RU2272631C2 - Синергическая композиция для ингибирования вич - Google Patents

Синергическая композиция для ингибирования вич Download PDF

Info

Publication number
RU2272631C2
RU2272631C2 RU2004111994/15A RU2004111994A RU2272631C2 RU 2272631 C2 RU2272631 C2 RU 2272631C2 RU 2004111994/15 A RU2004111994/15 A RU 2004111994/15A RU 2004111994 A RU2004111994 A RU 2004111994A RU 2272631 C2 RU2272631 C2 RU 2272631C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
niglizine
hiv
azt
azidothymidine
composition
Prior art date
Application number
RU2004111994/15A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2004111994A (ru
Inventor
сунова Ольга Александровна Пл (RU)
Ольга Александровна Плясунова
Андрей Георгиевич Покровский (RU)
Андрей Георгиевич Покровский
Лиди Ашрафовна Балтина (RU)
Лидия Ашрафовна Балтина
Генрих Александрович Толстиков (RU)
Генрих Александрович Толстиков
Original Assignee
Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор") filed Critical Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор")
Priority to RU2004111994/15A priority Critical patent/RU2272631C2/ru
Priority to PCT/RU2004/000469 priority patent/WO2005102360A1/ru
Publication of RU2004111994A publication Critical patent/RU2004111994A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2272631C2 publication Critical patent/RU2272631C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается синергетической композиции, содержащей азидотимидин и пента-О-никотинат глицирризиновой кислоты - ниглизин, в концентрациях, физиологически достижимых в крови: для азидотимидина - 0,0037-0,0254 мкМ, для ниглизина - 0,0052-9,64 мкМ. Применение данной композиции позволяет эффективно подавлять репродукцию ВИЧ-1, при этом существенно снижаются затраты на лечение. Композиция обладает высокой биодоступностью и высокой эффективностью. 6 табл., 1 ил.

Description

Изобретение относится к вирусологии и медицине, а именно к разработке композиционных препаратов на основе азидотимидина и производных глицирризиновой кислоты, способных эффективно ингибировать репродукцию вируса иммунодефицита человека при низких физиологических концентрациях входящих в них отдельных компонентов.
В условиях распространения эпидемии СПИДа проблема лечения этого опасного заболевания остается одной из актуальных проблем современной медицины. На протяжении уже почти 15 лет в клинической практике для лечения ВИЧ-инфекции широко используется азидотимидин (АЗТ) - эффективный ингибитор вирусной обратной транскриптазы [1]. В последние годы в связи с быстро развивающейся в организме ВИЧ-инфицированных пациентов резистентностью вируса к азидотимидину [2], а также из-за высокой токсичности препарата (в том числе митохондриальной токсичности) [3, 4] его применение ограничено. А монотерапия АЗТ в настоящее время не рекомендована Всемирной организацией здравоохранения, поскольку приводит к появлению устойчивых к препарату мутантов вируса.
В настоящее время в большинстве случаев азидотимидин применяют в качестве составляющего в так называемых «коктейлях» в сочетании с 2-4 другими препаратами [5, 6], воздействующими на другие мишени цикла репродукции вируса. Как правило, это ингибиторы протеазы ВИЧ или ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ. Несмотря на эффективность некоторых таких «коктейлей», актуальным остается поиск новых сочетаний-комбинаций азидотимидина с препаратами другой природы и иного механизма действия, достаточно эффективных и дешевых в производстве, пригодных для лечения ВИЧ-инфекции.
Одним из таких доступных и дешевых препаратов является глицирризиновая кислота (ГК), механизм действия которой некоторые авторы связывают с ингибированием протеинкиназы, обеспечивающей фосфорилирование Т4 рецептора, необходимого для связывания вируса [7], другие - с непосредственным блокированием связывания вируса с клеткой [8]. Хотя механизм анти-ВИЧ действия ГК остается невыясненным до конца, ясно одно, что она ингибирует репродукцию вируса на ранних стадиях инфекции [9] в отличие от азидотимидина.
Исследование «лечебного» действия ГК на модели хронической ВИЧ-инфекции в моноцитах человека линии U937 при длительном культивировании в ее присутствии показало, что ГК эффективно ингибирует продукцию вируса на первых 4-х пассажах, а далее до 20-го пассажа лишь на 60% снижает вируспродукцию по сравнению с контролем [10]. Использование комбинации АЗТ и ГК (1:1000) оказалось более эффективным: к 20-му пассажу вирусспецифический белок р24 не выявлялся [10].
Исследование противовирусной активности целого ряда производных ГК продемонстрировало эффективность их анти-ВИЧ действия в культуре клеток [11-13]. Ранее было показано, что моноаммониевая соль глицирризиновой кислоты (глицирам) не является антагонистом по отношению к азидотимидину и в сочетании с ним эффективно блокирует репродукцию ВИЧ в культуре клеток как при острой, так и при хронической инфекции при соотношении АЗТ:глицирам=1:10000 [9, прототип]. Однако эффективные концентрации АЗТ и глицирама являются довольно высокими и неприемлемы на уровне организма.
Технической задачей изобретения является разработка высокоэффективных анти-ВИЧ композиций на основе азидотимидина и производных глицирризиновой кислоты, обладающих синергическим эффектом входящих в него компонентов при физиологически допустимых концентрациях последних в крови.
Поставленная задача решается путем подбора и исследования противовирусной активности различных комбинаций АЗТ и нового отечественного препарата пента-О-никотината глицирризиновой кислоты (ниглизина) - эффективного ингибитора ВИЧ [14]. При подборе комбинаций компонентов новой синергической композиции необходимо учитывать фармакокинетику азидотимидина и глицирризиновой кислоты, согласно которой концентрации АЗТ не должны превышать 0,05-0,1 мкг/мл, а ГК - 2-10 мкг/мл, что соответствует реальным концентрациям этих соединений в крови [15].
В результате этого исследования показано, что АЗТ и ниглизин в комбинациях 1:20, 1:50, 1:100, 1:200 и 1:2000 проявляют выраженный синергический эффект (табл.1). Важно отметить, что если для АЗТ 50%-ные ингибирующие дозы в этих комбинациях варьируют незначительно (от 0,0056 до 0,014 мкМ) и мало отличаются от таковой для индивидуального препарата, то в случае ниглизина они существенно снижаются по мере уменьшения его доли в комбинации (от 2,076 до 0,0519 мкМ).
Таблица 1
Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1EVK комбинациями АЗТ и ниглизина
Комбинация ID50, мкМ FIC
АЗТ Ниглизин
Штамм ВИЧ-1EVK
Индивидуальный препарат 0,0254 9,64 -
АЗТ:ниглизин=1:20 0,0124 0,052 0,491
АЗТ:ниглизин=1:50 0,0142 0,148 0,574
АЗТ:ниглизин=1:200 0,01 0,386 0,614
АЗТ:ниглизин=1:2000 0,0056 2,076 0,435
АЗТ-резистентный мутант ВИЧ-1
Индивидуальный препарат 4,49 0,134 -
АЗТ:ниглизин=1:100 0,0037 0,074 0,553
* - комбинационный индекс (the fractional inhibition concentration), определенный согласно [16].
Таким образом, используя комбинации АЗТ с ниглизином, можно существенно снизить эффективные концентрации индивидуальных препаратов от 0,0254 до 0,0142 мкМ, что соответствует 0,0038 мкг/мл, и ниже (до 0,0037 мкМ) для АЗТ и от 9,64 до 0,052 мкМ (0,07 мкг/мл) для ниглизина, что значительно ниже физиологически достижимых в крови и нетоксичных концентраций этих соединений.
В экспериментах исследовалась противовирусная активность ниглизина и его комбинаций с АЗТ в отношении АЗТ-резистентного мутанта ВИЧ-1, полученного в культуре клеток и характеризующегося снижением чувствительности к АЗТ в 160 раз и наличием точечных мутаций в гене pol Asp67→Asn; Lys70→Arg; Leu214→Phe, ответственных за резистентность [17].
Ниглизин оказался более эффективным в отношении АЗТ-резистентного мутанта (ID50=0,134 мкМ), чем в отношении «дикого» штамма (ID50=9,64 мкМ). Определенный для комбинации АЗТ:ниглизин=1:100 комбинационный индекс FIC составил 0,553 (<1), что свидетельствует о синергическом противовирусном действии этой комбинации в отношении АЗТ-резистентного мутанта. Причем 50%-ные ингибирующие дозы препаратов в смеси были существенно ниже, чем для индивидуальных соединений: для АЗТ - 0,0037 мкМ, а для ниглизина - 0,052 мкМ.
Эффективность сочетанного анти-ВИЧ действия АЗТ и ниглизина как в отношении «дикого» штамма, так и АЗТ-резистентного мутанта свидетельствует о перспективности использования подобных композиций для лечения ВИЧ-инфекции.
Изобретение иллюстрируется следующей диаграммой.
Фиг.1. Эффективность ингибирования ВИЧEVK композицией АЗТ и ниглизина 1:50 в культуре клеток МТ-4.
  АЗТ (мкг/мл) Ниглизин (мкг/мл) Композиция 1:50 (мкг/мл)
1 - 0,001 0,05 0,001:0,05
2 - 0,01 0,5 0,01:0,5
3 - 0,1 5 0,1:5
4 - 1 50 1:50
Для лучшего понимания сущности изобретения ниже следуют примеры его конкретного выполнения.
Пример 1. Оценка анти-ВИЧ активности композиции азидотимидина и ниглизина 1:50.
Анти-ВИЧ-1 активность композиции изучают на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. Клетки МТ-4 заражают стоком вируса (штамм ВИЧ-lEVK [18]) с множественностью заражения 0,2-0,5 инфекционных единиц на клетку и инкубируют при 37°С в течение 1 часа (адсорбция вируса). Суспензию инфицированных клеток разводят ростовой питательной средой RPMI-1640, содержащей 10% сыворотки плода коровы фирмы "ICN" (США), 0,06% L-глутамина, 100 мкг/мл гентамицина и 60 мкг/мл линкомицина, до посевной концентрации 0,5×106 клеток/мл и вносят в лунки 96-луночного культурального планшета. Затем в лунки вносят аликвоты последовательных разведений азидотимидина в среде без добавок до конечных концентраций от 0,1 нг/мл до 1,0 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию), аликвоты последовательных разведений ниглизина в ДМСО до конечных концентраций от 0,05 до 100 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) и смесь аликвот последовательных разведений азидотимидина и ниглизина, конечные концентрации азидомидина в которых от 1,0 нг/мл до 1,0 мкг/мл, а ниглизина - от 0,05 до 50 мкг/мл (по три лунки на каждый вариант). Экспериментальные (с препаратом) и контрольные (без препарата) инфицированные клетки и контрольные неинфицированные клетки (без препарата) культивируют при 37°С и 5% CO2 в течение 4 суток. По окончании инкубации подсчитывают долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания 0,4%-ным раствором трипанового синего и контролируют уровень накопления вирусспецифического белка р24 иммуноферментным методом, как описано в [19].
Экпериментальные данные приведены на Фиг.1. На основе полученных в эксперименте количественных данных строят дозозависимые кривые, из которых определяют ингибирующие дозы ((ID50) - концентрацию соединения, на 50% снижающую накопление вирусного антигена р24 по сравнению с контролем) для индивидуальных соединений и для каждого соединения в смеси. Полученные таким образом количественные характеристики используют далее для расчета комбинационного индекса (FIC), определяемого согласно [16] по формуле:
Figure 00000002
где А - азидотимидин, В - ниглизин.
Количественные данные ингибирования репродукции вируса композицией и индивидуальными соединениями представлены в табл.2. Комбинационный индекс равен 0,574 (<1), что свидетельствует о синергетическом анти-ВИЧ действии азидотимидина и ниглизина в соотношении 1:50.
Таблица 2
Количественные характеристики ингибирования вич-1EVK композицией АЗТ и ниглизина (1:50)
Препарат ID50, мкМ FIC
Индивидуальная В смеси  
0,574
АЗТ 0,0254 0,0142
Ниглизин 9,64 0,148
Пример 2. Оценка анти-ВИЧ активности композиции азидотимидина и ниглизина 1:20.
Анти-ВИЧ-1 активность композиции изучают на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. Клетки МТ-4 заражают, разводят ростовой питательной средой до посевной концентрации и вносят в лунки культурального планшета, как описано в примере 1. Затем в лунки вносят аликвоты последовательных разведений азидотимидина в среде без добавок до конечных концентраций от 0,1 нг/мл до 1,0 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию), аликвоты последовательных разведений ниглизина в ДМСО до конечных концентраций от 0,02 до 100 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) и смесь аликвот последовательных разведений азидотимидина и ниглизина, конечные концентрации азидомидина, в которых от 1,0 нг/мл до 1,0 мкг/мл, а ниглизина - от 0,02 до 20 мкг/мл (по три лунки на каждый вариант). Экспериментальные (с препаратом) и контрольные (без препарата) инфицированные клетки и контрольные неинфицированные клетки (без препарата) культивируют при 37°С и 5% СО2 в течение 4 суток. По окончании инкубации подсчитывают долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания 0,4%-ным раствором трипанового синего и контролируют уровень накопления вирусспецифического белка р24 иммуноферментным методом, как описано в [19]. На основе полученных в эксперименте количественных данных строят дозозависимые кривые, из которых определяют ингибирующие дозы (ID50) и рассчитывают комбинационный индекс (FIC), как описано выше в примере 1. Количественные данные ингибирования репродукции вируса композицией и индивидуальными соединениями представлены в табл.3. Комбинационный индекс равен 0,56 (<1), что свидетельствует о синергетическом анти-ВИЧ действии азидотимидина и ниглизина в соотношении 1:20.
Таблица 3
Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1EVK композицией АЗТ и ниглизина (1:20)
Препарат ID50, мкМ FIC
индивидуальная в смеси  
0,491
АЗТ 0,0254 0,01235
Ниглизин 9,64 0,0519
Пример 3. Оценка анти-ВИЧ активности композиции азидотимидина и ниглизина 1:100 в отношении АЗТ-резистентного мутанта ВИЧ-1.
Анти-ВИЧ-1 активность композиции изучают на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. Клетки МТ-4 заражают АЗТ-резистентным мутантом ВИЧ-1 с множественностью заражения 0,2-0,5 инфекционных единиц на клетку и инкубируют при 37°С в течение 1 часа (адсорбция вируса). Суспензию инфицированных клеток разводят ростовой питательной средой до посевной концентрации и вносят в лунки культурального планшета, как описано в примере 1. Затем в лунки вносят аликвоты последовательных разведений азидотимидина в среде без добавок до конечных концентраций от 0,1 нг/мл до 0,1 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию), аликвоты последовательных разведений ниглизина в ДМСО до конечных концентраций от 0,1 до 100 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) и смесь аликвот последовательных разведений азидотимидина и ниглизина, конечные концентрации азидомидина в которых от 0,1 нг/мл до 0,1 мкг/мл, а ниглизина - от 1 до 100 мкг/мл (по три лунки на каждый вариант). Экспериментальные (с препаратом) и контрольные (без препарата) инфицированные клетки и контрольные неинфицированные клетки (без препарата) культивируют при 37°С и 5% СО2 в течение 4 суток. По окончании инкубации подсчитывают долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания 0,4%-ным раствором трипанового синего и контролируют уровень накопления вирусспецифического белка р24 иммуноферментным методом, как описано в [19]. На основе полученных в эксперименте количественных данных строят дозозависимые кривые, из которых определяют ингибирующие дозы (ID50) и рассчитывают комбинационный индекс (FIC), как описано выше в примере 1. Количественные данные ингибирования репродукции АЗТ-резистентного мутанта ВИЧ-1 композицией и индивидуальными соединениями представлены в табл.4. Комбинационный индекс равен 0,553 (<1), что свидетельствует о синергическом анти-ВИЧ действии азидотимидина и ниглизина в таком соотношении 1:100.
Таблица 4
Количественные характеристики ингибирования АЗТ-резистентного мутанта ВИЧ-1 комбинацией АЗТ и ниглизина (1:100)
Препарат ID50, мкМ FIC
индивидуальная в смеси  
0,553
АЗТ 4,49 0,0037
Ниглизин 0,134 0,074
Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1EVK и АЗТ-резистентного мутанта ВИЧ-1 композициями АЗТ и ниглизина приведены в итоговой Таблице 1.
Пример 4. Оценка анти-ВИЧ активности композиции азидотимидина и ниглизина 1:200.
Анти-ВИЧ-1 активность композиции изучают на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. Клетки МТ-4 заражают, разводят ростовой питательной средой до посевной концентрации и вносят в лунки культурального планшета, как описано в примере 1. Затем в лунки вносят аликвоты последовательных разведений азидотимидина в среде без добавок до конечных концентраций от 0,5 нг/мл до 0,5 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию), аликвоты последовательных разведений ниглизина в ДМСО до конечных концентраций от 0,1 до 200 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) и смесь аликвот последовательных разведений азидотимидина и ниглизина, конечные концентрации азидомидина в которых от 0,5 нг/мл до 0,5 мкг/мл, а ниглизина - от 0,1 до 100 мкг/мл (по три лунки на каждый вариант). Экспериментальные (с препаратом) и контрольные (без препарата) инфицированные клетки и контрольные неинфицированные клетки (без препарата) культивируют при 37° и 5% СО2 в течение 4 суток. По окончании инкубации подсчитывают долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания 0,4%-ным раствором трипанового синего и контролируют уровень накопления вирусспецифического белка р24 иммуноферментным методом, как описано в [19]. На основе полученных в эксперименте количественных данных строят дозозависимые кривые, из которых определяют ингибирующие дозы (ID50) и рассчитывают комбинационный индекс (FIC), как описано выше в примере 1. Количественные данные ингибирования репродукции вируса композицией и индивидуальными соединениями представлены в табл.5. Комбинационный индекс равен 0,614 (<1), что свидетельствует о синергетическом анти-ВИЧ действии азидотимидина и ниглизина в соотношении 1:200.
Таблица 5
Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1EVK композицией АЗТ и ниглизина (1:200)
Препарат ID50, мкм FIC
индивидуальная в смеси  
0,614
АЗТ 0,0254 0,01
Ниглизин 9,64 0,386
Пример 5. Оценка анти-ВИЧ активности композиции азидотимидина и ниглизина 1:2000.
Анти-ВИЧ-1 активность композиции изучают на высокочувствительной к вирусу иммунодефицита человека культуре клеток МТ-4. Клетки МТ-4 заражают, разводят ростовой питательной средой до посевной концентрации и вносят в лунки культурального планшета, как описано в примере 1. Затем вносят в лунки аликвоты последовательных разведений азидотимидина в среде без добавок до конечных концентраций от 0,5 нг/мл до 0,5 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию), аликвоты последовательных разведений ниглизина в ДМСО до конечных концентраций от 0,1 до 200 мкг/мл (по три лунки на каждую концентрацию) и смесь аликвот последовательных разведений азидотимидина и ниглизина, конечные концентрации азидомидина в которых от 0,5 нг/мл до 0,1 мкг/мл, а ниглизина - от 1 до 200 мкг/мл (по три лунки на каждый вариант). Экспериментальные (с препаратом) и контрольные (без препарата) инфицированные клетки и контрольные неинфицированные клетки (без препарата) культивируют при 37°С и 5% СО2 в течение 4 суток. По окончании инкубации подсчитывают долю жизнеспособных клеток в камере Горяева после окрашивания 0,4%-ным раствором трипанового синего и контролируют уровень накопления вирусспецифического белка р24 иммуноферментным методом, как описано в [19]. На основе полученных в эксперименте количественных данных строят дозозависимые кривые, из которых определяют ингибирующие дозы (ID50) и рассчитывают комбинационный индекс (FIC), как описано выше в примере 1.
Количественные данные ингибирования репродукции вируса композицией и индивидуальными соединениями представлены в табл.6. Комбинационный индекс равен 0,435 (<1), что свидетельствует о синергетическом анти-ВИЧ действии азидотимидина и ниглизина в таком соотношении 1:2000.
Таблица 6
Количественные характеристики ингибирования ВИЧ-1EVK комбинацией АЗТ и ниглизина (1:2000)
Препарат ID50, мкм FIC
индивидуальная в смеси  
0,435
АЗТ 0,0254 0,0056
Ниглизин 9,64 2,076
Таким образом впервые показано, что предлагаемые композиции ниглизина с АЗТ способны эффективно подавлять репродукцию как «дикого» штамма, так и АЗТ-устойчивого мутанта ВИЧ-1 в культуре чувствительных к вирусу клеток, проявляя при этом синергический эффект. Учитывая, что ниглизин является эффективным индуктором интерферона-гамма [20], можно надеяться существенно усилить его терапевтический потенциал при лечении ВИЧ-инфекции. Это позволяет рекомендовать такого рода композиции («коктейли») для разработки новых эффективных отечественных средств лечения ВИЧ-инфекции, которые могут существенно (примерно в 50 раз) снизить затраты общества и самих больных на лечение.
Список литературы
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. Т.2. Изд. 14-е, Москва: ООО «Новая волна». - 2000.
2. Larder B.A, Kemp S.D. Multiple mutations in HIV-1 reverse transcriptase confer high-level resistance to zidovudine (AZT). // Science. - 1989. - Vol.246. - P.1155-1158.
3. Chiu D.T. & Duesberg P.H. The toxicity of azidothymidine (AZT) on human and animal cells in culture at concentrations used for antiviral therapy.// Genetica. - 1995 - Vol.95 - P.103-109.
4. Brinkman К., Hofstede J.M, Burger D.M. Adverse effects of reverse transcriptase inhibitors: mitochondrial toxicity as common pathway. // AIDS. - 1998. - Vol.12. - P.1735-1744.
5. Schmit J.-C., Weber B. Recent advances in antiretroviral therapy and HIV infection monitoring.//Intervirology. - 1997. - Vol.40. - №5/6. - P.304-321.
6. Кравченко А.В. Комбинированная антиретровирусная терапия ВИЧ-инфекции. // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - №1.- С.59-62.
7. Ito M., Sato A., Hirabayashi K., Tanabe F., Shigeta S., Baba M., De Clercq E., Nakashima H., Yamamoto N. Mechanism of inhibitory effect of glycyrrhizin on replication of human immunodeficiency virus (HIV) // Antiviral Res. - 1988. - V.10. - P.289-298.
8. Fields A.P., Bednarik P.P., Hess A., May W.S. Human immunodeficiency virus induces phosphorylation of its cell surface receptor // Nature (London). - 1988. - V.333. - P.278-280.
9. Плясунова О.А., Егоричева И.Н., Федюк Н.В. и др. Изучение анти-ВИЧ активности (3-глицирризиновой кислоты // Вопр.вирусол. - 1992 - №5-6 - С.235-238.
10. Покровский А.Г., Плясунова О.А., Гашникова Н.М., Мамаева О.А., Федюк Н.В. Хронически инфицированная ВИЧ-1 культура моноцитов человека U937 как модель для оценки эффективности анти-ВИЧ препаратов // Вопросы вирусологии. - 2001. - №6. - С.38-42.
11. Покровский А.Г., Плясунова О.А., Ильичева Т.Н., Борисова О.А., Федюк Н.В., Петренко Н.И., Петухова В.З., Шульц Э.Э., Толстиков Г.А. Синтез производных растительных тритерпенов и исследование их противовирусной и иммуностимулирующей активности // Химия в интересах устойчивого развития. - 2001. - №9. - С.485-491.
12. Патент РФ №2199547, кл. С 07 J 63/00, опубликован БИ №6 за 2003 г.
13. Патент РФ №2198177, кл. С 07 J 63/00, опубликован БИ №4 за 2003 г.
14. Авторское свидетельство СССР №1804848, кл. А 61 К 31/705, опубликовано БИ №12, за 1993 г.
15. Ильичева Т.Н., Олькин С.Е., Федюк Н.В., Абдуллаев С.М., Шульц Э.Э., Толстиков Г.А., Покровский А.Г. Фармакокинетика глицирризиновой кислоты и ее производных. // Русский журнал "ВИЧ/СПИД и родственные проблемы". - 2000. - Т.4. - №1. - С.74.
16. Allen L.B., Teepe A.G., Kehoe M.J., Holland C.S., Me Namara D.J. and Cook P.D. Antiviral and cytotoxicity evaluation of 3-nitro-3-deazauridine // Antiviral Res. - 1989. - V.12. - P.259-268.
17. Покровский А.Г., Плясунова О.А., Киселева Я.Ю., Гашникова Н.М., Федюк Н.В. Сравнительное исследование возникновения резистентности ВИЧ-1 к АЗТ и Н-фосфонату АЗТ в культуре клеток // ДАН. - 2002. - Т.384. - №2. - С.259-252.
18. Карамов Э.В., Богомолов Б.П., Жданов В.М. // Обз. центров, сотрудничающих с ВОЗ, по вирусным инфекциям. - М. - 1986. - С.4-7.
19. Федюк Н.В., Коновалов Е.Е., Локтев В.Б., Урываев Л.В., Куляндин С.А., Покровский А.Г. // Вопросы вирусологии. - 1992. - №3. - С.135-138.
20. Заявка на патент РФ №2003134868 (037495), приоритет от 01.12.2003 г. "Индуктор гамма-интерферона".

Claims (1)

  1. Синергическая композиция для ингибирования ВИЧ, характеризующаяся тем, что она содержит азидотимидин и пента-О-никотинат глицирризиновой кислоты - ниглизин, в концентрациях, физиологически достижимых в крови: для азидотимидина 0,0037-0,0254 мкМ, для ниглизина 0,0052-9,64 мкМ.
RU2004111994/15A 2004-04-20 2004-04-20 Синергическая композиция для ингибирования вич RU2272631C2 (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004111994/15A RU2272631C2 (ru) 2004-04-20 2004-04-20 Синергическая композиция для ингибирования вич
PCT/RU2004/000469 WO2005102360A1 (fr) 2004-04-20 2004-11-29 Composition synergique pour inhiber le virus de l'immunodeficience humaine

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2004111994/15A RU2272631C2 (ru) 2004-04-20 2004-04-20 Синергическая композиция для ингибирования вич

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004111994A RU2004111994A (ru) 2005-10-10
RU2272631C2 true RU2272631C2 (ru) 2006-03-27

Family

ID=35196734

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004111994/15A RU2272631C2 (ru) 2004-04-20 2004-04-20 Синергическая композиция для ингибирования вич

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2272631C2 (ru)
WO (1) WO2005102360A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2365374C2 (ru) * 2006-09-18 2009-08-27 Общество с ограниченной ответственностью "Сибфармакон" (ООО "Сибфармакон") Лекарственный состав для ингибирования репродукции вируса иммунодефицита человека

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4950652A (en) * 1987-03-23 1990-08-21 Hem Research, Inc. dsRNAs for combination therapy in the treatment of viral diseases
RU2024547C1 (ru) * 1991-03-04 1994-12-15 Институт органической химии УНЦ РАН АМИД β-ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТЫ С 6-АМИНО-2-ТИО-УРАЦИЛОМ, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ АНТИ-СПИД-АКТИВНОСТЬ

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
John M. et al. Randomized, controlled, 48-week study of switching stavudine and/or protease inhibitors to combivir/abacavir to prevent or reverse lipoatrophy in HIV-infected patients. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2003, 33 (1): 29-33. *
Плясунова О.А., Егоричева И.Н., Федюк Н.В. и др. Изучение анти-ВИЧ Активности β-глицирризиновой кислоты. Вопросы Вирусологии. 1992, № 5-6, с.235-238. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2004111994A (ru) 2005-10-10
WO2005102360A1 (fr) 2005-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pinti et al. Anti-HIV drugs and the mitochondria
BR112019016316A2 (pt) Métodos para o tratamento da influenza
JP5940559B2 (ja) 癌及び免疫抑制の処置のためのシロシンゴピンとミトコンドリア阻害剤の組み合わせ
CN107106519A (zh) 人类治疗剂
JP2019515022A (ja) 炎症関連疾患及び障害を治療するための求電子的に強化されたフェノール化合物
Brownstein et al. A novel approach to treating COVID-19 using nutritional and oxidative therapies
EA015636B1 (ru) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ И/ИЛИ СПИДа, И ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТА
WO2010121245A1 (en) Method of treating hepatocellular carcinoma
US8945632B2 (en) Methods and compositions for inhibiting the nuclear factor κB pathway
WO2006104292A1 (en) Pharmaceutical composition comprising arsenic acid, meta-arsenite, and pharmaceutically acceptable salts
RU2272631C2 (ru) Синергическая композиция для ингибирования вич
Habashy et al. Identification of effective anti-HCV and anti-HIV royal jelly constituents and their acute toxicity evaluation in Albino rats
Craig et al. In vitro anti-HIV and cytotoxicological evaluation of the triple combination: AZT and ddC with HIV proteinase inhibitor saquinavir (Ro 31-8959)
Widodo et al. Antiviral activity of Justicia gendarussa Burm. f. leaves against HIV-infected MT-4 cells
WO1997037661A1 (fr) Medicament de prevention et de traitement des infections virales
Kanyara et al. Anti‐HIV‐1 activities in extracts from some medicinal plants as assessed in an in vitro biochemical HIV‐1 reverse transcriptase assay
US20210000802A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating aids comprising rhodanine derivative
RU2427373C1 (ru) Средство для индукции эндогенного интерферона
US20200361973A1 (en) Combination product comprising dicycloplatin and preparation method and use thereof
RU2304145C1 (ru) Ди- и триникотинаты глицирризиновой кислоты и ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека
JP2014169255A (ja) 抗ウイルス医薬品の相加相乗剤
Riley et al. DHEA and thymus integrity in the mouse
Cox et al. Effect of resistance on combination chemotherapy for human immunodeficiency virus infection
RU2199547C2 (ru) Амид глицирризиновой кислоты с 5-аминоурацилом, проявляющий анти-вич активность
US10828317B2 (en) Method of treating bacterial infections

Legal Events

Date Code Title Description
TK4A Correction to the publication in the bulletin (patent)

Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 9-2006 FOR TAG: (73)

PD4A Correction of name of patent owner
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150421