RU2322491C1 - Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений - Google Patents
Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений Download PDFInfo
- Publication number
- RU2322491C1 RU2322491C1 RU2006120501/13A RU2006120501A RU2322491C1 RU 2322491 C1 RU2322491 C1 RU 2322491C1 RU 2006120501/13 A RU2006120501/13 A RU 2006120501/13A RU 2006120501 A RU2006120501 A RU 2006120501A RU 2322491 C1 RU2322491 C1 RU 2322491C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- biologically active
- active compounds
- complex
- lecanicillium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, фармакологии, микробиологии, точнее к получению медицинского препарата с использованием микроорганизмов - продуцентов. Штамм Lecanicillium sp. Г16 выделен из почвенного образца Тебердинского заповедника. Депонирован в Коллекции культур микроорганизмов ГНЦА под номером 347А. Изобретение позволяет получить комплексный препарат, обладающий высокой гиполипидемической и противоопухолевой активностью и пролонгирующим действием при низких концентрациях 3 табл.
Description
Изобретение относится к области фармакологии, микробиологии, биотехнологии, точнее к получению медицинского препарата с использованием микроорганизмов - продуцентов.
Предшествующий уровень техники
Культуры мицелиальных грибов являются источником биологически активных соединений. В клинике широко используются препараты с гиполипидемической, иммуносупрессивной, иммуностимулирующей и другими активностями. Установлена тесная связь иммунных реакций организма с его липидтранспортной системой. Большое значение имеет применение для медицинских целей липидов грибов, как эссенциальных, так и регулирующих гомеостаз макроорганизма.
Известно биологически активное соединение "ловастатин", получаемый из штамма P.cetrinum (Endo A., Kuroda M., Tsujita Y. ML-236A, ML-236B and ML-236C, new inhibitors of cholesterogenesis produced by P.cetrinum. J.Antibiot / 1976, v.29, pp. 1346-1348), который проявляет гиполипидемическую активность. Однако, его концентрация при использовании достаточно велика и он не обладает пролонгирующим действием.
Сущность изобретения
Целью изобретения является использование штамма Lecanicillium sp. 347A для получения комплексного препарата, обладающего высокой гиполипидемической и противоопухолевой активностью и пролонгирующим действием при низких концентрациях.
Штамм Lecanicillium sp. Г16 выделен из почвенного образца Тебердинского заповедника и депонирован в Коллекцию культур микроорганизмов ГНЦА под номером 347A.
Указанный штамм относится к мезофильным аэробам, его рост наблюдается в диапазоне температур 10-32°С. Хорошо сохраняется при температурах 4-8°С. Штамм сохраняет жизнеспособность при pH 3,0-8,0. При комнатной температуре и чередующемся освещении указанный штамм в течение 2 недель сохраняет способность продуцировать вторичные метаболиты.
Оптимальными для роста штамма Lecanicillium sp. 347A и образования им вторичных метаболитов являются температуры в пределах 24-26°С и pH 6,0-7,0.
Штамм Lecanicillium sp. 347A через 2 недели роста при 24°С характеризуется следующими морфологическими свойствами.
Солодовый агар: образует белые, опушенные ватообразные колонии Д=90 мм. Воздушный мицелий достигает высоты 10 мм и выше. Центр колонии более плотный, слегка приподнят. Обратная сторона - желтовато-кремовая.
На среде Райстрика - колонии белые, опушенные, ватообразные. Обратная сторона желтовато-кремовая. Д=90 мм.
Среда Чапека - колонии белые, ватообразные, несколько приплюснутые. Центр колонии слегка приподнят. Наблюдаются центрические кольца. Обратная сторона также с центрическими кольцами, кремоватая с зеленоватыми полосами. Д=40-45 мм.
Сусло-агар: Колонии белые, высокие, образуют центрические кольца: плотные в центре и к периферии более рыхлые. Высота более 10 мм, Д=40-45 мм. Обратная сторона колонии центрическими кольцами - буровато-кремовые.
Овсяный агар: колонии белые, опушенные, ватообразные Д=90 мм. Воздушный мицелий достигает высоты 10 мм. Центр колонии более плотный, слегка приподнят. Обратная сторона кремовая.
Гаузе 1: Колонии белые, рыхлые, ватообразные. Д=45-50 мм. Высота 6-8 мм. Спороносный слой в середине колонии более плотный, центр вдавлен, к периферии разреженный.
Рост и развитие культуры на агаризованных средах происходит по мицелиальному типу с образованием типичных разветвленных конидиеносцев с фиалидами, которые встречаются как единичные, так и в мутовках. На концах фиалид находятся склеенные в капельках конидии. Конидии цилиндрические с закругленными концами размером 3-5×1-2 μm, собранные в округлые головки. Хламидоспоры не наблюдаются.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.
Комплексный препарат биологически активных соединений получают выращиванием штамма в глубинных условиях на посевной и ферментационной среде одного и того же состава, содержащей органический азот (может быть представлен гороховой или соевой мукой, БВК и т.д.), углеводы (меласса, солод, сахароза, глюкоза, крахмал картофельный и т.д.), минеральные соли (хлорид натрия, фосфорнокислый калий 1 и 2-х замещенный, аммоний сульфат) и воду, pH среды 6,5-7,2. Посевная стадия длительностью 48-72 часа, объем инокулята 5-15%. Процесс ферментации осуществляют в течение 10-14 суток при 24°С в условиях аэрации. Объем среды в колбах емкостью 750 мл составляет 100-200 мл.
По окончании ферментации отделяют мицелий от нативного раствора и экстрагируют препарат органическим растворителем (ацетон, спирт). Растворитель удаляют на роторном испарителе и целевой сырец реэкстрагируют из водной взвеси петролейным эфиром. Реэкстракт осушают безводным сульфатом натрия и концентрируют до окрашенного сиропообразного продукта. Комплексный препарат осаждают гексаном.
Пример: От одного литра культуральной жидкости отделяют мицелий центрифугированием или фильтрованием. Полученный влажный мицелий (80% влажности) экстрагируют 3-х кратным объемом ацетона (по отношению к объему мицелия) в течение часа. Экстракт отделяют от мицелия фильтрованием и удаляют растворитель на роторном испарителе при 45°С. Целевой сырец реэкстрагируют из водной взвеси петролейным эфиром (2 раза по 1/4 объема от объема водной взвеси). Петролейный реэкстракт сушат безводным сульфатом натрия и концентрируют на роторном испарителе до окрашенного сиропообразного продукта. Получают 0,5 г комплексного препарата.
Биологическая активность комплексного препарата биологически активных соединений
Комплексный препарат биологически активных соединений проявляет высокую гиполипидемическую активность.
При использовании стандартной методики определения синтеза стеролов клетками культуры гепатоцитов Нер G2 по включению 3H-ацетата натрия в стеролы. Установлено, что ловастатин в дозе 200 мг/мл подавляет синтез стеролов на 50±6 (%). Комплексный препарат биологически активных соединений в разведении 1:1000 подавлял синтез стеринов на 60±2 (%).
На модели гиперлипидемии кроликов in vivo под действием комплексного препарата 347А в дозе 0,04 мг/кг показано максимальное снижение общего холестерина (ОХ) в крови кроликов на 55%, триглицеридов (ТГ) на 40%, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) на 98% и увеличение уровня липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) на 30%. При действии контрольного препарата ловастатина в дозе 4 мг/кг наблюдается снижение ОХ на 53%, ТГ на 46‰, ЛПНП на 97% и повышение ЛПВП 18%. Под влиянием комплексного препарата 347А эффект сохраняется в течение 5 часов, в то время как действие контрольного препарата ловастатина прекращается. Сравнительные данные действия ловастатина и комплексного препарата биологически активных соединений приведены в таблице 1.
| Таблица 1 Максимальное влияние ловастатина и комплексного препарата биологически активных соединений на уровень ОХ, триглицеридов, ЛПНП и ЛПВП в сыворотке крови кроликов |
|||||
| Препарат | Конц. препарата (мг/кг) | Максимальное снижение уровня ОХ (%) | Максимальное снижение уровня ТГ (%) | Максимальное увеличение уровня ХС ЛПВП (%) | Максимальное снижение уровня ХС ЛПНП (%) |
| ловастатин | 4 | 53,5 | 45,8 | 17,7 | 97,1 |
| препарат | 0,04 | 54,9 | 39,3 | 30,1 | 98,6 |
Комплексный препарат биологически активных соединений подавляет фитогемагглютинин (ФГА) индуцированную пролиферацию лимфоцитов крови доноров в концентрации 0,01-1 мкг/мл на 92-98%, что проиллюстрировано примером в таблице 2.
| Таблица 2. Подавление ФГА-индуцированной пролиферации лимфоцитов комплексным препаратом биологически активных соединений |
||||||||||
| № | Контроль (имп/мин) | Опыт (имп/мин) Жизнеспособность лимфоцитов | ||||||||
| Спонт. | ФГА | ФГА+препарат (мкг/мл) | Контроль | Опыт ФГА+препарат | ||||||
| Спонт | ФГА | |||||||||
| 1 | 0,1 | 0,01 | 0,1 | 0,01 | ||||||
| 1 | 1752 | 45673 | 1067 | 1102 | 4314 | 3 | 14 | 21 | 0,7 | 22 |
| 2 | 2483 | 53966 | 1265 | 1765 | 4491 | 0,5 | 0,9 | 14 | 14 | 15 |
| 1 | Процент подавления | 97,7 | 97,6 | 90,6 | ||||||
| 2 | Процент подавления | 97,7 | 96,7 | 91,7 | ||||||
Комплексный препарат биологически активных соединений индуцирует апоптоз трансформированных лимфоидных клеток линии Yurkat в концентрации 1-100 нг/мл на 15-20%, что проиллюстрировано примером в таблице 3.
| Таблица 3. | ||||
| Контроль | Комплексный препарат биологически активных соединений | |||
| 100 (нг/мл) | 10 (нг/мл) | 1 (нг/мл) | ||
| Гипердиплоидные | 29,79 | 32,58 | 36,35 | 28,35 |
| Диплоидные | 30,72 | 27,86 | 24,24 | 25,88 |
| Апоптоз | 16,04 | 17,77 | 19,99 | 14,13 |
| Некроз | 23,82 | 22,24 | 27,82 | 23,99 |
Таким образом, заявленный комплексный препарат биологически активных соединений проявляет гиполипидемическую активность, которая проявляется в снижении содержания в крови животных общего холестерина, триглицеридов, нормализации соотношения ЛПВП и ЛПНП, и противоопухолевую активность, индуцируя апоптоз трансформированных лимфоидных клеток линии Yurkat, при этом обладая свойством длительного действия при низкой концентрации.
Claims (1)
- Штамм Lecanicillium sp. 347A, депонирован в Коллекции культур микроорганизмов ГНЦА - продуцент комплекса биологически активных соединений, проявляющих гиполипидемическую и противоопухолевую активность и обладающих пролонгирующим действием при низких концентрациях.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006120501/13A RU2322491C1 (ru) | 2006-06-13 | 2006-06-13 | Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2006120501/13A RU2322491C1 (ru) | 2006-06-13 | 2006-06-13 | Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2322491C1 true RU2322491C1 (ru) | 2008-04-20 |
Family
ID=39454043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2006120501/13A RU2322491C1 (ru) | 2006-06-13 | 2006-06-13 | Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2322491C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102417886A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-04-18 | 青岛农业大学 | 一种刀孢蜡蚧菌菌株 |
| RU2732594C1 (ru) * | 2019-10-14 | 2020-09-21 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство обороны Российской Федерации | Штамм микроскопического гриба Aspergillus sp. ВКМ F-4822D, являющийся активным агентом биоповреждений промышленных материалов |
-
2006
- 2006-06-13 RU RU2006120501/13A patent/RU2322491C1/ru active
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ENDO A., KURODA M., TSUJITA Y., ML-236A, ML-236B, and ML-236C, new inhibitors of cholesterogenesis produced by Penicillium citrinium, J Antibiot, 1976 Dec; 29(12), 1346-8. ГУДОВА Н.В. Действие ловастина, ингибитора биосинтеза холестерина, на продуцент Aspergillus terreus шт.35, Тезисы докладов XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "ЛОМОНОСОВ-2006", 12-15 апреля 2006 г, Москва, 2006, с.67-68. * |
| ГЕОРГИЕВА М.Л. Биологически активные вещества у микромицетов из содовых солончаков. Тезисы докладов XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "ЛОМОНОСОВ-2006", 12-15 апреля 2006 г, Москва, 2006, с.54-55. ЕВСЕНКО М.С. Противоопухолевая активность полисахаридов Ganoderma lucidum и ее изменение в процессе онтогенеза. Тезисы докладов XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "ЛОМОНОСОВ-2006", 12-15 апреля 2006 г, Москва, 2006, с.86-87. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102417886A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-04-18 | 青岛农业大学 | 一种刀孢蜡蚧菌菌株 |
| RU2732594C1 (ru) * | 2019-10-14 | 2020-09-21 | Российская Федерация, от имени которой выступает Министерство обороны Российской Федерации | Штамм микроскопического гриба Aspergillus sp. ВКМ F-4822D, являющийся активным агентом биоповреждений промышленных материалов |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6013493A (en) | Taxol production by a microbe | |
| KR830002801B1 (ko) | 고(高) 콜레스테롤혈증치료제, 모나콜린 k의 제조방법 | |
| US4173629A (en) | Antibiotic S 31794/F-1 | |
| RU2322491C1 (ru) | Штамм lecanicillium sp. 347а - продуцент комплекса биологически активных соединений | |
| Matsumae et al. | Studies on Cerulenin. I Studies on Cerulenin Producing Strain | |
| RU2320713C1 (ru) | Штамм acremonium sp. г25-продуцент комплекса биологически активных соединений | |
| Hatori et al. | FR901512, a Novel HMG-CoA Reductase Inhibitor Produced by an Agonomycetous Fungus No. 14919 I. Taxonomy of the Producing Organism, Fermentation, Isolation and Physico-chemical Properties | |
| JPH0368570A (ja) | 抗真菌薬 | |
| Hatori et al. | FR171456, a novel cholesterol synthesis inhibitor produced by Sporormiella minima No. 15604 I. taxonomy, fermentation, isolation, physico-chemical properties | |
| CN112691124A (zh) | 内生真菌a814提取物在制备抗细菌药物中的应用 | |
| JPWO2007018194A1 (ja) | セルコスポラミドの製造方法 | |
| JP4263741B2 (ja) | プラバスタチンナトリウムの生産に用いる微生物およびそれによるプラバスタチンナトリウムの製造方法 | |
| JPWO2013031239A1 (ja) | 新規マングロマイシン化合物及びその製造方法 | |
| JP5639768B2 (ja) | 新規ＳｐｏｘａｚｏｍｉｃｉｎＡ物質及びその製造法 | |
| JP3897757B2 (ja) | 新規ｆｋｉ−１０８３物質およびその製造法 | |
| CN117122622A (zh) | 真菌纯绿青霉提取物在制备抗mrsa活性的药物中的应用 | |
| RU2499040C2 (ru) | Способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью | |
| JPH0570430B2 (ru) | ||
| JP5163168B2 (ja) | 新規ｆｋｉ−３８６４物質およびその製造方法 | |
| RU2386692C1 (ru) | Способ получения тартрата эпоксиагроклавина-i и хиноцитрининов | |
| JP2009184946A (ja) | 新規ｆｋｉ−１７４６−１およびｆｋｉ−１７４６−２物質並びにそれらの製造方法 | |
| EP0216607A2 (en) | Physiologically active substance FD-838 and process for preparing the same | |
| WO2011111738A1 (ja) | 新規ｆｋｉ－４４２９物質およびその製造方法 | |
| CZ287668B6 (cs) | Nový mutantní kmen Aspergillus terreus a způsob fermentace lovastatinu | |
| WO1999019458A1 (en) | A method of fermentation preparation of lovastatin by an aspergillus terreus strain and the strain for performing the method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20110113 |
|
| HE4A | Notice of change of address of a patent owner |