RU2348428C2 - Функционально реконструированные вирусные мембраны, содержащие адъювант - Google Patents
Функционально реконструированные вирусные мембраны, содержащие адъювант Download PDFInfo
- Publication number
- RU2348428C2 RU2348428C2 RU2006101394/15A RU2006101394A RU2348428C2 RU 2348428 C2 RU2348428 C2 RU 2348428C2 RU 2006101394/15 A RU2006101394/15 A RU 2006101394/15A RU 2006101394 A RU2006101394 A RU 2006101394A RU 2348428 C2 RU2348428 C2 RU 2348428C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reconstructed
- viral
- virus
- antigen
- cysteinyl
- Prior art date
Links
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title claims abstract description 167
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 87
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 66
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 88
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 88
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 70
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 29
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 143
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 40
- -1 (bispalmitoyloxy) propyl-cysteinyl-seryl- (lysyl) Chemical group 0.000 claims description 31
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 27
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 25
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 25
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 24
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 21
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 108010059722 Viral Fusion Proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 15
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 15
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 15
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 15
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 15
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 13
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 10
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 5
- PGDHBKBKNIPPGA-YLJLHNITSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-3,3-di(hexadecanoyloxy)-2-(propylamino)-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoic acid Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)OC([C@H](NCCC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)(S)OC(CCCCCCCCCCCCCCC)=O PGDHBKBKNIPPGA-YLJLHNITSA-N 0.000 claims description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 4
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 4
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 241000712892 Arenaviridae Species 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 3
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 claims description 2
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 125000001288 lysyl group Chemical group 0.000 claims 4
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 claims 1
- 101710132653 Protein M2 Proteins 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 143
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 29
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 25
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 19
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 18
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 14
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 8
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 241000845082 Panama Species 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 7
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N octaethyleneglycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 5
- 108700010900 influenza virus proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical group O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 4
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000049556 Jagged-1 Human genes 0.000 description 3
- 108700003486 Jagged-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000007298 Mucin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108700037966 Protein jagged-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 3
- 108010065667 Viral Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical class OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 3
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- 241000710842 Japanese encephalitis virus Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 2
- 108010036039 Serrate-Jagged Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003012 bilayer membrane Substances 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 3h-imidazo[4,5-h]quinoline Chemical class C1=CN=C2C(N=CN3)=C3C=CC2=C1 RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 1
- 206010001935 American trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 108010087765 Antipain Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241001292006 Arteriviridae Species 0.000 description 1
- 241000228257 Aspergillus sp. Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 208000006373 Bell palsy Diseases 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241001337994 Cryptococcus <scale insect> Species 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 1
- 102100031940 Epithelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 1
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000150562 Hantaan orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000150362 Hantaviridae Species 0.000 description 1
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 1
- 241000228404 Histoplasma capsulatum Species 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000904196 Homo sapiens Pancreatic secretory granule membrane major glycoprotein GP2 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 241000342334 Human metapneumovirus Species 0.000 description 1
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710148794 Intercellular adhesion molecule 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 1
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241001092142 Molina Species 0.000 description 1
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 102100024019 Pancreatic secretory granule membrane major glycoprotein GP2 Human genes 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 229920002685 Polyoxyl 35CastorOil Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 101001039269 Rattus norvegicus Glycine N-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000219287 Saponaria Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 101001039853 Sonchus yellow net virus Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 101000582398 Staphylococcus aureus Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000194022 Streptococcus sp. Species 0.000 description 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 1
- 241000710771 Tick-borne encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000223109 Trypanosoma cruzi Species 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000036826 VIIth nerve paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 241000710772 Yellow fever virus Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- YVBOZGOAVJZITM-UHFFFAOYSA-P ammonium phosphomolybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]P([O-])=O.[O-][Mo]([O-])(=O)=O YVBOZGOAVJZITM-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N antipain Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SDNYTAYICBFYFH-TUFLPTIASA-N 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001097 facial muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 244000000058 gram-negative pathogen Species 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 108010038415 interleukin-8 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000010681 interleukin-8 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 244000000074 intestinal pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N n-[(2r,3r,4s,5r)-4,5,6-trihydroxy-1-oxo-3-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexan-2-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000004719 natural immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002357 osmotic agent Substances 0.000 description 1
- QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N oxirane;propane-1,2,3-triol Chemical compound C1CO1.OCC(O)CO QUANRIQJNFHVEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 1
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 1
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003147 proline derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000004400 serine Nutrition 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 241000007181 unidentified human coronavirus Species 0.000 description 1
- 229940051021 yellow-fever virus Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5258—Virus-like particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
- C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
- C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/906—Drug delivery
- Y10S977/907—Liposome
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области медицины и касается функционально реконструированных вирусных мембран, содержащих адьювант. Сущность изобретения включает реконструированную вирусную мембрану, липидный бислой которой содержит слитой белок вируса и амфифильный адьювант, в качестве которого используют липопептид. Далее, изобретение относится к способам получения реконструированных вирусных мембран, проявляющих активность слитой мембраны, которые являются липидными двухслойными мембранами, предпочтительно содержащими природные липиды вируса, вирусный слитый белок, необязательно, один или более дополнительных антигенов и амфифильные адъюванты. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие реконструированные вирусные мембраны. Преимущество изобретения заключается в усилении иммунного ответа. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 табл., 10 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к вакцинам, направленным против антигенов, таких как мембранные белки патогенов или опухолевых клеток. Далее, изобретение относится к способам получения реконструированных вирусных мембран с активностью слитых мембран, представляющих собой мембраны липидного бислоя, содержащие природные липиды вируса, амфифильные антигены и амфифильные адъюванты, а также к фармацевтическим композициям, содержащим такие реконструированные вирусные мембраны.
Предшествующий уровень техники
Традиционно вакцины против оболочечных вирусов содержат либо убитые, либо живые аттенуированные вирусы, либо препараты на основе их составных частей (например, препараты расщепленного вируса или субъединичные препараты). Для вакцинации эти препараты, как правило, вводят с помощью инъекции. После инъекции вирусы или белки, представленные в этих вакцинах, поглощаются антигенпрезентирующими клетками иммунной системы, такими как дендритные клетки или макрофаги, с последующей презентацией антигенных частей вакцин эффекторным клеткам иммунной системы. Вакцины являются эффективными при инъекции, так как антигенпрезентирующие клетки наиболее многочисленны именно под кожей. Однако в настоящее время установлено, что сходные клетки имеются и в слизистой оболочке, например в слизистой оболочке носа (Ogra et al., 2001). Для индукции фагоцитов, присутствующих в слизистой оболочке, с целью усиления иммунного ответа требуется более сильная стимуляция, чем для фагоцитов, находящихся под кожей (Janeway et al., 2001).
Несмотря на то, что инъекция некоторых вирусов или белков, содержащихся в вакцинах, например, вируса гриппа или вируса кори, вызывает иммунный ответ, который является достаточно сильным для защиты от последующего инфекционного заболевания, вызванного этим же вирусом, во многих других случаях такая защита не возникает, например, в случае респираторно-синцитиального вируса. Предприняты многочисленные попытки усиления иммунного ответа с помощью физических или химических средств. Наиболее важными принципами, извлеченными из таких экспериментов, являются следующие: 1) в отношении физической стимуляции - необходимость сборки множественных копий вирусных белков в частицы, где частицы могут представлять собой целые вирусы, реконструированные вирусные мембраны или белки на носителях из микрочастиц, причем частицы стимулируют иммунную систему лучше, чем отдельные субъединицы (Ogra et al., 2001; Janeway et al., 2001); 2) в отношении химической стимуляции - требование, чтобы фагоциты или эффекторные клетки иммунной системы получали определенные сигналы через рецепторы, представленные на поверхности антигенпрезентирующей клетки, например, с помощью адъювантов - химических соединений, распознаваемых этими рецепторами.
С помощью дополнительной физико-химической стимуляции вирусные белки вызывают сильный иммунный ответ даже при введении в мембраны слизистой оболочки, например носа (Ogra et al., 2001). Большинство современных способов и композиций для стимуляции иммунного ответа, основанных на применении химических или физических средств, или комбинаций этих двух принципов, имеют существенные недостатки, изложенные ниже.
Специалистами разработан особый тип вакцинной композиции, известной как «виросомы», которые представляют собой липидные бислои, содержащие вирусные гликопротеины. Виросомы могут содержать реконструированные вирусные мембраны, обычно получаемые путем экстракции мембранных белков и липидов из оболочечных вирусов с помощью детергента, с последующим добавлением липидов и удалением указанного детергента из экстрагированных вирусных мембранных белков и липидов. В результате формируются характеристические липидные бислои с выступающими из них белками (Stegmann et al., 1987). Виросомы могут также содержать мембраны, сформированные из очищенных вирусных белков и синтетических или природных липидов, или другие вещества, формирующие бислой. Характерной особенностью виросом является имитация в высокой степени состава, поверхностной структуры и функциональной активности нативной вирусной оболочки. В частности, важным свойством указанных виросом является сохранение рецептор-связывающей активности и активности слитых мембран природной вирусной оболочки, что позволяет виросомам входить в те же клетки, что и вирус, и быть представленными этими же клетками иммунной системе. Сохранение рецептор-связывающей активности и активности слитой мембраны необходимо для проявления полноценных иммуногенных свойств этих виросом (Arkema, 2000; Bungener, 2002).
В отношении некоторых вирусных антигенов виросомы вызывают защитные иммунные ответы, которые могут быть сильными даже в случае интраназальной доставки вакцины (как описано в патентах WO 88/08718 и WO 92/19267). Однако другие виросомные композиции проявляют лишь крайне слабое повышение иммуногенности по сравнению с препаратами убитых вирусов или субъединичными препаратами (как описано Glück et al., 1994). В данном цитируемом примере виросомы были получены с помощью протокола на основе добавления экзогенных липидов, причем установлено, что полученный состав виросом и поверхностная структура отличаются от таковых в нативной вирусной оболочке. Специалистам известно, что различная структура поверхности влияет на свойства слитой мембраны генерированных виросом и, следовательно, на их иммуногенность.
Для усиления иммунного ответа допускается интраназальное введение этой вакцины; адъювантный белок из Escherichia coli (лабильный к нагреванию токсин) смешивали с содержащей липиды виросомой противогриппозной вакцины (EP 0538437). Клинические испытания показали, что добавление токсина абсолютно необходимо для индукции титров сывороточных антител, эквивалентных введенной вакцине (Glück et al., 1994). Несмотря на то, что добавление токсина усиливает иммуногенность этой вакцины, оно также индуцирует тяжелый побочный эффект, известный как паралич Белла - временный паралич мимических мышц. Хотя адъювантное действие токсина происходит благодаря узнаванию антигенпрезентирующей клеткой, нет уверенности в том, что в данном случае токсин и вирусный белок будут контактировать в одной и той же клетке, и поэтому для обеспечения активации каждой клетки необходима относительно высокая концентрация токсина, что повышает вероятность узнавания антигенов активированной клеткой. Таким образом, данный тип препарата виросом с добавлением липидов имеет ряд недостатков.
Виросомы также готовят из очищенных гриппозных антигенов, смешанных с производными мурамилдипептида (EP 0205098 и EP 0487909). В этом случае производное мурамилдипептида формирует мембрану. Хотя мурамилдипептид является адъювантом, и состав действительно усиливает иммунный ответ на гриппозные антигены, мурамилдипептиды вызывают повышение температуры (Kotani et al., 1976; Dinarello et al., 1978), быстрое выведение виросом из организма после инъекции и локальную токсичность, вызывающую гранулему и воспаление (Ribi et al., 1979; Kohashi et al., 1980). Кроме того, виросомы имеют ограниченный срок годности при нейтральном pH (Powell et al., 1988); оптимальный pH для поддержания их структурной целостности является слишком низким, чтобы получить состав вакцины вместе со слитым белком вирусов, которые входят в клетку с помощью рецептор-опосредованного эндоцитоза, например, гемагглютинином вируса гриппа. Кроме того, такие синтетические мембраны являются недостаточно хорошими имитаторами природной вирусной мембраны, и, следовательно, вызванный иммунный ответ будет отличаться от такового, генерируемого против вируса.
В качестве альтернативы специалистами получены комплексные антигены, отличающиеся от реконструированных вирусных мембран, такие как «иммуностимуляторные комплексы» (ISCOM, Morein et al., 1984), содержащие вирусные белки в комплексе с адъювантами, такими как сапонины, подобные Quil A® (EP 0231039B1; EP 0109942A1; EP 0180564A1), большинство из которых выделено из коры Quillaia saponaria Molina. Смешанные с антигеном и липидами, такими как холестерин, эти адъюванты формируют клеткоподобные структуры размером 30-40 нм, представляя антигенную частицу, в то же время действуя как адъювант. Хотя ISCOM используются в ряде ветеринарных вакцин и усиливают иммуногенность вирусных мембранных белков, разработка таких вакцин для человека не проводится из-за их токсичности и сложного состава смеси (Cox et al., 1998).
Позже была разработана протеосома вакцин гриппа (США, заявка № 20010053368), содержащая нековалентные комплексы очищенной наружной мембраны белков бактерий, таких как менингококки, смешанные с антигенными белками, например гемагглютинином вируса гриппа или гликопротеином оболочки вируса иммунодефицита человека. Хотя эти многочисленные бактериальные белки могут действовать в качестве адъювантов, сложная природа таких смесей, состоящих из многочисленных белков, будет регулировать их продукцию. Кроме того, иммунный ответ направлен на все белки и другие антигены, представленные в растворе, и менее специфичен в отношении вирусных белков.
Другая композиция, разработанная компанией Biovector Therapeutics, содержит внутренний кор углевода, окруженный липидной оболочкой, содержащей антигены. При использовании гемагглютинина вируса гриппа в качестве антигена замечено некоторое усиление иммунного ответа, но не достаточное для оправдания дальнейшей разработки.
В качестве интраназальных вакцин разработаны живые аттенуированные варианты респираторных вирусов, таких как адаптированный к холоду штамм вируса гриппа с минимальным уровнем репликации в дыхательных путях. Эти вакцины характеризуются явным преимуществом в индукции иммунных ответов, которые аналогичны природному иммунитету, индуцированному заражением вирусом дикого типа. В случае гриппа такие вакцины известны, начиная с 1980-х годов, и в настоящее время завершается их подготовка к серийному выпуску. Задержка вызвана способностью многих вирусов быстро мутировать, что вызывает у аттенуированных вирусов частичную или полную реверсию к вирусу дикого типа, и, в действительности, может вызвать заболевание, которое они должны предотвращать.
В силу вышеупомянутых доводов специалисты признают, что хотя для индукции иммунных ответов на патогены, которые сами по себе не индуцируют сильного иммунного ответа, а также для интраназального и других способов применения на слизистой разработаны такие составы как ISCOM и протеосомы, все еще существует необходимость в глубоком изучении вакцинных композиций, которые индуцируют сильный иммунный ответ, не содержат живых вирусов и имеют низкую токсичность.
Сущность изобретения
В настоящем изобретении предлагаются новые средства и способы, разрешающие ряд вышеописанных проблем и трудностей. В изобретении предлагается реконструированная вирусная мембрана, содержащая амфифильный адъювант и антиген, где указанные адъювант и антиген взаимодействуют посредством гидрофобных взаимодействий и представлены в сочетании с липидной двухслойной мембраной на основе реконструированных вирусных мембран, где реконструированная вирусная мембрана имеет активность слияния, превосходящую таковую виросом, приготовленных в соответствии с патентом EP 0538437. Далее, реконструированная вирусная мембрана в высокой степени имитирует состав, поверхностную структуру и функциональные свойства вирусной оболочки, из которой получают реконструированную вирусную мембрану. В изобретении предлагается способ получения таких реконструированных вирусных мембран, включающий в себя следующие стадии: i) разрушение вируса в соответствующем детергенте; ii) удаление вирусного генетического материала и коровых белков; iii) контакт одной или более амфифильных молекул, имеющих адъювантную активность, и антигена в растворе, содержащем детергент; и iv) удаление детергента в условиях, обеспечивающих перестройку мембраны.
Кроме того, в изобретении предлагается фармацевтический препарат, содержащий реконструированные вирусные мембраны в соответствии с изобретением, фармацевтически приемлемый носитель и способ применения таких реконструированных вирусных мембран или фармацевтического препарата в соответствии с изобретением для лечения или профилактики заболеваний посредством интраназальной, пероральной или парентеральной доставки.
Описание изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение относится к реконструированной вирусной мембране. Реконструированная вирусная мембрана предпочтительно содержит: (a) липидный бислой; (b) слитый белок вируса; (c) амфифильный адъювант; и (d) необязательно, дополнительный антиген. Предпочтительно, в реконструированной вирусной мембране липидный бислой имеет липидный состав, совместимый со слиянием, как индуцированная слитым белком вирусная мембрана клетки-хозяина, природного вирусного хозяина. Предпочтительно, липидный состав совместим со слиянием при оптимальном pH слияния. Предпочтительно, слитый белок, амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя, например, ассоциированы с ним, интегрированы в него и/или включены в бислой вирусной мембраны посредством гидрофобных взаимодействий с липидами бислоя и/или друг с другом. Другое преимущество состоит в том, что слитый белок и амфифильный адъювант нековалентно связаны. Предпочтительно, чтобы амфифильный адъювант и дополнительный антиген также были связаны нековалентной связью. Вирусные мембраны согласно изобретению предпочтительно представляют собой функционально реконструированные вирусные мембраны, содержащие липиды, предпочтительно природные липиды вируса, амфифильный адъювант, вирусный слитый белок и один или несколько антигенов, где амфифильный адъювант, липиды вирусных слитых белков и антигены взаимодействуют сначала посредством гидрофобных взаимодействий, где гидрофобная часть амфифильного адъюванта преимущественно формирует внутреннюю часть липидной двухслойной мембраны, причем бислой включает в себя слитый белок, антиген или антигены и липиды. Функциональная реконструкция означает, что реконструированная мембрана имеет активность слитой мембраны. Предпочтительно, если реконструированная вирусная мембрана находится в виде везикул.
Под слитым белком вируса здесь подразумевают интегральный мембранный белок вируса, обычно оболочечного вируса, который при экспрессии на поверхности соответствующей клетки млекопитающего (или птицы) может индуцировать слияние клетки при соответствующем pH с клетками, которые являются природными хозяевами вируса (см., например, Hernandez et al., 1996). Примерами вирусных слитых белков, предназначенных для включения в реконструированную вирусную мембрану, являются белок E1 вируса леса Семлики, белок гемагглютинина (HA) вируса гриппа, белки gp120/gp41 HIV, F-белки парамиксовирусов. Два типа слияния, индуцированного вирусным слитым белком, могут различаться. Первый тип слияния, индуцированный, например, белками gp120/gp41 HIV, происходит при нейтральном pH на поверхности адресной клетки-хозяина. Второй тип слияния, индуцированный, например, белком гемагглютинина (HA) вируса гриппа, происходит в результате интернализации при более низком pH (5,0-6,5) в эндосомном компартменте клетки-хозяина. Оба типа слияния входят в композицию согласно настоящему изобретению.
Способность реконструированных вирусных мембран согласно изобретению сливаться с клеткой-хозяином зависит от присутствия соответствующего вирусного слитого белка. Однако эта способность также зависит от липидного состава бислоя реконструированной вирусной мембраны, так как виросомы, содержащие синтетические липиды и вирусные слитые белки, описанные в научной литературе, не способны к слиянию. Поэтому липидный состав реконструированных вирусных мембран предпочтительно выбирать таким образом, чтобы мембраны были способны к слиянию с соответствующими клетками-хозяевами при определенном pH. Способность реконструированных вирусных мембран к слиянию может быть оценена с помощью способа слияния теней эритроцитов, как, например, описано здесь в примере 3. Для реконструированных вирусных мембран, содержащих гемагглютинин вируса гриппа, предпочтительная активность слияния в этом способе индуцирует слияние не менее 30% реконструированных вирусных мембранных везикул с тенями эритроцитов через 1 мин, при смешивании 1 мкМ виросом с 50 мкМ фосфолипидной мембраны теней эритроцитов при pH, оптимальном для гемагглютинина.
Предпочтительной активностью слияния для других реконструированных вирусных мембран, которые не могут быть тестированы с помощью вышеуказанного способа, является слияние с добавлением реконструированных вирусных мембран в клетки, способные заражаться вирусом, из которого получают эти слитые белки. Реконструированные мембраны должны обеспечивать слияние по меньшей мере 10% клеток, которые сливаются с помощью вируса, из которого получены эти слитые белки.
Предпочтительным липидным составом, обеспечивающим реконструированные вирусные мембраны активностью слияния, является липидный состав, содержащий природные липиды вируса. Термин «природные липиды вируса» здесь означает, что эти липиды представлены в мембране вируса, растущего на клетках, предпочтительно клетках млекопитающих, или на оплодотворенных яйцеклетках. Природные липиды вируса предпочтительно получают или выделяют из растущих вирусных частиц, в отличие от синтетических липидов. Однако функционально реконструированные вирусные мембраны согласно изобретению кроме природных липидов могут содержать очищенные липиды из других источников, например синтетические липиды. Таким образом, липидный состав для реконструированных вирусных мембран с активностью слияния предпочтительно является составом, полученным из природных вирусных мембран. К липидным составам, применяемым в настоящем изобретении, относятся составы, содержащие исключительно природные липиды вируса, составы, содержащие природные липиды вируса с добавлением липидов из других источников, а также составы, содержащие липиды из различных источников, которые имитируют липидный состав природной вирусной мембраны.
Применяемые здесь адъюванты содержат любое вещество или соединение, которое при использовании в комбинации с антигеном, для иммунизации человека или животного, стимулирует иммунную систему, тем самым вызывая или усиливая иммунный ответ или облегчая проявление иммунного ответа против антигена, предпочтительно без генерации специфического иммунного ответа к самому адъюванту. Предпочтительно, адъюванты усиливают иммунный ответ против данного антигена по меньшей мере в 1,5; 2; 2,5; 5; 10 или 20 раз по сравнению с иммунным ответом, генерируемым против антигена в тех же условиях, но в отсутствие адъюванта. Разработаны тесты для определения статистического среднего показателя усиления иммунного ответа против данного антигена, продуцируемого адъювантом в группе животных или у человека, по сравнению с соответствующей контрольной группой. Предпочтительно, чтобы адъювант усиливал иммунный ответ против не менее двух различных антигенов. Адъювант согласно изобретению обычно представляет собой соединение, чужеродное для млекопитающих, что, тем самым, исключает иммуностимуляторные соединения, которые являются эндогенными для млекопитающих, такие как интерлейкины, интерфероны и другие гормоны. Адъюванты, включаемые в состав функционально реконструированных вирусных мембран согласно изобретению, преимущественно являются амфифильными адъювантами.
Термин «амфифильный адъювант» относится к любому адъюванту, в том числе к соединениям, подобным липопептидам или гликолипидам, имеющим гидрофобную мембрану, встроенную и ориентированную полярными (головная группа) частями в окружающую среду, которые предпочтительно сами могут ассоциироваться с везикулами липидного бислоя или мицеллами в воде, или, что более предпочтительно, встраиваться в везикулы бислоя или мицеллы в воде. Этот термин также означает любой амфифильный адъювант, стабильно включенный в липидные бислои (содержащие природные липиды вируса) со своей гидрофобной частью, контактирующей с внутренней, гидрофобной областью двухслойной мембраны и частью полярной головной группы, ориентированной на внешнюю, полярную поверхность мембраны. Однако из тематики согласно изобретению не исключаются более гидрофобные адъюванты, имеющие менее выраженную амфифильность, например, у них отсутствуют части полярной головной группы или имеются только части слабой полярной головной группы, ассоциированные с везикулами липидного бислоя или интегрированные в них. Используемые здесь «амфифильные адъюванты» с адъювантной активностью представляют собой природные или (частично) синтетические адъюванты, способные формировать реконструированную вирусную мембрану вместе с одним или несколькими желательными антигенами и природными липидами вируса в водной среде в условиях, обеспечивающих формирование реконструированной вирусной мембраны.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения амфифильный адъювант, представленный в реконструированной вирусной мембране, является фармацевтически приемлемым для введения человеку, в отличие от, например, Quil A™ или других сапонинов, которые являются амфифилами с изученной адъювантной активностью. Амфифильные адъюванты согласно изобретению предпочтительно нековалентно связаны с антигенами, но представлены вместе в липидном бислое реконструированной мембраны. Отсутствие ковалентной связи антигена и адъюванта обеспечивает процессинг антигена и презентацию его эпитопов в иммунной системе, которые высокоидентичны таковым природного белка, что обеспечивает хорошее узнавание белка, представленного на природном патогене. С другой стороны, гидрофобное взаимодействие антигена и адъюванта с липидным бислоем (или друг с другом) обеспечивает распределение адъюванта и антигена на реконструированных вирусных мембранах в препарате. Тем самым, большинство мембранных везикул в препарате содержит как антиген, так и адъювант в одной везикуле; более предпочтительно, не менее 60, 70, 80, 90 или 95% везикул содержат как антиген, так и адъювант. Комбинация антигена и адъюванта в отдельной мембране или везикуле позволяет доставлять антиген в антигенпрезентирующую клетку, которая активируется с помощью адъюванта, что вызывает усиление терапевтической и/или профилактической эффективности реконструированных вирусных мембран.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанный амфифильный адъювант узнается Toll-подобным рецептором (TLR), представленным на антигенпрезентирующих клетках. Специалистам известны различные соединения, узнаваемые TLR, в том числе липопептиды, липополисахариды, пептидогликаны, лиоптехоевые кислоты, липопротеины (выделенные из микоплазм, микобактерий или спирохет), двунитевая РНК (поли I:C), неметилированная ДНК, липоарабиноманнан, флагеллин, CpG-содержащая ДНК и имидазохинолины. Не все TLR-узнаваемые соединения могут быть использованы как адъюванты, например, из-за токсичности липополисахаридов грамотрицательных бактерий дикого типа, которая является слишком высокой для их применения в качестве адъювантов, или из-за отсутствия фармацевтической приемлемости при использовании для человека. В качестве адъювантов могут быть использованы другие TLR-узнающие соединения. Эти TLR-узнающие адъюванты могут быть амфифильными адъювантами сами по себе или, в качестве альтернативы, могут быть модифицированы в амфифильный адъювант, например, путем сопряжения гидрофобных соединений (см. ниже) с полярным лигандом TLR. Альтернативно, амфифильные адъюванты могут быть мишенями других рецепторов. Предпочтительным амфифильным адъювантом является липопептид, который может быть получен синтетически или полусинтетически. Предпочтительно, липопептид, используемый в качестве амфифильного адъюванта, имеет адъювантную активность и является фармацевтически приемлемым при использовании для человека. Липопептид согласно изобретению представляет собой молекулу, обычно содержащую один или несколько (олиго)пептидов, ковалентно связанных с одним или более гидрофобных соединений, выбранных из группы, содержащей жирные кислоты, липиды, церамиды, плазмалогены, алкильные или алкеновые цепи или стерины. В общем, липопептиды, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно состоят из 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот, предпочтительно пептидов, содержащих 40-70% положительно заряженных аминокислот, из которых лизин и аргинин являются предпочтительными; и, предпочтительно, пептиды содержат один или более серинов и/или цистеинов. Особенно предпочтительные липопептиды представлены в таблице 1.
В другом варианте осуществления изобретения указанный амфифильный адъювант является гликолипидом. Предпочтительный гликолипид для применения в качестве амфифильного адъюванта имеет адъювантную активность и фармацевтически приемлем при использовании для человека. Гликолипиды представляют собой липиды (или другие гидрофобные соединения), ковалентно связанные с одним или несколькими сахарами. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются реконструированные вирусные мембраны, в которых гликолипидом является α-галактозилцерамид или фосфатидилинозитманнозид. Термины «α-галактозилцерамид» и «фосфатидилинозитманнозид» означают любое производное этих соединений. Производные этих молекул, имеющие адъювантную активность и применяемые в контексте настоящего изобретения, описаны в патентах США №№ 5936076 и 4542212 соответственно. Другими подходящими гликолипидными адъювантами, применяемыми в настоящем изобретении, являются модифицированные формы эндотоксических липополисахаридов (LPS) грамотрицательных бактерий, проявляющие пониженную токсичность части липида A LPS, но сохраняющие (частично) адъювантную активность. Модифицированные LPS получают из генетически модифицированных грамотрицательных патогенов, как описано в патенте WO 02/09746.
Модифицированные LPS, используемые в настоящем изобретении в качестве амфифильного адъюванта, имеют модифицированную часть липида A со сниженной токсичностью. Токсичность модифицированного LPS предпочтительно меньше токсичности соответствующего LPS дикого типа, более предпочтительно, токсичность модифицированного LPS на 90, 80, 60, 40, 20, 10, 5, 2, 1, 0,5 и 0,2% меньше токсичности LPS дикого типа. Токсичность LPS дикого типа и различных модифицированных форм со сниженной токсичностью определяют с помощью любого общеизвестного способа. Предпочтительным способом определения токсичности, например биологической активности модифицированных LPS, является тест WEHI, основанный на индукции TNF-α в клеточной линии MM6 макрофагов (Espevik and Niessen, 1986, J.Immunol.Methods 95: 99-105; Zeigler-Heitbrock et al., 1988, Int.J.Cancer 41: 456-461). С другой стороны, модифицированный LPS со сниженной токсичностью проявляет значительную иммуностимулирующую активность, например адъювантную активность. Модифицированный LPS со сниженной токсичностью обладает не менее 10, 20, 40 ,80, 90 или 100% иммуностимулирующей активности по сравнению с соответствующим LPS дикого типа. Иммуностимулирующая активность может быть определена in vivo на лабораторных животных, как описано выше или в примерах, или in vitro, например, по определению созревания дендритных клеток, стимулированных путем инкубации с LPS, которые тестируют посредством измерения продукции не менее одного цитокина (например, одного из IL-12, IL-10, TNF-α, IL-6 и IL-1-β) в LPS-стимулированных дендритных клетках, или путем измерения экспрессии не менее одной костимуляторной молекулы (например, CD40 или CD86) на LPS-стимулированных дендритных клетках.
В другом аспекте настоящего изобретения амфифильный адъювант, представленный в виросоме согласно изобретению, является пептидом, предпочтительно амфифильным пептидом. Предпочтительно, пептид, применяемый в качестве амфифильного адъюванта, имеет адъювантную активность и является фармацевтически приемлемым для человека. Пептиды, в частности полярные пептиды, с адъювантной активностью могут быть превращены в амфифильные адъюванты путем (ковалентного) связывания их с соответствующим гидрофобным соединением (см. выше). В качестве альтернативы амфифильные пептиды могут включать в себя гидрофобное растяжение аминокислот, такое как трансмембранная последовательность, как описано ниже. Предпочтительный пептид содержит последовательность из Notch-лиганда Jagged-1 (Weijzen et al., 2002; Genbank инвентарный № AAC 52020) или последовательность белка A Staphylococcus aureus. Пептиды, имеющие последовательности Jagged-1 или белка A, предпочтительно ковалентно связаны с соответствующим гидрофобным соединением (см. выше) и/или содержат трансмембранную последовательность (см. ниже). Полярная часть пептидов, происходящих от Jagged-1 или белка A, которая выступает из липидного бислоя, содержит не более 3, 4, 5, 6, 7 или 8 аминокислот.
Реконструированные вирусные мембраны согласно изобретению пригодны как для парентерального, так и для мукозального (например, интраназального или перорального) введения. Важным аспектом настоящего изобретения является то, что реконструированные вирусные мембраны могут применяться для интраназальной доставки антигенов, которые в норме не обеспечивают достаточный иммунный ответ при интраназальной доставке субъекту для защиты от последующего инфицирования патогенным организмом, содержащим антиген.
Реконструированные вирусные мембраны согласно изобретению содержат слитый вирусный белок и, необязательно, дополнительный антиген. Следует учитывать, что реконструированные вирусные мембраны, содержащие только вирусный слитый белок и не содержащие дополнительный антиген, также являются частью изобретения. В таких реконструированных вирусных мембранах вирусный слитый белок функционирует как антиген в добавление к своей функции слитого белка. С другой стороны, реконструированные вирусные мембраны могут также содержать один или более дополнительных антигенов в добавление к вирусному слитому белку.
В соответствии с изобретением антигены, которые являются частью реконструированной вирусной мембраны, имеют гидрофобную часть, которая способна встраиваться в мембрану липидного бислоя реконструированной вирусной мембранной везикулы. Многие патогены, такие как вирусы, бактерии, дрожжи и паразиты, несут в своем капсиде, клеточной стенке или мембране белки, которые вызывают иммунный ответ у хозяина. Примерами антигенов, имеющих гидрофобные элементы, такие как трансмембранные сегменты, и пригодных в качестве составной части реконструированной вирусной мембраны, в соответствии с изобретением являются белки, представленные в мембране (в случае вирусов также называемые оболочкой) патогена. Предпочтительно, антигеном, представленным в реконструированных вирусных мембранах согласно изобретению, является интегральный мембранный белок. Антигенные белки в реконструированных вирусных мембранах настоящего изобретения ориентированы таким же образом, как и на вирусной или клеточной мембране; они могут представлять эпитопы, которые в норме частично или временно спрятаны, когда присутствуют в мембранном липидном бислое. Стимуляция иммунной системы этими антигенпрезентирующими реконструированными вирусными мембранами может происходить вследствие комбинации этих специфических узнаваний клетками иммунной системы, их определенными свойствами, презентацией белка и раскрытием спрятанных эпитопов. Предпочтительно, антигенные белки, используемые в реконструированных вирусных мембранах согласно изобретению, содержат один или более защитных эпитопов, например эпитопов, способных вызвать иммунный ответ у млекопитающих, где эпитопы обеспечивают защиту от инфекции, вызванной патогеном, от которого происходит антиген, или который обеспечивает защиту от опухолевой экспрессии антигена.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения указанные антигены получают из вируса, паразита, гриба или бактерии. Особенно предпочтительны реконструированные вирусные мембраны, в которых указанный антиген получают из вируса гриппа. Предпочтительными белками вируса гриппа, которые могут быть использованы в реконструированных вирусных мембранах настоящего изобретения, являются белок гемагглютинина (HA), белок нейраминидазы (NA) и/или белок M2, отдельно или в комбинации.
Антигены, применяемые для формирования реконструированных вирусных мембран, могут быть получены из всех видов вирусов, не ограничивающими примерами таких вирусов являются: Retroviridae, например, вирус иммунодефицита человека (HIV); рубеллавирус; Paramyxoviridae, например, вирусы парагриппа, кори, эпидемического паротита, респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус человека; Flaviviridae, например, вирус желтой лихорадки, вирус денге, вирус гепатита C (HCV), вирус японского энцефалита (JEV), вирус клещевого энцефалита, вирус энцефалита Сент-Луис или вирус Западного Нила; Herpesviridae, например, вирус простого герпеса, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр; Bunyaviridae; Arenaviridae; Hantaviridae, например, вирус Хантаан; Coronaviridae, например, коронавирус человека; Papovaviridae, например, папилломавирус человека; Rhabdoviridae, например, вирус бешенства; Alphaviridae; Arteriviridae; Filoviridae, например, вирус Эбола; Poxviridae, например, вирус натуральной оспы и вирус африканской лихорадки свиней. Эти антигены также могут быть получены из патогенных бактерий, грибов, (включая дрожжи) или паразитов. К этим антигенам относятся бактериальные антигены, такие как антигены Helicobacter, например, H. pylori; Neisseria, например, N. mengitidis; Haemophilus, например, H. influenza; Bordetella, например, B. pertussis; Chlamydia; Streptococcus, например, Streptococcus sp.серотипа A; Vibrio, например, V. cholera; грамотрицательные кишечные патогены, такие как Salmonella, Shigella, Campylobacter и Escherichia, а также антигены бактерий, вызывающих сибирскую язву, проказу, туберкулез, дифтерию, болезнь Лайма, сифилис, брюшной тиф и гонорею. Антигены паразитов включают в себя антигены простейших, таких как Babeosis bovis, Plasmodium, Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Trypanosoma, например, T. cruzi. Грибковые антигены могут включать в себя антигены грибов, таких как Aspergillus sp., Candida albicans, Cryptococcus, например, C. neoformans и Histoplasma capsulatum.
Хотя вакцинация, в общем, применяется для профилактической защиты от патогенов или для лечения заболеваний, вызванных патогенной инфекцией, специалисты используют вакцины для терапии опухолей. Кроме того, увеличивается число опухолеспецифических белков, которые могут быть адресованы посредством гуманизированных антител или через человека. Такие опухолеспецифические белки также являются предметом настоящего изобретения. Специалистам известно большое число опухолеспецифических антигенов. В предпочтительном варианте осуществления изобретения предлагаются реконструированные вирусные мембраны, содержащие опухолеспецифический антиген. Подходящие опухолеспецифические антигены включают онкофетальный антиген, простата-специфичный мембранный антиген, простата-специфичный антиген, белок MZ2E, полиморфный эпителиальный муцин (PEM), фолат-связывающий белок LK26, укороченный рецептор фактора роста эпидермиса (EGRF), антиген Томсена-Фриденрайха (T), ганглиозиды GM-2 и GD-2, Ep-CAM, муцин-1, эпителиальный гликопротеин-2 и специфичный для толстой кишки антиген.
Предпочтительными антигенами этих патогенов являются интегральные мембранные белки. Однако немембранные белковые антигены или их части, содержащие защитные эпитопы, также могут быть модифицированы для применения в настоящем изобретении путем слияния их с трансмембранной последовательностью. Трансмембранные последовательности или заякоренные на мембране последовательности, хорошо известные специалистам, основаны на генетической геометрии трансмембранных молекул млекопитающих. Трансмембранная последовательность, как правило, имеет протяженность 10-30, в среднем 20 аминокислот, большинство из которых имеет гидрофобные боковые цепи. Трансмембранные последовательности известны для большого числа разновидностей белков, и любые из них могут быть использованы. Примерами заякоренных на мембране последовательностей, применяемых в настоящем изобретении, являются последовательности, происходящие от CD8, ICAM-2, IL-8R, CD4 и LFA-1. Предпочтительно, трансмембранная последовательность происходит от вирусного интегрального мембранного белка, который в естественных условиях присутствует на вирусной мембране. Примерами таких последовательностей являются трансмембранная область респираторно-синцитиального вируса человека (RSV), гликопротеин G (например, аминокислоты 38-63) или трансмембранная область нейраминидазы вируса гриппа (например, аминокислоты 7-27).
В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения реконструированной вирусной мембраны, включающий в себя следующие стадии: (a) смешивание амфифильного адъюванта, вирусного слитого белка, необязательно, дополнительного антигена и липидов в растворе, содержащем детергент; (b) снижение концентрации детергента в условиях, обеспечивающих реконструкцию вирусной мембраны, содержащей липидный бислой, в котором амфифильный адъювант и вирусный слитый белок взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя, где предпочтительно амфифильный адъювант и вирусный слитый белок являются нековалентно связанными, и где предпочтительно амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген являются нековалентно связанными, а реконструированная вирусная мембрана имеет активность слитой мембраны; (c) необязательно, очистку реконструированной вирусной мембраны; (d) необязательно, введение реконструированной вирусной мембраны в фармацевтическую композицию. Способ приготовления вирусных липидов может дополнительно включать в себя: i) растворение вируса в соответствующем детергенте, таком как моно-N-додециловый эфир октаэтиленгликоля; ii) удаление вирусного генетического материала и коровых белков, например, с помощью дифференциального ультрацентрифугирования. Концентрацию детергента предпочтительно снижают путем диализа, диафильтрации или абсорбции на гидрофобных бусинах (и/или путем исключения класса крупности) при соответствующей скорости удаления детергента, что позволяет реформировать мембрану, где предпочтительно амфифильный адъювант и вирусный слитый белок, а также дополнительный антиген, представленные в реконструированной вирусной мембране, взаимодействуют посредством гидрофобных взаимодействий с внутренней гидрофобной областью двухслойной мембраны и/или друг с другом. Вирус предпочтительно является содержащим мембрану вирусом, таким как большинство оболочечных вирусов. Предпочтительными вирусами, используемыми в качестве источника природных вирусных липидов, являются вирусы гриппа, вирус леса Семлики или парамиксовирусы.
Предпочтительно, способ получения реконструированной вирусной мембраны, представленный в настоящем изобретении, включает стадию очистки указанной реконструированной вирусной мембраны. Метод очистки реконструированных вирусных мембран является общеизвестным для специалистов и включает, например, дифференциальное центрифугирование, центрифугирование в градиенте плотности и/или хроматографию (вытеснительную, ионообменную и/или аффинную хроматографию). Детергенты представляют собой амфифильные молекулы с поверхностной активностью. Подходящими детергентами являются детергенты, которые эффективно растворяют компоненты вирусной мембраны, но не денатурируют слитый белок, вирусный капсид и/или коровые белки, например, цвиттерионные детергенты, такие как моно-N-додециловый эфир октаэтиленгликоля.
Гидрофобные взаимодействия происходят в результате действия нековалентных неэлектростатических сил притяжения между гидрофобными веществами, присутствующими в водной среде. В другом аспекте настоящего изобретения предлагается фармацевтический препарат, содержащий в качестве активного компонента реконструированную вирусную мембрану согласно изобретению и фармацевтически приемлемый носитель. В фармацевтические композиции также могут быть включены фармацевтически приемлемые стабилизирующие агенты, осмотические агенты, буферные агенты, диспергирующие агенты. Предпочтительная форма зависит от способа введения и терапевтического применения. Фармацевтический носитель может быть любым совместимым, нетоксичным веществом, пригодным для доставки реконструированных вирусных мембран больному. К фармацевтически приемлемым носителям для интраназальной доставки относятся вода, забуференные физиологические растворы, глицерин, полисорбат 20, кремофор EL и водная смесь каприлового/капринового глицерида, забуференная для обеспечения нейтрального pH среды. Фармацевтически приемлемые носители для парентеральной доставки представляют собой стерильный забуференный 0,9% NaCl или 5% глюкозу, необязательно с добавлением 20% альбумина. Препараты для парентерального введения должны быть стерильными. Парентеральный способ введения полипептида или антитела выбирают в соответствии с известными способами введения, например, инъекция или инфузия внутривенно, внутрибрюшинно, внутримышечно, внутриартериально или внутрь повреждения. Реконструированные вирусные мембраны предпочтительно вводят с помощью болюсной инъекции. Типичная фармацевтическая композиция для внутримышечной инъекции должна содержать, например, 1-10 мл физиологического раствора, забуференного фосфатным буфером, и 1-100 мкг, предпочтительно 15-45 мкг (антигенный белок) реконструированных вирусных мембран настоящего изобретения. Для перорального применения активный ингредиент можно вводить в виде жидкой лекарственной формы, такой как эликсиры, сиропы и суспензии. Жидкая лекарственная форма для перорального введения может содержать краситель и ароматизатор для повышения переносимости у больного. Способы приготовления композиций, вводимых парентерально, перорально или интраназально, общеизвестны и подробно описаны в различных источниках, включая Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., Mack Publishing, Easton, PA, 1980), которая с этой целью полностью включена посредством ссылки. В другом аспекте изобретение относится к способу вакцинации против заболевания, или для профилактики или лечения инфекционного заболевания или опухоли путем введения субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей реконструированные вирусные мембраны согласно изобретению, с целью профилактики или лечения. Изобретение также относится к реконструированным вирусным мембранам согласно изобретению, которые используют в качестве лекарственного средства, предпочтительно в качестве лекарственного средства для вакцинации против заболевания, или для профилактики или лечения инфекционного заболевания или опухоли. Изобретение дополнительно относится к применению реконструированных вирусных мембран согласно изобретению с целью производства лекарственных средств для вакцинации против заболевания, или для профилактики или лечения инфекционного заболевания или опухоли.
Описание фигур
Фиг.1. Схематическое изображение градиента сахарозы, используемого для анализа физической ассоциации между липопептидами, белком и липидами содержащих адъювант реконструированных вирусных мембран.
Фиг.2. Двумерная тонкослойная хроматограмма липидов и липопептидов, выделенных с 10/40% поверхности раздела на градиентах, представленных на фиг.1. Панель A: контроль, реконструированные вирусные мембраны без липопептида; показаны нингидрин-реактивные природные вирусные липиды. Панель B: реконструированные вирусные мембраны, содержащие липопептиды; показаны природные вирусные липиды, химически активные с нингидрином и дополнительно нингидрин-реактивные липопептиды. Полученные хроматограммы являются двумерными: система 1 - CHCl3/метанол/H2O в соотношении 65/25/4; система 2 - N-бутанол/уксусная кислота/вода в соотношении 2/1/1; окрашены путем создания производных красителя нингидрина. Участки, заполненные образцом, маркированы «множественными пятнами».
Фиг.3. Электронная микрография реконструированных вирусных мембран, содержащих липопептиды в соответствии с настоящим изобретением; негатив окрашен с помощью фосфомолибдата аммония. Мембраны имеют диаметр около 100-200 нм.
Фиг.4. Титры IgA в носу и легком после двух интраназальных вакцинаций A/Panama/2007/99, раздельно в течение 14 дней; титры определены через 3 недели после последней вакцинации. Пре-иммунные титры были вычтены. Использованные вакцины представляли собой стандартную коммерческую субъединичную вакцину, виросомы, приготовленные в соответствии с патентом EP 0538437, или реконструированные вирусные мембраны, содержащие липопептиды, в соответствии с настоящим изобретением. Размер группы - 10 мышей.
Фиг.5. Титры IgG в крови после двух интраназальных вакцинаций, раздельно в течение 14 дней; титры определены через 3 недели после последней вакцинации. Пре-иммунные титры были вычтены. Использованные вакцины представляли собой виросомы, приготовленные в соответствии с патентом EP 0538437, или реконструированные вирусные мембраны, содержащие липопептиды, в соответствии с настоящим изобретением. Для вакцинации 4 групп по 10 мышей использовали 4 различных вакцинных препарата, каждый из которых содержал антиген одного вирусного штамма.
Фиг.6. Активность слияния реконструированных вирусных мембран в соответствии с изобретением. Реконструированные вирусные мембраны, содержащие пирен-фосфолипид, смешивали с тенями эритроцитов, слияние измеряли в соответствии с протоколом.
Фиг.7. Титры IgG в крови после однократной внутримышечной вакцинации; титры определены через 3 недели после последней вакцинации. Пре-иммунные титры были вычтены. Использованные вакцины представляли собой виросомы, приготовленные в соответствии с патентом EP 0538437, или реконструированные вирусные мембраны, содержащие липопептиды, в соответствии с настоящим изобретением. Размер группы - 10 мышей.
Фиг.8. Анализ градиента равновесной плотности сахарозы реконструированных вирусных мембран штамма A/Wyoming вируса показан отдельным пиком плотности реконструированного материала; липопептиды выделены из фракций 4, 5 и 6.
Фиг.9. Титры IgG в крови после интраназальных вакцинаций в дни 0 и 14 в группе из 10 мышей. Антиген из штамма A/Panama/2007/99 вируса, мембраны содержат N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)3-пролин.
Фиг.10. Титры IgA в носу и легком в группе из 10 мышей после двух интраназальных вакцинаций реконструированными мембранами штамма A/Panama/2007/99, содержащими липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)3-пролина, раздельно в течение 14 дней; титры определены через 3 недели после последней вакцинации. Пре-иммунные титры были вычтены.
Примеры
Пример 1. Получение реконструированной вирусной мембраны, содержащей липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)
3
-лизина, природные липиды вируса гриппа и мембранные белки вируса гриппа
Вирус гриппа размножали путем выращивания вируса, полученного из Всемирного центра гриппа или из Американской типовой коллекции тканевых культур (ATCC), с использованием общеизвестных способов, например, путем выращивания вируса на оплодотворенных яйцеклетках или в культивируемых клетках. Вирус затем очищали, предпочтительно посредством ультрацентрифугирования, дифференциального или в градиенте плотности, или путем их комбинации с последующей инактивацией β-пропиолактоном или формальдегидом в соответствии с общепринятыми стандартными процедурами.
Очищенный и концентрированный вирус гриппа A/Panama/2007/9 (1500 нМ фосфолипида) инкубировали с 1 мл детергента окта(этиленгликоль)-н-додецилмоноэфир (C12E8) (Boehringer, Mannheim, Germany) в концентрации 100 мМ (вышеуказанная концентрация детергента является необходимой критической мицеллярной концентрацией) в течение 10 мин при 4°C в изотоническом буфере при нейтральном pH: 145 мМ NaCl, 2,5 мМ HEPES, 1 мл ЭДТА, pH 7,4 (Буфер A). Затем нуклеокапсидные и матриксные белки вируса удаляли путем центрифугирования при 100000 × g в течение 30 мин при 4°C. После центрифугирования осадок в пробирке отбрасывали, супернатант смешивали с сухим липопептидом в соотношении 0,5 мг липопептида на 750 нМ вирусного липида и перемешивали до растворения липопептида. Затем на каждые 350 мкл смеси добавляли 128 мг BioBeads SM-2 (Bio-Rad) и детергент удаляли путем энергичного встряхивания смеси и бусин в течение 1 ч. Жидкость добавляли к другой порции из 64 мг этих бусин и встряхивали в течение 10 мин. Полученный мутный супернатант содержал реконструированные вирусные мембраны и мог быть использован для вакцинации без дальнейшей очистки или после очистки.
Для анализа физической ассоциации между липидами, липопептидами и вирусными белками мутную смесь, содержащую реконструированные вирусные мембраны, наслаивали на верхнюю часть прерывистого сахарозного градиента, содержащего подушку из 1 мл 40% сахарозы (масса/об.) в буфере A и 4 мл верхнего слоя 10% сахарозы (масса/об.) в буфере A (как изображено на фиг.1). Градиенты центрифугировали 90 мин при 100000 × gmax, образцы собирали из 40% сахарозной подушки, с поверхности раздела между 40% подушкой и 10% верхним слоем и из верхнего слоя. В процессе центрифугирования в этих градиентах невключенные вирусные белки перемещались в подушку, липиды и липопетиды, не представленные в реконструированных мембранах, передвигались в верхнюю часть градиента, а реконструированные вирусные мембраны могли находиться на поверхности раздела (Фиг.1). Примерно 15% вирусных липидов обнаружено около верхней части градиента, 6% липопептида, 85% вирусного липида, 94% липопептида и 60% вирусного мембранного белка, наслоенных на градиент, ассоциированы с полосой реконструированной вирусной мембраны.
Для анализа липидного состава полосы 2 образца реконструированных вирусных мембран, приготовленных в соответствии с вышеуказанным протоколом, или в отсутствие добавленного липопептида, выделяли с 40/10% поверхности раздела сахарозного градиента, как описано выше, и экстрагировали CHCl3/MeoH по Folch et al. (1957). Экстрагированные липиды и липопептиды анализировали с помощью двухмерной тонкослойной хроматографии, используя CHCl3/метанол/H2O в соотношении 65/25/4 в качестве первого элюента, с последующим применением N-бутанол/уксусная кислота/вода в соотношении 2/1/1 и окрашиванием путем создания производных красителя нингидрина (чашку опрыскивали 2% нингидрином в N-бутаноле и инкубировали при 80°C в течение 10 мин). Результаты, представленные на фиг.2, четко демонстрируют физическую ассоциацию природных липидов вируса с липопептидами.
Электронные микрографии виросом, выделенных из полосы градиента, представлены на фиг.3. Четко видны частицы вирусного размера, содержащие вирусные антигенные спайки, характерные для вирусов гриппа.
Пример 2. Эксперименты по интраназальной иммунизации с помощью реконструированных вирусных мембран, содержащих липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)
3
-лизина, природные липиды вируса гриппа и мембранные белки вируса гриппа
Вакцинацию путем интраназального введения реконструированной вирусной мембраны, содержащей гемагглютинин вируса гриппа и N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин, сравнивали с интраназальным введением стандартной субъединичной вакцины или виросомной вакцины, приготовленной в соответствии с патентом EP 0538437. Мышей Balb/C иммунизировали путем интраназального вливания по каплям 10 мкл антигена, содержащего 5 мкг белков вируса гриппа, в дни 0 и 14. Образцы крови брали в дни 0, 14 и 35, смывы из носа и легких собирали на 35 день. Сравнивали несколько разных штаммов вируса гриппа. Каждую мышь иммунизировали одним типом штамма. Смывы из легких получали путем инъекции 1,5 мл PBS (фосфатно-солевой буферный раствор) в легкие с помощью шприца в трахею с последующей аспирацией 1 мл жидкости. Назальные смывы собирали путем инъекции 0,5 мл PBS в обратном направлении через трахею в носоглотку, лаважную жидкость собирали в ноздрях. Инородные вещества и клеточные компоненты немедленно удаляли из лаважных жидкостей путем центрифугирования, добавляли смесь ингибиторов протеазы (хемстатин, антипаин, леупептин, пепстатин, в конечной концентрации 1 мкг/мл из концентрированного в 1000 раз маточного раствора в сухом ДМСО), после чего образцы замораживали в жидком азоте и хранили при -20°C до использования. Образцы анализировали посредством ELISA (иммуноферментный твердофазный анализ) с использованием IgA носа и легкого и IgG против белков вируса гриппа. Результаты представлены на фиг.4 и 5 соответственно.
Пример 3. Активность слияния реконструированной вирусной мембраны, содержащей липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)
3
-лизина, природные липиды вируса гриппа, меченный пиреном фосфатидилхолин и мембранные белки вируса гриппа
Очищенный и концентрированный вирус гриппа A/Panama/2007/9 (1500 нМ фосфолипида) инкубировали с 1 мл окта(этиленгликоль)-н-додецилмоноэфира (C12E8) в концентрации 100 мМ в течение 10 мин при 4°C в изотоническом буфере при нейтральном pH: 145 мМ NaCl, 2,5 мМ HEPES, 1 мл ЭДТА, pH 7,4 (Буфер A). Затем путем центрифугирования при 100000 × g в течение 30 мин при 4°C удаляли нуклеокапсидный и матриксный белок вируса. После центрифугирования осадок в пробирке отбрасывали. Супернатант смешивали с сухим липопептидом и пирен-меченным фосфолипидом в соотношении 0,5 мг липопептида и 150 нМ 1-гексадеканоил-2-(1-пирендеканоил)-sn-глицеро-3-фосфатидилхолина на 750 нМ вирусного липида и перемешивали до растворения липопептида и пирен-меченного фосфолипида. Затем 128 мг BioBeads SM-2 (Bio-Rad) добавляли на каждые 350 мкл смеси и детергент удаляли путем энергичного встряхивания смеси и бусин в течение 1 ч. Жидкость затем добавляли к другим 64 мг этих бусин и встряхивали в течение 10 мин.
Для измерения мембранного слияния адресные мембраны теней эритроцитов готовили из старых концентратов эритроцитов (кровь типа B, резус-фактор отрицательный) по способу Steck и Kant (1974). Слияние измеряли при концентрации 0,06 М фосфолипида теней эритроцитов и 1 мкМ виросомного фосфолипида в буфере, содержащем 140 мМ NaCl, 15 мМ цитрата натрия при pH 5,1. Липидную смесь регулировали путем разбавления PyrPC. Для этой цели измеряли флуоресценцию пиренового эксимера, возбуждение и эмиссию при длине волны 345 нм (полоса пропускания 2 нм) и 490 нм (полоса пропускания 16 нм), соответственно, в присутствии 475 нм светофильтра, отфильтровывающего 475 нм в эмиссионном луче. Фон флуоресценции определяли путем бесконечного разбавления зонда, который получали путем добавления 35 мкл 0,2 М C12E8. Изменения уровня флуоресценции превращали в степень слияния (f) путем расчета f=100×(E0-E)/(E0-Ey), где E - флуоресценция эксимера в любой период времени, E0 и Ey - интенсивность флуоресценции при 490 нм в период времени 0 и после добавления C12E8, соответственно, с поправкой на эффект разбавления. Результаты, представленные на фиг.6, четко указывают на сильную активность слияния реконструированной мембраны.
Пример 4. Эксперименты по внутримышечной иммунизации с помощью реконструированных вирусных мембран, содержащих липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)
3
-лизина, природные липиды вируса гриппа и мембранные белки вируса гриппа, по сравнению с иммунизацией виросомами, приготовленными в соответствии с EP 0538437
25 мкл гриппозного антигена (5 мкг белка) инъецировали в мышцу задней ноги мыши Balb/C в день 0. Образцы крови брали в дни 0 и 14. Для вакцинного препарата использовали штамм A/Panama/2007/99 вируса. Образцы анализировали с помощью IgG ELISA против гриппозного гемагглютинина. Результаты показаны на фиг.7.
Пример 5. Физическая характеристика функционально реконструированных вирусных мембран, содержащих мембранные белки A/Wyoming, с помощью центрифугирования в градиенте равновесной плотности
Реконструированные мембраны вирусных мембран, содержащие липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина, готовили, как описано в примере 1, наслаивали на верхнюю часть 10-60% (масса/об.) сахарозного градиента и центрифугировали при 50000 об/мин на роторе Beckman SW55 в течение 16 ч. В этом типе градиента липиды и липопептиды остаются в верхней части, тогда как белки мигрируют в самую нижнюю часть фракции. Образцы, выделенные из градиента, анализировали с помощью рефрактометра с целью определения белка и фосфолипида. Результаты, представленные на фиг.8, по существу показывают, что, судя по единственному пику, весь вирусный белок и большинство вирусного липида совместно очищены. Липопептиды были выделены только из фракций 4, 5 и 6. Эти данные указывают на то, что реконструированные мембраны представляют собой частицы с плотностью около 1,12 г/мл.
Пример 6. Эксперименты по интраназальной иммунизации с помощью реконструированных вирусных мембран, содержащих липопептид N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)
3
-пролина, природные липиды вируса гриппа и мембранные белки вируса гриппа
Мембраны готовили из штамма A/Panama/2007/99, как описано в примере 1, и использовали для иммунизации мышей, как описано в примере 2. Титры ELISA IgG в сыворотке и титры IgA в носу и легком показаны на фиг.9 и 10 соответственно. Это свидетельствует о том, что лизиновые и пролиновые производные N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил- вызывают приблизительно эквивалентное усиление иммунного ответа.
Таблица 1 Липопептиды, особенно пригодные для получения реконструированных вирусных мембран, в соответствии с изобретением |
|
N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серин | |
S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серин | |
N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
N-пальмитоил-S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
N-пальмитоил-S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
N-пальмитоил-S-2,3(пальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
N-пальмитоил-S-2,3-гидрокси-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизин | |
N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)3-пролин | |
N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(глутаминил)3-глутаминовой кислоты |
Ссылки
Arkema, A. (2000) Vaccine 18: 1327-1333
Böttcher C.J.F, Van Gent C.M., Fries C J. (1961) Anal Chim Acta 24: 203-204
Bungener, L (2002) Vaccine 20: 323-338
Cox J.C., Sjolander A., Barr I.G. (1998) Adv Drug Delivery 32: 247-271
Dinarello, C.A. (1978) J. Infect. Dis. 138: 760-767
Folch, H. et al. (1957) J. Biol. Chem 226, 497-509
Glück, R, et al., (1994) J Infect Dis 181: 1129-1132
Hernandez, L.D: et al., (1996) Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 12: 627-661
Janeway, C. et al. (2001) Immunobiology, 5th edition, Garland Publishing, New York
Kohashi, O. et al. (1980) Infect Immun. 20: 70-75
Kotani, S. et al., (1976) Biken J. 19: 9-13
Morein et al. (1984) Nature 308: 457-460
Ogra PL, Faden H, Welliver RC (2001) Clin Microbiol Rev 14: 430-445
Powell, M.F. et al., (1988) 5: 528-532
Ribi, E.E. (1979) Cancer Res, 39: 4756-4759
Steck, T.L. and Kant, J.A. (1974) Meth. Enzym. 31: 172-180
Stegmann T., Morselt H.W.M., Booy F.P., Van Breemen J.F.L., Scherphof G., Wilschut J. (1987) EMBO J 6: 2651-2659
Weijzen S, et al., (2002) J Immunol 169: 4237-4238
Claims (13)
1. Реконструированная вирусная мембрана, липидный бислой которой содержит слитый белок вируса, амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген, где
(a) липидный бислой имеет липидный состав, совместимый со слиянием, индуцированным слитым белком вирусной мембраны с мембраной клетки, которая может быть слита с вирусом, из которого получен слитый белок;
(b) слитый белок и амфифильный адъювант взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя; и
(c) слитый белок, амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген не являются ковалентно связанными, где амфифильный адъювант представляет собой липопептид.
(a) липидный бислой имеет липидный состав, совместимый со слиянием, индуцированным слитым белком вирусной мембраны с мембраной клетки, которая может быть слита с вирусом, из которого получен слитый белок;
(b) слитый белок и амфифильный адъювант взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя; и
(c) слитый белок, амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген не являются ковалентно связанными, где амфифильный адъювант представляет собой липопептид.
2. Реконструированная вирусная мембрана по п.1, где липидный бислой содержит природные липиды вирусной мембраны.
3. Реконструированная вирусная мембрана по п.1 или 2, где амфифильный адъювант является лигандом Toll-подобного рецептора млекопитающих.
4. Реконструированная вирусная мембрана по п.1, где липопептид выбран из группы, состоящей из N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серина;
S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серина;
N-пальмитоил-S-2,3 (биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серин-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-3(пальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина и N-пальмитоил-S-2,3-гидрокси-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)3-пролина; N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(глутаминил)3-глутаминовой кислоты.
S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серина;
N-пальмитоил-S-2,3 (биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(бисолеоилокси)-пропил-цистеинил-серил-серин-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; S-2,3(бисмиристоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-3(пальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина и N-пальмитоил-S-2,3-гидрокси-пропил-цистеинил-серил-(лизил)3-лизина; N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(пролил)3-пролина; N-пальмитоил-S-2,3(биспальмитоилокси)-пропил-цистеинил-серил-(глутаминил)3-глутаминовой кислоты.
5. Реконструированная вирусная мембрана по п.1, где антигеном является интегральный мембранный белок.
6. Реконструированная вирусная мембрана по п.1, где антигеном является вирусный антиген.
7. Реконструированная вирусная мембрана по п.6, где антиген получен из вируса гриппа.
8. Реконструированная вирусная мембрана по п.7, где антигеном является гемагглютинин (НА), нейраминидаза (NA) или белок М2.
9. Реконструированная вирусная мембрана по п.6, где антиген получен из вируса, выбранного из группы, состоящей из Retroviridae, рубеллавируса, Paramyxoviridae, Flaviviridae, Herpesviridae, Bunyaviridae, Arenaviridae, Hantaviridae, Coronaviridae, Papovaviridae, Rhabdoviridae, Alphaviridae, Arteriviridae, Filoviridae, Arenaviridae, Poxviridae и вируса африканской лихорадки свиней.
10. Реконструированная вирусная мембрана по п.1, где антиген получен из паразита, бактерии, гриба, дрожжей, или где антиген является опухолеспецифичным антигеном.
11. Способ получения реконструированной вирусной мембраны, включающий в себя следующие стадии:
(а) растворение вируса в детергенте;
(b) удаление вирусного генетического материала и коровых белков;
(c) смешивание амфифильного адъюванта, вирусного слитого белка, необязательно, дополнительного антигена и липидов в растворе, содержащем детергент;
(d) снижение концентрации детергента в условиях, обеспечивающих реконструирование вирусной мембраны, содержащей липидный бислой, в которой амфифильный адъювант и вирусный слитый белок взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя, где амфифильный адъювант и вирусный слитый белок являются нековалентно связанными, где амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген являются нековалентно связанными, и где реконструированная вирусная мембрана проявляет активность слитой мембраны;
(e) необязательно, очистка реконструированной вирусной мембраны; и
(f) необязательно, введение реконструированной вирусной мембраны в состав фармацевтической композиции,
где амфифильный адъювант представляет собой липопептид.
(а) растворение вируса в детергенте;
(b) удаление вирусного генетического материала и коровых белков;
(c) смешивание амфифильного адъюванта, вирусного слитого белка, необязательно, дополнительного антигена и липидов в растворе, содержащем детергент;
(d) снижение концентрации детергента в условиях, обеспечивающих реконструирование вирусной мембраны, содержащей липидный бислой, в которой амфифильный адъювант и вирусный слитый белок взаимодействуют с гидрофобной внутренней частью липидного бислоя, где амфифильный адъювант и вирусный слитый белок являются нековалентно связанными, где амфифильный адъювант и, необязательно, дополнительный антиген являются нековалентно связанными, и где реконструированная вирусная мембрана проявляет активность слитой мембраны;
(e) необязательно, очистка реконструированной вирусной мембраны; и
(f) необязательно, введение реконструированной вирусной мембраны в состав фармацевтической композиции,
где амфифильный адъювант представляет собой липопептид.
12. Фармацевтическая композиция для вакцинации против патогена или опухоли, причем композиция содержит реконструированную вирусную мембрану по любому из пп.1-10 и фармацевтически приемлемый носитель.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, пригодная для интраназального, перорального, или парентерального введения.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NLPCT/NL03/00450 | 2003-06-19 | ||
NL0300450 | 2003-06-19 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2006101394A RU2006101394A (ru) | 2006-06-10 |
RU2348428C2 true RU2348428C2 (ru) | 2009-03-10 |
Family
ID=33550371
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006101394/15A RU2348428C2 (ru) | 2003-06-19 | 2004-06-18 | Функционально реконструированные вирусные мембраны, содержащие адъювант |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7618641B2 (ru) |
EP (2) | EP1633395B1 (ru) |
JP (1) | JP4685005B2 (ru) |
KR (1) | KR101225199B1 (ru) |
CN (1) | CN100556454C (ru) |
AR (1) | AR056245A1 (ru) |
AU (1) | AU2004246974B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0411519A (ru) |
CA (1) | CA2527735C (ru) |
DK (2) | DK2368576T3 (ru) |
ES (2) | ES2390454T3 (ru) |
IL (1) | IL172584A (ru) |
MX (1) | MXPA05013929A (ru) |
NO (1) | NO20055934L (ru) |
PL (2) | PL1633395T3 (ru) |
RU (1) | RU2348428C2 (ru) |
TW (1) | TWI329130B (ru) |
UA (1) | UA87269C2 (ru) |
WO (1) | WO2004110486A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200509907B (ru) |
Families Citing this family (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090017061A1 (en) | 2005-01-18 | 2009-01-15 | Bernard Jan Appelmelk | Mycobacteria with Mannose Cap-Deficient Lipoarabinomannan |
AR059972A1 (es) * | 2006-03-22 | 2008-05-14 | Solvay Pharm Bv | Administracion intranasal o inhalacional de virosomas |
US8535683B2 (en) | 2006-03-22 | 2013-09-17 | Abbott Biologicals B.V. | Intranasal or inhalational administration of virosomes |
TWI397419B (zh) * | 2006-03-22 | 2013-06-01 | Abbott Biologicals Bv | 病毒顆粒的鼻內或吸入給藥 |
US8916164B2 (en) * | 2007-08-29 | 2014-12-23 | Abivax | Methods of enhancing adjuvaticity of vaccine compositions |
EP2058002A1 (en) | 2007-10-31 | 2009-05-13 | Bestewil Holding B.V. | Reconstituted respiratory syncytial virus membranes and use as respiratory syncytial virus vaccine |
MX2011007703A (es) | 2009-02-06 | 2011-09-28 | Mymetics Corp | Antigenos gp41 novedosos. |
AU2010210073B2 (en) | 2009-02-06 | 2016-06-09 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Splitting gp41 |
CA2792938C (en) | 2010-03-23 | 2018-07-31 | Irm Llc | Compounds (cystein based lipopeptides) and compositions as tlr2 agonists used for treating infections, inflammations, respiratory diseases etc. |
WO2011128720A1 (en) | 2010-04-14 | 2011-10-20 | Mymetics Corporation | Trans-activator of transcription protein |
BR112013004389A2 (pt) | 2010-08-27 | 2016-05-17 | Pantarhei Bioscience Bv | método imunoterapêutico para tratamento do câncer de próstata |
WO2012041503A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-04-05 | Franvax S.R.L. | Generation of virosome particles |
WO2015000831A1 (en) * | 2013-07-02 | 2015-01-08 | Crucell Holland B.V. | Method for preparing virosomes |
NZ730357A (en) * | 2014-09-12 | 2021-12-24 | Bestewil Holding Bv | Methods for providing adjuvanted virosomes and adjuvanted virosomes obtainable thereby |
WO2016039620A2 (en) | 2014-09-12 | 2016-03-17 | Bestewil Holding B.V. | Respiratory syncytial virus virosomes |
WO2016080830A2 (en) | 2014-11-18 | 2016-05-26 | Pantarhei Bioscience B.V. | Immunotherapeutic method for treating pancreatic cancer |
CA3080835A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Pantarhei Bioscience B.V. | Immunotherapeutic methods for treating and/or preventing lung cancer |
EP3847187A1 (en) | 2018-09-03 | 2021-07-14 | Laboratoire HRA-Pharma | Zp3 fragments in immunotherapy of ovarian cancer |
US11523988B2 (en) | 2018-11-29 | 2022-12-13 | Catalent U.K. Swindon Zydis Limited | Oral dispersible vaccine comprising virosomes |
US20200188511A1 (en) | 2018-12-12 | 2020-06-18 | Anergis S.A. | Methods of improving efficacy of allergy vaccines |
WO2021207303A1 (en) * | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alsatech, Inc. | Immune stimulation against coronavirus infections |
WO2023066923A1 (en) | 2021-10-19 | 2023-04-27 | Rahman Nafis | Male contraception |
WO2023237726A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Pantarhei Oncology B.V. | An intracellular tumor-specific variant of human zona pellucida glycoprotein 3 and nucleic acids coding therefor for use in the treatment of cancer |
WO2024088138A1 (zh) * | 2022-10-25 | 2024-05-02 | 宁波明亦生物科技有限公司 | 质膜透化灭活口服疫苗 |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4542212A (en) | 1975-10-14 | 1985-09-17 | Institut Pasteur | Phosphorylated 3-glyceryl-esters of glucose |
JPS5929931B2 (ja) * | 1980-12-09 | 1984-07-24 | オムロン株式会社 | 安全スイツチ |
SE8205892D0 (sv) | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
SE8405493D0 (sv) | 1984-11-01 | 1984-11-01 | Bror Morein | Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel |
JPH0688911B2 (ja) | 1985-06-06 | 1994-11-09 | 国立予防衛生研究所長 | インフルエンザワクチン及びその製造方法 |
DE3775783D1 (de) | 1986-01-14 | 1992-02-20 | Nederlanden Staat | Verfahren zur herstellung immunologischer komplexe und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzung. |
NZ224422A (en) | 1987-05-05 | 1990-11-27 | Molecular Eng Ass | Composition adapted for intranasal immunisation against viral infection comprising a glycoprotein complexed with a lipid |
NZ240369A (en) | 1990-10-30 | 1993-09-27 | Daiichi Seiyaku Co | Muramyl dipeptide derivatives and vaccine compositions |
AU655823B2 (en) | 1991-05-08 | 1995-01-12 | Crucell Switzerland Ag | Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them |
US20030113347A1 (en) | 1991-05-08 | 2003-06-19 | Schweiz. Serum- & Impfinstitut Bern | Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them |
US5879685A (en) | 1991-05-08 | 1999-03-09 | Schweiz, Serum- & Impfinstitut Bern | Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them |
US5936076A (en) | 1991-08-29 | 1999-08-10 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | αgalactosylceramide derivatives |
ATE273320T1 (de) * | 1996-04-11 | 2004-08-15 | Univ British Columbia | Fusogene liposomen |
ATE331530T1 (de) | 2000-02-15 | 2006-07-15 | Id Biomedical Corp Quebec | Proteasom-influenzavirus-impfstoffzusammensetzu g |
GB0103170D0 (en) | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
US20030092145A1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-05-15 | Vic Jira | Viral vaccine composition, process, and methods of use |
ATE494909T1 (de) * | 2002-11-20 | 2011-01-15 | Bestewil Holding Bv | Zusammensetzungen mit antigen-komplexen,verfahren zu ihrer herstellung und verfahren zur verwendung derantigen-komplexe zur vakzinierung |
US7491395B2 (en) * | 2002-11-20 | 2009-02-17 | Bestewil Holding B.V. | Compositions comprising antigen-complexes, method of making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination |
-
2004
- 2004-06-16 AR ARP040102097A patent/AR056245A1/es unknown
- 2004-06-16 TW TW093117276A patent/TWI329130B/zh not_active IP Right Cessation
- 2004-06-18 DK DK10180937.4T patent/DK2368576T3/en active
- 2004-06-18 BR BRPI0411519-8A patent/BRPI0411519A/pt not_active Application Discontinuation
- 2004-06-18 UA UAA200512191A patent/UA87269C2/ru unknown
- 2004-06-18 ES ES04748669T patent/ES2390454T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-18 PL PL04748669T patent/PL1633395T3/pl unknown
- 2004-06-18 EP EP04748669A patent/EP1633395B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-18 JP JP2006516989A patent/JP4685005B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-06-18 CA CA2527735A patent/CA2527735C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-18 WO PCT/NL2004/000437 patent/WO2004110486A1/en active Application Filing
- 2004-06-18 KR KR1020057024393A patent/KR101225199B1/ko active IP Right Grant
- 2004-06-18 US US10/560,594 patent/US7618641B2/en active Active
- 2004-06-18 MX MXPA05013929A patent/MXPA05013929A/es active IP Right Grant
- 2004-06-18 AU AU2004246974A patent/AU2004246974B2/en not_active Ceased
- 2004-06-18 PL PL10180937T patent/PL2368576T3/pl unknown
- 2004-06-18 EP EP10180937.4A patent/EP2368576B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-18 DK DK04748669.1T patent/DK1633395T3/da active
- 2004-06-18 ES ES10180937.4T patent/ES2536689T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-06-18 RU RU2006101394/15A patent/RU2348428C2/ru active
- 2004-06-18 CN CNB2004800167589A patent/CN100556454C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-12-06 ZA ZA200509907A patent/ZA200509907B/xx unknown
- 2005-12-14 IL IL172584A patent/IL172584A/en unknown
- 2005-12-14 NO NO20055934A patent/NO20055934L/no not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
DIJKSTRA J. et al., Activation of murine lymphocytes by lipopolysaccharide incorporated in fusogenic, reconstituted influenza virus envelopes (virosomes), J. Immunol., 1996 Aug 1; 157(3): 1028-36. FERNANDES ISABELLE et al., Synthetic lipopeptides incorporated in liposomes: In vitro stimulation of the proliferation of murine splenocytes in vivo induction of an immune response against a peptide antigen, Molecular Immunology, June 1997; 34(8-9); 569-76 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2348428C2 (ru) | Функционально реконструированные вирусные мембраны, содержащие адъювант | |
JP4535211B2 (ja) | コクリエート送達ビヒクル | |
US4196191A (en) | Biological preparations | |
JP6466571B2 (ja) | アジュバント添加ビロソームを提供する方法およびそれによって得られるアジュバント添加ビロソーム | |
EP2058002A1 (en) | Reconstituted respiratory syncytial virus membranes and use as respiratory syncytial virus vaccine | |
JP2008500984A (ja) | ヴィロソームとサポニンアジュバントを含むワクチン組成物 | |
US4148876A (en) | Biological preparations | |
US7491395B2 (en) | Compositions comprising antigen-complexes, method of making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination | |
JP2023522592A (ja) | 抗原性部位とリポソーム調製物とを含む免疫原性組成物、当該組成物を作製する方法、薬物として使用するための、特にワクチンとして使用するための、当該組成物 | |
EP1666056A1 (en) | Cancer vaccine vesicles | |
ES2358900T3 (es) | Composiciones que comprenden complejos de antígenos, procedimiento para su preparación así como precedimientos de utilización de los complejos de antígenos para la vacunación. |