RU2397248C1 - РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ - Google Patents
РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2397248C1 RU2397248C1 RU2009117289/13A RU2009117289A RU2397248C1 RU 2397248 C1 RU2397248 C1 RU 2397248C1 RU 2009117289/13 A RU2009117289/13 A RU 2009117289/13A RU 2009117289 A RU2009117289 A RU 2009117289A RU 2397248 C1 RU2397248 C1 RU 2397248C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- asp
- asparaginase
- plasmid
- blue
- coli
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и касается новой плазмиды pL-ASP-08 и нового штамма бактерий Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08, содержащего данную плазмиду. Рекомбинантная плазмидная ДНК pL-ASP-08 имеет молекулярную массу 2,9 МДа (4471 п.о.) и предназначена для синтеза L-аспарагиназы. Изобретение позволяет получать высокоочищенную генно-инженерную L-аспарагиназу для изготовления лекарственных препаратов, применяемых при лечении лимфобластных лейкозов, лимфо- и ретикулосарком в комбинированной химиотерапии. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генной инженерии, и касается новой плазмиды pL-ASP-08 и нового штамма бактерий Escherichia coli XL1-blue/ pL-ASP-08, который может быть использован для получения высокоочищенной генно-инженерной L-аспарагиназы, применяемой для изготовления лекарственных препаратов при лечении лимфобластных лейкозов, лимфо- и ретикулосарком в комбинированной химиотерапии.
L-аспарагиназа (L-аспарагинамидогидролаза, ЕС3.5.1.1), относящаяся к треониновым амидогидролазам, катализирует гидролитическое расщепление L-аспарагина с образованием аспарагиновой кислоты и аммиака и является одним из ключевых ферментов, осуществляющих взаимосвязь азотистого и углеродного обмена у про- и эукариотических организмов. В быстроделящихся лейкозных клетках гидролиз аспарагина, катализируемый L-аспарагиназой, приводит к нарушению биосинтеза белков и гибели опухолевых клеток, подавлению роста опухоли (Biochem. Pharmacol. 1985, 34, 559-565; Keefer JF, Moraga DA, Schuster SM et al). Таким действием обладает L-аспарагиназа из Escherichia coli, Ervinia caratovora, Ervinia chrysanthemi и некоторых других микроорганизмов (ж-л «Вопросы медицинской химии», 2000, №6, 3-18). При наличии нескольких изоферментов L-аспарагиназы в E. coli противоопухолевое действие оказывает лишь один из них - изоформа ЕсА2, кодируемая геном ansB (UniProtKB/Swiss-Prot, ASPG2_ECOLI, Accession number P00805).
Известны рекомбинантная плазмидная ДНК pBADLANS для получения штамма-продуцента рекомбинантной L-аспарагиназы и штамм E.coli TCAR-LANS - продуцент рекомбинантной L-аспарагиназы. (Пат. РФ №2221868, МКИ C12N, опубл. 2004).
Недостатком известного технического решения является невысокая экспрессия L-аспарагиназы - не выше 10%.
Известен наиболее близкий к заявленному способ получения рекомбинантной L-аспарагиназы, включающий создание рекомбинантной плазмидной ДНК pACYCLANS, содержащей ген L-аспарагиназы Erwina carotovora и культивирование штамма E. coli, трансформированного рекомбинантной плазмидной ДНК pACYCLANS с последующим выделением L-аспарагиназы (Патент РФ №2224797, МКИ C12N, опубл.2004). Недостатком известного способа является невысокое содержание рекомбинантной L-аспарагиназы - не более 12% от общего белка клеток.
Изобретение решает задачу создания рекомбинантного штамма - продуцента L-аспарагиназы с высоким содержанием фермента.
Поставленная задача решается за счет создания рекомбинантной плазмидной ДНК pL-ASP-08 длиной 4471 п.о. с молекулярной массой 2,9 МДа, кодирующей аминокислотную последовательность L-аспарагиназы, и состоящей из BamH1/HindIII фрагмента плазмиды pL-ASP-08 длиной 3425 п.о., содержащего участок ori инициации репликации плазмиды, гибридный промотор транскрипции lac О, терминатор транскрипции рибосомного оперона Е. coli Stop codons, ген β-лактамазы bla, определяющий устойчивость к ампициллину, уникальный сайт узнавания рестрикционной эндонуклеазой Xho I; и искусственной последовательности ДНК - фрагмента BamH1/HindIII длиной 1046 п.о., включающего синтетический ген L-аспарагиназы и содержащего уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами BamHI и HindIII.
А также поставленная задача решается за счет штамма бактерий Escherichia coli XL-blue/pL-ASP-08 - продуцента рекомбинантной L-аспарагиназы, содержащего плазмидную ДНК pL-ASP-08.
Исходной плазмидой для конструирования нового гена, кодирующего фермент L-аспарагиназу, служит плазмида pQE-30 (QIAGEN, Cat. No 33203). Для получения синтетической ДНК (1046 п.о.), содержащей фрагмент, кодирующий аминокислотную последовательность фермента L-аспарагиназы, проводят полимеразную цепную реакцию на матрице суммарной ДНК Е. Coli H42. Встраивание полученной синтетической ДНК в исходную плазмиду с помощью реакции лигирования приводит к получению искомой плазмиды pL-ASP-08.
Рекомбинантная плазмидная ДНК pL-ASP-08, кодирующая L-аспарагиназу с аминокислотной последовательностью L-аспарагиназы, характеризуется следующими признаками:
Имеет молекулярную массу 2,9 МДа (4471 п.о.);
кодирует L-аспарагиназу;
состоит из BamH1/HindIII фрагмента плазмиды pL-ASP-08 длиной 3425 п.о., содержащего участок ori инициации репликации плазмиды, гибридный промотор транскрипции lac О, терминатор транскрипции рибосомного оперона Е. coli Stop codons, ген β-лактамазы bla, определяющий устойчивость к ампициллину, уникальный сайт узнавания рестрикционной эндонуклеазой Xho I, и искусственной последовательности ДНК - фрагмента BamH1/HindIII длиной 1046 п.о., включающего синтетический ген L-аспарагиназы и содержащего уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами BamH1 и Hind III.
Для получения штамма-продуцента L-аспарагиназы трансформируют компетентные клетки Escherichia coli XLl-blue (rec A1 end A1 gyr A96 thi-1 hsdR17 sup E44 rREl F1 lac [F' proAB lac IqZΔM 15 Tn10 (TetR)]) плазмидной ДНК pL-ASP-08.
Полученный штамм, названный Е. coli XL1-blue/pL-ASP-08, характеризуется следующими свойствами.
Культурально-морфологические признаки
Клетки мелкие, палочковидной формы, грамотрицательные, 1x3,5 мкм, подвижные. Штамм хорошо растет на обычных питательных средах (МПА, МПБ, LB-бульон, LB-агар, минимальная среда с глюкозой). При росте на агаризованной среде LB колонии округлые, гладкие, полупрозрачные, блестящие, серые. Край ровный, диаметр колоний 1-3 мм, консистенция пастообразная. Рост в жидких средах (LB, минимальная среда с глюкозой) характеризуется ровным помутнением, осадок легко седиментирует.
Физиолого-биохимические признаки
Клетки растут при 4-42°С, оптимум рН 6,8-7,6. В качестве источника азота используют как минеральные соли аммония, так и органические соединения: аминокислоты, пептон, триптон, дрожжевой экстракт. В качестве источника углерода при росте на минимальной среде используют глицерин, углеводы, аминокислоты.
Генетические признаки
Клетки проявляют устойчивость к ампициллину (до 300 мкг/мл), обусловленную наличием генов устойчивости к антибиотику в ДНК рекомбинантной плазмиды pL-ASP-08.
Условия хранения
Штамм бактерий E. coli XL-blue/pL-ASP-08 хранят на чашках и косяках при 4°С. Пересевы на свежие среды проводят один раз в месяц. Может храниться не менее одного года в среде LB, содержащей 15% глицерина, при -70°С.
Устойчивость к антибиотикам
Клетки штамма-продуцента проявляют устойчивость к ампициллину (до 300 мкг/мл), обусловленную наличием генов устойчивости в ДНК рекомбинантной плазмиды pL-ASP-08.
Предлагаемое изобретение обеспечивает синтез L-аспарагиназы в изоформе ЕсА2 с уровнем экспрессии не ниже 30-35% и активностью фермента 240-250 МЕ/мл культуральной жидкости.
Изобретение иллюстрирует чертеж, на котором показана физическая карта рекомбинантной плазмиды pL-Asp-08. Уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами со следующими координатами: Xho I - 1, BamHI -148, Hind III - 1194
ori - участок инициации репликации плазмиды,
lac О - гибридный промотор транскрипции,
Stop codons - терминатор транскрипции рибосомного оперона Е. coli,
L-asparaginase - область, кодирующая L-аспарагиназу.
bla - ген β-лактамазы.
Изобретение иллюстрируют примеры
Пример 1.
Получение плазмиды pL-Asp-08.
Получение плазмиды pL-Asp-08 проводят в три этапа.
1. Наращивают культуру клеток природного штамма Е. Coli H42 в 200 мл культуральной среды, содержащей кукурузный экстракт и минеральные соли, в течение 16 часов. Биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием 10 мин при 6000 об/мин. Клетки 1 г биомассы ресуспендируют в 20 мл Трис-HCl буфера, рН 7,5 и разрушают ультразвуковой обработкой (10 импульсов по 30 с при +4°С). Из полученной суспензии выделяют тотальную ДНК клеток стандартным методом щелочного лизиса (Maniatis, Т., Fritsch, E.F. and Sambrook, J. (1982) Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Sping Harbor Laboratory Press). Полученная ДНК является матрицей в полимеразной цепной реакции (ПЦР) получения фрагмента ДНК, кодирующего аминокислотную последовательность L-аспарагиназы.
2. На основании нуклеотидной последовательности гена ansB, приведенной в базе UniProtKB/Swiss-Prot:P00805 для L-аспарагиназы формы ЕсА2, синтезируют праймеры (прямой - GGATCCGAGTTTTTCAAAAAG…, и обратный - TGACCGCAGCTGATAAAGCCT…) для наработки фрагмента ДНК, кодирующего аминокислотную последовательность L-аспарагиназы, с помощью ПЦР. Полимеразную цепную реакцию проводят в стандартных условиях (Mullis K.B., Target amplification for DNA analysis by the polymerase chain reaction, Ann Biol Clin (Paris). 1990,48(8):579-82), в результате получают искусственную последовательность ДНК, фрагмент BamH1/HindIII длиной 1046 п.о., кодирующий аминокислотную последовательность L-аспарагиназы.
3. Исходную плазмиду pQE-30 (QIAGEN, Cat. No 33203) обрабатывают рестрикционными эндонклеазами BamH1 и HindIII и с помощью фермента ДНК-лигазы проводят встраивание в нее полученного синтетического фрагмента BamH1/HindIII длиной 1046 п.о., кодирующего аминокислотную последовательность L-аспарагиназы по стандартной методике (Maniatis, Т., Fritsch, E.F. and Sambrook,, J. (1982) Molecular Cloning: a Laboratory Manual, Cold Sping Harbor Laboratory Press).
Правильность нуклеотидной последовательности созданной плазмиды pL-Asp-08 подтверждают рестриктным анализом по уникальным сайтам узнавания рестрикционными эндонуклеазами Xho I, BamHI и Hind III, а также установлением нуклеотидной последовательности области клонирования фрагмента (координаты 1-1210 п.о. по физической карте плазмиды pL-Asp-08) секвенированием.
Плазмиду хранят в 10 мМ Трис-HCl буфере рН 8,0, содержащем 1 мМ ЭДТА, при - 70°С неограниченное время.
Физическая карта плазмиды приведена на чертеже.
Пример 2.
Получение штамма E.coli XLl-blue/pL-ASP-08.
Получение штамма и проверку активности синтезируемой L-аспарагиназы проводят в три этапа.
1. Штамм E. coli XLl-blue/pL-ASP-08 получают путем введения плазмиды pL-ASP-08 в компетентные клетки Escherichia coli XL1-blue с помощью электропорации. Для получения компетентных клеток бактериальные клетки исходного штамма Escherichia coli XL1-blue-(rec A1 end A1 gyr А96 thi-1 hsdR17 sup E44 rREl F1 lac [F' proAB lac IqZΔM 15 Tn10 (TetR)]), (STRATAGENE: кат. номер: 200268) выращивают в 10 мл жидкой среды LB в течение ночи при 37°С и пересевают в 1 литр той же среды. Наращивание продолжают еще 2,5 часа при 37°С на качалке при интенсивной аэрации, а затем быстро охлаждают во льду. Клетки осаждают центрифугированием в течение 10 мин при 8000 об/мин при +4°С на центрифуге JA21 (Beckman, США). Осадок один раз промывают в равном объеме, т.е. в 1 л деионизированной воды. Осажденные клетки ресуспендируют 1/2 объема 10% глицерина, после осаждения клетки ресуспендируют 1/4 объема 10% глицерина и снова центрифугируют, полученный осадок ресуспендируют в 3 мл 10% глицерина, разливают в охлажденные пробирки «Эппендорф» по 40 мкл, быстро замораживают и хранят при -70°С.
2. Введение плазмиды pL-ASP-08 в компетентные клетки E. coli XL1-blue проводят в стандартном режиме метода электропорации. Полученные клетки штамма Е coli XL1-blue/pL-ASP-08 вносят в 10 мл среды LB и выращивают при 37°С в течение ночи. Полученная культура клеток является инокулятом для наращивания культуры при определении продуктивности штамма E. coli XL1-blue/pL-ASP-08.
3. Для определение продуктивности штамма-продуцента L-аспарагиназы E. coli XL1-blue/pL-ASP-08 в 15 мл жидкой среды LB, содержащей 100 мкг/мл ампициллина, вносят 1% инокулята и выращивают при 37°С на качалке при 180 об/мин в течение 2 ч. Затем добавляют индуктор изопропилтиогалактопиранозид (ИПТГ) до конечной концентрации 0,5 мМ и продолжают наращивание в тех же условиях еще 2,0 ч. Из культуральной жидкости отбирают пробу 1 мл и центрифугируют 6 мин при 12000 об/мин, после чего клетки ресуспендируют в 100 мкл деионизированной воды, добавляют 33 мкл буфера, содержащего 125 мМ Трис-HCl, рН 6,8, 20% глицерина, 3% додецилсульфата натрия, 3% меркаптоэтанола и 0,01% бромфенолового синего и прогревают 10 мин при 100°С. Отбирают аликвоту (3 мкл) и анализируют электрофорезом в 12% полиакриламидном геле, содержащем 0,1% додецилсульфата натрия. Гель окрашивают Кумаси R250 и проводят цифровую обработку геля с помощью программы TotalLab. Продуктивность штамма E. coli XL1-blue/pL-ASP-08 составляет 35% фермента от суммарного клеточного белка, а содержание L-аспарагиназы в 1 мл культуральной жидкости составляет 165 мкг.
В) Определение активности L-аспарагиназы в культуре клеток E. coli XL1-blue/pL-ASP-08.
Активность L-аспарагиназы в культуре клеток E. coli XL1-blue/pL-ASP-08 определяют по ее способности к расщеплению L-аспарагина с последующим спектрофотометрическим тестированием образовавшегося иона аммония (Worthington Enzyme Manual, 1993 Edition). Для этого 1 мл культуры клеток вносят в 39 мл дистиллированной воды. Из разбавленной суспензии в реакцию берут 100 мкл. После остановки реакции трихлоруксусной кислотой пробу центрифугируют 10 мин при 7000 об/мин и отбирают супернатант для спектрофотометрического определения иона аммония с реактивом Несслера. Активность L-аспарагиназы составляет 42,1 МЕ/мл, или в перерасчете на белок - 255 МЕ/мг.
Claims (2)
1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pL-ASP-08, имеющая молекулярную массу 2,9 МДа (4471 п.о.), предназначенная для синтеза L-аспарагиназы, состоящая из: BamH1/HindIII фрагмента плазмиды pL-ASP-08 длиной 3425 п.о., содержащего участок ori инициации репликации плазмиды, гибридный промотор транскрипции lac О, терминатор транскрипции рибосомного оперона Е. coli Stop codons, ген β-лактамазы bla, определяющий устойчивость к ампициллину, уникальный сайт узнавания рестрикционной эндонуклеазой Xho I; и искусственной последовательности ДНК-фрагмента BamH1/HindIII длиной 1046 п.о., включающего ген L-аспарагиназы из E.coli Н42, и содержащего уникальные сайты узнавания рестрикционными эндонуклеазами BamHI и HindIII, имеющие следующие координаты: BamH1 - 148, HindIII - 1194.
2. Штамм бактерий Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - продуцент рекомбинантной L-аспарагиназы, содержащий плазмидную ДНК pL-ASP-08 по п.1.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009117289/13A RU2397248C1 (ru) | 2009-05-07 | 2009-05-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009117289/13A RU2397248C1 (ru) | 2009-05-07 | 2009-05-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2397248C1 true RU2397248C1 (ru) | 2010-08-20 |
Family
ID=46305482
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009117289/13A RU2397248C1 (ru) | 2009-05-07 | 2009-05-07 | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2397248C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2817891C1 (ru) * | 2023-06-27 | 2024-04-22 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Московский эндокринный завод" | Продуцент l-аспарагиназы e. coli и экспрессионная плазмида pet28a-asnsyn, кодирующая l-аспарагиназу |
-
2009
- 2009-05-07 RU RU2009117289/13A patent/RU2397248C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2817891C1 (ru) * | 2023-06-27 | 2024-04-22 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Московский эндокринный завод" | Продуцент l-аспарагиназы e. coli и экспрессионная плазмида pet28a-asnsyn, кодирующая l-аспарагиназу |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Kataoka et al. | Cloning and overexpression of the old yellow enzyme gene of Candida macedoniensis, and its application to the production of a chiral compound | |
EP3739043A1 (en) | Glutamate dehydrogenase mutant and application thereof | |
KR20150014941A (ko) | 아이소프렌의 생산을 위한 미생물유기체 및 방법 | |
CN107189991B (zh) | 一种葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用 | |
CN109468288A (zh) | 一种高效降解组胺的新多铜氧化酶 | |
CN111041011B (zh) | 一种草甘膦氧化酶突变体及其克隆、表达与应用 | |
JP4815219B2 (ja) | 好アルカリ性サイクロデキストラン合成酵素遺伝子を含有するdna、組み換え体dna、および好アルカリ性サイクロデキストラン合成酵素の製造法 | |
RU2397248C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pL-ASP-08 И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli XL1-blue/pL-ASP-08 - ПРОДУЦЕНТ L-АСПАРАГИНАЗЫ | |
RU2447151C1 (ru) | ПЛАЗМИДА 40Ph, ОПРЕДЕЛЯЮЩАЯ СИНТЕЗ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ CmAP, ШТАММ E.coli rosetta(DE3)/40Ph - ПРОДУЦЕНТ ХИМЕРНОГО БЕЛКА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО АМИНОКИСЛОТНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ CmAP, И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ | |
CN110713993A (zh) | 5-氨基乙酰丙酸合成酶突变体及其宿主细胞和应用 | |
KR102358538B1 (ko) | 유전자 총법을 이용한 미세조류의 교정 방법 | |
WO2013058516A1 (en) | Recombinant vector, recombinant yeast containing the vector, and mass-producing method of glucose oxidase using the yeast | |
JP3325128B2 (ja) | 新規なクレアチンアミジノハイドロラーゼ遺伝子、新規な組み換え体dna及びクレアチンアミジノハイドロラーゼの製造法 | |
RU2250262C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pET23-a(+)PrxVIhumΔ178, КОДИРУЮЩАЯ N-КОНЦЕВОЙ ФРАГМЕНТ ПЕРОКСИРЕДОКСИНА VI ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ E.coli BL21/DE3/pET23-a(+)/PrxVIhumΔ178 - ПРОДУЦЕНТ N-КОНЦЕВОГО ФРАГМЕНТА ПЕРОКСИРЕДОКСИНА VI ЧЕЛОВЕКА | |
CN102453725B (zh) | 一种重组载体、包含该重组载体的重组菌株及制备方法 | |
JP4639235B2 (ja) | L−カルニチン生合成関連遺伝子を含む腸内細菌属微生物、およびその微生物を用いたl−カルニチンの産生方法 | |
KR102316549B1 (ko) | 신규 이소부탄올 내성 유전자 및 그의 용도 | |
RU2803295C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pNhyDAAO, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ОКСИДАЗЫ D-АМИНОКИСЛОТ БАКТЕРИЙ Natronosporangium hydrolyticum ACPA39 (NhyDAAO) В КЛЕТКАХ Escherichia coli, И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ Escherichia coli BL21(DE3)/pNhyDAAO ВКПМ В-14337 - ПРОДУЦЕНТ NhyDAAO | |
KR20140018850A (ko) | 효모에서 엔테로키나아제를 생산하는 조성물과 방법 | |
KR100802535B1 (ko) | 입체선택적 에폭사이드 가수분해 활성이 우수한 어류유전자재조합 생촉매 | |
JP5935382B2 (ja) | RrhJ1IIヌクレアーゼおよびその遺伝子 | |
KR101153400B1 (ko) | 신규 리포산 합성효소와 리포산 단백질 리가제를 이용한 알파-리포산의 생산방법 | |
RU2232807C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк ptrcte-oph и продуцент фермента органофосфатгидролазы | |
KR101828080B1 (ko) | 싸이크로박터 유래의 저온활성 지질분해효소 | |
CN117089540A (zh) | 粪便宏基因组来源的谷氨酸脱羧酶及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110508 |