RU2453291C1 - Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации - Google Patents
Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2453291C1 RU2453291C1 RU2010146680/14A RU2010146680A RU2453291C1 RU 2453291 C1 RU2453291 C1 RU 2453291C1 RU 2010146680/14 A RU2010146680/14 A RU 2010146680/14A RU 2010146680 A RU2010146680 A RU 2010146680A RU 2453291 C1 RU2453291 C1 RU 2453291C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tracheal
- trachea
- naclo
- matrix
- allogeneic transplantation
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности к трансплантологии. Для получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации используют донорскую трахею. Образец трахеи механически очищают от жировой и соединительной ткани, промывают дистиллированной водой, инкубируют в течение 14-21 суток в 5% растворе NaClO4, обновляя раствор каждые 72 часа, промывают физиологическим раствором. Способ обеспечивает получение стерильного матрикса трахеи для аллогенной трансплантации в короткие сроки с сохранением макроструктуры и эластичности трахеи и снижением иммуногенности. 12 ил., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности трансплантологии.
При развитии стеноза трахеи, вызванного злокачественными новообразованиями, инфекционными заболеваниями, послеоперационными осложнениями или травмой, возникает необходимость в резекции значительных участков органа. В ряде случаев невозможно формирование первичного анастомоза и требуется замена дефекта трансплантатом.
Для восстановления целостности трахеи использовались различные протезы и ткани: замещение трахеальных дефектов аутологичными тканями, такими как надкостница, тонкая кишка, мышцы, пищевод, ткани бронха и аорты. Эти способы оказались малоэффективными и не позволяли формировать полноценный каркас трахеи. Кроме того, эти трансплантаты в дальнейшем замещались соединительной тканью, блокирующей воздухопроводящие пути [Grillo НС. Tracheal replacement: a critical review. Ann. Thorac. Surg.. - 2002. - Vol.73. - P.1995-2004].
Известны аллотрансплантаты для замещения дефектов трахеи, содержащие эпителий и хрящевые кольца, которые являлись мишенями для отторжения. Для предотвращения отторжения аллотрансплантата требуется проведение длительной неспецифической иммуносупрессивной терапии, вызывающей ряд побочных эффектов. В большинстве случаев после прекращения иммуносупрессивной терапии наблюдалось отторжение трансплантированных тканей [М. Sykes Immune evasion by chimeric trachea. N. Engl. J. Med. -. 2010 - Vol.362. - P.172-174].
В качестве прототипа заявляемого способа получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации предлагается способ с использованием трупной трахеи, детергентов и энзимов [Р. Macchiarini at al. Clinical transplantation of a tissue-engineered airway. Lancet 2008; 372:2023-2030]. Для снижения иммуногенности и удаления молекул главного комплекса гистосовместимости МНС I и II классов образец трахеи выдерживали в дистиллированной воде в течение 72 часов, затем проводили децеллюляризацию путем инкубирования трахеи в смеси 4% раствора натрия деоксихолата и 2000 ед. дезоксирибонуклеазы в 1 mM/л натрия хлорида, 25 циклов в течение 6 недель.
Недостатки прототипа: 1) не обеспечивает стерильность трансплантата, что может привести к гнойно-септическим осложнениям и к последующему отторжению трансплантата; 2) длительность обработки трансплантата трахеи (6 недель) не позволяет использовать его у больных с острой дыхательной недостаточностью, обусловленной дефектом или обтурацией трахеи; 3) нарушает структуру хрящевой ткани.
Задачей заявляемого изобретения является разработка способа получения стерильного матрикса трахеи для аллогенной трансплантации в более короткие сроки (2-3 недели).
Заявляемый способ предусматривает следующие стадии:
а) механическое очищение донорской трупной трахеи от соединительной и жировой тканей;
б) децеллюляризация донорской трахеи.
Способ осуществляется следующим образом: образцы трахеи механически очищают от жировой и соединительной тканей, промывают дистиллированной водой. С целью децеллюляризации трахею инкубируют в 5% растворе перхлората натрия (NaClO4) в течение 14-21 суток, при этом растворы обновляют каждые 72 часа. Затем образцы трахеи отмывают физиологическим раствором.
Пример 1. Оценка макро- и микроструктуры иммуногистохимических особенностей трасплантата
Исследования проведены на мышах линии C57BL/6 весом 22-25 г. У мышей линии C57BL/6 под эфирным наркозом удаляли трахею и механически освобождали от слизи, мышечных элементов, жировой и соединительной тканей; затем промывали дистиллированной водой. С целью децеллюляризации образцы трахеи инкубировали в 5% растворе NaClO4 в течение 14 суток. Раствор обновляли каждые 72 часа. Затем образцы отмывали физиологическим раствором и проводили морфологическое и иммуногистохимическое исследования. Экспрессию антигенов МНС I и II классов, а также дифференцировочных антигенов натуральных киллеров определяли на отпечатках и криостатных срезах образцов трахеи. Для этих целей использовали антитела NK 1.1 - РЕ, МНС I-FITC и МНС II-FITC фирмы Coltag. Световую и флюоресцентную микроскопию проводили с использованием фотовидеосистемы фирмы Zeiss и программы Axiovision 2.
Как показано на фиг.1, обработка 5% раствором NaClO4 не приводит к выраженным нарушениям структуры хрящевой и соединительной тканей трахеи.
В заявляемом способе получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации образцы сохраняли свою макроструктуру и эластичность. При использовании заявляемого способа наблюдали полное разрушение структуры слизистой оболочки, в то время как хрящевая ткань сохраняла свою структуру, а в хондроцитах определяли невакуолизированную цитоплазму и ядро (Фиг.2, 3). Показано, что после обработки слизистой оболочки 5% раствором NaClO4 были обнаружены лишь отдельные полуразрушенные клетки с вакуолизированной цитоплазмой и безъядерные клеточные фрагменты (Фиг.4, 5). При иммунофлюоресцентном исследовании выявлено, что после воздействия 5% раствора NaClO4 в отпечатках трахеи не обнаружено специфической реакции на антигены гистосовместимости МНС I класса, определяли лишь единичные МНС II-положительные клетки (Фиг.6, 7).
Пример 2. Оценка гетеротопной аллогенной трасплантации матрикса трахеи у мышей
Подготовку трансплантатов осуществляли, как описано в примере 1. Далее у мышей реципиентов линии Balb/c в дорзолатеральной области грудной клетки формировали подкожный карман, в который помещали трансплантат. Через 28 суток трансплантат извлекали и проводили гистологическое исследование. Световую микроскопию проводили с использованием фото-видеосистемы фирмы Zeiss (Германия) и программы Axiovision 2. Гистологическое исследование извлеченного трансплантата позволило установить, что в нем сохранялись хрящевые полукольца и соединительная ткань (Фиг.8, 9).
Пример 3. Оценка гетеротопной аллогенной трасплантации матрикса трахеи у собак
Подготовку образцов донорской трахеи человека осуществляли, как описано в примере 1, но обработка трахеи длилась 21 сутки. Далее у собаки-реципиента в области паховой складки делали дугообразный разрез кожи и формировали межмышечный карман, в который помещали матрикс донорской трахеи, полученный заявляемым способом.
У животного после имплантации трахеи, обработанной по заявляемому способу, не наблюдалось симптомов общей или местной воспалительных реакций. Через 28 суток трансплантат извлекали и проводили гистологическое исследование. Трансплантат сохранил свою форму, хрящевую основу и эластичность (Фиг.10). При гистологическом исследовании было установлено, что микроструктура образца трахеи, обработанной по заявляемому способу, полностью сохранена: целостность хрящевой и мембранозной частей трахеи не претерпела существенных изменений, признаки отторжения тканей отсутствуют (Фиг.11, 12).
Технический результат
Заявляемый способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации обеспечивает в короткие сроки (2-3 недели) снижение иммуногенности, стерильность, сохранение макроструктуры и эластичности трахеи.
Изобретение иллюстрировано следующими фигурами:
Фиг.1 - трахея мыши после обработки 5% раствором NaClO4, микрофотография, ув. 100.
Фиг.2 - срез трахеи после обработки 5% раствором NaClO4, окр. гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 100.
Фиг.3 - срез трахеи после обработки 5% раствором NaClO4, окр. гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 900.
Фиг.4 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, живые клетки, окр. по Романовскому-Гимза, микрофотография, ув. 900.
Фиг.5 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, живые клетки, окр. по Романовскому-Гимза, микрофотография. Ув. 400.
Фиг.6 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, окр. антителами МНС I-FITC, иммунофлюоресценция, микрофотография, ув. 400.
Фиг.7 - отпечаток трахеи мыши после обработки 5% раствором NaClO4, окр. антителами МНС II-FITC, иммунофлюоресценция, микрофотография, ув. 900.
Фиг.8 - аллотрансплантат трахеи после инкубации в 5% растворе NaClO4, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 200.
Фиг.9 - аллотрансплантат трахеи после инкубации в 5% растворе NaClO4, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 400.
Фиг.10 - Матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, макрофотография.
Фиг.11 - матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 100.
Фиг.12 - матрикс трахеи человека после инкубации в 5% растворе NaClO4, удаленный через 30 суток после трансплантации собаке, окраска гематоксилин-эозин, микрофотография, ув. 400.
Claims (1)
- Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации, включающий использование донорской трахеи, отличающийся тем, что образец трахеи механически очищают от жировой и соединительной ткани, промывают дистиллированной водой, инкубируют в течение 14-21 сут в 5%-ном растворе NaClO4, обновляя раствор каждые 72 ч, промывают физиологическим раствором.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010146680/14A RU2453291C1 (ru) | 2010-11-17 | 2010-11-17 | Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010146680/14A RU2453291C1 (ru) | 2010-11-17 | 2010-11-17 | Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2010146680A RU2010146680A (ru) | 2012-05-27 |
RU2453291C1 true RU2453291C1 (ru) | 2012-06-20 |
Family
ID=46231257
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2010146680/14A RU2453291C1 (ru) | 2010-11-17 | 2010-11-17 | Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2453291C1 (ru) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2499611C1 (ru) * | 2012-09-28 | 2013-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук (ИТЭБ РАН) | Способ повышения биосовместимости трансплантатов клапанов сердца и сосудов |
RU2547799C1 (ru) * | 2013-12-24 | 2015-04-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Росийской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России) | Способ создания биоинженерного каркаса легкого крысы |
MD1015Z (ru) * | 2015-05-12 | 2016-10-31 | ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА | Метод децеллюляризации печени у экспериментальных животных |
RU2678966C1 (ru) * | 2018-04-03 | 2019-02-05 | ООО "БиоИн-М" | Способ повышения биосовместимости перикардиальных биоматериалов для реконструктивной хирургии |
RU2786726C2 (ru) * | 2018-08-23 | 2022-12-26 | Тераселл Консалтинг Спрл | Способ получения матрикса ткани человека и животных с целью их использования в качестве трансплантатов, автоматизированный способ обработки биологической ткани, резервуар для этих способов, входящий в комплект |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3409372A1 (de) * | 1984-03-14 | 1985-09-19 | Dr. Ruhland Nachf. GmbH, 8425 Neustadt | Material zum vitalisieren von implantatoberflaechen |
RU2328984C1 (ru) * | 2007-02-16 | 2008-07-20 | Государственное учреждение Российский научный центр хирургии им. академика Б.В. Петровского РАМН (РНЦХ РАМН) | Способ донорского забора тиреотрахеального трансплантата |
-
2010
- 2010-11-17 RU RU2010146680/14A patent/RU2453291C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3409372A1 (de) * | 1984-03-14 | 1985-09-19 | Dr. Ruhland Nachf. GmbH, 8425 Neustadt | Material zum vitalisieren von implantatoberflaechen |
RU2328984C1 (ru) * | 2007-02-16 | 2008-07-20 | Государственное учреждение Российский научный центр хирургии им. академика Б.В. Петровского РАМН (РНЦХ РАМН) | Способ донорского забора тиреотрахеального трансплантата |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
GILBERT T.W. et al. Decellularization of tissues and organs, Biomaterials, 2006, №27, p.3675-3683, (реферат), [он-лайн], [найдено 02.06.2011], найдено из базы данных PubMed. BAIGUERA S. et al. Tissue-engineered tracheal transplantation. Transplantation. 2010 Mar 15; 89(5):485-91. (реферат), [он-лайн], [найдено 02.06.2011], найдено из базы данных PubMed. * |
MACCHIARINI P. et al. Clinical transplantation of a tissue-engineered airway. Lancet. 2008 Dec 13; 372(9655):2023-30. (реферат), [он-лайн], [найдено 02.06.2011], найдено из базы данных PubMed. * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2499611C1 (ru) * | 2012-09-28 | 2013-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук (ИТЭБ РАН) | Способ повышения биосовместимости трансплантатов клапанов сердца и сосудов |
RU2547799C1 (ru) * | 2013-12-24 | 2015-04-10 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Росийской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России) | Способ создания биоинженерного каркаса легкого крысы |
MD1015Z (ru) * | 2015-05-12 | 2016-10-31 | ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА | Метод децеллюляризации печени у экспериментальных животных |
RU2678966C1 (ru) * | 2018-04-03 | 2019-02-05 | ООО "БиоИн-М" | Способ повышения биосовместимости перикардиальных биоматериалов для реконструктивной хирургии |
RU2786726C2 (ru) * | 2018-08-23 | 2022-12-26 | Тераселл Консалтинг Спрл | Способ получения матрикса ткани человека и животных с целью их использования в качестве трансплантатов, автоматизированный способ обработки биологической ткани, резервуар для этих способов, входящий в комплект |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2010146680A (ru) | 2012-05-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6915224B2 (ja) | 抗線維化材料のための修飾されたアルギネートおよび用途 | |
Quarta et al. | Bioengineered constructs combined with exercise enhance stem cell-mediated treatment of volumetric muscle loss | |
Haykal et al. | Evaluation of the structural integrity and extracellular matrix components of tracheal allografts following cyclical decellularization techniques: comparison of three protocols | |
KR101056069B1 (ko) | 동물조직 분말을 이용한 다공성 3차원 지지체의 제조방법 | |
Rohaina et al. | Reconstruction of limbal stem cell deficient corneal surface with induced human bone marrow mesenchymal stem cells on amniotic membrane | |
JP6480911B2 (ja) | 組織移植片の脱細胞化方法 | |
Baiguera et al. | Dynamic decellularization and cross-linking of rat tracheal matrix | |
JP2001502905A (ja) | ホウォートンゼリーから分離した細胞を用いた軟骨組織の形成 | |
AU2014283031B2 (en) | Implant and method of producing an implant by decellularising an tissue by perfusion under negative pressure | |
WO2008083223A1 (en) | Methods for culturing dermal cells for treatment of skin injuries such as burns | |
CN1735685A (zh) | 用未分化的间充质细胞治疗组织 | |
CN104105493A (zh) | 哺乳动物胎儿肺细胞以及其治疗用途 | |
KR20120095022A (ko) | 간엽줄기세포 및 면역조절 t 세포를 유효성분으로 포함하는 이식편대숙주질환 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물 | |
RU2453291C1 (ru) | Способ получения матрикса трахеи для аллогенной трансплантации | |
WO2007083685A1 (ja) | 生体内で細胞増殖可能な角膜内皮製剤 | |
Ohno et al. | Airway reconstruction using decellularized tracheal allografts in a porcine model | |
KR102104120B1 (ko) | 사람 코 하비갑개 유래 중간엽 줄기세포 기반 3d 바이오프린팅 조직체 및 이의 이용 | |
Kiselevsky et al. | Optimization of a method for preparation and repopulation of the tracheal matrix for allogenic transplantation. | |
Kim et al. | Tracheal replacement with fresh and cryopreserved aortic allograft in adult dog | |
RU2458635C1 (ru) | Способ получения трахеобронхиального биоимпланта | |
Lee et al. | Evaluation of immunosuppressive therapy use for tracheal transplantation with trachea-mimetic bellows scaffolds in a rabbit model | |
KR101901100B1 (ko) | 동물의 기관조직을 이용한 인공 기관 지지체의 제조 방법 | |
CN109689075A (zh) | 包括无软骨细胞破碎物和干细胞的用于促进软骨分化的复合物及其应用 | |
Yuan et al. | In vivo immunological properties research on mesenchymal stem cells based engineering cartilage by a dialyzer pocket model | |
KR102181811B1 (ko) | 조직의 탈세포화 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20181118 |