RU2456291C2

RU2456291C2 - Безводные кристаллические соли винфлунина, способ их получения и их применение в качестве лекарства, и способ очистки винфлунина

Info

Publication number: RU2456291C2
Application number: RU2009133244/04A
Authority: RU
Inventors: Жан-Луи МОРЕЛЬ (FR); Жан-Луи Морель; Ришар ПЕНА (FR); Ришар Пена; Жан-Поль РИБЕ (FR); Жан-Поль Рибе
Original assignee: Пьер Фабр Медикамент
Priority date: 2007-02-13
Filing date: 2008-02-13
Publication date: 2012-07-20
Also published as: US8343991B2; FR2912406A1; CN101652374A; US20100029703A1; WO2008098970A1; EP2121708A1; FR2912406B1; CN101652374B; CA2677269A1; JP2010518145A; CA2677269C; RU2009133244A

Abstract

Настоящее изобретение относится к безводным кристаллическим солям винфлунина общей формулы (I), полученным с 1 или 2 эквивалентами фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты. В формуле (I) [Кислота] представляет собой бромистоводородную, молочную или фумаровую кислоту для группы водорастворимых кристаллических солей, и пара-толуолсульфоновую, бензойную, миндальную или пара-гидроксибензойную кислоту для группы относительно водонерастворимых кристаллических солей. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 9 ил., 8 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к новым солевым и кристаллическим формам винфлунина, способам получения таких форм и к их применению в терапии.

Винфлунин представляет собой индольное производное соединений винбластина и винкристина

Эти соединения, экстракты Catharanthus roseus, относятся к антимитотическим алкалоидам и в течение ряда лет использовались для химиотерапии рака. Трудности, связанные с получением этих производных путем экстракции из растений, привели к тому, что несколько исследовательских групп получили аналогичные новые соединения, имеющие такие же свойства, и разработали способы их синтеза. Таким образом были получены и представлены на рынке виндезин и винорелбин (Навелбин) для лечения рака. Принципиальным признаком химической структуры этих соединений является комбинация двух мономеров-алкалоидов - катарантина и виндолина.

В рамках разработки новых способов получения винорелбина реакционная способность этого соединения в сильнокислой среде привела к обнаружению новой молекулы - 20',20'-дифтор-3',4'-дигидровинорелбина, или винфлунина (WO 95/03312). В процессе той же работы были проверены терапевтические преимущества этого соединения.

Различными методами ¹H ЯМР и ¹³С ЯМР спектроскопии была изучена точная конформация винфлунина (Magn. Reson. Chem., 2001, 39, p.43-48). Это исследование было проведено на дитартрате винфлунина в растворе. Однако эта соль является гигроскопичной, что снижает ее стабильность в твердом состоянии, и, таким образом, является препятствием при ее промышленном производстве. В настоящее время дитартрат винфлунина выделен в виде аморфного твердого порошкообразного вещества, которое следует хранить при отрицательной температуре, ниже -15°С, и в атмосфере инертного газа, например азота или аргона. До настоящего времени было невозможно получить безводную кристаллическую форму дитартрата, хотя была получена гидратированная кристаллическая форма дитартрата путем кристаллизации в водно-спиртовых растворителях (патентная заявка FR 0512942).

Хранение этого вещества и обращение с ним, таким образом, требуют осторожности. Поэтому любые формы, которые улучшат его физическую стабильность в твердом состоянии, упростят производство, хранение и упаковку.

Обычно кристаллизация аморфного вещества является весьма трудной и получение первых кристаллов является очень проблематичным. Однако этот тип твердого вещества позволяет преодолеть ряд недостатков аморфной формы. Конечно, оно удерживает меньше влаги, и его стабильность, улучшаясь со временем, облегчает производственный процесс благодаря, в частности, меньшей тенденции к агломерации и лучшей текучести. Это позволяет изготавливать больше видов лекарственных форм, облегчить их производство и хранение.

Обычно фильтруемость кристаллической суспензии сильно возрастает по сравнению с аморфным твердым веществом.

Авторы изобретения показали, что можно получить кристаллические формы с использованием других солей, дающих безводные кристаллические формы в подходящей системе растворителей. Использование протестированных кислот, выбранных из фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот, привело к получению кристаллических солей, где молярное отношение кислоты к винфлунину составляет 1/1 или 2/1 в соответствии с использованной кислотой. Большинство кислот дает соли, которые осаждаются одинаково с 1 или 2 молярными эквивалентами в зависимости от количества использованной кислоты. Настоящее изобретение относится к солям в кристаллической форме, по существу не содержащим ни одной молекулы воды в структуре, кристаллизационной или сольватационной воды. Эти соли называются в данном описании "безводные кристаллические соли винфлунина".

Фумаровая кислота дает соль, которая осаждается предпочтительно в молярном отношении фумаровой кислоты к винфлунину 1/1, независимо от количества использованной кислоты.

Получение кристаллической соли также открывает пути к методам очистки путем кристаллизации, которые представляют собой значительное преимущество, принимая во внимание трудности, с которыми сталкиваются при производстве винфлунина высокого качества.

Безводные кристаллические соли винфлунина, полученные указанным способом, можно разделить на две категории:

- соли неорганических кислот или органических алифатических кислот, составляющие группу, имеющие предпочтительную растворимость в воде для фармацевтического использования,

- соли органических ароматических кислот, имеющие более низкую растворимость в воде, однако их кристалличность является преимуществом для очистки винфлунина путем кристаллизации.

Конечно, может быть рассмотрена перекристаллизация одной из этих более или менее растворимых солей для улучшения чистоты сырого винфлунина. Эти соли можно обрабатывать основанием, таким как, например, бикарбонат натрия, четвертичный амин или, предпочтительно аммиаком, с получением основания винфлунина лучшего качества, которое затем снова переводят в соль с использованием одной из фармацевтически приемлемых кислот с получением водорастворимой соли, которую можно использовать в качестве лекарства.

Такую очистку путем кристаллизации можно проводить на различных стадиях процесса производства, например при окончательной очистке, для получения партий высокой чистоты, или на стадии предварительной очистки партии перед выполнением другого способа очистки, например, путем препаративной хроматографии.

Авторы изобретения показали, что такие безводные кристаллические соли имеют лучшую стабильность во времени, как показано сравнительными испытаниями аморфного дитартрата винфлунина и кристаллического фумарата винфлунина, которые описаны в заявке.

Таким образом, настоящее изобретение относится к безводным кристаллическим солям винфлунина с фармацевтически приемлемыми неорганическими и органическими кислотами, такими как (но не исключительно) соли бромистоводородной, серной, молочной и фумаровой кислот, которые относятся к категории водорастворимых кристаллических солей, и соли пара-толуолсульфоновой, бензойной, миндальной, пара-гидроксибензойной кислот, которые относятся к категории относительно водонерастворимых кристаллических солей. Все эти соли могут быть представлены общей формулой (I):

где [Кислота] представляет собой бромистоводородную, серную, молочную или фумаровую кислоту для группы водорастворимых кристаллических солей, и пара-толуолсульфоновую, бензойную, миндальную или пара-гидроксибензойную кислоту для группы относительно водонерастворимых кристаллических солей.

Предпочтительным, в частности, является фумарат. Эту соль получить относительно легко, она обильно кристаллизуется, имеет свойство всегда иметь стехиометрию 1 молярный эквивалент фумаровой кислоты на 1 молярный эквивалент винфлунина, что представляет собой значительное преимущество с точки зрения воспроизводимости, производства и массового соотношения активного продукта к массе соли.

Это преимущество является важным для получения пероральных форм, таких как таблетки, гелевые колпачки или капсулы, композиция которых требует больших количеств активного ингредиента при необходимости избегать увеличения объема, что делает пероральный прием неудобным. Соответственно, кристаллические формы, которые имеют более компактную форму материала, чем аморфные соли, также имеют преимущество.

Безводное кристаллическое состояние солевых форм винфлунина согласно изобретению продемонстрировано методами, известными специалистам в данной области, например методами рентгеновской порошковой дифракции и инфракрасной спектрометрии, и может быть проверено простой микроскопией. Для целей сравнения на фиг.1 представлена порошковая дифрактограмма аморфного дитартрата винфлунина (не имеющая характеристических спектральных линий).

Изобретение, таким образом, также относится к способам получения кристаллических солей винфлунина, которые включают следующие стадии:

- растворение основания винфлунина в подходящем растворителе;

- добавление кислоты в пропорции 1 или 2 молярных эквивалента, в растворе в подходящем растворителе или не в растворе;

- выпаривание смеси растворителей;

- перемешивание жидкости или смеси жидкостей, нерастворителя или слабого растворителя, при комнатной или пониженной температуре в течение периода времени, необходимого для осаждения;

- фильтрование и выделение образованных кристаллов или аморфного твердого вещества;

- выдерживание при перемешивании аморфного твердого вещества в жидкости или смеси жидкостей, нерастворителя или слабого растворителя, при комнатной или пониженной температуре в течение периода времени, необходимого для кристаллизации,

- фильтрование и выделение образованных кристаллов,

- промывание с использованием жидкости или смеси жидкостей, нерастворителя или слабого растворителя, и сушку кристаллов в вакууме.

Предпочтительно растворители, используемые для растворения основания винфлунина, представляют собой ацетон, этилацетат и толуол. Также могут быть использованы дихлорметан или спирты, такие как, например, этанол, метанол, 1- и 2-пропанол.

Предпочтительно растворители, используемые для растворения кислот, представляют собой воду, ацетон, этилацетат и толуол. Также могут быть использованы дихлорметан или спирты, такие как, например, этанол, метанол, 1- и 2-пропанол.

Предпочтительно жидкости, являющиеся нерастворителями или слабыми растворителями, используемые для осаждения солей, представляют собой этиловый эфир, изопропиловый эфир, этилацетат, ацетон и толуол. Также могут быть использованы метил-трет-изобутиловый эфир, гексан, гептан или петролейный эфир.

Предпочтительно жидкости, являющиеся нерастворителями или слабыми растворителями, используемые для выдерживания аморфных солей, представляют собой (но не ограничены этим), например, этиловый эфир и изопропиловый эфир, этилацетат, ацетон и толуол. Также могут быть использованы метил-трет-изобутиловый эфир, гексан, гептан или петролейный эфир.

Предпочтительно жидкости, являющиеся нерастворителями или слабыми растворителями, используемые для промывки кристаллов, представляют собой этиловый эфир и изопропиловый эфир. Также могут быть использованы метил-трет-изобутиловый эфир, гексан, гептан или петролейный эфир.

Как указано выше, температуру осаждения или выдерживания можно контролировать для оптимизации времени, которое требуется для кристаллизации или для ее качества. Таким образом, предпочтительно выбирают температуру ниже 50°С, более предпочтительно между 4°С и 25°С.

Количество растворителя устанавливается специалистом и предпочтительно составляет между 1 и 20 объемными частями (мл) относительно массы (г) винфлунина.

Исходя из того, что уже показано терапевтическое преимущество винфлунина и его производных, особенно солей винфлунина, настоящее изобретение также относится к лекарственному средству, включающему одну из кристаллических солей винфлунина согласно изобретению. В частном аспекте изобретение относится к применению кристаллических солей винфлунина для изготовления лекарства для лечения раковой патологии. В частности, можно в качестве неограничительного примера привести рак груди, мочевого пузыря, немелкоклеточный рак легкого и рак простаты.

Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей эффективное количество кристаллической соли винфлунина согласно изобретению в физиологически приемлемой среде.

В частности, можно в качестве примера привести фармацевтические композиции для перорального, парентерального, внутривенного или подкожного введения, более предпочтительно для перорального введения в форме таблеток, капсул или гелевых капсул.

Дозы зависят от пола, возраста и веса пациента, а также от пути введения.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение без ограничения его объема.

Сравнительная стабильность аморфного дитартрата и кристаллического фумарата:

1. Исходные материалы:

Партия ОР3.0В: аморфный дитартрат винфлунина.

Batch JLM4008400: кристаллический фумарат винфлунина.

2. Условия стабильности:

Тесты на стабильность проводили с использованием порошковой формы при отсутствии света при следующих условиях:

- Закрытая бутыль: 50°С,

- Открытая бутыль: 40°С, относительная влажность (RH) 75%.

Измерения проводили при температуре Т₀ и Т₀+14 дней.

3. Условия анализа:

Система ВЭЖХ:

Колонка: Sunfire C18, 5 мкм, 4.6×250 мм (Waters), температура 35°С.

Элюент: CH₃CN/МеОН/H₂O/KH₂PO₄ 400/150/450/6.8 (мл/мл/мл/г), рН 7 (доведено с помощью KOH).

Скорость потока: 1 мл/мин

Детектирование: 269 нм

4. Результаты

Партия. Природная соль винфлунина	Время анализа	Условия анализа стабильности	Анализ ВЭЖХ	Содержание воды
ОР3.0В Аморфный дитартрат	Т₀	-	99,28%	6,27%
	Т₀+14 д.	50°С	97,18%	-
	Т₀+14 д.	40°С, 75% RH	98,21%	10,18%
JLM4008400 Кристаллический фумарат	Т₀	-	99,52%	1,33%
	Т₀+14 д.	50°С	99,56%	-
	Т₀+14 д.	40°С, 75% RH	99,38%	4,18%

Соединение аморфного дитартрата винфлунина разрушалось в порошковой форме до 2,1% при 50°С (закрытая бутыль) и до 1,07% в присутствии влаги (40°С, 75% RH), в то время как кристаллический фумарат винфлунина при тех же условиях оставался стабильным (разрушение меньше 0,2%).

Описание фигур:

ФИГ.1: порошковая дифрактограмма аморфного дитартрата винфлунина.

ФИГ.2: порошковая дифрактограмма гидробромида

ФИГ.3: порошковая дифрактограмма сульфата

ФИГ.4: порошковая дифрактограмма лактата

ФИГ.5: порошковая дифрактограмма фумарата

ФИГ.6: порошковая дифрактограмма пара-толуолсульфоната

ФИГ.7: порошковая дифрактограмма бензоата

ФИГ.8: порошковая дифрактограмма манделата

ФИГ.9: порошковая дифрактограмма пара-гидроксибензоата

Кристаллизация солей винфлунина

Пример 1: гидробромид

Растворяют тестовый образец 4,56 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 2 эквивалента водного раствора бромистоводородной кислоты (0,53 мл для 62% раствора). Соль медленно осаждается. Разводят небольшим количеством этилового эфира и оставляют стоять на ночь. Фильтруют и промывают эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 4,43 г кристаллической соли.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm (м.д.) 0.72 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.37-1.46 (m, 1 Н) 1.47-1.55 (m, 1 Н) 1.60-1.97 (m, 4 Н) 1.72 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 2.04 (s, 3 H) 2.12-2.22 (m, 1 H) 2.65-2.77 (m, 2 Н) 2.75 (s, 3 H) 2.81-3.20 (m, 4 Н) 3.33-3.44 (m, 2 Н) 3.54-3.65 (m, 3 Н) 3.64 (s, 1 H) 3.77 (s, 7 H) 3.87 (s, 3 H) 4.87 (s, 2 H) 4.93 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.07 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.31 (s, 1 H) 5.42 (d, J=10.11 Hz, 1 H) 5.87 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.38 (s, 2 H) 7.13-7.22 (m, 2 H) 7.38 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 7.72 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 10.25 (br. s., 1 H)

Пример 2: сульфат

Растворяют тестовый образец 4,29 г основания винфлунина в смеси ацетона и этанола и добавляют 2 эквивалента водного раствора 3 М серной кислоты (3,5 мл). Выпаривают и помещают осадок в ацетон, добавляют этиловый эфир и оставляют стоять на ночь. Фильтруют и промывают эфиром. Получают 4,77 г аморфного порошка.

Полученный порошок перемешивают 24 часа в ацетоне при комнатной температуре, затем добавляют немного изопропилового эфира, фильтруют и промывают изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 4,53 г кристаллического продукта.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.73 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.44-1.56 (m, 2 Н) 1.63-1.83 (m, 2 Н) 1.71 (t, J=19.45 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=13.00 Hz, 1 H) 1.99-2.09 (m, 1 H) 2.07 (s, 3 H) 2.26-2.36 (m, 1 Н) 2.67 (dd, J=15.66, 6.06 Hz, 1 H) 2.79 (s, 3 H) 2.97 (dd, J=14.40, 2.78 Hz, 1 H) 3.12 (t, J=14.40 Hz, 1 H) 3.30-3.35 (m, 3 H) 3.34 (s, 1 H) 3.40-3.51 (m, 2 Н) 3.71-3.82 (m, 1 Н) 3.72 (s, 1 H) 3.76 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 3.85-3.94 (m, 2 Н) 3.88 (s, 3 H) 4.88 (s, 5H) 4.94 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 5.05 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 5.31 (s, 1 H) 5.64 (d, J=10.11 Hz, 1 H) 5.92 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.42 (s, 1 H) 6.59 (s, 1 H) 7.12 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.15 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 10.41 (s, 1 H)

Пример 3: лактат

Растворяют тестовый образец 4,59 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 2 эквивалента L(+) молочной кислоты (1,01 г) в виде раствора в ацетоне. Выпаривают ацетон и осадок растирают в порошок в изопропиловом эфире и оставляют стоять на ночь. Фильтруют и промывают изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 3,81 г кристаллического продукта.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.70 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.33 (d, J=7.07 Hz, 3 H) 1.36-1.49 (m, 2 Н) 1.60-1.81 (m, 2 Н) 1.70 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 1.84-1.94 (m, 1 Н) 1.99-2.12 (m, 1 H) 2.02 (s, 3 H) 2.27-2.40 (m, 1 H) 2.61-2.83 (m, 4 H) 2.72 (s, 3 H) 3.06-3.27 (m, 6 H) 3.47-3.56 (m, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.66-3.73 (m, 1Н) 3.76 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4.09 (q, J=7.00 Hz, 1 H) 4.87 (s, 4 H) 4.92-5.03 (m, 2Н) 5.25-5.35 (m, 2 Н) 5.84 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.28 (s, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 7.13-7.23 (m, 2 Н) 7.36 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H)

Пример 4: фумарат

Растворяют тестовый образец 4,58 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 1 эквивалент фумаровой кислоты (0,65 г) в виде раствора в метаноле. Выпаривают растворители и осадок растирают в порошок в ацетоне, фильтруют и промывают эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 3,54 г кристаллической соли.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.71 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.31-1.41 (m, 1 Н) 1.41-1.50 (m, 1 Н) 1.60-1.84 (m, 3 Н) 1.70 (t, J=19.20 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 1.99-2.12 (m, 1 Н) 2.02 (s, 3 H) 2.37-2.47 (m, 1 Н) 2.69-2.75 (m, 6 Н) 2.80 (dd, J=13.89, 2.27 Hz, 1 H) 3.11 (t, J=14.40 Hz, 1 H) 3.17-3.39 (m, 4 H) 3.55 (d, J=14.65 Hz, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.71 (d, J=13.14 Hz, 1 H) 3.76 (s, 6 H) 3.86 (s, 3 H) 4.87 (s, 5 H) 5.00 (d, J=13.00 Hz, 1 H) 5.27-5.35 (m, 2 H) 5.84 (dd, J=10.11, 4.04 Hz, 1 H) 6.32 (s, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (s, 2 H) 7.10-7.20 (m, 2 Н) 7.35 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H)

Пример 5: пара-толуолсульфонат

Растворяют тестовый образец 1,8 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 2 эквивалента пара-толуолсульфокислоты (0,76 г) в виде раствора в этилацетате. Добавляют изопропиловый эфир и оставляют стоять на ночь. Фильтруют и промывают изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 2,5 г аморфного порошка.

Полученный порошок перемешивают 24 часа в толуоле при комнатной температуре, фильтруют и промывают изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 1,5 г кристаллического продукта.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.67 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.45-1.55 (m, 2 Н) 1.58-1.83 (m, 2 H) 1.71 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 2.02 (s, 1 H) 2.05 (s, 3 H) 2.19-2.30 (m, 1 H) 2.35 (s, 6 H) 2.67 (dd, J=15.66, 6.06 Hz, 1 H) 2.78 (s, 3 H) 2.92 (dd, J=14.15, 2.53 Hz, 1 H) 3.03-3.44 (m, 5 H) 3.54-3.64 (m, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.68 (s, 1 H) 3.72-3.82 (m, 3 H) 3.76 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 4.87 (s, 2 H) 4.93 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.05 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.29 (s, 1 H) 5.55 (d, J=10.61 Hz, 1 H) 5.83 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.40 (s, 1 H) 6.62 (s, 1 H) 7.05 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.18 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.18 (d, J=8.08 Hz, 4 H) 7.39 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.57 (d, J=8.08 Hz, 4 H) 7.63 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 10.43 (s, 1 H)

Пример 6: бензоат

Растворяют тестовый образец 1,8 г основания винфлунина в минимальном количестве этилацетата и добавляют 2 эквивалента бензойной кислоты (0,54 г) в виде раствора в этилацетате. Выпаривают этилацетат и осадок растирают в порошок в изопропиловом эфире, фильтруют и промывают осадок изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 2,1 г кристаллической соли.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.70 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.30-1.40 (m, 2 Н) 1.54-1.92 (m, 4 Н) 1.68 (t, J=20.00 Hz, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.03-2.11 (m, 1 Н) 2.28-2.37 (m, 1 Н) 2.65 (d, J=16.00 Hz, 2 H) 2.64 (s, 1 H) 2.71 (s, 3 H) 3.02-3.29 (m, 6 Н) 3.50 (d, J=14.15 Hz, 1 H) 3.57 (s, 1 H) 3.62 (d, J=12.63 Hz, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4.78 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.88 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.87 (br. s., 2 H) 5.28 (d, J=10.50 Hz, 1 H) 5.30 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=10.11, 4.04 Hz, 1 H) 6.32 (s, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 7.07 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.14 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.31-7.36 (m, 2H) 7.38 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.45-7.47 (m, J=7.4 Hz, 1Н) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.92 (d, J=7.4 Hz, 2 H)

Пример 7: манделат

Растворяют тестовый образец 1,3 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 1 эквивалент R(-) миндальной кислоты (0,24 г) в виде раствора в ацетоне. Выпаривают ацетон в вакууме и осадок растирают в порошок в изопропиловом эфире. Оставляют стоять на ночь при комнатной температуре, фильтруют и промывают осадок изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 1,3 г кристаллической соли.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.70 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.32-1.44 (m, 2 Н) 1.55-1.92 (m, 3 H) 1.68 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 1.98-2.08 (m, 1 H) 2.01 (s, 3 H) 2.28-2.42 (m, 1 H) 2.55-2.87 (m, 3 H) 2.67 (s, 1 H) 2.72 (s, 3 H) 3.00-3.29 (m, 6 H) 3.60 (s, 2 H) 3.57 (s, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4.89 (s, 3 H) 4.88 (s, 4 H) 5.28 (d, J=10.00 Hz, 1 H) 5.29 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=9.60, 4.04 Hz, 1 H) 6.33 (s, 2 H) 7.09 (t, J=7.58 Hz, 1 H) 7.16 (t, J=7.58 Hz, 1 H) 7.20-7.30 (m, 3 Н) 7.34 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=7.07 Hz, 2 H) 7.67 (d, J=8.08 Hz, 1Н)

Пример 8: пара-гидроксибензоат

Растворяют тестовый образец 1,3 г основания винфлунина в минимальном количестве ацетона и добавляют 1 эквивалент пара-гидроксибензойной кислоты (0,22 г) в виде раствора в ацетоне. Выпаривают ацетон в вакууме и осадок растирают в порошок в изопропиловом эфире. Оставляют стоять на ночь при комнатной температуре, фильтруют и промывают осадок изопропиловым эфиром. Сушат 20 часов в вакууме при 70°С при отсутствии света. Получают 1,3 г кристаллической соли.

1Н ЯМР (400 МГц, МеОН) δ ppm 0.71 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.29-1.40 (m, 2 Н) 1.56-1.92 (m, 3 H) 1.67 (t, J=19.20 Hz, 3 H) 1.98-2.08 (m, 1 H) 2.01 (s, 3 H) 2.28-2.38 (m, 1 H) 2.53-2.76 (m, 2 H) 2.65 (s, 1 H) 2.71 (s, 3 H) 3.00-3.28 (m, 7 H) 3.49 (d, J=13.64 Hz, 1 H) 3.58 (d, J=10.00 Hz, 1 H) 3.57 (s, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.84 (s, 3 H) 4.76 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.84 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 4.89 (s, 4 H) 5.28 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 5.30 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=9.60, 4.04 Hz, 1 H) 6.34 (s, 2 H) 6.74 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.06 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.12 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=8.08 Hz, 2H)

- Ядерный магнитный резонанс.

Спектр ¹H ЯМР регистрировали при нормальной частоте 400 МГц на спектрометре Bruker Avance DPX 400 с широкополосным обратным зондом и z-градиентом. Перед регистрацией ЯМР спектра продукт растворяют в дейтерированном метаноле (Euriso-top, пункт D 324-B, партия А-3561) в приблизительной концентрации 0,4% (мас./об.). Химические сдвиги выражают в ppm (миллионных долях), в качестве внутреннего стандарта используют тетраметилсилан (ТМС). Константы взаимодействия выражают в герцах.

Ядерный магнитный резонанс используют для подтверждения структурной целостности молекулы соли винфлунина после кристаллизации и для определения молярного отношения используемой кислоты к винфлунину. Это отношение составляет 1/1 или 2/1 в соответствии с использованной кислотой.

- Дифракция рентгеновских лучей:

Образцы анализировали на дифрактометре Bruker AXS D8 Advance с медным антикатодом (λ=1,54060А), работающим при 30 кВ и 53 мА, оборудованным блоком приемной щели переменной ширины и детектором Vantec.

Анализы проводили между 2 и 40°2θ с шагом 0,007°2θ и временем счета 40 сек. Образцы помещали в держатель образцов с нулевым отражением (С79298-А3158-В188 Bruker AXS).

Claims

1. Безводная кристаллическая соль винфлунина, полученная с 1 или 2 эквивалентами фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты, выбранной из фумарата, гидробромида, лактата, пара-толуолсульфоната, бензоата, манделата и пара-гидроксибензоата, имеющая порошковую дифрактограмму, как показано на фигурах 2-9.

2. Способ получения кристаллической соли винфлунина, включающий следующие стадии:
- растворение основания винфлунина в растворителе или смеси растворителей, выбранных из ацетона, этилацетата, смеси ацетона с этанолом, смеси ацетона с метанолом, смеси ацетона с этилацетатом;
- добавление неорганической или органической кислоты;
- осаждение соли;
- фильтрование и выделение образованной соли;
- выдерживание и кристаллизация соли в растворителе или нерастворителе, выбранном из этилового эфира или изопропилового эфира;
- фильтрование, промывание и сушка кристаллов в вакууме.

3. Способ по п.2, где кислота выбрана из фармацевтически приемлемых неорганических или органических кислот, таких как фумаровая, бромистоводородная, молочная, пара-толуолсульфоновая, бензойная, миндальная и пара-гидроксибензойная кислота.

4. Способ по п.2, где кислоту используют в соотношении 1 или 2 молярных эквивалента на 1 молярный эквивалент винфлунина.

5. Способ по п.2, где кислоту растворяют в воде или подходящем органическом растворителе, выбранном из ацетона, этилацетата, этанола, метанола.

6. Способ по п.2, где осаждение соли осуществляют в среде, или в растворителе, или смеси растворителя и нерастворителя, таких как ацетон, этилацетат, этиловый эфир, изопропиловый эфир.

7. Способ по п.2, где выдерживание осуществляют в растворителе или смеси растворителя и нерастворителя, таких как ацетон, этилацетат, этиловый эфир, изопропиловый эфир.

8. Безводная кристаллическая соль винфлунина по п.1 или полученная способом по п.2, используемая в качестве лекарства.