обучению на мышах APPPS как модели церебрального амилоидоза и болезни Альцгеймера в водном лабиринте Морриса приведены на фиг.4.
Пример 6. Нейрегулин-1β на модели вызванной МРТР болезни Паркинсона у мышей
Методы
Использовали 10-недельных самцов мышей С57В 1/6 на модели вызванной МРТР (1-метил-4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин) болезни Паркинсона.
Извлекали ткани мозга (черная субстанция, стриатум, кора) у 10-недельных самцов мышей С57 В1/6 (n=10 на группу) через различные промежутки времени после введения (0, 1, 3, 7, 21 день) NaCl (контроль) или МРТР (острая и субхроническая модели). Методы следовали опубликованным методикам (Hoglinger et al., 2007; Hoglinger et al., 2004).
Обработка | Время после введения МРТР | ||||
0 дней | 1 день | 3 дня | 7 дней | 21 день | |
МРТР, острая | n=10 | n=10 | n=10 | n=10 | n=10 |
МРТР, хроническая | n=10 | n=10 | n=10 | n=10 | n=10 |
NaCl | n=10 | ||||
Итого: n=100 |
МРТР растворяли в виде порошка в 0,9% NaCl и вводили внутрибрюшинно (острое введение: 4×20 мг/кг с интервалом в 2 часа; хроническое введение: 5×30 мг/кг с интервалом в 24 часа); инъекции занимали примерно 10 секунд. Через определенные промежутки времени (см. таблицу) животных забивали путем сворачивания шеи. Методы следовали опубликованным методикам (Hoglinger et al., 2007; Hoglinger et al., 2004; Liberatore et al., 1999; Przedborski and Vila, 2003; Vila and Przedborski, 2003).
0 дней после последнего введения МРТР: | потеря дофаминергических нейронов стриатума |
1 день после последнего введения МРТР: | начало активации микроглии |
3 дня после последнего введения МРТР: | максимальная активация микроглии |
7 дней после последнего введения МРТР: | максимальная активация астроцитов |
максимальная активация астроцитов 21 день после последнего введения МРТР: | максимальная гибель клеток |
Через 21 день после интрацеребрального вливания ECD NRG-1β и контрольного пептида через минипомпы Alzet и последующей обработки МРТР (острой либо хронической) проводили гистологическое определение дофаминергических нейронов среднего мозга по стереологическим принципам. Также проводили биохимическое определение дофамина и его метаболитов в стриатуме методом HPLC. Процедуры выполняли согласно опубликованным методикам (Hoglinger et al., 2007; Hoglinger et al., 2004).
Обработка | Вливание | N |
МРТР, острая | ECD NRG-1β | n=10 |
Контроль, острая | ECD NRG-1β | n=10 |
МРТР, хроническая | ECD NRG-1β | n=10 |
Контроль, хроническая | ECD NRG-Iβ | n=10 |
МРТР, острая | контрольный пептид | n=10 |
Контроль, острая | контрольный пептид | n=10 |
МРТР, хроническая | контрольный пептид | n=10 |
Контроль, хроническая | контрольный пептид | n=10 |
Итого: n=80 |
Как видно из фиг.5, результаты измерения дофамина и его метаболитов методом HPLC показывают четкий эффект введения ECD NRG-1β при вызванном МРТР повреждении на этой модели болезни Паркинсона.
Эффекты не являются классическими: в то время, как отсутствуют значительные эффекты на уровень дофамина как при вызванном МРТР повреждении, так и в остром или хроническом контроле на введение ECD NRG-1β, имеются выраженные и четкие эффекты на концентрации DOPAC и HVA. Хроническое введение ECD NRG-1β приводит к четкому и значимому уменьшению этого метаболита в отсутствие вызванного МРТР повреждения, тогда как в остром режиме наблюдается лишь небольшое снижение. При хронических условиях вызванного МРТР повреждения ECD NRG-1β вызывает значительное повышение гомованилиновой кислоты (HVA), причем этот эффект еще более выражен в отсутствие вызванного МРТР повреждения.
Эти результаты можно объяснить понижающей регуляцией МАО-В и/или повышающей регуляцией СОМТ при хроническом введении ECD NRG-1β. При использовавшихся условиях наблюдался огромный и значительный положительный эффект на выживаемость дофаминергических нейронов. ECD NRG-1β и на этой модели оказывал сильное нейрозащитное действие. С учетом внутрибрюшинного введения при этой серии экспериментов его четкая эффективность опять таки свидетельствует о том, что ECD NRG-1β очень эффективно проходит через гематоэнцефалический барьер.
На фиг.6 представлена метаболическая схема, на которую явно влияет введение ECD NRG-1β: дофамин превращается в DOPAC под действием МАО-В и в 3-МТ под действием СОМТ; после чего из обоих метаболитов образуется гомованилиновая кислота - под действием СОМТ из DOPAC и под действием МАО-В из 3-МТ; очевидно, введение ECD NRG-1β регулирует активность обоих ферментов.
Еще более важно, как видно из фиг.7, что на модели вызванной МРТР болезни Паркинсона имеется четкий и значимый нейрозащитный эффект ECD NRG-1β, который становится заметным при гистологическом измерении дофаминергических нейронов в среднем мозге. Стереологический метод описан в других работах (Liberatore et al., 1999; Przedborski & Vila, 2003; Vila & Przedborski, 2003; Hoglinger et al., 2004; Hoglinger et al., 2004).
В целом имеется удивительно четкий м благотворный нейрозащитный эффект у животных на модели вызванной МРТР болезни Паркинсона. Эти эффекты опять же свидетельствуют о том, что внутрибрюшинное введение очень низких концентраций ECD NRG-1β (например, 20 нг/кг) достаточно для достижения эффективности, а тем самым и то, что ECD NRG-1β проходит через гематоэнцефалический барьер. К тому же сложное влияние на метаболиты дофамина (результаты HPLC; фиг.5) указывает на регуляцию МАО-В и СОМТ под действием NRG-1 и ECD NRG-1β.
Пример 7. Идентификация кислой посттрансляционной изоформы ECD NRG-1β в качестве действующего начала
Мы опубликовали данные о том, что при обучении и памяти активной формой является определенная посттрансляционная кислая изоформа ECD NRG-1β (Schillo et al., 2005a). Теперь же мы показываем, что аналогичная картина наблюдается у животных на модели болезни Альцгеймера и посмертной ткани мозга больных при болезни Альцгеймера и Паркинсона. Мы пришли к выводу, что действующим началом является именно эта кислая изоформа.
Методы
Для окрашивания вестерн-блотов использовали следующие антитела: кроличье поликлональное антитело против ECD NRG-1 (sc-28916, серия 12905 Santa Cruz; Н-210). Антитело против нейрегулина-1 (Н-210) представляет собой кроличье поликлональное антитело против аминокислот 21-230, локализованных в N-концевом внеклеточном домене изоформы HRG-a нейрегулина-1 человека. Антитело Н-210 рекомендуется для обнаружения изоформ HRG-α, HRG-α1A, HRG-α2B, HRG-α3, HRG-1β HRG-β2, HRG-β3 (GGF), GGF2 и SMDF нейрегулина-1 мыши, крысы и человека методом вестерн-гибридизации (исходное разведение 1:200, диапазон разведений 1:100-1:1000), иммунопреципитации (1-2 мкг на 100-500 мкг общего белка (1 мл лизата клеток)) и иммунофлуоресценции (исходное разведение 1:50, диапазон разведений 1:50-1:500).
Вторичные антитела:
против козьих антител, с HRP - sc-2922, серия С1405 Santa Cruz
против кроличьих антител, с HRP - sc-2054, серия G2005 Santa Cruz
Наряду с иммуноокрашиванием проводили масс-спектрометрию MALDI-TOF и Q-TOF для проверки ECD NRG-1β.
Как видно из фиг.8, очень сходная картина обнаруживается на модели церебрального амилоидоза у мышей APPPS и на модели болезни Альцгеймера.
Концентрация именно этой кислой изоформы ECD NRG-1β со значением pI примерно 5,0 значительно повышена у получавших его мышей APPPS, которые в то же время и лучше обучаются.
На фиг.8 представлены два репрезентативных снимка из одного подвергавшегося обработке животного с хорошим обучением (вверху) и не подвергавшегося обработке животного с плохим обучением (внизу).
На фиг.9 представлены результаты эксперимента по вестерн-гибридизации с использованием посмертного материала из коры головного мозга каждого из 9 больных при болезни Альцгеймера и подобранных по возрасту контролей. Четко видно, что фрагмент ECD NRG-1β значительно меньше представлен при болезни Альцгеймера. В качестве внутреннего контроля измеряли содержание NRG-12, на который не влияет ухудшение памяти при этой болезни.
Другое исследование этой специфической связанной с болезнью Альцгеймера и памятью изоформы ECD NRG-1β методом вестерн-гибридизации на 2-мерных гелях (2D-PAGE) того же посмертного материала из головного мозга человека, что использовался для фиг.8, показало, как это видно из репрезентативных примеров на фиг.10, что именно кислая изоформа ECD NRG-1β снижается при болезни Альцгеймера.
Выводы
Мы впервые представили функциональные свидетельства эффектов in vivo посттрансляционных модификаций транскрипта гена nrg-1, в частности укороченной формы, образующейся при протеолитическом расщеплении, включающей внеклеточный домен NRG-1β с мол. массой 15-35 и значением pI 4-10; более конкретно мы обнаружили антипсихотическое действие на животных моделях шизофрении, вероятно, связанное с регуляцией МАО-В и СОМТ, при концентрации 5-600 нг/кг (внутривенно). В отличие от контрольных нейролептиков, которые применяются при более высоких в 100-1000 раз концентрациях, при этом не наблюдалось отрицательных эффектов.
Кроме того, мы обнаружили нейрозащитное действие на модели вызванной МРТР болезни Паркинсона при концентрации в 3-300 нг/кг (внутривенно).
Более того, мы обнаружили положительный эффект на память и обучение у животных на модели (водный лабиринт Морриса) обучения на соответствующих моделях церебрального амилоидоза и болезни Альцгеймера.
Учитывая неблагоприятные эффекты у многих применяемых в настоящее время нетипичных антипсихотических средств (Haddad and Sharma, 2007), можно сделать вывод, что растворимый ECD-фрагмент NRG-1 с EGF-доменами SMDF, NRG-1α и в особенности NRG-1β может быть полезным в качестве самостоятельного или сочетанного лекарства для лечения шизофрении, биполярного психоза и депрессии.
Он также мог бы быть полезным в том же смысле и при других заболеваниях центральной нервной системы типа нейродегенеративных заболеваний, как-то болезни Альцгеймера и Паркинсона, боковом амиотрофическом склерозе, множественном склерозе, инсульте, травматических повреждениях головного и спинного мозга.
Растворимые белки ECD NRG-1β производят эти очень широкие эффекты вследствие их центральной роли в нейрональной передаче сигналов, в частности через опосредованную глутаматом передачу сигналов и эксцитотоксичность, что играет главную роль во всех приведенных выше показаниях (Schrattenholz and Soskic, 2006).
Claims (14)
1. Применение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 β для изготовления медикамента для лечения неврологических заболеваний, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (р1) в пределах от 5 до 9,5.
2. Применение по п.1 для лечения шизофрении, в частности когнитивных аспектов шизофрении, биполярного психоза и депрессии, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, эпилепсии, множественного склероза (MS), бокового амиотрофического склероза (ALS), инсульта, травматических повреждений головного и спинного мозга.
3. Применение по п.1 или 2, в котором изоформа нейрегулина-1 β представляет собой рекомбинантную растворимую изоформу нейрегулина-1 β человека.
4. Применение по любому из пп.1 и 2, в котором изоформа нейрегулина-1 представляет собой модифицированный полипептид, причем модификации выбираются из фосфорилирования, гликозилирования, метилирования, миристилирования, окисления и любых комбинаций из них.
5. Применение по п.1 в комбинации с дополнительным медикаментом.
6. Применение по п.5, в котором дополнительный медикамент является медикаментом для лечения неврологических заболеваний.
7. Применение по п.6, в котором дополнительный медикамент выбирают из соединений, влияющих на метаболизм катехоламинов, ингибиторов ацетил-холинэстеразы, ингибиторов МАО-В или СОМТ, блокаторов каналов типа мемантина, агонистов либо антагонистов дофаминовых или серотониновых рецепторов, ингибиторов обратного захвата катехоламинов либо серотонина, или любых антипсихотических медикаментов типа клозапина или оланзапина, либо препаратов типа габапентина при лечении болезней Альцгеймера или Паркинсона, шизофрении, биполярного психоза, депрессии или других неврологических заболеваний.
8. Применение по п.5 или 6, в котором дополнительный медикамент выбран из группы, состоящей из медикамента для лечения психотических заболеваний, таких как шизофрения, биполярный психоз и депрессия, например оланзапин или клозапин, медикамента для лечения болезни Паркинсона, медикамента для лечения болезни Альцгеймера, медикамента для лечения множественного склероза (MS), медикамента для лечения бокового амиотрофического склероза (ALS), медикамента для лечения эпилепсии, медикамента для лечения инсульта, медикамента для лечения травматических повреждений головного мозга и медикамента для лечения травматических повреждений спинного мозга.
9. Фармацевтическая композиция для лечения неврологических заболеваний, включающая:
(i) рекомбинантную растворимую изоформу нейрегулина-1 β, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (pI) в пределах от 5 до 9,5, и
(ii) дополнительный медикамент для лечения неврологических заболеваний.
(i) рекомбинантную растворимую изоформу нейрегулина-1 β, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (pI) в пределах от 5 до 9,5, и
(ii) дополнительный медикамент для лечения неврологических заболеваний.
10. Применение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 β, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (pI) в пределах от 5 до 9,5, для изготовления медикамента для усиления памяти и когнитивной способности.
11. Применение по п.10 для уменьшения и/или торможения потери памяти и когнитивной способности, связанными с таким неврологическим заболеванием, как болезнь Альцгеймера.
12. Применение по п.10 или 11, в котором изоформа нейрегулина-1 является такой, как определена по любому из пп.1-4.
13. Способ лечения неврологического заболевания, включающий введение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 β в фармацевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом субъекту, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (pI) в пределах от 5 до 9,5.
14. Способ усиления памяти и когнитивной способности, включающий введение рекомбинантной растворимой изоформы нейрегулина-1 β в фармацевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом субъекту, где изоформа нейрегулина-1 β представляет собой часть внеклеточного домена нейрегулина-1 β, где данная часть имеет молекулярную массу 25-32 кДа и изоэлектическую точку (р1) в пределах от 5 до 9,5.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US98857607P | 2007-11-16 | 2007-11-16 | |
US60/988,576 | 2007-11-16 | ||
PCT/EP2008/009715 WO2009062750A2 (en) | 2007-11-16 | 2008-11-17 | Active soluble post-translationally modified neuregulin isoforms |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010124429A RU2010124429A (ru) | 2011-12-27 |
RU2491955C2 true RU2491955C2 (ru) | 2013-09-10 |
Family
ID=40545995
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010124429/15A RU2491955C2 (ru) | 2007-11-16 | 2008-11-17 | Активные растворимые изоформы нейрегулина, несущие посттрансляционные модификации |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (9) | US20100256066A1 (ru) |
EP (1) | EP2219662B1 (ru) |
JP (2) | JP5650537B2 (ru) |
CN (2) | CN105561299A (ru) |
AU (1) | AU2008323169B2 (ru) |
BR (2) | BRPI0820538B1 (ru) |
CA (1) | CA2705328C (ru) |
DK (1) | DK2219662T3 (ru) |
ES (1) | ES2414058T3 (ru) |
MX (1) | MX340564B (ru) |
PT (1) | PT2219662E (ru) |
RU (1) | RU2491955C2 (ru) |
WO (1) | WO2009062750A2 (ru) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2399452A1 (en) * | 2000-02-11 | 2001-08-16 | Proteosys Ag. | Use of neuregulin-.beta. as an indicator and/or target |
JP5650537B2 (ja) | 2007-11-16 | 2015-01-07 | マインド−エヌアールジー ソシエテ アノニムMind−NRG SA | 活性のある溶解性の翻訳後修飾されたニューレグリン−アイソフォーム |
RU2014109093A (ru) * | 2011-08-17 | 2015-09-27 | Дженентек, Инк. | Антитела против нейрегулина и их применение |
CN102327613A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-01-25 | 浙江大学 | ErbB受体激动剂在制备治疗癫痫病的药物中的应用 |
CN103083645A (zh) * | 2011-10-27 | 2013-05-08 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 神经调节素1及其受体作为制备或筛选抗癫痫药物靶点的用途 |
JP6342627B2 (ja) * | 2013-08-02 | 2018-06-13 | 国立大学法人 東京大学 | 筋萎縮性側索硬化症の新規病因遺伝子 |
CN108732355B (zh) * | 2017-04-25 | 2021-06-25 | 首都医科大学附属北京安定医院 | 一种测定bace1酶切nrg1活性的检测方法及其试剂盒 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5530109A (en) * | 1991-04-10 | 1996-06-25 | Ludwig Institute For Cancer Research | DNA encoding glial mitogenic factors |
IL101943A0 (en) | 1991-05-24 | 1992-12-30 | Genentech Inc | Structure,production and use of heregulin |
US6087323A (en) | 1992-04-03 | 2000-07-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Use of neuregulins as modulators of cellular communication |
US5770567A (en) * | 1994-11-14 | 1998-06-23 | Genentech, Inc. | Sensory and motor neuron derived factor (SMDF) |
US6750196B1 (en) | 1995-03-27 | 2004-06-15 | Acorda Therapeutics | Methods of treating disorders of the eye |
CA2306228A1 (en) | 1997-10-14 | 1999-04-22 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Therapeutic methods comprising use of a neuregulin |
NL1014232C2 (nl) | 2000-01-31 | 2001-08-01 | Dsm Nv | Zout van een melaminecondensatieproduct en een fosfor bevattend zuur. |
CA2399452A1 (en) | 2000-02-11 | 2001-08-16 | Proteosys Ag. | Use of neuregulin-.beta. as an indicator and/or target |
CA2400595A1 (en) * | 2000-02-28 | 2001-09-07 | Decode Genetics Ehf | Human schizophrenia gene |
EP2418218A1 (en) * | 2001-08-06 | 2012-02-15 | ProteoSys AG | Neuregulin-Beta isoforms associated with neuronal processes |
WO2003045439A1 (fr) | 2001-11-28 | 2003-06-05 | Anges Mg, Inc. | Preparations medicinales contenant du materiel genetique destinees au traitement de maladies neurodegeneratives |
WO2004076639A2 (en) * | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Wyeth | Use of gene expression profiling in the diagnosis and treatment of lupus nephritis and systemic lupus erythematosus |
CA2573674A1 (en) | 2004-07-16 | 2006-01-26 | Proteosys Ag | Muscarinic antagonists with parp and sir modulating activity as agents for inflammatory diseases |
US20070213264A1 (en) * | 2005-12-02 | 2007-09-13 | Mingdong Zhou | Neuregulin variants and methods of screening and using thereof |
EP2918283B1 (en) * | 2005-12-30 | 2018-01-31 | Zensun (Shanghai) Science & Technology, Co., Ltd. | Extended release of neuregulin for improved cardiac function |
WO2007113366A1 (es) * | 2006-04-05 | 2007-10-11 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Uso de compuestos inductores del desarrollo axonal de neuronas, composiciones terapéuticas que los contienen y sus aplicaciones |
JP5650537B2 (ja) | 2007-11-16 | 2015-01-07 | マインド−エヌアールジー ソシエテ アノニムMind−NRG SA | 活性のある溶解性の翻訳後修飾されたニューレグリン−アイソフォーム |
-
2008
- 2008-11-17 JP JP2010533509A patent/JP5650537B2/ja active Active
- 2008-11-17 CA CA2705328A patent/CA2705328C/en active Active
- 2008-11-17 MX MX2010005205A patent/MX340564B/es active IP Right Grant
- 2008-11-17 CN CN201510907489.5A patent/CN105561299A/zh active Pending
- 2008-11-17 RU RU2010124429/15A patent/RU2491955C2/ru active
- 2008-11-17 DK DK08851021.9T patent/DK2219662T3/da active
- 2008-11-17 WO PCT/EP2008/009715 patent/WO2009062750A2/en active Application Filing
- 2008-11-17 CN CN2008801218533A patent/CN101903036A/zh active Pending
- 2008-11-17 BR BRPI0820538-8A patent/BRPI0820538B1/pt active IP Right Grant
- 2008-11-17 BR BR122020025248-0A patent/BR122020025248B1/pt active IP Right Grant
- 2008-11-17 ES ES08851021T patent/ES2414058T3/es active Active
- 2008-11-17 US US12/742,983 patent/US20100256066A1/en not_active Abandoned
- 2008-11-17 AU AU2008323169A patent/AU2008323169B2/en active Active
- 2008-11-17 PT PT88510219T patent/PT2219662E/pt unknown
- 2008-11-17 EP EP08851021.9A patent/EP2219662B1/en active Active
-
2014
- 2014-05-07 US US14/271,755 patent/US20140323408A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-07 US US14/271,617 patent/US20140243269A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-07 JP JP2014095768A patent/JP5913426B2/ja active Active
- 2014-05-07 US US14/271,749 patent/US20140243270A1/en not_active Abandoned
- 2014-12-08 US US14/563,427 patent/US20150239948A1/en not_active Abandoned
-
2016
- 2016-10-25 US US15/333,959 patent/US10350269B2/en active Active
-
2019
- 2019-05-23 US US16/420,755 patent/US10813978B2/en active Active
-
2020
- 2020-09-04 US US17/012,159 patent/US20210077579A1/en active Pending
- 2020-12-18 US US17/126,351 patent/US20210128687A1/en active Pending
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BUONANNO A. et al. Neuregulin and ErbB receptor signaling path-ways in the nervous system. Curr Opin Neurobiol. 2001 Jun; 11(3): 287-96. Реферат [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из базы данных PubMed PMID: 11399426). ГРЭХАМ-СМИТ Д.Г., АРОНСОН Дж.К. Оксфордский справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии. - М., Медицина, 2000, с.136-137, §10.2.2., с.150, §2., 3. FALLON KB et al. Constitutive activation of the neuregulin-1/erbB signaling pathway promotes the proliferation of a human peripheral neuroepithelioma cell line. J Neurooncol. 2004 Feb; 66(3):273-84. 45. Реферат [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из базы данных PubMed PMID: 15015657). ДАМУЛИН И.В. Патогенетические, диагностические и терапевтические аспекты сосудистых когнитивных нарушений. Consilium medicum том 8 /№8/2006 [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из Интернета: old.consilium-medicum.com/media/consilium/06_08/80.shtm). * |
KANI K et al. The extracellular domains of ErbB3 retain high ligand binding affinity at endosome pH and in the locked conformation. Biochemistry. 2005 Dec 6; 44 (48): 15842-57. Реферат [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из базы данных PubMed PMID: 16313187). * |
WANG Z. et al. Contrasting effects of mitogenic growth factors on myelination in neuron-oligodnedrocyte co-cultures. Glia. 2007 Apr. 1; 55(5):537-45 Реферат [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из базы данных PubMed PMID:17236210). ZHAO YY et al. Neuregulin promote survival and growth of cardiac myocytes. Persistence of ErbB2 and ErbB4 expression in neonatal and adult ventricular myocytes. J Biol Chem 1998 Apr 24; 273(17): 10261-9 [онлайн] [найдено 2012.08.27] (Найдено из базы данных PubMed PMID: 9553078). * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20210128687A1 (en) | Method of effecting neuroprotection using soluble neuregulin isoforms | |
RU2389500C2 (ru) | Нейропротективная пищевая добавка | |
JP2010529128A (ja) | レット症候群および他の障害の処置 | |
CN107921085A (zh) | 用于治疗衰老相关病症的方法和组合物 | |
Hao et al. | Soluble epoxide hydrolase inhibition alleviated cognitive impairments via NRG1/ErbB4 signaling after chronic cerebral hypoperfusion induced by bilateral carotid artery stenosis in mice | |
Zhang et al. | Davunetide improves spatial learning and memory in Alzheimer's disease-associated rats | |
US20190091284A1 (en) | Amidated Dopamine Neuron Stimulating Peptides for CNS Dopaminergic Upregulation | |
US20180117113A1 (en) | Amidated Dopamine Neuron Stimulating Peptide Restoration of Mitochondrial Activity | |
JP2021531272A (ja) | 外傷性視神経症の処置のための組成物及び方法 | |
US20210145930A1 (en) | Multiple layer article with interactive reinforcements linear ribbon fiber reinforcement for composite forms | |
KR20230047329A (ko) | 졸중을 치료하기 위한 방법 및 조성물 |