RU2280079C2 - Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы - Google Patents
Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2280079C2 RU2280079C2 RU2004106510/14A RU2004106510A RU2280079C2 RU 2280079 C2 RU2280079 C2 RU 2280079C2 RU 2004106510/14 A RU2004106510/14 A RU 2004106510/14A RU 2004106510 A RU2004106510 A RU 2004106510A RU 2280079 C2 RU2280079 C2 RU 2280079C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gene
- length
- predisposition
- gp3a
- nucleotide pairs
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии. Способ позволяет повысить быстро и с большой достоверностью и надежностью определять предрасположенность к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы. Проводят исследование гена GP3a, при этом при обнаружения в нем сочетания аллелей PL-A1 и PL-A2, устанавливают предрасположенность к онкологическим заболеваниям, в том числе к инвазивным и метастатическим формам. А исследования гена GP3a осуществляют путем выделения ДНК методом полимеразной цепной реакции, причем ген исследуют в сухой капле крови на бумажном носителе и в качестве праймеров для полимеразной цепной реакции используют 5'gctccaatgtacggggtaaa и 5'ctcctcagacctccaccttg, синтезируют ДНК-продукт длиной 384 нуклеотидных пары, который расщепляют рестриктазой Mspl, образуя фрагменты ДНК, при этом идентифицируют аллель PL-A1 по фрагментам длиной 290 и 80 нуклеотидных пар, а аллель PL-A2 по фрагментам длиной 175, 120 и 80 нуклеотидных пар. 2 н.п. ф-лы.
Description
Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы, включающий исследование гена GР3а путем выделения ДНК методом полимеразной цепной реакции.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для выявления групп пациентов с высоким риском развития рака простаты и мочевого пузыря, в том числе к инвазивным и метастатическим формам заболевания.
Рак предстательной железы и мочевого пузыря - часто встречающиеся злокачественные новообразования у мужчин. В России в 1996 году было впервые выявлено 8,3 тыс. случаев заболевания раком предстательной железы, что на 52% больше, чем в 1989 году, и ххх случаев рака мочевого пузыря. По темпу прироста заболеваемости рак предстательной железы находится на втором месте, уступая раку кожи. Смертность от рака простаты заболевания составляет 7,7 на 100000 населения, а от рака мочевого пузыря ххх на 100000 населения. В западных странах рак предстательной железы занимает первое-второе место по заболеваемости и смертности среди мужского населения. В США рак предстательной железы является наиболее частым злокачественным новообразованием, составляя 30% от всех впервые диагностированных онкологических заболеваний у мужчин и обуславливает 13% онко-зависимой смертности. Например, в 2001 году выявлено около 198100 новых случаев рака простаты. Эти данные свидетельствуют об улучшении диагностики рака простаты, что, безусловно, связано с широким внедрением простат-специфического антигена (ПСА) в клиническую практику. Однако, несмотря на улучшение ранней диагностики у 10-20% пациентов в США и около 40% в России при первичном обследовании имеются метастазы в кости. Большинство смертных случаев все еще обусловлено распространенным метастатическим процессом, устойчивым к лечению, несмотря на улучшение оперативной техники, местной и системной химио- и лучевой терапии.
По нашему мнению, современный подход к лечению рака простаты и, особенно, метастатической и гормоно-рефрактерной его форм должен базироваться на глубоких знаниях молекулярных и генетических основ этиологии и патогенеза злокачественного процесса.
В этом ключе актуальным направлением генетических исследований является изучение интегринов-протеинов, ответственных за связь между клетками и межклеточным матриксом. Возможно, что нарушение баланса между клетками и межклеточным матриксом, вследствие какого-либо повреждения или особенностей интегринов приводит к нарушению апоптоза, развитию злокачественного образования, его инвазии и метастазированию. Ген GPIIIa кодирует β-субъединицу типа III, подтипа а интегринового рецептора.
В настоящее время установлена центральная роль интегринов в развитии некоторых злокачественных опухолей человека. В первую очередь это относится к различным формам меланомы и некоторых других злокачественных опухолей кожи. Также вероятна, но до сих пор не изучена роль интегринов в процессе развития, инвазии и метастазирования рака предстательной железы и мочевого пузыря.
В связи с этим, предложен способ определеления генетической предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы, включающий выделение и исследование гена GP3a и его аллелей. Фактором такой генетической предрасположенности является наличие у исследуемого пациента аллеля PL-A2 гена GP3a.
Ранее данная конкретная задача не решалась, то есть способа-аналога нет.
Способ осуществляется следующим образом.
1. Исследуют кровь с выделением ДНК
2. Исследуют аллели гена GP3a
3. При выявлении в результате анализа аллеля PL-A2 гена гликопротеина GP3a вероятность развития любых форм рака простаты и мочевого пузыря на 50%, а инвазивных и метастатических форм рака, требующих активного лечения, существенно (более чем в 3 раза) выше, чем в популяции.
Для указанного способа был разработан новый способ выделения и исследования гена GP3a. Известен способ выделения и исследования этого гена, который основывается на выделении ДНК для ПЦР из клеток периферической крови (van Goor ML, Gomez Garcia E, Brouwers GJ, Leebeek FW, Koudstaal PJ, Dippel DW. PLA1/A2 polymorphism of the platelet glycoprotein receptor IIb/IIIa in young patients with cryptogenic TIA or ischemic stroke. Thromb Res. 2002 Oct 1; 108(1):63-5). Этот способ характеризуется существенно увеличенным временем анализа, повышенными затратами на реактивы и, кроме того, делает неизбежной стадию пробоподготовки, на которой существует высокий риск взаимной контаминации проб, то есть такая работа может проводиться только в специально оборудованных лабораториях.
Технический результат изобретения заключается в создании более быстрого, дешевого и доступного способа полимеразной цепной реакции с одновременно большей его достоверностью и надежностью.
В предлагаемом способе, во-первых, в качестве ДНК-матрицы используется не раствор ДНК, а сухая капля крови на бумажном носителе, в качестве носителя используется бумага Ватман ЗММ (Ватман, Англия). Это усовершенствование метода существенно удешевляет подготовку проб и делает ее более защищенной от контаминации. Оно позволяет использовать данный способ для широкомасштабных скрининговых определений генотипа пациентов, в том числе обследований пациентов в регионах, включающих пересылку препаратов "сухая капля" при комнатной температуре.
Во-вторых, предложены оригинальные олигонуклеотидные праймеры для полимеразной цепной реакции 5'gctccaatgtacggggtaaa и 5'ctcctcagacctccaccttg, которые позволяют синтезировать специфический ДНК-продукт длиной 384 нуклеотидных пары. Этот продукт при расщеплении рестриктазой MspI образует фрагменты ДНК длиной 290 и 80 нуклеотидных пар в случае аллеля PL-A1 и фрагменты длиной 170, 120 и 80 нуклеотидных пар в случае аллеля PL-A2. Анализ продуктов реакции проводится методом стандартного электрофореза в полиакриламидном или агарозном геле, что не представляет затруднений для стандартной диагностической лаборатории.
Способ осуществляют следующим образом:
1. На подушечке безымянного пальца пациента скарификатором делают прокол кожи и выдавливают каплю крови 50-100 мкл.
2. Каплю крови переносят на квадратик (2×2 см) хроматографической бумаги Ватман 3 ММ и высушивают на воздухе.
3. Фрагмент сухой капли размером 2×3 мм вносят в стандартную смесь для полимеразной цепной реакции объемом 50 мкл.
4. Проводят полимеразную цепную реакцию продолжительностью 35 циклов в следующем режиме:
денатурация ДНК при температуре 94°С - 40 сек;
отжиг праймеров при температуре 60°С - 30 сек;
полимеризация при температуре 72°С - 90 сек.
5. Обрабатывают продукт полимеразной цепной реакции рестриктазой MspI в соответствии с инструкцией для данного фермента.
6. Анализируют длину фрагментов ДНК методом стандартного электрофореза в полиакриламидном или агарозном геле.
Для подтверждения действенности предлагаемого метода приведем следующий пример.
С использованием данного способа проведено обследование 40 больных раком предстательной железы и 20 больных раком мочевого пузыря. Установлено, что частота рака предстательной железы в группе носителей аллеля PL-A2 гена GP3a в 2 раза выше, чем в среднем в популяции, где она составляет 15%. При этом у больных инвазивным раком простаты и мочевого пузыря частота носительства аллеля PL-A2 гена GP3a в 3-4 раза, а метастатическим - в 6-8 раз выше, чем в популяции.
Claims (2)
1. Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы, включающий исследование гена GP3a, при этом при обнаружении в нем сочетания аллелей PL-A1 и PL-A2 устанавливают предрасположенность к онкологическим заболеваниям, в том числе к инвазивным и метастатическим формам.
2. Способ исследования гена GP3a путем выделения ДНК методом полимеразной цепной реакции, отличающийся тем, что ген исследуют в сухой капле крови на бумажном носителе, а в качестве праймеров для полимеразной цепной реакции используют 5'gctccaatgtacggggtaaa и 5'ctcctcagacctccaccttg, синтезируют ДНК-продукт длиной 384 нуклеотидных пары, который расщепляют рестриктазой Mspl, образуя фрагменты ДНК, при этом идентифицируют аллель PL-A1 по фрагментам длиной 290 и 80 нуклеотидных пар, а аллель PL-A2 по фрагментам длиной 175, 120 и 80 нуклеотидных пар.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004106510/14A RU2280079C2 (ru) | 2004-03-05 | 2004-03-05 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2004106510/14A RU2280079C2 (ru) | 2004-03-05 | 2004-03-05 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2004106510A RU2004106510A (ru) | 2005-08-10 |
RU2280079C2 true RU2280079C2 (ru) | 2006-07-20 |
Family
ID=35844938
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004106510/14A RU2280079C2 (ru) | 2004-03-05 | 2004-03-05 | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2280079C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102766633A (zh) * | 2012-07-25 | 2012-11-07 | 湖南大学 | 可用于检测人肝癌细胞株Bel-7404的核酸适体及其筛选方法和应用 |
-
2004
- 2004-03-05 RU RU2004106510/14A patent/RU2280079C2/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
HIRATA H, HISATOMI H, et al Genetic detection for hematogenous micrometastasis in patients with various types of malignant tumors using Uroplakin II derived primers in polymerase chain reaction.: Oncol Rep. 2003 Jul-Aug; 10(4):963-6. SATO K, JINZAKI M, KURIBAYASHI S.[Lung scintigraphy and CT. MRI], Nippon Rinsho. 2003 Oct; 61(10): 1739-43. * |
VAN GOOR M.L. et al. PLA1/A2 polymorphism of the platelet glycoprotein receptor IIb/IIIa in young patients with cryptogenic TIA or ischemic stroke. Thromb Res. 2002 Oct 1; 108(1): 63-5. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102766633A (zh) * | 2012-07-25 | 2012-11-07 | 湖南大学 | 可用于检测人肝癌细胞株Bel-7404的核酸适体及其筛选方法和应用 |
CN102766633B (zh) * | 2012-07-25 | 2014-06-04 | 湖南大学 | 可用于检测人肝癌细胞株Bel-7404的核酸适体及其筛选方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2004106510A (ru) | 2005-08-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mastoraki et al. | ESR1 methylation: A liquid biopsy–based epigenetic assay for the follow-up of patients with metastatic breast cancer receiving endocrine treatment | |
Cheng et al. | Circulating tumor DNA: a promising biomarker in the liquid biopsy of cancer | |
Patel et al. | The translational potential of circulating tumour DNA in oncology | |
US20230127823A1 (en) | Non-Invasive Gene Mutation Detection in Lung Cancer Patients | |
Singh et al. | Serum microRNA expression patterns that predict early treatment failure in prostate cancer patients | |
KR20080080525A (ko) | 유전자 전사에 대한 fgfr3의 억제제의 효과 | |
Zammarchi et al. | MMTV‐like sequences in human breast cancer: a fluorescent PCR/laser microdissection approach | |
Ito et al. | BRAF heterogeneity in melanoma | |
Solmi et al. | Search for epithelial-specific mRNAs in peripheral blood of patients with colon cancer by RT-PCR. | |
Zheng et al. | Clinical applications of liquid biopsies for early lung cancer detection | |
Jin et al. | Rapid and accurate detection of KRAS mutations in colorectal cancers using the isothermal-based optical sensor for companion diagnostics | |
Liu et al. | Analysis of DNA hypermethylation in pancreatic cancer using methylation-specific PCR and bisulfite sequencing | |
JP6757942B2 (ja) | ハイブリダイゼーション用バッファー組成物及びハイブリダイゼーション方法 | |
CN109161543B (zh) | 用于富集低频dna突变的dna探针及其应用 | |
US20110236396A1 (en) | Methods and compositions for diagnosing and treating a colorectal adenocarcinoma | |
Mokarram et al. | Microsatellite instability typing in serum and tissue of patients with colorectal cancer: comparing real time PCR with hybridization probe and high-performance liquid chromatography | |
Sridhar et al. | Molecular genetic testing methodologies in hematopoietic diseases: current and future methods | |
RU2280079C2 (ru) | Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы | |
CN107058305A (zh) | 一组核苷酸序列及在eml4‑alk融合基因快速检测中的应用 | |
Araújo et al. | Epidermal growth factor genetic variation associated with advanced cervical cancer in younger women | |
Chen et al. | Investigating the association between XRCC1 gene polymorphisms and susceptibility to gastric cancer | |
CN106868197B (zh) | 基因标志物在多发性骨髓瘤中的应用 | |
Vishwakarma et al. | Simultaneous extraction and quantification of circulating mitochondrial and nuclear DNA using a single plasma sample to predict specific molecular diagnostic implications | |
RU2490641C1 (ru) | Способ прогнозирования течения неходжкинских лимфом | |
CN105506140B (zh) | Ros1融合基因arms荧光定量pcr分型检测试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
FA94 | Acknowledgement of application withdrawn (non-payment of fees) |
Effective date: 20060124 |
|
FZ9A | Application not withdrawn (correction of the notice of withdrawal) |
Effective date: 20060124 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060306 |