RU2379290C2 - Изотопно-меченые производные хинолина, выступающие в качестве лигандов аденозинового рецептора a3 - Google Patents

Изотопно-меченые производные хинолина, выступающие в качестве лигандов аденозинового рецептора a3 Download PDF

Info

Publication number
RU2379290C2
RU2379290C2 RU2007122396/04A RU2007122396A RU2379290C2 RU 2379290 C2 RU2379290 C2 RU 2379290C2 RU 2007122396/04 A RU2007122396/04 A RU 2007122396/04A RU 2007122396 A RU2007122396 A RU 2007122396A RU 2379290 C2 RU2379290 C2 RU 2379290C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
group
straight
branched chain
general formula
compounds
Prior art date
Application number
RU2007122396/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2007122396A (ru
Inventor
Геза ТИМАРИ (HU)
Геза Тимари
Кинга БОЭР (HU)
Кинга Боэр
Геза ТОТ (HU)
Геза ТОТ
Чаба ТЕМБЕЛИ (HU)
Чаба ТЕМБЕЛИ
Original Assignee
Санофи-Авентис
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Санофи-Авентис filed Critical Санофи-Авентис
Publication of RU2007122396A publication Critical patent/RU2007122396A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2379290C2 publication Critical patent/RU2379290C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/24—Oxygen atoms attached in position 8
    • C07D215/26—Alcohols; Ethers thereof
    • C07D215/28—Alcohols; Ethers thereof with halogen atoms or nitro radicals in positions 5, 6 or 7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/041—Heterocyclic compounds
    • A61K51/044—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins
    • A61K51/0455—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine, rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D215/54—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/22—Tin compounds
    • C07F7/2208—Compounds having tin linked only to carbon, hydrogen and/or halogen

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к соединению с общей формулой (I)
Figure 00000018
и его изомерам, где R1 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или фенильную группу, тиенильную группу или фурильную группу, опционально замещенную одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, С1-4 алкоксигруппами с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена; R2 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или фенильную, бензильную, тиенильную или фурильную группу, опционально замещенную метилендиоксигруппой, или одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, или С1-4 алкокси-, гидрокси-, трифторметил- или цианогруппой с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена, а также к способу его получения. Также изобретение относится к новым интермедиатам с общей формулой (II) и их получению. Технический результат: получены и описаны радиолиганды А3 антагонистического действия, меченного изотопами йода с массовым числом 125, которые обладают высокой специфической активностью. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Description

Данное изобретение относится к лигандам аденозинового рецептора А3, меченным изотопами йода с массовым числом 125, преимущественно к антагонистам и их изомерам, к экспериментальному материалу, их содержащему, к способу получения соединений с общей формулой (I)
Figure 00000001
и их изомеров, к новым интермедиатам с общей формулой (II)
Figure 00000002
и их получению.
Аденозин представляет собой хорошо известный компонент некоторых эндогенных молекул (АТФ, НАД+, нуклеиновых кислот). Кроме того, он играет важную регуляторную роль во многих физиологических процессах. Влияние аденозина на функцию сердца было открыто уже в 1929 г. (Drury and Szentgyörgyi, J Physiol 68:213, 1929). Обнаружение возрастающего числа физиологических функций, регулируемых аденозином, и открытие новых подтипов аденозиновых рецепторов предоставили возможности для применения специфичных лигандов в лечебных целях (Poulse, S. A. and Quinn, R. J. Bioorganic and Medicinal Chemistry 6:619, 1998).
До настоящего времени рецепторы для аденозина были разделены на три основных класса: A1, A2 и A3. Подтип A1 частично отвечает за ингибирование аденилатциклазы присоединением мембранного Gi-белка, частично влияет на другие системы вторичных мессенджеров. Подтип рецепторов A2 можно разделить на два следующих подтипа - A2a и A2b, которые повышают активность аденилатциклазы. Ряд аденозиновых рецепторов А3 был недавно выделен из библиотеки кДНК семенников крыс. Позднее было доказано, что он соответствует новому, функционализированному аденозиновому рецептору. Активация рецепторов А3 также связана с некоторыми системами вторичных мессенджеров: ингибированием аденилатциклазы, активацией фосфолипазы C и D.
Аденозиновые рецепторы находятся в некоторых органах и регулируют их функции. Оба типа A2a и A2b рецепторов играют важные роли в центральной нервной и сердечно-сосудистой системах. В ЦНС аденозин ингибирует освобождение синаптических трансмиттеров, эффект которого усиливается рецепторами A1. В сердце рецепторы A1 также усиливают отрицательный инотропный, хронотропный и дромотропный эффекты аденозина. Аденозиновые рецепторы A2a, которые находятся в относительно большом количестве в полосатом теле, функционально взаимодействуют с дофаминовыми рецепторами, регулируя синаптическую передачу. Аденозиновые рецепторы A2a в эндотелиальных и гладкомышечных клетках отвечают за аденозининдуцируемое расширение кровеносных сосудов.
На основе обнаружения кРНК аденозиновые рецепторы A2b широко распространены в различных тканях. Они были обнаружены почти в каждом типе клеток, но их экспрессия максимальна в кишечнике и мочевом пузыре. Данный подтип, возможно, также выполняет важную регуляторную функцию в регулировании сосудистого тонуса и играет некоторую роль в функции тучных клеток.
В противоположность рецепторам A1 и A2a, для которых распределение по тканям было установлено на белковом уровне, присутствие рецепторов A2b и A3 было установлено на основе их кРНК уровня. Уровни экспрессии для аденозиновых рецепторов A3 достаточно низкие по сравнению с другими подтипами и очень сильно зависят от вида рецептора. Аденозиновые рецепторы A3 экспрессированы, в первую очередь, в центральной нервной системе, семенниках, иммунной системе и оказываются вовлечены в модуляцию освобождения медиатора из тучных клеток в реакции гиперчувствительности немедленного типа.
Для использования в лечебных целях необходимо убедиться, что молекула не связывается или связывается только в случае очень высокой концентрации с аденозиновым рецептором A1, A2а и A2b подтипом. Данное изобретение относится к соединениям с общей формулой (I), меченным изотопами йода с массовым числом 125, и к их солям, сольватам и изомерам, которые обладают высокой селективностью к A3 подтипу аденозинового рецептора.
[3H]-MRE 3008-F20 радиолиганд-антагонист аденозинового рецептора A3 известен из литературы (P. G. Baraldi, Bioorganic and Medicinal Chemistry 10, 209-211, 2000). Также известен [3H]-PSB-11 радиолиганд-антагонист рецептора A3 (C. H. Müller, Bioorganic and Medicinal Chemistry 12, 501-503, 2002).
Целью заявителей было получение радиолиганда A3 антагонистического действия, меченного изотопами йода с массовым числом 125, так как они обладают более высокой специфической активностью по сравнению с лигандами, меченными тритием. Задача заключалась в получении радиолигандов, обладающих сильной аффинностью к аденозиновому рецептору A3, но в то же время демонстрирующих высокую селективность к подтипам, т. е. связывание с рецепторами A1, A2а и A2b при более высокой концентрации. Дальнейшей целью было получение радиолигандов, пригодных для характеризации рецептора A3 в различных тканях и изучения механизма действия антагонистов A3.
Предмет данного изобретения представляет собой соединения с общей формулой (I)
Figure 00000003
и их изомеры, где в формуле
R1 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или циклоалкильную С3-6 группу, или фенильную группу, тиенильную группу или фурильную группу, опционально замещенную одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, С1-4 алкоксигруппами с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена, или 5- или 6-членное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три атома азота, или 5-членное гетероароматическое кольцо, содержащее один атом азота и один атом кислорода, или один атом азота и один атом серы, опционально замещенное одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, С1-4 алкоксигруппами с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена;
R2 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или фенильную, бензильную, тиенильную или фурильную группу, опционально замещенную метилендиоксигруппой, или одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, или С1-4 алкокси-, гидрокси-, трифторметил- или цианогруппами с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена, или 5- или 6-членное гетероароматическое кольцо, содержащее один, два или три атома азота, или один атом азота и один атом кислорода, или один атом азота и один атом серы, опционально замещенное одной или более алкильными С1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, С1-4 алкоксигруппами с прямой или разветвленной цепью или атомами галогена.
Подробные значения вышеупомянутых заместителей следующие.
Под алкильной С1-4 группой с прямой или разветвленной цепью заявители понимают метильную, этильную, пропильную, изопропильную, бутильную, изобутильную, втор-бутильную, трет-бутильную, предпочтительно этильную или метильную группу.
Под С1-4 алкоксигруппой с прямой или разветвленной цепью заявители понимают метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси-, бутокси-, изобутокси-, втор-бутокси-, трет-бутокси-, предпочтительно этокси- или метоксигруппу.
Под С3-6 циклоалкильной группой заявители понимают циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную или циклогексильную группу.
Под гетероароматическим кольцом, содержащим один или два, или три атома азота, может пониматься пиррольное, имидазольное, пиразольное, 1,2,3-триазольное, 1,2,4-триазольное, пиридиновое, пиримидиновое, пиридазиновое, пиразиновое или 1,3,4-триазиновое кольцо. Кольцо опционально замещено С1-4 алкильной или алкоксигруппой или атомом галогена.
Под гетероароматическим кольцом, содержащим один атом азота и один атом кислорода или один атом серы, понимается оксазольное, изоксазольное, тиазольное, изотиазольное кольцо. Кольцо опционально замещено С1-4 алкильной или алкоксигруппой или атомом галогена.
Подходящая группа соединений с общей формулой (I) образована соединениями, в которых
R1 обозначает фенильную, тиенильную или фурильную группу,
R2 обозначает 4-метоксифенильную, 3-метилфенильную, 3-метоксифенильную, 2-тиенильную, 3-тиенильную, 2-фурильную или 3-фурильную группу.
В особенности подходят следующие соединения, удовлетворяющие вышеупомянутым критериям:
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамид
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамид.
Дополнительный предмет данного изобретения представляет собой получение соединений с общей формулой (I)
Figure 00000004
и интермедиатов с общей формулой (II).
Figure 00000005
Интермедиаты с общей формулой (II), которые используются в процессе получения в соответствии с данным изобретением, являются новыми. В общей формуле (II) значение заместителей R1 и R2, аналогично определенному выше, R3 обозначает алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, предпочтительно метильную или бутильную группу.
В способе, в соответствии с данным изобретением, соединения с общей формулой (I) получаются при взаимодействии соответствующих соединений с общей формулой (II) со свободным [125I]NaI в присутствии окислителя.
Реакция проводится в среде водного метанола (pH 3) при комнатной температуре.
В качестве окислителя могут быть использованы пероксиды, например, пероксид водорода, N-галогенсукцинамиды, например, N-хлорсукцинамид, или хлорсульфамиды, предпочтительно хлорамин-Т.
Продукт очищают при помощи обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ) с использованием модифицированного С18-содержащего силикагеля в качестве неподвижной фазы и бинарной смеси метанол-вода, содержащей 0,1% (в объемном отношении) трифторуксусной кислоты в качестве элюирующей системы, со скоростью потока 0,9 мл/мин.
Обнаружение проводилось УФ-излучением с длиной волны 272 нм; обнаружение радиоактивности проводилось жидкостным сцинтилляционным способом.
В соответствии с данным изобретением соединение с общей формулой (II)
Figure 00000006
может быть получено из соответствующего хинолина с общей формулой (III),
Figure 00000007
где значение заместителей R1 и R2, аналогично определенному выше, и Х обозначает атом брома или йода, при взаимодействии в присутствии палладиевого катализатора, органического или неорганического основания и органического растворителя с гексаалкилдистаннановым соединением. Выделяется продукт с общей формулой (II). Замена атома галогена на триалкилстаннил-группу проводится в органическом растворителе, например, в диоксане или диметилформамиде, или преимущественно в N-метил-2-пирролидоне. Реакция может протекать в широком интервале температур между 20-100°С. В качестве органического основания можно применять триалкиламины, предпочтительно триэтиламин. В качестве неорганического основания могут быть использованы гидроксиды щелочных металлов, карбонаты и ацетаты, предпочтительно ацетат калия. В реакции в качестве катализатора могут быть использованы ацетат палладия, хлорид палладия или тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (Z.P. Zhuang, M.P. Kung, C. Hou, D.M. Skovronsky, T.L. Gur, K. Plössl, J.Q. Trojanowski, V.M.Y. Lee, H.F. Kung, J. Med. Chem. 44, 1905, (2001)), но заявители обнаружили, что с катализатором тетракис(три(о-толил)фосфин)палладий(0) реакция идет быстрее и с лучшим выходом.
Соединения с общей формулой (III)
Figure 00000008
могут быть синтезированы согласно способу, описанному в патентной заявке WO 02/096879.
Способ в соответствии с данным изобретением показан на Схеме Реакции 1.
Figure 00000009
Дальнейшие особенности изобретения иллюстрируются примерами, не ограничивая ими формулу изобретения.
Примеры
Пример 1
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамид
В общей формуле (I) R1 обозначает фенильную группу, R2 обозначает 4-метоксифенильную группу.
а) К 8 мкл раствора 0,1 мг/мл 4-метокси-N-(6-трибутилстаннил-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамида в метаноле прибавляли 25 мкл (1,1 нмоль) 1%-ного (в объемном отношении) раствора трифторуксусной кислоты в метаноле и 70 МБк раствора [125I]NaI (21 мкл). К реакционной смеси прибавляли 5 мкл (2 нмоль) водного раствора 0,1 мг/мл хлорамина-Т, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. После инкубационного периода реакцию останавливали прибавлением 7 мкл (3,5 нмоль) раствора 0,1 мг/мл пиросульфита натрия, и продукт немедленно очищали при помощи ОФ ВЭЖХ с проведением УФ-обнаружения и обнаружения радиоактивности. Таким образом получали 31 МБк названного соединения (молярная активность 81,4 ГБк/ммоль) с радиохимической чистотой >95%. Очищенный продукт хранится в смеси метанол-вода (0,1% ТФУ) 3:1 (объемная активность: 29 МБк/мл).
б) 4-метокси-N-(6-трибутилстаннил-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамид.
0,33 г 4-метокси-N-(6-йодо-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамида растворяли в 5 мл N-метил-2-пирролидона, и к раствору прибавляли 240 мг ацетата натрия, 50 мг тетракис(три(о-толил)фосфин)палладия(0) и 0,6 мл гексабутилдистанната. Реакционная смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 часов, затем переносили в 20 мл воды и экстрагировали толуолом 2×20 мл. Объединенную фазу толуола высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем при использовании смеси хлороформ - этилацетат (10:0,5) в качестве элюента. После выпаривания чистых фракций получали 250 мг названного соединения.
1Н-ЯМР(CDCl3) δ 0,9(м, 9Н), 1,1 (м, 6Н), 1,3 (м, 6Н), 1,55 (м, 6Н), 3,8 (с, 3Н), 5,08 (д, 2Н), 7,06 (д, 2Н), 7,2-7,4 (м, 5Н), 7,55 (д, 2Н), 7,9-8,1 (м, 3Н), 8,66 (м, 1Н), 10,1 (с, 1Н).
Пример 2
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамид.
В общей формуле (I) R1 обозначает тиенильную группу, R2 обозначает 4-метоксифенильную группу.
а) К 8 мкл (1,1 нмоль) раствора 0,1 мг/мл 4-метокси-N-(6-трибутилстаннил-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамида в метаноле прибавляли 25 мкл (1,1 нмоль) 1%-ного (в объемном отношении) раствора трифторуксусной кислоты в метаноле и 70 МБк раствора [125I]NaI (21 мкл). К реакционной смеси прибавляли 5 мкл (2 нмоль) водного раствора 0,1 мг/мл хлорамина-Т, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. После инкубационного периода реакцию останавливали прибавлением 7 мкл (3,5 нмоль) раствора 0,1 мг/мл пиросульфита натрия, и продукт немедленно очищали при помощи ОФ ВЭЖХ с проведением УФ-обнаружения и обнаружения радиоактивности. Таким образом получали 28 МБк названного соединения (молярная активность 81,4 ГБк/ммоль) с радиохимической чистотой >95%. Очищенный продукт хранили в смеси метанол-вода (0,1 % ТФУ) 3:1 (объемная активность: 28 МБк/мл).
б) 4-метокси-N-(6-трибутилстаннил-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамид.
0,3 г 4-метокси-N-(6-йодо-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамида растворяли в 5 мл N-метил-2-пирролидона, и к раствору прибавляли 240 мг ацетата натрия, 50 мг тетракис(три(о-толил)фосфин)палладия(0) и 0,6 мл гексабутилдистаннана. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона в течение 16 часов, затем переносили в 20 мл воды и экстрагировали толуолом 2×20 мл. Объединенную фазу толуола высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем при использовании смеси хлороформ-этилацетат (10:0,5) в качестве элюента. После выпаривания чистых фракций получали 235 мг названного соединения.
1Н-ЯМР(CDCl3) δ 0,9(м, 9Н), 1,1 (м, 6Н), 1,3 (м, 6Н), 1,55 (м, 6Н), 3,85 (с, 3Н), 5,1 (д, 2Н), 6,9-7,17 (м, 4Н), 7,43-7,54 (м, 2Н), 8,03 (м, 3Н), 8,72-8,82 (м, 2Н), 10,86 (с, 1Н).
Пример 3
А./ Биологические методы
Связывание аденозинового рецептора А1 человека
Приготовление мембранной суспензии: собирают клетки яичников клонированного китайского хомяка, экспрессирующие аденозиновые рецепторы А1 человека (далее: CHO-hA1), промывают их три раза физиологическим раствором с фосфатным буфером, центрифугируют (1000 г, 10 мин) и гомогенизируют (B.Braun Potter S) при скорости вращения 1500 об/мин. Буфер: 50 мМ трис-HCl, pH 7,4. Центрифугируют данную гомогенизированную смесь (43,000 г, 10 мин), суспендируют осадок в пробирке после центрифугирования в вышеупомянутом буфере, доведя концентрацию белка до 5 мг/мл (способ Бредфорда), и добавляют 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы.
Протокол связывания: инкубируют CHO-hA1 мембранный препарат (содержание белка 50 мкг) в присутствии тестового соединения и 10 нМ [3H]CCPA (2-хлоро-N6-циклопентил-аденозин) (80.000 распадов в минуту) в инкубационном буфере (50 мМ трис-HCl, pH 7.4, 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы). Неспецифическое связывание определяется в присутствии 10 мкМ R-PIA (N6-[L-2-фенилизопропил]аденозин) в общем объеме 100 мкл в течение 3 часов при комнатной температуре. Фильтруют через стекловолоконные фильтры Whatman GF/B (предварительно вымоченные в 0,5%-ном полиэтилимине в течение 3 часов), промывают 4 раза по 1 мл ледяной 50 мМ трис-HCl (pH 7.4) на 96-луночном харвестере клеток Брэндела. Обнаружение активности: в 96-луночном планшете в присутствии смеси HiSafe-3 в бета-счетчике (1450 Microbeta, Wallac). Ингибирование [%] = 100-((активность в присутствии тестового соединения - неспецифическая активность)/(полная активность - неспецифическая активность))*100.
Связывание аденозинового рецептора А2а человека
Инкубируют 7 мкг мембран (аденозиновые рецепторы А2а человека, внедренные в клетки HEK-293, источник: Receptor Biology, Inc.), в присутствии тестового соединения и 20 нМ [3H]CGS-21680 (2-[p-(2-карбонилэтил)фенилэтиламино]-5'-N-этилкарбоксамидо-аденозин) (200.000 распадов в минуту) в инкубационном буфере (50 мМ трис-HCl, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы, pH 7.4). Неспецифическое связывание определяется в присутствии 100 мкг NECA (5'-N-этилкарбоксамидо-аденозин) в общем объеме 100 мкл в течение 90 мин при комнатной температуре. Фильтруют в вакууме через стекловолоконные фильтры Whatman GF/B (предварительно вымоченные в 0,5%-ном полиэтилимине в течение 3 часов), промывают 4 раза по 1 мл ледяным буфером (50 мМ трис-HCl, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 0,9 % NaCl, pH 7.4) на 96-луночном харвестере клеток Брэндела. Обнаружение активности: в бета-счетчике (1450 Microbeta, Wallac) в присутствии 200 мкл смеси HiSafe-3. Ингибирование [%] = 100-((активность в присутствии тестового соединения - неспецифическая активность)/(полная активность - неспецифическая активность))*100.
Связывание аденозинового рецептора А2b человека
Протокол связывания: инкубируют 20,8 мкг мембран (аденозиновые рецепторы А2b человека, внедренные в клетки HEK-293, источник: Receptor Biology, Inc.) в присутствии тестового соединения и 32,4 нМ [3H]DPCPX (8-циклопентил-1,3-дипропилксантин) (800,000 распадов в минуту) в инкубационном буфере (50 мМ трис-HCl, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 0,1 мМ бензамидина, 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы, pH 6.5). Неспецифическое связывание определяют в присутствии 100 мкМ NECA (5'-N-этилкарбоксамидо-аденозин) в общем объеме 100 мкл в течение 30 мин при комнатной температуре. Фильтруют в вакууме 25 мм рт. ст. через стекловолоконные фильтры Whatman GF/С (предварительно вымоченные в 0,5%-ном полиэтилимине в течение 3 часов), промывают 4 раза по 1 мл ледяной 50 мМ трис-HCl (pH 6.5) на 96-луночном харвестере клеток Брэндела. Обнаружение активности: в бета-счетчике (1450 Microbeta, Wallac) в присутствии 200 мкл смеси HiSafe-3. Ингибирование [%] = 100-((активность в присутствии тестового соединения - неспецифическая активность)/(полная активность - неспецифическая активность))*100.
Связывание аденозинового рецептора А3 человека
Приготовление мембранной суспензии: собирают клетки яичников клонированного китайского хомяка, экспрессирующие рецепторы А3 человека (далее: CHO-hA3), промывают их три раза физиологическим раствором с фосфатным буфером, центрифугируют (1000 г, 10 мин) и гомогенизируют (B.Braun Potter S) при скорости вращения 1500 об/мин. Буфер: 50 мМ трис, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, pH 0,8. Центрифугируют данную гомогенизированную смесь (43,000 г, 10 мин), суспендируют осадок в пробирке после центрифугирования в вышеупомянутом буфере, доведя концентрацию белка до 0,1 мг/мл (способ Бредфорда), и добавляют 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы.
Связывание рецептора в присутствии [125I]AB-MECA
Инкубируют CHO-hA3 мембранный препарат (содержание белка 2 мкг) в присутствии тестового соединения и 0,5 нМ [125I]AB-MECA (4-амино-3-йодо-бензил-5'-N-этилкарбоксамидо-аденозин) (100,000 распадов в минуту) в инкубационном буфере (50 мМ трис, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы, pH 8.0). Неспецифическое связывание радиолиганда определяют в присутствии 100 мкМ R-PIA (N6-[L-2-фенилизопропил]аденозин) в общем объеме 50 мкл в течение 60 мин при комнатной температуре. Фильтруют в вакууме 25 мм рт. ст. через стекловолоконные фильтры Whatman GF/С (предварительно вымоченные в 0,5%-ном полиэтилимине в течение 3 часов), промывают 4 раза по 1 мл ледяным буфером (50 мМ трис, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, pH 8.0) на 96-луночном харвестере клеток Брэндела. Обнаружение радиоактивности: в гамма-счетчике (1470 Wizard, Wallac). Ингибирование [%] = 100-((активность в присутствии тестового соединения - неспецифическая активность)/(полная активность - неспецифическая активность))*100.
Связывание рецептора в присутствии радиоактивного йодсодержащего соединения из Примера 2/а
Инкубируют CHO-hA3 мембранный препарат (содержание белка 4 мкг) в присутствии тестового соединения и 0.5 нМ соединения, содержащего радиоактивный йод (100.000 распадов в минуту), описанного в Примере 2/а, в инкубационном буфере (50 мМ трис, pH 8.0, 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 0,08% CHAPS, 0,5% бычий сывороточный альбумин, 2 МЕ/мл аденозиндезаминазы). Неспецифическое связывание радиолиганда определяется в присутствии 100 мкМ R-PIA (N6-[L-2-фенилизопропил]аденозин) в общем объеме 50 мкл в течение 60 мин при комнатной температуре. Для уменьшения адсорбции изотопнозамещенный препарат и реакционную смесь держат в полиэтиленовой пробирке. Фильтруют в вакууме 25 мм рт. ст. через стекловолоконные фильтры Whatman GF/С (предварительно вымоченные в 0,5%-ном полиэтилимине в течение 3 часов), промывают 4 раза по 1 мл ледяным буфером (50 мМ трис (pH 8), 10 мМ MgCl2, 1 мМ ЭДТУ, 0,08% CHAPS, 0,25% бычий сывороточный альбумин) на 96-луночном харвестере клеток Брэндела. Обнаружение радиоактивности: в гамма-счетчике (1470 Wizard, Wallac). Ингибирование [%] = 100-((активность в присутствии тестового соединения - неспецифическая активность)/(полная активность - неспецифическая активность))*100.
B./ Результаты биологических исследований
I Аффинность немеченого йодсодержащего соединения, приведенного в Примере 2/b в качестве исходного материала (т. е. немеченого аналога нового радиолиганда, приведенного в Примере 2/а), к подтипам аденозиновых рецепторов в присутствии известных радиолигандов
Аффинность исходного соединения из Примера 2/b к аденозиновому рецептору А3 (Ki = 1,5 нМ) проявляет селективность, которая, по крайней мере, в 1000 раз больше, чем в случае других подтипов аденозиновых рецепторов (Таблица 1).
Таблица 1. Характеризация исходного соединения из Примера 2/b по отношению к его аффинности к аденозиновым рецепторам
      Ингибирование в 1мМ
  hА3 hА1 hА2A hА2B
  [-125I]AB-MEGA [3H]CCPA [3H]CGS21680 [3H]DPCPX
Исходное соединение из Примера 2/b Ki = 1,5 нМ 4% 29% -16%
II/A Исследование нового радиоактивного йодсодержащего соединения из Примера 2/а на аденозиновом рецепторе А3 человека при помощи анализа Скэтчарда, используемого для характеризации радиолигандов
На основе кривых радиоизотопного насыщения при помощи анализа Скэтчарда (G. Scatchard, Ann. N. Y. Acad. Sci. 51:660, 1949) была установлена константа диссоциации (KD) нового радиолиганда из Примера 2/а на мембранном препарате CHO-hA3. В исследованном диапазоне концентраций (0,156 нМ-10 нМ) радиолиганд связывается только по одному участку связывания в присутствии мембранного препарата, содержащего 4 мкг белка. Найденное значение KD равно 4 нМ, максимальная связывающая способность 985 фмоль/1 мг белка (смотри чертеж).
На чертеже кривая насыщения Скэтчарда нового радиолиганда из Примера 2/а в присутствии мембранного препарата CHO-hA3.
II/B Сравнение известного аденозинового радиолиганда A3 с новым радиолигандом из Примера 2/а на основе значений аффинности контрольных соединений в присутствии 4 мкг CHO-hA3 препарата
Зная значения KD, при помощи уравнения Ченга-Прусова (Y. J. Cheng and W. H. Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22:3099, 1973) константы Ki исследуемых контрольных соединений и константы исходного соединения из Примера 2/b (т. е. немеченого аналога нового радиолиганда из Примера 2/а) были рассчитаны на основе значений IC50. Контрольные соединения проявили сходные значения аффинности в присутствии известного и нового радиолигандов, подтверждая пригодность радиолиганда из Примера 2/а. Немеченый аналог нового радиолиганда проявил значение Ki, примерно равное значению KD изотопно-меченной формы (4,0 нМ и 1,3 нМ), также подтверждая специфическое связывание нового радиолиганда (смотри Таблицу 2).
Таблица 2. Сравнение известного аденозинового радиолиганда A3 и нового радиолиганда из Примера 2/а с помощью значений аффинности контрольных соединений в присутствии 4 мкг CHO-hA3 препарата
  [-125I]AB-MEGA Радиолиганд, приведенный в Примере 2/а
  Ki  
R-PIA 65 нМ 150 нМ
CI-IB-MEGA 3,3 нМ 5,9 нМ
Исходное соединение из Примера 2/b 1,5 нМ 1,3 нМ

Claims (16)

1. Соединения с общей формулой (I)
Figure 00000010

и их изомеры, где
R1 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или фенильную группу, тиенильную группу или фурильную группу, опционально замещенную одной или более алкильными C1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, C1-4 алкоксигруппами с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена;
R2 обозначает атом водорода или алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, или фенильную, бензильную, тиенильную или фурильную группу, опционально замещенную метилендиоксигруппой, или одной или более алкильными C1-4 группами с прямой или разветвленной цепью, или C1-4 алкокси-, гидрокси-, трифторметил- или цианогруппой с прямой или разветвленной цепью, или атомами галогена.
2. Соединения с общей формулой (I)
Figure 00000011

и их изомеры по п.1, в котором
R1 обозначает фенильную, тиенильную или фурильную группу,
R2 обозначает 4-метоксифенильную, 3-метилфенильную, 3-метоксифенильную, 2-тиенильную, 3-тиенильную, 2-фурильную или 3-фурильную группу.
3. Соединения по пп.1 и 2 выбранные из
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-бензиламино-3-цианохинолин-2-ил)бензамид
4-метокси-N-(6-[125I]йодо-4-[2-тиенилметиламино]-3-цианохинолин-2-ил)бензамид.
4. Способ получения соединений с общей формулой (I),
Figure 00000012

где значение R1 и R2 аналогично определенному в п.1, отличающийся тем, что триалкилстаннильное соединение с общей формулой (II)
Figure 00000013

где значение R1 и R2 аналогично определенному в п.1 и R3 обозначает
алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, реагирует с [125I]NaI в присутствии окислителя.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что в качестве окислителя используется пероксид, такой как пероксид водорода, N-галогенсукцинамид, такой как N-хлорсукцинамид, или хлорсульфамид, предпочтительно хлорамин-Т.
6. Способ по п.4, отличающийся тем, что используется свободный [125I]NaI.
7. Способ по п.4, отличающийся тем, что реакция проводится в среде водного метанола (pH 3) при комнатной температуре.
8. Способ по п.4, отличающийся тем, что продукт выделяется из реакционной смеси при помощи ОФ ВЭЖХ.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что в процессе выделения при помощи ОФ ВЭЖХ в качестве неподвижной фазы используется модифицированный C18-содержащий силикагель и разделение осуществляется с использованием бинарной элюирующей системы метанол - вода, содержащей 0,1 об.% трифторуксусной кислоты, со скоростью потока 0,9 мл/мин с проведением УФ обнаружения и обнаружения радиоактивности в режиме реального времени.
10. Соединения с общей формулой (II)
Figure 00000014

и их изомеры, где значение R1 и R2 аналогично определенному в п.1, и R3 обозначает алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью.
11. Соединения с общей формулой (II)
Figure 00000015

по п.1, в котором R1 и R2 обозначают фенильную или тиенильную группу, а R3 обозначает метильную или бутильную группу.
12. Способ получения соединений с общей формулой (II),
Figure 00000016

где в формуле значение R1 и R2 аналогично определенному в п.1, и R3 обозначает алкильную С1-4 группу с прямой или разветвленной цепью, отличающийся тем, что соединение с общей формулой (III)
Figure 00000017

где в формуле значение R1 и R2 аналогично определенному в п.1, реагирует с гексаалкилдистаннаном в органическом растворителе в присутствии основания и палладиевого катализатора.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используется диоксан, диметилформамид, предпочтительно N-метил-2-пирролидон.
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что в качестве основания используется органическое основание, такое как триалкиламин, предпочтительно триэтиламин, или неорганическое основание, такое как гидроксид щелочного металла, карбонат или ацетат, предпочтительно ацетат калия.
15. Способ по п.12, отличающийся тем, что в качестве катализатора используется ацетат палладия, хлорид палладия, тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), предпочтительно тетракис(три(о-толил)фосфин)палладий(0).
16. Способ по п.12, отличающийся тем, что в качестве гексаалкилдистаннана используется гексабутилдистаннан.
RU2007122396/04A 2004-11-15 2005-11-09 Изотопно-меченые производные хинолина, выступающие в качестве лигандов аденозинового рецептора a3 RU2379290C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU0402371A HUP0402371A2 (en) 2004-11-15 2004-11-15 Novel 125-i-labeled amino-quinoline derivatives
HUP0402371 2004-11-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2007122396A RU2007122396A (ru) 2008-12-20
RU2379290C2 true RU2379290C2 (ru) 2010-01-20

Family

ID=89985606

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007122396/04A RU2379290C2 (ru) 2004-11-15 2005-11-09 Изотопно-меченые производные хинолина, выступающие в качестве лигандов аденозинового рецептора a3

Country Status (15)

Country Link
US (1) US7964731B2 (ru)
EP (1) EP1814857B1 (ru)
JP (1) JP2008519816A (ru)
KR (1) KR20070084202A (ru)
CN (1) CN101056859B (ru)
AT (1) ATE479660T1 (ru)
AU (1) AU2005303544B2 (ru)
BR (1) BRPI0517816A (ru)
CA (1) CA2588073A1 (ru)
DE (1) DE602005023334D1 (ru)
HU (1) HUP0402371A2 (ru)
IL (1) IL182971A0 (ru)
MX (1) MX2007005768A (ru)
RU (1) RU2379290C2 (ru)
WO (1) WO2006051341A1 (ru)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6921825B2 (en) * 1998-09-16 2005-07-26 King Pharmaceuticuals Research & Development, Inc. Adenosine A3 receptor modulators
RU2278112C2 (ru) * 2001-05-31 2006-06-20 Санофи-Авентис Производные аминохинолина и аминопиридина и их применение в качестве лигандов аденозина a3

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BARALDI P.G. et al. Synthesis and preliminary biological evalution of …. BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS. Vol.10, no.3, 02.2000, p.209-211. MULLER et al. 3H-8-ETHYL-4-METHYL-2-PHENYL-(8R)-4,5,7,8-tetrahydro-1h-imidazo …. BIOORG. MED. CHEM. LETT. Vol.12, 2002, p.501-503. *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006051341A1 (en) 2006-05-18
CN101056859A (zh) 2007-10-17
HUP0402371A2 (en) 2006-09-28
RU2007122396A (ru) 2008-12-20
JP2008519816A (ja) 2008-06-12
CN101056859B (zh) 2010-05-05
MX2007005768A (es) 2007-07-16
US7964731B2 (en) 2011-06-21
EP1814857B1 (en) 2010-09-01
EP1814857A1 (en) 2007-08-08
BRPI0517816A (pt) 2008-10-21
AU2005303544B2 (en) 2011-06-02
CA2588073A1 (en) 2006-05-18
ATE479660T1 (de) 2010-09-15
HU0402371D0 (en) 2005-03-29
IL182971A0 (en) 2007-08-19
AU2005303544A1 (en) 2006-05-18
KR20070084202A (ko) 2007-08-24
US20080027225A1 (en) 2008-01-31
DE602005023334D1 (de) 2010-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2010223513B2 (en) Substituted 2-mercaptoquinoline-3-carboxamides as KCNQ2/3 modulators
SA03240209B1 (ar) محاكيات جلوكوكورتيكوئيد glucocorticoid mimetics,طرق لتحضيرها , تراكيبها الصيدليه , واستخداماتها
TWI788424B (zh) 受體抑制劑的并環類衍生物
CN101679318A (zh) 使用链接化学法的用于碳酸酐酶-ix的分子成象探针的发展
EP1745039A2 (en) 3-aryl-5,6-disubstituted pyridazines
MXPA97002658A (en) Novedous derivatives of carboxyl acid, supreparation and
KR20110020902A (ko) 글루코코르티코이드 유사체, 이의 제조방법, 약제학적 조성물 및 이의 용도
JP2008525363A (ja) プロスタグランジン媒介疾患治療のためのピリジン化合物
WO2014036897A1 (zh) 咪唑啉类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN102702044A (zh) 作为γ分泌酶抑制剂的碳环和杂环芳基砜化合物
JP2020512315A (ja) Ｍｋ２阻害剤として有用なヘテロアリール化合物
AU2009323287B2 (en) Quinolone compound and pharmaceutical composition
UA119805C2 (uk) Похідні гідроксіалкілпіперазину як модулятори cxcr3-рецептора
EP1745024A1 (en) 1-aryl-4-substituted isoquinolines
US7365089B2 (en) Triazolo-quinolin derivatives useful as adenosine receptor ligands
RU2379290C2 (ru) Изотопно-меченые производные хинолина, выступающие в качестве лигандов аденозинового рецептора a3
CA2809287A1 (en) Substituted 2-oxo- and 2-thioxo-dihydroquinoline-3-carboxamides as kcnq2/3 modulators
JP2015214527A (ja) イミダゾール誘導体
JP2010513553A (ja) 癌治療用イミダゾリジノニルアミノピリミジン化合物
JP6173576B2 (ja) ピラジン誘導体
EP1845993A2 (en) Novel adenosine a3 receptor modulators
KR100316354B1 (ko) A-2수용체친화성을갖는2-치환된아데노신
CN115340499B (zh) Bcl-xl抑制剂及其用途
CZ216895A3 (en) Novel derivatives of 3-hydroxyanthranilic acid, process and intermediates of their preparation, novel pharmaceutical preparations and their use
WO2022228365A1 (zh) 六元杂芳并脲环的衍生物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20121110