RU2268933C1

RU2268933C1 - STRAIN Haemophilus parasuis SK-1 AS PATHOGEN OF SWINE HEMOPHILEOUS POLYSEROSITIS FOR PREPARING DIAGNOSTIC AND VACCINE PREPARATIONS

Info

Publication number: RU2268933C1
Application number: RU2004111867/13A
Authority: RU
Inventors: Владимир Сергеевич Русалеев (RU); Владимир Сергеевич Русалеев; Ольга Владиславовна Прунтова (RU); Ольга Владиславовна Прунтова; Валентин Михайлович Гневашев (RU); Валентин Михайлович Гневашев; Андрей Владимирович Потехин (RU); Андрей Владимирович Потехин; Ольга Ивановна Ручнова (RU); Ольга Ивановна Ручнова; Алексей Владимирович Щербаков (RU); Алексей Владимирович Щербаков
Original assignee: Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ ВНИИЗЖ)
Priority date: 2004-04-21
Filing date: 2004-04-21
Publication date: 2006-01-27
Also published as: RU2004111867A

Abstract

FIELD: veterinary microbiology, biotechnology.

SUBSTANCE: strain is deposited in the Collection of microorganism strains FGU VGNKI at the registration number Haemophilus parasuis SK-1-DEP. The strain is virulent in native state and possesses antigenic and immunogenic activity after inactivation. In culturing in broth PPLO-base liquid nutrient medium for 12 h the strain is accumulated with the titer value 9.3-9.7 lg CFU/cm³. The strain retains its own properties in storage in semi-liquid agar at 4-6°C for 1 month and in the lyophilized state at 4-6° for 1 year. The strain shows high biological, antigenic and immunogenic activities, it retains native immunobiological properties after inactivation that can be used in preparing highly effective diagnostic and vaccine preparations.

EFFECT: valuable properties of strain.

4 tbl, 7 ex

Description

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении средств диагностики и специфической профилактики гемофилезного полисерозита свиней (ГПС).The invention relates to the field of veterinary microbiology and biotechnology and can be used in the development and manufacture of diagnostic tools and specific prophylaxis of hemophilic polyserositis of pigs (GPS).

В настоящее время под влиянием массовой вакцинации животных, применения химиопрепаратов, антибиотиков и других веществ, приведших к нарушению биоценоза, существенно изменилась не только этиологическая структура инфекционных заболеваний, но и роль различных серовариантов в их возникновении и развитии. В результате все более широкое распространение получают условно-патогенные микроорганизмы, болезнетворное действие которых ранее игнорировалось или рассматривалось как эксвизитное. Среди этих болезней определенное место занимает ГПС (болезнь Глессера), который регистрируется преимущественно у поросят отъемного возраста.Currently, not only the etiological structure of infectious diseases, but also the role of various serovariants in their occurrence and development has significantly changed under the influence of mass vaccination of animals, the use of chemotherapy, antibiotics, and other substances that led to a violation of the biocenosis. As a result, conditionally pathogenic microorganisms are gaining more and more widespread, the pathogenic effect of which was previously ignored or considered as excitatory. Among these diseases, a specific place is occupied by GPS (Glesser disease), which is recorded mainly in piglets of weaned age.

ГПС - инфекционная болезнь, характеризующаяся серозно-фибринозным воспалением перикарда, плевры, брюшины, суставов и мозговых оболочек. Возбудителем этого заболевания являются гемофильные бактерии Haemophilus parasuis (H.parasuis), представляющие собой мелкие 0,5×0,2-0,3 мкм полиморфные грамотрицательные не образующие спор палочки. Они являются постоянными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей многих видов животных. Вирулентные штаммы H.parasuis образуют капсулу. В мазках H.parasuis располагаются в виде палочек и коротких цепочек. Растут в аэробных условиях на питательных средах с добавлением дрожжевого экстракта, сыворотки крови или лизата цельной крови, а также на шоколадном агаре. Серологически различают 15 сероваров по соматическому антигену и 5 серогрупп (А, В, С, D, N) по капсульному. Самыми вирулентными и распространенными в Европе и Северной Америке являются серовары №1, 2, 4, 5 и 7. Несколько реже встречаются серовары №3, 12, 13 и 14.GPS is an infectious disease characterized by serous-fibrinous inflammation of the pericardium, pleura, peritoneum, joints and meninges. The causative agent of this disease are Haemophilus parasuis hemophilic bacteria (H.parasuis), which are small 0.5 × 0.2-0.3 microns polymorphic gram-negative, non-spore forming bacilli. They are permanent residents of the mucous membranes of the upper respiratory tract of many animal species. Virulent strains of H. parasuis form a capsule. In H. smears, parasuis are arranged in the form of sticks and short chains. Grow under aerobic conditions on nutrient media with the addition of yeast extract, blood serum or whole blood lysate, as well as chocolate agar. Serologically distinguish 15 serovars by somatic antigen and 5 serogroups (A, B, C, D, N) by capsular. The most virulent and common in Europe and North America are serovars No. 1, 2, 4, 5, and 7. Serovars No. 3, 12, 13, and 14 are somewhat less common.

Источником ГПС служат больные и переболевшие поросята, а также свиноматки-бактерионосители. Заражение ГПС происходит, в основном, аэрогенным путем. Важную роль в возникновении ГПС играют иммунологический фон у поросят, предшествующее переболевание вирусными болезнями, а также различные факторы, снижающие общую резистентность организма животных. Часто ГПС протекает в виде смешанной инфекции с энзоотической пневмонией и другими микоплазмозами.Sick and ill piglets, as well as bacteriological sows, serve as a source of GPS. Infection with GPS occurs mainly by aerogenous route. An important role in the occurrence of HPS is played by the immunological background in piglets, previous illnesses with viral diseases, as well as various factors that reduce the overall resistance of the animal organism. Often, GPS occurs as a mixed infection with enzootic pneumonia and other mycoplasmoses.

Диагноз на ГПС ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований [1-13].The diagnosis of GPS is made on the basis of epizootological, clinical, pathological data and laboratory results [1-13].

ГПС имеет широкое распространение во многих странах с развитым свиноводством и наносит отрасли значительный экономический ущерб.GPS is widespread in many countries with developed pig farming and causes significant economic damage to the industry.

С 2000 по 2003 гг. выполнена работа по мониторингу бактериальных инфекций поросят на территории Российской Федерации. Проведено обследование 19 хозяйств в 11 регионах России. Бактериологически обследовали 2346 образцов патологического материала от 391 головы павших и вынужденно убитых поросят в возрасте от 1 сут до 5 мес. H.parasuis и Actinobacillus pleuropneumonie изолировали из 1,35% проб патологического материала. Несмотря на незначительный процент выделения возбудителей ГПС и актинобациллезной плевропневмонии, в некоторых обследованных хозяйствах отход поросят отъемного возраста от этих заболеваний достигал 22,8% к общему числу павших отъемышей. Лечение больных гемофилезным полисерозитом поросят с помощью лекарственных средств экономически себя не оправдало, поскольку переболевшие животные резко отставали в росте и погибали в более поздние сроки от образования фибринозных спаек между серозными оболочками внутренних органов [14].From 2000 to 2003 work was done to monitor bacterial infections of piglets in the territory of the Russian Federation. A survey of 19 households in 11 regions of Russia. Bacteriologically examined 2346 samples of pathological material from 391 heads of dead and involuntarily killed piglets at the age of 1 day to 5 months. H. parasuis and Actinobacillus pleuropneumonie were isolated from 1.35% samples of pathological material. Despite the insignificant percentage of the excretion of the causative agents of GPS and actinobacillus pleuropneumonia, in some of the examined farms weaned piglets from these diseases reached 22.8% of the total number of dead weaners. The treatment of patients with hemophilic polyserositis of piglets with the help of drugs did not economically justify themselves, since the sick animals lagged sharply in growth and died at a later date from the formation of fibrinous adhesions between the serous membranes of the internal organs [14].

По этой причине вакцинопрофилактика ГПС занимает ведущее место в комплексе противоэпизоотических мер, направленных на борьбу с этим заболеванием. Для профилактики ГПС используют инактивированные вакцины, полученные из вирулентных штаммов гемофил, подвергнутых инактивации с помощью различных химических препаратов.For this reason, the vaccine prophylaxis of GPS takes a leading place in the complex of anti-epizootic measures aimed at combating this disease. Inactivated vaccines obtained from virulent hemophilic strains subjected to inactivation using various chemicals are used to prevent GPS.

Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [15].A known strain of H.parasuis of an unknown serotype is the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [15].

Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [16].A known H.parasuis strain of unknown serotype is the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [16].

Известен штамм H.parasuis неустановленного серотипа - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [17].A known strain of H.parasuis of an unknown serotype is the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [17].

Известен штамм H.parasuis серотипа А - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [18].A known strain of H.parasuis serotype A is the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [18].

Известен штамм H.parasuis серотипа D - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [18].Known strain H.parasuis serotype D - the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [18].

Известен штамм H.parasuis НТ серотипа D - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [19].Known strain H.parasuis NT serotype D - the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [19].

Известен штамм H.parasuis серотипа А - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [20].A known strain of H.parasuis serotype A is the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [20].

Известен штамм H.parasuis серотипа С - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [20].Known strain H.parasuis serotype C - the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [20].

Известен штамм H.parasuis серотипа «DB-28» - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [21].Known strain H.parasuis serotype "DB-28" - the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [21].

Известен штамм H.parasuis серотипа «DB-30» - возбудитель ГПС для изготовления инактивированной вакцины [21].Known strain H.parasuis serotype "DB-30" - the causative agent of GPS for the manufacture of inactivated vaccines [21].

Общим недостатком известных штаммов является низкая противоэпизоотическая эффективность изготовленных на их основе вакцинных препаратов.A common disadvantage of the known strains is the low antiepizootic efficacy of vaccines prepared on their basis.

В связи с этим задача отбора и изучения эпизоотических изолятов возбудителя ГПС в целях получения новых производственных штаммов H.parasuis для изготовления диагностических и вакцинных препаратов остается актуальной.In this regard, the task of selecting and studying epizootic isolates of the causative agent of HPS in order to obtain new production strains of H. parasuis for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations remains relevant.

В задачу создания настоящего изобретения входило получить новый производственный штамм H.parasuis - возбудитель ГПС, обладающий высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющий свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодный для изготовления чувствительных и высокоспецифических диагностикумов и высокоиммуногенных вакцинных препаратов, способных защитить свиное поголовье от эпизоотического возбудителя ГПС, циркулирующего на территории Российской Федерации.The task of creating the present invention was to obtain a new production strain of H.parasuis - the causative agent of HPS, which has high biological, antigenic and immunogenic activity, retains its native immunobiological properties after inactivation and is suitable for the manufacture of sensitive and highly specific diagnostics and highly immunogenic vaccine preparations that can protect the pork population from the epizootic causative agent of GPS circulating in the Russian Federation.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала штаммов H.parasuis - возбудителей ГПС, обладающих высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, сохраняющих свои нативные иммунобиологические свойства после инактивации и пригодных для изготовления высокоэффективных диагностических и вакцинных препаратов.The technical result from the use of the present invention is to expand the arsenal of H. parasuis strains, the causative agents of GPS, with high biological, antigenic and immunogenic activity, retaining their native immunobiological properties after inactivation and suitable for the manufacture of highly effective diagnostic and vaccine preparations.

Указанный технический результат достигнут получением штамма H.parasuis СК-1 (авторское наименование «штамм «СК-1») - возбудителя ГПС. Штамм является новым, ранее неизвестным.The specified technical result was achieved by obtaining the strain H.parasuis SK-1 (the copyright name "strain" SK-1 ") - the causative agent of GPS. The strain is new, previously unknown.

Исходная культура для получения штамма «СК-1» была выделена из патологического материала вынужденно убитых поросят в возрасте 45 суток с признаками ГПС, поступивших из ЗАО «Северный ключ» Самарской области.The initial culture for obtaining the strain "SK-1" was isolated from the pathological material of the forcedly killed piglets at the age of 45 days with signs of GPS received from Severny Klyuch CJSC in the Samara Region.

Полученный штамм депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ) МСХ РФ 6 января 2004 года под регистрационным номером Haemophilus parasuis СК-1-ДЕП.The resulting strain was deposited in the All-Russian state collection of strains of microorganisms used in veterinary medicine and animal husbandry, the Federal State Institution "All-Russian State Center for Quality and Standardization of Medicines for Animals and Feed" (FSI VGNKI) Ministry of Agriculture of the Russian Federation on January 6, 2004 under registration number Haemophilus parasuis SK 1-DEP.

Штамм «СК-1» обладает высокой антигенной и иммуногенной активностью. Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС, создающей напряженный и продолжительный иммунитет у вакцинированных животных.The strain "SK-1" has a high antigenic and immunogenic activity. The possibility of its use for the manufacture of an inactivated emulsion vaccine against GPS, which creates intense and lasting immunity in vaccinated animals, has been experimentally confirmed.

Штамм «СК-1» характеризуется следующими признаками и свойствами.Strain "SK-1" is characterized by the following features and properties.

Происхождение штаммаThe origin of the strain

Штамм «СК-1» относится к виду Haemophilus parasuis (семейство Pasteurellaceae, род Haemophilus).The strain "SK-1" refers to the species Haemophilus parasuis (family Pasteurellaceae, genus Haemophilus).

Выделен в лаборатории микробиологии ФГУ ВНИИЗЖ в ноябре 2002 г. от больных гемофилезным полисерозитом поросят в возрасте 45 суток.In November 2002, piglets at the age of 45 days were isolated from the microbiology laboratory of the Federal State Institution of the All-Russian Scientific Research Institute of Veterinary Life Sciences from patients with hemophilic polyserositis.

Морфологические свойстваMorphological properties

Штамм «СК-1» обладает морфологическими признаками, характерными для данных микроорганизмов. Клетки штамма «СК-1» овальные, сферические или палочковидные, по размеру обычно менее 1 мкм в ширину и различные по длине, иногда образуют нити, обнаруживают заметный плеоморфизм, образуют капсулу, неподвижные.Strain "SK-1" has morphological characteristics characteristic of these microorganisms. The cells of the strain "SK-1" are oval, spherical or rod-shaped, usually smaller than 1 μm in width and different in length, sometimes form filaments, exhibit noticeable pleomorphism, form a capsule, motionless.

При окраске по Граму клетки штамма «СК-1» окрашиваются отрицательно.When stained according to Gram, cells of strain "SK-1" are stained negatively.

Культуральные свойстваCultural properties

Штамм «СК-1» растет на средах сложного состава только в присутствии фактора роста V (NAD - никотинамидадениндинуклеотид или NADP - никотинамидадениндинуклеотид-фосфат). Оптимальная температура 35-37°С.The strain "SK-1" grows on media of complex composition only in the presence of growth factor V (NAD - nicotinamide adenine dinucleotide or NADP - nicotinamide adenine dinucleotide phosphate). The optimum temperature is 35-37 ° C.

При росте на жидкой питательной среде на основе бульона PPLO (для плевропневмониеподобных организмов) фирмы Difco, содержащей 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта (фактора роста V), в течение 24 часов штамм «СК-1» образует незначительное равномерное помутнение среды.When growing on a liquid nutrient medium based on PPLO broth (for pleuropneumonia-like organisms) from Difco, containing 10% freshly prepared yeast extract (growth factor V), the SK-1 strain forms a slight uniform turbidity within 24 hours.

При росте на плотных питательных средах, изготовленных на основе бульона PPLO (фирма Difco) и содержащих 1,5% агара (фирма Difco) и 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта, штамм «СК-1» формирует характерный рост колоний H.parasuis: мелкие, диаметром 0,5-2 мм, круглые, выпуклые, с гладкой блестящей поверхностью колонии в «S» форме.When growing on solid nutrient media made on the basis of PPLO broth (Difco) and containing 1.5% agar (Difco) and 10% freshly prepared yeast extract, strain SK-1 forms a characteristic growth of H.parasuis colonies: small, with a diameter of 0.5-2 mm, round, convex, with a smooth shiny surface of the colony in the "S" form.

Ферментативные (биохимические) свойстваEnzymatic (biochemical) properties

Штамм «СК-1» обладает биохимическими свойствами, характерными для вида H.parasuis, образует каталазу, оксидазу, не образует уреазу, сероводород и индол. Ферментирует без образования газа углеводы: глюкозу, сахарозу, лактозу, маннит; не ферментирует сорбит, лизин и орнитин.The strain "SK-1" has biochemical properties characteristic of the species H. parasuis, forms catalase, oxidase, does not form urease, hydrogen sulfide and indole. Carbohydrates without fermentation of gas: glucose, sucrose, lactose, mannitol; does not ferment sorbitol, lysine and ornithine.

Биотехнологическая характеристикаBiotechnological characteristic

Штамм «СК-1» является вирулентным в нативном виде и обладает антигенной и иммуногенной активностью после инактивации.The strain "SK-1" is virulent in its native form and has antigenic and immunogenic activity after inactivation.

Штамм «СК-1» предназначен для изготовления инактивированной вакцины против ГПС. При выращивании на жидкой питательной среде на основе бульона PPLO (фирма Difco), содержащей 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта (фактор роста V), в течение 12 часов штамм «СК-1» накапливается в титре 9,3-9,7 Ig колониеобразующих единиц в 1 см³ (КОЕ/см³).Strain "SK-1" is intended for the manufacture of inactivated vaccines against GPS. When grown on a liquid nutrient medium based on PPLO broth (Difco) containing 10% freshly prepared yeast extract (growth factor V), the SK-1 strain accumulates in the titer of 9.3-9.7 Ig colony forming units over 12 hours in 1 cm ³ (CFU / cm ³ ).

Штамм «СК-1» сохраняет свои свойства при хранении в полужидком агаре при температуре 4-6°С в течение месяца, а в лиофилизированном состоянии при температуре 4-6°С в течение 1 года.The strain "SK-1" retains its properties when stored in semi-liquid agar at a temperature of 4-6 ° C for a month, and in a lyophilized state at a temperature of 4-6 ° C for 1 year.

ПатогенностьPathogenicity

Штамм «СК-1» является патогенным для лабораторных и естественно-восприимчивых животных.The strain "SK-1" is pathogenic for laboratory and naturally susceptible animals.

Внутрибрюшинное заражение морских свинок массой 300-350 г суспензией штамма «СК-1», содержащей 2 млрд. КОЕ/см³, вызывает заболевание животных через 2 суток, а через 3-5 суток - их гибель.Intraperitoneal infection of guinea pigs weighing 300-350 g with a suspension of SK-1 strain containing 2 billion CFU / cm ³ causes the disease of the animals after 2 days, and after 3-5 days their death.

При заражении белых мышей массой 16-18 г разведениями суточных бульонных культур ЛД₅₀ для штамма «СК-1» составила 398 млн. микробных клеток (м.к.).When infecting white mice weighing 16-18 g with dilutions of daily broth cultures, the LD ₅₀ for strain SK-1 amounted to 398 million microbial cells (mk).

При заражении белых мышей массой 16-18 г суспензией клеток штамма «СК-1», выращенного на плотной питательной среде, Ig ЛД₅₀ штамма «СК-1» для белых мышей составляет 9,7 (5,01×10⁹).When infection of white mice weighing 16-18 g with a suspension of cells of strain "SK-1" grown on a solid nutrient medium, Ig LD _{50 of} strain "SK-1" for white mice is 9.7 (5.01 × 10 ⁹ ).

Серологические свойстваSerological properties

Штамм «СК-1» обладает агглютинирующей активностью в отношении антител переболевших или иммунизированных животных в реакции агглютинации (РА). При иммунизации лабораторных и естественно-восприимчивых животных формалинизированный цельноклеточный антиген штамма «СК-1» индуцирует образование специфических антител, выявляемых в РА, в разведении 1:200-1:3200.Strain "SK-1" has agglutinating activity against antibodies of sick or immunized animals in the agglutination reaction (RA). During immunization of laboratory and naturally susceptible animals, the formalinized whole-cell antigen of strain SK-1 induces the formation of specific antibodies detected in RA at a dilution of 1: 200-1: 3200.

Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties

Иммуногенная активность - 100%.Immunogenic activity - 100%.

Патогенность - выражена.Pathogenicity - expressed.

Вирулентность - выражена.Virulence - expressed.

Контагиозность - выражена.Contagiousness - expressed.

Свободен от контаминации грибной микрофлорой, бактериями других видов и вирусами.It is free from contamination with fungal microflora, bacteria of other species and viruses.

На основании полученных данных можно утверждать, что штамм «СК-1» по биохимическим, антигенным и иммуногенным свойствам является оригинальным, ранее неизвестным штаммом. Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная профилактика вновь возникающих очагов болезни, а для этого необходима высокоактивная и безвредная вакцина.Based on the data obtained, it can be argued that the strain "SK-1" in terms of biochemical, antigenic and immunogenic properties is an original, previously unknown strain. To reduce its epizootic danger, timely prevention of newly emerging foci of the disease is necessary, and for this a highly active and harmless vaccine is needed.

По мнению заявителя, предлагаемый штамм обладает признаками патентоспособности «новизна» и « изобретательский уровень».According to the applicant, the proposed strain has the features of patentability "novelty" and "inventive step".

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают его объем.The essence of the invention is illustrated by examples of its implementation, which do not limit its scope.

Пример 1.Example 1

Исходная культура для получения штамма «СК-1» была выделена из патологического материала (легкое, эксудат грудной полости, заглоточные и средостенные лимфоузлы, селезенка, сердце, кровь из сердца) вынужденно убитых поросят в возрасте 45 суток с признаками гемофилезного полисерозита, поступивших из ЗАО «Северный ключ» Самарской области.The initial culture for obtaining the strain "SK-1" was isolated from pathological material (lung, exudate of the chest cavity, pharyngeal and mediastinal lymph nodes, spleen, heart, blood from the heart) of pigs at the age of 45 days with signs of hemophilic polyserositis received from CJSC "Northern Key" of the Samara region.

Штамм «СК-1» был выделен в лаборатории ФГУ ВНИИЗЖ с использованием плотных питательных сред, изготовленных на основе бульона PPLO (фирма Difco), содержащих 1,5% агара (фирма Difco), 10% свежеприготовленного дрожжевого экстракта и 1% гемина.The strain SK-1 was isolated in the laboratory of FSI ARRIAH using solid nutrient media made on the basis of PPLO broth (Difco), containing 1.5% agar (Difco), 10% freshly prepared yeast extract and 1% hemin.

Выделенная чистая культура изолята была идентифицирована по культуральным и биохимическим свойствам и в полимеразной цепной реакции как H.parasius (таблица 1) и заложена на хранение в виде супсензии бактериальных клеток с концентрацией 10 млрд. м.к./см³ в желатин-сахарозной среде, лиофильно высушенной под вакуумом. Штамм хранится при температуре - 40°С.The isolated pure culture of the isolate was identified by H. parasius according to the cultural and biochemical properties and in the polymerase chain reaction (table 1) and stored as bacterial cell suspension with a concentration of 10 billion cubic meters / cm ³ in a gelatin-sucrose medium lyophilized under vacuum. The strain is stored at a temperature of - 40 ° C.

Штамм освежают 1-2 раза в год (12 мес.). Концентрация культуры за 12 мес. хранения снижалась менее чем на 0,5 Ig КОЕ/см³, при этом стабильно сохраняется активность в РА и иммуногенная активность.The strain is refreshed 1-2 times a year (12 months). The concentration of culture for 12 months. storage decreased by less than 0.5 Ig CFU / cm ³ , while the activity in RA and immunogenic activity are stably maintained.

Полученному штамму бактерий H.parasuis присвоено авторское наименование «СК-1».The resulting bacterial strain H.parasuis is assigned the copyright name "SK-1".

Пример 2.Example 2

Для изготовления диагностического антигена H.parasuis используют штамм «СК-1». Лиофилизированную культуру штамма «СК-1» суспендируют в 1 см³PPLO бульона, содержащего ростовые факторы (раствор NADP - 1%, раствор гемина - 1%) и засевают во флаконы с 20 см³ PPLO бульона. Флаконы инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов.For the manufacture of diagnostic H.parasuis antigen use strain "SK-1". The lyophilized culture of strain SK-1 is suspended in 1 cm ^{3 of} PPLO broth containing growth factors (NADP solution - 1%, hemin solution - 1%) and inoculated into vials with 20 cm ³ PPLO broth. Vials are incubated in an incubator at 37 ° C for 24 hours.

24-часовую бульонную культуру штамма «СК-1» высевают на чашки с PPLO агаром, содержащим ростовые факторы (раствор NADP - 1%, раствор гемина - 1%). Посевы инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов.A 24-hour broth culture of strain SK-1 is plated on plates with PPLO agar containing growth factors (NADP solution - 1%, hemin solution - 1%). Crops are incubated in an incubator at 37 ° C for 24 hours.

Выросшую на каждой чашке культуру смывают стерильным 0,9% физиологическим раствором в объеме 5 см³, затем трижды отмывают, центрифугируя суспензию при 1000 g. Осевшие клетки ресуспендируют в стерильном физ. растворе и доводят концентрацию клеток до 10 млрд. м.к./см³ по стандарту мутности. В полученную суспензию вносят формалин до конечной концентрации 0,2% и инкубируют смесь в термостате при 37°С в течение 24 часов. Суспензию проверяют на полноту инактивации высевом на чашку с PPLO агаром.The culture grown on each plate is washed off with sterile 0.9% saline in a volume of 5 cm ³ , then washed three times, centrifuging the suspension at 1000 g. The settled cells are resuspended in a sterile physical. solution and bring the cell concentration to 10 billion MK / cm ³ according to the standard turbidity. Formalin is added to the resulting suspension to a final concentration of 0.2% and the mixture is incubated in an incubator at 37 ° C for 24 hours. The suspension is checked for completeness of inactivation by plating on a plate with PPLO agar.

Инактивированные клетки осаждают центрифугированием при 1000 g. По стандарту мутности доводят концентрацию антигена до 20 млрд. м.к./см³ в физ. растворе.Inactivated cells are pelleted by centrifugation at 1000 g. According to the turbidity standard, the antigen concentration is adjusted to 20 billion m.k./cm ³ in physical. solution.

Для получения гипериммунной сыворотки используют молодых кроликов массой 2,5-3,0 кг. Кроликов иммунизируют один раз в неделю, начиная с дозы 0,5 см³ антигена (концентрация 20 млрд. м.к./см³) с адъювантом Фрейнда (в отношении 1:1) подкожно. Все последующие инъекции делают внутривенно в возрастающих дозах: 1, 2 и 3 см³. Последнюю дозу (3 см³) повторяют 4 раза. Через 1 неделю после 8-й инъекции кроликов обескровливают.To obtain hyperimmune serum, young rabbits weighing 2.5-3.0 kg are used. Rabbits are immunized once a week, starting with a dose of 0.5 cm ³ antigen (concentration of 20 billion MK / cm ³ ) with Freund's adjuvant (1: 1 ratio) subcutaneously. All subsequent injections are given intravenously in increasing doses: 1, 2 and 3 cm ³ . The last dose (3 cm ³ ) is repeated 4 times. 1 week after the 8th injection, the rabbits are bled.

Активность антигена определяют в количественной РА, которую проводят в полистироловых планшетах или пробирках с использованием гипериммунных сывороток крови кролика, содержащих антитела против штамма «СК-1» (положительные контрольные сыворотки). Нормальную сыворотку крови кролика используют в качестве отрицательного контроля.Antigen activity is determined in quantitative RA, which is carried out in polystyrene tablets or test tubes using rabbit hyperimmune blood serum containing antibodies against strain SK-1 (positive control sera). Normal rabbit blood serum is used as a negative control.

Антиген считают активным, если в РА с гомологичной сывороткой он образует видимые невооруженные глазом агглютинаты при концентрации 5×10⁷м.к./см³ (7,69 log₂) и выше. При этом с нормальной (неиммунной) сывороткой кролика реакция отсутствует.An antigen is considered active if, in RA with homologous serum, it forms agglutinates visible to the naked eye with a concentration of 5 × 10 ⁷ m.c./cm ³ (7.69 log ₂ ) and higher. However, there is no reaction with normal (non-immune) rabbit serum.

Специфичность антигена определяют также в количественной РА, но с сыворотками, содержащими антитела к бактериям Pasteurella multocida и Actinobacillus pleuropneumoniae. Антиген HPs не дает положительной реакции с сыворотками, иммунными к названным выше видам бактерий (таблица 2).Antigen specificity is also determined in quantitative RA, but with sera containing antibodies to the bacteria Pasteurella multocida and Actinobacillus pleuropneumoniae. The HPs antigen does not give a positive reaction with serums that are immune to the above types of bacteria (table 2).

Таким образом, результаты РА свидетельствуют о специфичности антигена, полученного из штамма «СК-1».Thus, the results of RA indicate the specificity of the antigen obtained from strain "SK-1".

Пример 3.Example 3

Для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС суточную бульонную культуру из штамма «СК-1», выращенную в аппарате АК-210 (объем 10 л), стерильно переливают в стеклянную емкость для инактивации, в которую вносят раствор димера этиленимина (ДЭИ) в количестве, обеспечивающем его конечную концентрацию в суспензии 1% по активному веществу. Инактивацию проводят при постоянном перемешивании, рН в пределах 7,6-7,8 и температуре 36-37°С в течение 24 часов.For the manufacture of an inactivated emulsion vaccine against GPS, the daily broth culture from the SK-1 strain grown in the AK-210 apparatus (volume 10 l) is sterilely poured into a glass container for inactivation into which ethyleneimine dimer solution (DEI) is added in an amount providing its final concentration in suspension of 1% of the active substance. Inactivation is carried out with constant stirring, pH in the range of 7.6-7.8 and a temperature of 36-37 ° C for 24 hours.

После окончания процесса инактивации суспензию охлаждают до 2-8°С и исследуют на полноту инактивации. Полученный антиген очищают от балластных примесей и ДЭИ известными для специалиста методами. После этого антиген соединяют с масляным адъювантом.After the end of the inactivation process, the suspension is cooled to 2-8 ° C and examined for completeness of inactivation. The resulting antigen is purified from ballast impurities and DEI by methods known to those skilled in the art. After this, the antigen is combined with an oil adjuvant.

В качестве масляного адъюванта используют Montanide ISA-70 (фирма «SEPPIC», Франция). Масляный адъювант и инактивированный антиген смешивают в соотношении (мас.%) 70:30 на гомогенизаторе в течение 4-5 минут при скорости вращения винта 3000 об./мин, при этом получают однородную эмульсию белого цвета типа «вода-масло».Montanide ISA-70 (SEPPIC, France) was used as an oil adjuvant. The oil adjuvant and the inactivated antigen are mixed in a ratio (wt.%) 70:30 on a homogenizer for 4-5 minutes at a screw speed of 3000 rpm, and a homogeneous white water-oil emulsion is obtained.

Полученная вакцина имеет оптимальный компонентный состав, мас.%:The resulting vaccine has an optimal component composition, wt.%:

Антигенный материал из штамма «СК-1»Antigenic material from the strain "SK-1" 30,030,0 Масляный адъювантOil adjuvant 70,070.0

Содержание антигена в вакцине в указанных выше пределах является его эффективным количеством в препарате, обеспечивающим достижение технического результата.The content of antigen in the vaccine in the above range is its effective amount in the drug, ensuring the achievement of a technical result.

Готовую эмульсионную вакцину собирают в одну стерильную емкость, фасуют в стеклянные флаконы и контролируют в соответствии с техническими условиями.The finished emulsion vaccine is collected in one sterile container, Packed in glass bottles and controlled in accordance with the technical conditions.

Вакцина представляет собой эмульсию белого цвета слегка вязкой консистенции. При хранении вакцины допускается незначительное отслоение минерального масла на поверхности эмульсии. При встряхивании вакцины однородность эмульсии восстанавливается.The vaccine is a white emulsion with a slightly viscous consistency. When storing the vaccine, slight exfoliation of the mineral oil on the surface of the emulsion is allowed. By shaking the vaccine, the uniformity of the emulsion is restored.

Полученную вакцину контролируют на безвредность и стерильность.The resulting vaccine is monitored for safety and sterility.

Определение безвредности проводят на 10 белых мышах массой 16-18 г. Из пяти флаконов с вакциной отбирают с соблюдением правил асептики и антисептики по 5 см³ содержимого и объединяют в общий объем. Объединенную пробу (25 см³) используют для проверки на безвредность. Препарат вводят животным подкожно в область спины в объеме 0,5 см³. Наблюдение за животными производят в течение 10 сут. Вакцину считают безвредной, если все животные, взятые в опыт, остаются живыми и клинически здоровыми в течение срока наблюдения.The determination of harmlessness is carried out on 10 white mice weighing 16-18 g. Of five vials of vaccine are selected in compliance with the rules of asepsis and antiseptics, 5 cm ^{3 of the} contents and combined into a total volume. The combined sample (25 cm ³ ) is used to check for harmlessness. The drug is administered to animals subcutaneously in the back in a volume of 0.5 cm ³ . Observation of animals is carried out for 10 days. The vaccine is considered harmless if all the animals taken in the experiment remain alive and clinically healthy during the observation period.

Стерильность вакцины определяют в соответствии с ГОСТ 280885-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности».Sterility of the vaccine is determined in accordance with GOST 280885-89 “Biological preparations. Methods of bacteriological control of sterility. "

Антигенную активность каждой серии вакцины проверяют на морских свинках массой 350-400 г. Вакцину вводят двукратно с интервалом 20-25 суток 10 морским свинкам внутримышечно в области бедра в объеме 0,5 см³. Через 14 суток после второй вакцинации у морских свинок отбирают пробы крови, выдерживают при температуре 37°С, отделяют сыворотку и исследуют на наличие антител к бактериям H.parasuis в РА. Серию вакцины считают прошедшей контроль на антигенную активность, если титр специфических антител в РА не ниже 1:200. Результаты исследований представлены в таблицах 4 и 5.The antigenic activity of each vaccine series is tested on guinea pigs weighing 350-400 g. The vaccine is administered twice with an interval of 20-25 days to 10 guinea pigs intramuscularly in the thigh in a volume of 0.5 cm ³ . 14 days after the second vaccination, blood samples were taken from guinea pigs, maintained at a temperature of 37 ° C, serum was separated and examined for the presence of antibodies to H. parasuis bacteria in RA. The vaccine series is considered to have passed the control for antigenic activity if the titer of specific antibodies in RA is not lower than 1: 200. The research results are presented in tables 4 and 5.

Вакцину применяют для профилактической иммунизации свиней против гемофилезного полисерозита. Вакцина способствует образованию активного иммунитета против гемофилезного полисерозита через 21 сутки после 2-кратного применения препарата длительностью не менее 6 месяцев.The vaccine is used for prophylactic immunization of pigs against hemophilic polyserositis. The vaccine promotes the formation of active immunity against hemophilic polyserositis 21 days after 2-fold use of the drug for at least 6 months.

Пример 4.Example 4

Проведена оценка качества инактивированной эмульсионной вакцины против ГПС из штамма «СК-1», изготовленной так, как описано в примере 3.The quality assessment of the inactivated emulsion vaccine against GPS from strain "SK-1", made as described in example 3.

Проверку вакцины проводили по следующим показателям:The vaccine was tested according to the following indicators:

бактериологический контроль стерильности, определение безвредности вакцины и ее иммуногенной активности.bacteriological control of sterility, determination of the safety of the vaccine and its immunogenic activity.

Бактериологический контроль стерильностиBacteriological sterility control

Пробы вакцины посеяли на жидкую и плотную среду Сабуро, МПА, МПБ - по 3 пробирки, на МППБ - по 2 пробирки и 2 флакона, среду Эндо - по 3 чашки.Vaccine samples were seeded on liquid and dense Saburo, MPA, MPB medium - 3 tubes each, on MPPB - 2 tubes and 2 vials, Endo medium - 3 cups each.

Для выявления аэробов высевали 0,5 см³ вакцины в одну пробирку и 2 см³в один флакон, а для выявления анаэробов - соответственно по 1 и 5 см³.To identify aerobes, 0.5 cm ^{3 of the} vaccine was sown in one test tube and 2 cm ³ in one bottle, and for the detection of anaerobes, 1 and 5 cm ³ , respectively.

Пробирки, бактериологические чашки, флаконы с посевами на всех средах, кроме Сабуро, выдерживали в термостате при (37±0,5)°С, на среде Сабуро при (21±1,0)°С в течение 7 суток.Test tubes, bacteriological plates, vials with inoculations on all media except Saburo were kept in a thermostat at (37 ± 0.5) ° С, in Saburo medium at (21 ± 1.0) ° С for 7 days.

По истечении указанного срока делали пересев, за исключением посевов на МПА, среду Эндо, агар Сабуро.After the specified period, reseeding was done, with the exception of crops on the IPA, Wednesday Endo, agar Saburo.

Пересевали пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживали 7 суток.Samples were transferred to the same nutrient media and in the same volumes as during sowing. Secondary crops held for 7 days.

Одновременно проводили контроль стерильности сред. Результаты первичного и повторного посевов оценивали путем макроскопического исследования посевов.At the same time, sterility of the media was monitored. The results of the initial and repeated crops were evaluated by macroscopic examination of the crops.

Рост микроорганизмов на питательных средах с посевами отсутствовал.The growth of microorganisms on culture media with crops was absent.

Определение безвредности вакциныDetermination of vaccine safety

Безвредность вакцины проверяли на 10 белых мышах массой 16-18 г. Препарат вводили подкожно в области спины в объеме 0,5 см³. Наблюдение за животными вели в течение 10 суток. Все животные, взятые в опыт, остались живыми и клинически здоровыми в течение срока наблюдения.The safety of the vaccine was tested on 10 white mice weighing 16-18 g. The drug was administered subcutaneously in the back in a volume of 0.5 cm ³ . Observation of the animals was carried out for 10 days. All animals taken in the experiment remained alive and clinically healthy during the observation period.

Безвредность вакцины проверяли на 4 подсвинках 4-месячного возраста. Препарат вводили 2 животным внутримышечно за ухом в объеме 3 см³(трехкратная доза) и 2 животным внутримышечно за ухом в объеме 5 см³(пятикратная доза).The safety of the vaccine was tested on 4 gilts of 4 months of age. The drug was administered to 2 animals intramuscularly behind the ear in a volume of 3 cm ³ (three times the dose) and 2 animals intramuscularly behind the ear in a volume of 5 cm ³ (five times the dose).

В течение 10 суток наблюдения отклонений со стороны общего состояния организма четырех подсвинков, взятых в опыт, не наблюдали.Within 10 days of observing deviations from the general state of the body, four gilts taken in the experiment were not observed.

Местная реакция на введение препарата отсутствовала.There was no local reaction to the drug.

Определение иммуногенности.Determination of immunogenicity.

Иммуногенную активность вакцины проверяли на 20 морских свинках массой 300-350 г.The immunogenic activity of the vaccine was tested in 20 guinea pigs weighing 300-350 g.

Вакцину вводили однократно внутримышечно в области бедра по 0,2 см³. Через 21 сутки после иммунизации 10 вакцинированных и 10 контрольных (невакцинированных) морских свинок заражали внутрибрюшинно предварительно оттитрованной смертельной дозой возбудителя ГПС, штамм «СК-1», в объеме 0,5 см³ подкожно.The vaccine was administered once intramuscularly in the thigh area at 0.2 cm ³ . 21 days after immunization, 10 vaccinated and 10 control (unvaccinated) guinea pigs were infected intraperitoneally with a previously titrated lethal dose of the causative agent of HPS, strain SK-1, in a volume of 0.5 cm ³ subcutaneously.

В течение 4 суток контрольные свинки пали, а опытные оставались живы в течение 10 суток после гибели контроля.Within 4 days, control pigs fell, and experimental pigs remained alive for 10 days after the death of control.

Исследование показали, что вакцина из штамма «СК-1» стерильна, безвредна и иммуногенна.The study showed that the vaccine from the strain "SK-1" is sterile, harmless and immunogenic.

Пример 5.Example 5

Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС. Иммуногенную активность ассоциированной вакцины проверили на 10 морских свинках массой 300-350 г.The effectiveness of the vaccine against GPS from strain "SK-1" was tested in the composition of the associated inactivated emulsion vaccine against pasteurellosis, salmonellosis and GPS. The immunogenic activity of the associated vaccine was tested in 10 guinea pigs weighing 300-350 g.

Вакцину вводили однократно внутримышечно во внутреннюю поверхность бедра по 0,2 см³. Через 21 сутки после иммунизации 5 вакцинированных и 5 контрольных (невакцинированных) морских свинок заразили внутрибрюшинно предварительно оттитрованной смертельной дозой возбудителя ГПС из штамма «СК-1» в объеме 0,5 см³.The vaccine was administered intramuscularly once into the inner thigh 0.2 cm ³ . 21 days after immunization, 5 vaccinated and 5 control (unvaccinated) guinea pigs were infected with an intraperitoneally pre-titrated lethal dose of the causative agent of HPS from strain SK-1 in a volume of 0.5 cm ³ .

Следовательно, испытуемая вакцина иммуногенна по гемофилезному компоненту.Therefore, the test vaccine is immunogenic for the hemophilic component.

Пример 6.Example 6

Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС в условиях промкомплекса «Кузнецовский» Московской области на 580 головах свиноматок во время производственной апробации ассоциированного препарата.The effectiveness of the vaccine against GPS from strain SK-1 was tested as part of the associated inactivated emulsion vaccine against pasteurellosis, salmonellosis and GPS in the conditions of the Kuznetsovsky industrial complex in the Moscow region on 580 sows during production testing of the associated drug.

Вакцину применяли согласно временному наставлению. После применения вакцины поствакцинальных осложнений и прорывов иммунитета у животных не отмечено.The vaccine was administered according to the temporary instructions. After vaccine application, vaccine-related complications and breakthroughs of immunity in animals were not observed.

Пример 7.Example 7

Эффективность вакцины против ГПС из штамма «СК-1» проверена в составе ассоциированной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза, сальмонеллеза и ГПС в условиях неблагополучного по ГПС ОАО «Ильиногорское» Нижегородской области на свиноматках во время производственной апробации ассоциированного препарата. Вакцину применяли согласно временному наставлению. Общее количество привитых животных составило: опытных - 292 головы, контрольных - 285 голов.The efficacy of the HPS vaccine from the SK-1 strain was tested as part of the associated inactivated emulsion vaccine against pasteurellosis, salmonellosis and HPS in the conditions of the Ilyinogorskoye non-satisfactory SPS vaccine in the Nizhny Novgorod Region during sows during production testing of the associated drug. The vaccine was administered according to the temporary instructions. The total number of vaccinated animals was: experimental - 292 heads, control - 285 goals.

Наблюдение за привитыми животными показало:Observation of vaccinated animals showed:

1. Отклонений со стороны общего состояния организма опытных и контрольных животных на инъекцию биопрепарата не наблюдали.1. Deviations from the general condition of the body of the experimental and control animals for the injection of a biological product were not observed.

2. Температура тела и основные физиологические показатели оставались в пределах нормы.2. Body temperature and basic physiological parameters remained within normal limits.

3. Сыворотки крови свиноматок в количестве 20 проб исследовали в ФГУ ВНИИЗЖ до иммунизации и через 25 дней после введения второй дозы вакцины.3. The blood serum of sows in the amount of 20 samples was investigated at the Federal State Institution of ARRIAH before immunization and 25 days after the second dose of the vaccine.

4. Сыворотки крови свиноматок, иммунизированных против сальмонеллеза, пастереллеза и ГПС, были положительными.4. Blood serum of sows immunized against salmonellosis, pasteurellosis and GPS were positive.

Результаты испытаний показали, что вакцина безвредна, обладает достаточной иммуногенной активностью и может быть использована для специфической профилактики.The test results showed that the vaccine is harmless, has sufficient immunogenic activity and can be used for specific prophylaxis.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:Thus, the above information indicates the fulfillment when using the invention of the following set of conditions:

- штамм «СК-1»-возбудитель ГПС, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной микробиологии и биотехнологии;- strain "SK-1" - the causative agent of GPS, embodying the invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary microbiology and biotechnology;

- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;- for the proposed invention in the form as described in the independent claim, the possibility of its implementation using the means and methods described in the application or known prior to the priority date is confirmed;

- штамм «СК-1», полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации, пригоден для изготовления высокоспецифичных и чувствительных диагностикумов и высокоиммуногенных и безвредных вакцинных препаратов и расширяет арсенал новых производственных штаммов H.parasuis - возбудителей ГПС.- strain "SK-1", obtained in accordance with the invention, has high biological, antigenic and immunogenic activity in its native form and after inactivation, is suitable for the manufacture of highly specific and sensitive diagnostics and highly immunogenic and harmless vaccine preparations and expands the arsenal of new production strains of H .parasuis - GPS agents.

Следовательно, предлагаемый штамм соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».Therefore, the proposed strain meets the condition of patentability "industrial applicability".

Источники информацииInformation sources

1. Glässer К. Untersuchungen uber die Schweineseuche mit besonderer Berücksichtigung ihrer Äntiologie und Pathologie (studies on poliserositis in swine with special regard to etiology and pathology) - Deutsch. Tieärztl W. - Schr., 1910, 18, 729-733.1. Glässer K. Untersuchungen uber die Schweineseuche mit besonderer Berücksichtigung ihrer Äntiologie und Pathologie (studies on poliserositis in swine with special regard to etiology and pathology) - Deutsch. Tieärztl W. - Schr., 1910, 18, 729-733.

2. Nicolet J., Scholl E. Haemophilus infections. In: Leman A.D., Clock R. etai., (Eds). Diseases of swine. 5^th edn. Iowa State Univ. Press. Ames IA, 1981, pp.368-377.2. Nicolet J., Scholl E. Haemophilus infections. In: Leman AD, Clock R. etai., (Eds). Diseases of swine. 5 ^th edn. Iowa State Univ. Press Ames IA, 1981, pp. 368-377.

3. Nicolet J., Morozumi Т., Bloch J., Proposal for a serological classification of Haemophilus parasuis. - Proc. Int. Pig. Vet. Soc., Barcelona, 1986, p.260.3. Nicolet J., Morozumi T., Bloch J., Proposal for a serological classification of Haemophilus parasuis. - Proc. Int. Pig. Vet. Soc., Barcelona, 1986, p. 260.

4. Сидоров М.И., Скородумов Д.И. Гемофилезы животных. - М., Агропромиздат, 1986, 82-104.4. Sidorov M.I., Skorodumov D.I. Hemophiliazis of animals. - M., Agropromizdat, 1986, 82-104.

5. Nielsen R. Pathogenicity and Immunity studies of Haemophilus parasuis Serotypes. - Acta Vet. scand., 1993, 34,2, 193-198.5. Nielsen R. Pathogenicity and Immunity studies of Haemophilus parasuis Serotypes. - Acta Vet. scand., 1993, 34.2, 193-198.

6. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part I. Agri-Practice, 1993a, 14 (3), 3, 19-23.6. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part I. Agri-Practice, 1993a, 14 (3), 3, 19-23.

7. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part II. Agri-Practice, 1993b, 14(4), 34-39.7. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part II. Agri-Practice, 1993b, 14 (4), 34-39.

8. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part III. Agri-Practice, 1993с, 14 (5), 5-9.8. Hill H., Conner J.F. et.al. Haemophilus parasuis. Part III. Agri-Practice, 1993c, 14 (5), 5-9.

9. Segal J. Enfermedad de Glasser: conceptos generales de la infection por Haemophilus parasuis. - Med. Vet, 1996, V.13, N11, 595-605.9. Segal J. Enfermedad de Glasser: conceptos generales de la infection por Haemophilus parasuis. - Med. Vet, 1996, V.13, N11, 595-605.

10. Определитель бактерий Берджи: В 2-х т. М.: Мир, 1997. - Т.1. - С.200-203.10. The determinant of bacteria Bergey: In 2 vols. M .: Mir, 1997. - T.1. - S.200-203.

11. Скородумов Д.И. Актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония и гемофилезный полисерозит свиней (этиология, лабораторная диагностика, основы специфической профилактики актинобациллезной плевропневмонии). - Автореф. дисс... доктора вет. наук. Москва, 1997. - 40 с.11. Skorodumov D.I. Actinobacillus (hemophilic) pleuropneumonia and hemophilic polyserositis in pigs (etiology, laboratory diagnosis, the basics of specific prophylaxis of actinobacillus pleuropneumonia). - Abstract. Diss ... Dr. Vet. sciences. Moscow, 1997 .-- 40 p.

12. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий. - М.: Мир, 1999. - С.498-500.12. The determinant of nontrivial pathogenic gram-negative bacteria. - M.: Mir, 1999 .-- S.498-500.

13. Гаффаров Х.З., Романов Е.А. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними. - Казань, 2003. - С.73-77.13. Gaffarov H.Z., Romanov E.A. Infectious diseases of pigs and modern means of combating them. - Kazan, 2003 .-- S.73-77.

14. Гусев В.В., Приходько С.М. и соавт. Мониторинг бактериальных инфекций в промышленном свиноводстве. - Ветеринария, 2004. - №2. - С.7-8.14. Gusev V.V., Prikhodko S.M. et al. Monitoring bacterial infections in industrial pig farming. - Veterinary medicine, 2004. - No. 2. - S.7-8.

15. Baehler J.R., Burgisser H. et al. Infection Haemophilus parasuis chez le pore. Schweiz. Arch. Tierheilkd., 1974. - 116. - P.183-188.15. Baehler J. R., Burgisser H. et al. Infection Haemophilus parasuis chez le pore. Schweiz. Arch. Tierheilkd., 1974. - 116. - P.183-188.

16. Nielsen R., Danielsen V. An outbreak of Glässer's disease. Studies on etiology, serology and effect of vaccination. Nord.Vet.Med., 1975. - 27. - P.20-25.16. Nielsen R., Danielsen V. An outbreak of Glässer's disease. Studies on etiology, serology and effect of vaccination. Nord.Vet.Med., 1975 .-- 27 .-- P.20-25.

17. Сидоров М.А. и соавт. Иммуногенность вакцины против гемофилезного полисерозита поросят. - Доклады ВАСХНИЛ, 1980. - 8. - С.30.17. Sidorov M.A. et al. Immunogenicity of the vaccine against hemophilic polyserositis of piglets. - Reports of the Supreme Agricultural Academy, 1980. - 8. - P.30.

18. Тарасенок Н.И. Изучение возбудителя гемофилезного полисерозита поросят. - Ветеринария, 1989. - 11. - С.36-39.18. Tarasenok N.I. The study of the causative agent of hemophilic polyserositis of piglets. - Veterinary medicine, 1989. - 11. - P.36-39.

19. ТУ 10-09-110-91 от 29.04.91 г. «Формолвакцина гидроокись-алюминиевая против гемофилезного полисерозита поросят».19. TU 10-09-110-91 of 04.29.91, "Formolvacine-aluminum hydroxide against hemophilic polyserositis of piglets."

20. Толяронок Г.Е. Этиология и профилактика полисерозита свиней. - Автореф. дисс... канд. вет. наук. Минск, 1998, 20 с.20. Tolyaronok G.E. Etiology and prevention of polyserositis of pigs. - Abstract. diss ... cand. vet. sciences. Minsk, 1998, 20 p.

21. Гаффаров Х.З., Ефимова М.А. и соавт. Антигенная активность ассоциированной вакцины против гемофилезного полисерозита, трансмиссивного гастроэнтерита и отечной болезни поросят-отъемышей на лабораторных животных. - Ветеринарный врач, 2003. №3(15), С.41-43.21. Gaffarov Kh.Z., Efimova M.A. et al. Antigenic activity of the associated vaccine against hemophilic polyserositis, transmissible gastroenteritis and edematous disease of weaned piglets in laboratory animals. - Veterinarian, 2003. No. 3 (15), P.41-43.

Таблица 1
Биохимические свойства штамма «СК-1»Table 1
Biochemical properties of the strain "SK-1" Название тестаTest name Оценка реакцииReaction score «СК-1»SK-1 по определителю Берджиby the identifier of Bergee КаталазаCatalase ++ ++ ОксидазаOxidase -- Гемин (X)Gemin (X) -- -- NADP (V)NADP (V) ++ ++ β-гемолизβ hemolysis -- -- ИндолIndole -- -- УреазаUrease -- -- СероводородHydrogen sulfide -- dd ГлюкозаGlucose ++ ++ ЛактозаLactose ++ dd СорбитSorbitol -- -- МаннитMannitol ++ -- СахарозаSucrose ++ ++ ЛизинLysine -- -- ОрнитинOrnithine -- -- Примечание: «+» - положительная реакция
«-« - отрицательная реакция
«d» - вариабельная реакцияNote: "+" - a positive reaction
"-" - negative reaction
"D" is a variable reaction Таблица 2
Специфичность антигена H.parasuis, штамм «СК-1»table 2
The specificity of the H.parasuis antigen, strain "SK-1" Сыворотки крови кролика, специфические к изолятамIsolate-specific rabbit blood serum Антигены (титры антител сывороток в РА, выраженные в Ig)Antigens (serum antibody titers in RA expressed in Ig) СК-1SK-1 Ил-1IL-1 Ш-1W-1 К-1K-1 РМ №115RM No. 115 РМ №656RM No. 656 РМ №9RM No. 9 СК-1 (H.parasuis)SC-1 (H.parasuis) 3200*3200 * 400400 -- -- -- -- -- Ил-1 (H.parasuis)IL-1 (H.parasuis) 400400 16001600 -- -- -- -- -- Ш-1 (A.pleuropneumoniae)Sh-1 (A.pleuropneumoniae) -- -- 16001600 -- -- -- -- К-1 (A.pleuropneumoniae)K-1 (A.pleuropneumoniae) -- -- -- 16001600 -- -- -- P.multocida N115P.multocida N115 -- -- -- -- 32003200 400400 200200 P.multocida N656P.multocida N656 -- -- -- -- 400400 32003200 200200 P.multocida N9P.multocida N9 -- -- -- -- 400400 200200 32003200 Контроль **The control ** -- -- -- -- -- -- -- Примечание: * - величина, обратная разведению сыворотки;
** - неиммунная сыворотка крови кролика;
«-« - негативная реакция.Note: * - the reciprocal of the dilution of serum;
** - non-immune rabbit blood serum;
“-“ - a negative reaction.

Таблица 3
Результаты исследований в РА сывороток крови морских свинок, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной из штамма «СК-1»Table 3
The results of studies in RA of serum from guinea pigs immunized with an inactivated emulsion vaccine from strain "SK-1" № пробыSample number Титры специфических антител в РАThe titers of specific antibodies in RA До вакцинацииBefore vaccination После первой вакцинацииAfter the first vaccination После второй вакцинацииAfter the second vaccination 1one -- 400*400 * 800800 22 -- 100one hundred 400400 33 -- 200200 800800 4four -- 100one hundred 400400 55 -- 100one hundred 800800 Примечание: « » - величина, обратная разведению сыворотки;
«-« - негативная реакция.Note: "" is the reciprocal of the dilution of serum;
“-“ - a negative reaction. Таблица 4
Результаты исследований в РА сывороток крови свиней разного возраста, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной из штамма «СК-1»Table 4
The results of studies in RA of blood serum of pigs of different ages immunized with inactivated emulsion vaccine from strain "SK-1" Группа животныхGroup of animals Возраст животногоAnimal age Титр антител до вакцинацииAntibody titer before vaccination Титр агглютинирующих антител после вакцинации (21 сут)Agglutinating antibody titer after vaccination (21 days) Супоросные свиноматкиPregnant sows 50*fifty* 800800 100one hundred 800800 2525 32003200 150150 800800 200200 16001600 2525 32003200 50fifty 800800 -- 32003200 100one hundred 16001600 50fifty 32003200 100one hundred 400400 2525 800800 50fifty 800800 150150 800800 ОтъемышиWeaners 70 сут.70 days 2525 400400 100one hundred 400400 2525 800800 50fifty 800800 2525 200200 2525 800800 Контрольные животныеControl animals невакцинированныеunvaccinated 2525 -- 2525 -- Примечание: «*» - величина, обратная разведению сыворотки,
«-« - негативная реакция.Note: "*" is the reciprocal of the dilution of serum,
“-“ - a negative reaction.

Claims

The strain Haemophilus parasuis CK-1 is the causative agent of hemophilic polyserositis of the Pasteurellaceae family of the genus Haemophilus, species Haemophilus parasuis, a collection of the Federal State Institution of Higher Vocational Neurophysiology of Haemophilus parasuis CK-1-DEPT, for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.