RU2346004C2 - Экспонирование т-клеточных рецепторов - Google Patents

Экспонирование т-клеточных рецепторов Download PDF

Info

Publication number
RU2346004C2
RU2346004C2 RU2005117971/13A RU2005117971A RU2346004C2 RU 2346004 C2 RU2346004 C2 RU 2346004C2 RU 2005117971/13 A RU2005117971/13 A RU 2005117971/13A RU 2005117971 A RU2005117971 A RU 2005117971A RU 2346004 C2 RU2346004 C2 RU 2346004C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tcr
polypeptide
domain
exon
dtcr
Prior art date
Application number
RU2005117971/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2005117971A (ru
Inventor
Бент Карстен ЯКОБСЕН (GB)
Бент Карстен Якобсен
Торбен Бент АНДЕРСЕН (GB)
Торбен Бент АНДЕРСЕН
Питер Имон МОЛЛОЙ (GB)
Питер Имон МОЛЛОЙ
Йи ЛИ (GB)
Йи Ли
Джонатан Майкл БОУЛТЕР (GB)
Джонатан Майкл БОУЛТЕР
Original Assignee
Эвидекс Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0226227A external-priority patent/GB0226227D0/en
Priority claimed from GB0301814A external-priority patent/GB0301814D0/en
Priority claimed from GB0316356A external-priority patent/GB0316356D0/en
Application filed by Эвидекс Лимитед filed Critical Эвидекс Лимитед
Publication of RU2005117971A publication Critical patent/RU2005117971A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2346004C2 publication Critical patent/RU2346004C2/ru

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии. Описана фаговая частица, экспонирующая на своей поверхности Т-клеточный рецептор (TCR), представляющий собой scTCR человека. Экспонированная полипептидная пара dTCR или экспонированный полипептид scTCR включает последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, а дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки указанных последовательностей цепей константного Ig домена, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками. Представлена библиотека полипептидных пар мутированных TCR или полипептидов scTCR, экспонированных на описанной фаговой частице. Представлена нуклеиновая кислота, кодирующая описанную фаговую частицу. Раскрыт способ идентификации TCRs. Изобретение может использоваться для создания разнообразных библиотек TCR для идентификации высокоаффинных TCRs. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 63 ил., 2 табл.

Description

Текст описания приведен в факсимильном виде.
Figure 00000001
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
Figure 00000005
Figure 00000006
Figure 00000007
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000074
Figure 00000075
Figure 00000076
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
Figure 00000083
Figure 00000084
Figure 00000085
Figure 00000086
Figure 00000087

Claims (17)

1. Фаговая частица, экспонирующая на своей поверхности Т-клеточный рецептор (TCR), характеризующаяся тем, что TCR представляет собой scTCR человека, полипептидную пару dTCR человека, или полипептидную пару dTCR не человека, а также характеризующаяся тем, что экспонированная полипептидная пара dTCR или экспонированный полипептид scTCR включает последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR, а дисульфидная связь связывает аминокислотные остатки указанных последовательностей цепей константного Ig домена, где указанная дисульфидная связь находится между цистеиновыми остатками, на которые замещены
Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Ser 77 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Tyr 10 экзона 1 TRAC*01 и Ser 17 экзона 1 TRB1*P01 или TRBC2*01, или Thr 45 экзона 1 TRAC*01 и Asp 59 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или Ser 15 экзона 1 TRAC*01 и Glu 15 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения.
2. Фаговая частица по п.1, у которой или
а) С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец scTCR полипептида связан пептидной связью с остатком, экспонированным на поверхности фаговой частицы, или
б) С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR или С-конец scTCR полипептида связан дисульфидной связью с цистеиновым остатком, экспонированным на поверхности фаговой частицы.
3. Фаговая частица по п.1, экспонирующая на своей поверхности полипептидную пару dTCR, которая включает:
первый полипептид, в котором последовательность α или β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности а цепи внеклеточного константного домена TCR, и
второй полипептид, в котором последовательность α или β цепи вариабельного домена TCR, слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR.
4. Фаговая частица по п.1, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
5. Фаговая частица по п.2, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
6. Фаговая частица по п.3, где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
7. Фаговая частица по п.1, где в последовательностях цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, замещены нецистеиновыми остатками.
8. Фаговая частица по п.1, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу, экспонирующую на своей поверхности димерную полипептидную пару Т-клеточного рецептора (dTCR), причем указанная пара включает:
первый полипептид, в котором последовательность α цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности α цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, находящейся между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения, а С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR связан пептидной связью с белком оболочки фага.
9. Фаговая частица по п.1, которая представляет собой нитевидную фаговую частицу, экспонирующую на своей поверхности димерную полипептидную пару Т-клеточного рецептора (dTCR), причем указанная пара включает:
первый полипептид, в котором последовательность α цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности α цепи внеклеточного константного домена TCR, и второй полипептид, в котором последовательность β цепи вариабельного домена TCR слита с N-концом последовательности β цепи внеклеточного константного домена TCR, причем первый и второй полипептиды связаны дисульфидной связью, находящейся между цистеиновыми остатками, на которые замещены Thr 48 экзона 1 TRAC*01 и Ser 57 экзона 1 TRBC1*01 или TRBC2*01, или их эквиваленты нечеловеческого происхождения, а С-конец одного составляющего полипептидной пары dTCR связан пептидной связью с белком оболочки фага, и где последовательности α и β цепей внеклеточного константного Ig домена нативного TCR усечены на своих С-концах, соответствующих таковым нативных последовательностей, таким образом, что цистеиновые остатки, формирующие нативную межцепочечную дисульфидную связь, исключаются.
10. Библиотека полипептидных пар мутированных TCR или полипептидов scTCR, экспонированных на фаговых частицах по п.1.
11. Библиотека полипептидных пар мутированных dTCR, экспонированных на фаговых частицах dTCR по п.8.
11. Библиотека мутированных TCRs по п.10 или 11, в которой различия находятся в вариабельном домене или доменах dTCR или полипептидов scTCR.
12. Нуклеиновая кислота, кодирующая фаговую частицу по п.1.
13. Нуклеиновая кислота, кодирующая фаговую частицу по п.8.
15. Способ идентификации TCRs с характеристиками, выбираемыми из (i) усиленной экспрессируемости и/или усиленных характеристик (ii) связывания и/или (iii) стабильности, причем указанный способ заключается в том, что библиотека по п.10 подвергается: процессу отбора по указанным характеристикам с выделением фаговых частиц, экспонирующих TCR с указанными характеристиками, и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц и/или процессу скрининга, который измеряет указанные характеристики, идентифицируя те фаговые частицы, которые экспонируют TCR с желаемыми характеристиками, и выделяя эти фаговые частицы и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц.
16. Способ идентификации TCRs с характеристиками, выбираемыми из (i) усиленной экспрессируемости и/или усиленных характеристик (ii) связывания и/или (iii) стабильности, причем указанный способ заключается в том, что библиотека по п.11 подвергается: процессу отбора по указанным характеристикам, и выделением фаговых частиц, экспонирующих TCR с указанными характеристиками, и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц и/или процессу скрининга, который измеряет указанные характеристики, идентифицируя те фаговые частицы, которые экспонируют TCR с желаемыми характеристиками, и выделяя эти фаговые частицы и, необязательно, амплификацией для увеличения количества выделенных частиц.
17. Способ по п.15 или 16, в котором усиленной характеристикой является повышенная аффинность к TCR лиганду.
RU2005117971/13A 2002-11-09 2003-10-30 Экспонирование т-клеточных рецепторов RU2346004C2 (ru)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0226227.7 2002-11-09
GB0226227A GB0226227D0 (en) 2002-11-09 2002-11-09 Receptors
GB0301814.0 2003-01-25
GB0301814A GB0301814D0 (en) 2003-01-25 2003-01-25 Substances
GB0304067.2 2003-02-22
US46304603P 2003-04-16 2003-04-16
US60/463,046 2003-04-16
GB0311397.4 2003-05-16
GB0316356A GB0316356D0 (en) 2003-07-11 2003-07-11 Substances
GB0316356.5 2003-07-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2005117971A RU2005117971A (ru) 2006-03-20
RU2346004C2 true RU2346004C2 (ru) 2009-02-10

Family

ID=36117097

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2005117971/13A RU2346004C2 (ru) 2002-11-09 2003-10-30 Экспонирование т-клеточных рецепторов

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2346004C2 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2678421C2 (ru) * 2013-06-28 2019-01-28 Экс-Боди, Инк. Обнаружение антигена-мишени, фенотипический скрининг и его применение для идентификации специфичных эпитопов-мишеней клеток-мишеней
RU2777769C2 (ru) * 2013-06-28 2022-08-09 Экс-Боди, Инк. Обнаружение антигена-мишени, фенотипический скрининг и его применение для идентификации специфичных эпитопов-мишеней клеток-мишеней

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2678421C2 (ru) * 2013-06-28 2019-01-28 Экс-Боди, Инк. Обнаружение антигена-мишени, фенотипический скрининг и его применение для идентификации специфичных эпитопов-мишеней клеток-мишеней
US10370651B2 (en) 2013-06-28 2019-08-06 X-Body, Inc. Target antigen discovery, phenotypic screens and use thereof for identification of target cell specific target epitopes
RU2777769C2 (ru) * 2013-06-28 2022-08-09 Экс-Боди, Инк. Обнаружение антигена-мишени, фенотипический скрининг и его применение для идентификации специфичных эпитопов-мишеней клеток-мишеней
US11414784B2 (en) 2013-06-28 2022-08-16 X-Body, Inc. Target antigen discovery, phenotypic screens and use thereof for identification of target cell specific target epitopes

Also Published As

Publication number Publication date
RU2005117971A (ru) 2006-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zacharias et al. Partitioning of lipid-modified monomeric GFPs into membrane microdomains of live cells
ATE253111T1 (de) Für den capsaicin rezeptor kodierende nukleinsäuresequenzen und dem capsaicin rezeptor ähnliche polypeptide und ihre verwendung
JP2006525790A5 (ru)
JP2008506960A5 (ru)
ATE164395T1 (de) Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
ATE282631T1 (de) Sh3-bindender peptide von cortactin und deren verwendung
DK1012274T3 (da) Dödsdomæneholdig receptor-4 (DR4: dödsreceptor 4), medlem af TNF-receptorsuperfamilien og som binder til TRAIL (Apo-2L)
CA2265912A1 (en) Human bad polypeptides, encoding nucleic acids and methods of use
RU2007106050A (ru) Способ структурной характеристики рекомбинантного поликлонального белка или поликлональной клеточной линии
DK1133565T3 (da) Generering af specifikke bindingspartnere til (poly)peptider, som der kodes for af genomiske DNA-fragmenter eller EST'er
IS8016A (is) Prótín sem bindast viðtaka NOGO
DK2020604T3 (da) Ligand for den G-proteinkoblede receptor FPRL2
ATE335818T1 (de) Ligand polypeptide für hypophyse g-protein gekoppeltes rezeptor-protein, deren herstellung und anwendung
Durek et al. Interaction of synthetic human SLURP-1 with the nicotinic acetylcholine receptors
AR029642A1 (es) Una molecula de adn aislada que codifica un ligando denominado fhm que pertenece a la familia de supergenes de ligandos de tnf, polipeptidos de fhm, anticuerpos que conjugan fhm, materiales que integran dicha molecula y metodos de uso de dichas moleculas, metodos y compuestos farmaceuticos, metodos
DE69834643D1 (de) Adipozyten-spezifische protein homologe
ATE311443T1 (de) Methoden zur durchforstung (screenen) von proteinen
RU2346004C2 (ru) Экспонирование т-клеточных рецепторов
Fietzek et al. The covalent structure of collagen: Amino acid sequence of the N-terminal region of a2-CB5 from rat skin collagen
Milstein et al. Studies on the variability of immunoglobulin sequence
PT97355A (pt) Processo para a preparacao de polipeptidos recombinantes contendo uma sequencia de aminoacidos de uma proteina de celulas
DE69535921D1 (de) Alk-7 (aktivin-rezeptor-ähnliche kinase), ein serin/threonin kinase rezeptor
KR930701487A (ko) 식물성 독소 겔로닌의 단백질 구조물
ATE196775T1 (de) Gereinigte flt3 liganden von saeugentieren, agonisten und antagonisten davon
DE69417223D1 (de) Ein menschlicher t-zell rezeptor der protein g-gekoppelte rezeptor familie

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20140423