RU2240348C2 - Последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего, и вектор ее включающий - Google Patents
Последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего, и вектор ее включающий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2240348C2 RU2240348C2 RU2000101279/13A RU2000101279A RU2240348C2 RU 2240348 C2 RU2240348 C2 RU 2240348C2 RU 2000101279/13 A RU2000101279/13 A RU 2000101279/13A RU 2000101279 A RU2000101279 A RU 2000101279A RU 2240348 C2 RU2240348 C2 RU 2240348C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- acid sequence
- sequence
- seq
- vector
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
- A61K39/25—Varicella-zoster virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16211—Lymphocryptovirus, e.g. human herpesvirus 4, Epstein-Barr Virus
- C12N2710/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16211—Lymphocryptovirus, e.g. human herpesvirus 4, Epstein-Barr Virus
- C12N2710/16241—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/16243—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/108—Plasmid DNA episomal vectors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к генетической инженерии. Предложена последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего. Предложенная нуклеиновая кислота состоит из последовательности OriP вируса Эпштейна-Барра, включающей остатки 1-495 SEQ ID NO:1, и последовательности EBNA1 вируса Эпштейна-Барра, включающей остатки 627-1718 SEQ ID NO:1, консенсусную последовательность полиаденилирования и вирусный промотор. Предложенная нуклеиновая кислота имеет длину менее 3 т.п.н. Предложен также вектор, включающий вышеуказанную последовательность. Предложенная группа изобретений позволяет улучшить свойства экспрессионных векторов и создать стабильные кассеты, экспрессирующие ген. Изобретение может быть использовано для генной терапии и для создания экспрессионных векторов. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил.
Description
Известный уровень техники
Вирус Эпштейна-Барра (EBV) представляет собой вирус герпеса человека с латентной фазой, характеризуемой стабильным эписомальным размножением замкнутой в кольцо формы вирусной ДНК. Для латентной фазы репликации необходимы два дискретных элемента ДНК: находящееся в цис-положении начало репликации, OriP, и ядерный антиген 1 Эпштейна-Барра (EBNA1) - единственный кодируемый вирусом белок, необходимый для репликации (Yates et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 3806-10, 1984; Yates et al. Nature 313: 812-5, 1985). Большинство векторов EBV очень велики, порядка 10 т.п.о. или больше (без вставки), из-за большого размера сегментов EBNA1 и OriP. Размер существующих сегментов EBNA1 и OriP служит помехой в разработке экспрессионных векторов с улучшенными свойствами и в создании компактных экспрессирующих ген и стабильных кассет, которые могут быть введены в состав других средств доставки, таких как ретровирусы или аденовирусы.
Краткое изложение существа изобретения
В целом отличительной особенностью изобретения служит последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего. Эта нуклеотидная последовательность включает (а) последовательность OriP с делецией и (b) последовательность EBNA1 с делецией, функционально связанную с промотором, и эта нуклеотидная последовательность имеет длину менее 3 т.п.о., предпочтительно менее 2 т.п.о. и наиболее предпочтительно менее 1,8 т.п.о.
В предпочтительных вариантах последовательность OriP включает приблизительно 1-495 остатки SEQ ID NO:1 последовательность EBNA1 включает приблизительно 627-1718 остатки SEQ ID NO:1; последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно включает консенсусную последовательность полиаденилирования (например, близкую к последовательности SEQ ID NO: 2); а промотор представляет собой вирусный промотор.
В сходных вариантах в изобретении характеризуются также векторы и клетки (например, клетки млекопитающих и предпочтительно клетки человека), которые включают такие последовательности нуклеиновых кислот.
Подробное описание
Фиг.1 представляет собой последовательность укороченной EBV OriP и EBNA-1 кассеты.
Фиг.2 представляет собой последовательность компактного синтетического работающего в обоих направлениях сайта полиаденилирования, которая может быть применена совместно с компактным репликоном EBV.
После большой делеции и мутагенеза оказалось возможным вставить во фрагмент длиной менее 2 т.п.о. цис- и трансдействующие функции, необходимые для эписомальной репликации EBV. В частности, примером является представленный на фиг.1 фрагмент из 1748 пар оснований (SEQ ID NO: 1), который действует как компактный репликон EBV. Этот фрагмент содержит все последовательности, необходимые для эффективной экспрессии белка EBNA-1, за исключением консенсусной последовательности полиаденилирования. Фрагмент является сегментом от сайта Вg12 до сайта BamHl, который содержит OriP элемент между остатками 1 и 495, модифицированный промотор гена тими-динкиназы вируса 1 Неrpes simplex между остатками с 496 до 616 и кодирующую последовательность для укороченного и модифицированного гена EBNA1 между остатками 627 и 1718. Плазмидные векторы, основанные на этой последовательности, реплицируют как эписомы в ядре трансфецированных клеток, происходящих не от грызунов (Yates et al., 1985, смотри выше).
Для сведения к минимуму суммарной длины последовательности указанный выше фрагмент конструировали как вставку вышеработающего в обоих направлениях сайта полиаденилирования в соответствующем векторе. Пример компактного синтетического работающего в обоих направлениях сайта полиаденилирования представлен на фиг.2 (SEQ ID NO: 2).
Компактные репликоны EBV находят применение в векторах для генной терапии, например, в средствах доставки генов, таких как экспрессионные векторы.
Другие осуществления представлены в формуле изобретения.
Claims (8)
1. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего, включающая (а) последовательность OriP вируса Эпштейна-Барра, которая включает приблизительно остатки 1-495 SEQ ID NO:1 и (b) последовательность EBNA1 вируса Эпштейна-Барра, которая включает приблизительно остатки 627-1718 SEQ ID NO:1, функционально связанную с промотором, причем указанная последовательность нуклеиновой кислоты имеет длину менее 3 т.п.о.
2. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота имеет длину менее 2 т.п.о.
3. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что указанная нуклеиновая кислота имеет длину менее 1,8 т.п.о.
4. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что указанная последовательность нуклеиновой кислоты дополнительно включает консенсусную последовательность полиаденилирования.
5. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.4, отличающаяся тем, что указанная консенсусная последовательность полиаденилирования включает приблизительно SEQ ID NO:2.
6. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, отличающаяся тем, что указанный промотор представляет собой вирусный промотор.
7. Последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, встроенная в клетку.
8. Вектор, включающий последовательность нуклеиновой кислоты по п.1, причем указанный вектор способен к эписомальной репликации в ядре трансфицированной клетки.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US5020697P | 1997-06-19 | 1997-06-19 | |
| US60/050,206 | 1997-06-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2000101279A RU2000101279A (ru) | 2001-11-27 |
| RU2240348C2 true RU2240348C2 (ru) | 2004-11-20 |
Family
ID=21963948
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000101279/13A RU2240348C2 (ru) | 1997-06-19 | 1998-04-14 | Последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего, и вектор ее включающий |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6133025A (ru) |
| EP (1) | EP1032418B1 (ru) |
| JP (1) | JP2002505586A (ru) |
| KR (1) | KR100569826B1 (ru) |
| CN (1) | CN1263861C (ru) |
| AR (1) | AR054291A1 (ru) |
| AT (1) | ATE270341T1 (ru) |
| AU (1) | AU744680B2 (ru) |
| BR (1) | BR9810055A (ru) |
| CA (1) | CA2293299A1 (ru) |
| DE (1) | DE69824881T2 (ru) |
| DK (1) | DK1032418T3 (ru) |
| ES (1) | ES2224382T3 (ru) |
| HU (1) | HUP0003971A3 (ru) |
| ID (1) | ID24649A (ru) |
| PL (1) | PL337528A1 (ru) |
| PT (1) | PT1032418E (ru) |
| RU (1) | RU2240348C2 (ru) |
| TR (1) | TR199903155T2 (ru) |
| WO (1) | WO1998057658A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2002257440A1 (en) * | 2001-05-07 | 2002-11-18 | National Research Council Of Canada | Enhanced production of recombinant proteins by transient transfection of suspension-growing mammalian cells |
| EP2285969B1 (en) | 2008-05-15 | 2013-01-16 | National Research Council Of Canada | Use of protein kinase b and valproic acid to increase heterologous gene expression in mammalian cells |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4939088A (en) * | 1987-02-18 | 1990-07-03 | Meloy Laboratories Inc. | Sustained production of recombinant gamma interferon using an Epstein-Barr virus replicon |
-
1998
- 1998-04-14 EP EP98918285A patent/EP1032418B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-14 DK DK98918285T patent/DK1032418T3/da active
- 1998-04-14 TR TR1999/03155T patent/TR199903155T2/xx unknown
- 1998-04-14 CA CA002293299A patent/CA2293299A1/en not_active Abandoned
- 1998-04-14 AT AT98918285T patent/ATE270341T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-04-14 PL PL98337528A patent/PL337528A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1998-04-14 HU HU0003971A patent/HUP0003971A3/hu unknown
- 1998-04-14 DE DE1998624881 patent/DE69824881T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-14 BR BR9810055-6A patent/BR9810055A/pt active Search and Examination
- 1998-04-14 JP JP50439199A patent/JP2002505586A/ja not_active Withdrawn
- 1998-04-14 ES ES98918285T patent/ES2224382T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-14 PT PT98918285T patent/PT1032418E/pt unknown
- 1998-04-14 ID IDW991631A patent/ID24649A/id unknown
- 1998-04-14 KR KR1019997011923A patent/KR100569826B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-14 AU AU71239/98A patent/AU744680B2/en not_active Ceased
- 1998-04-14 WO PCT/US1998/007641 patent/WO1998057658A1/en active IP Right Grant
- 1998-04-14 CN CNB98810816XA patent/CN1263861C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-14 RU RU2000101279/13A patent/RU2240348C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-01 AR ARP980102555A patent/AR054291A1/es unknown
- 1998-06-19 US US09/100,730 patent/US6133025A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Yates J. et al., "A cis-acting element from the Epstein-Barr viral genome that permits stable replication of recombinant plasmids in latently infected cells", Proc Natl Acad Sci USA. 1984 Jun; 81(12):3806-10. Yates J. et al., "Stable replication of plasmids derived from Epstein-Barr virus in various mammalian cells", Nature, 28 Feb. 1985, vol. 313, pages 812-815. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU7123998A (en) | 1999-01-04 |
| DK1032418T3 (da) | 2004-11-01 |
| BR9810055A (pt) | 2000-09-12 |
| HUP0003971A2 (en) | 2001-03-28 |
| ID24649A (id) | 2000-07-27 |
| CA2293299A1 (en) | 1998-12-23 |
| KR100569826B1 (ko) | 2006-04-11 |
| TR199903155T2 (en) | 2000-09-21 |
| WO1998057658A1 (en) | 1998-12-23 |
| PL337528A1 (en) | 2000-08-28 |
| PT1032418E (pt) | 2004-10-29 |
| DE69824881T2 (de) | 2004-11-18 |
| EP1032418B1 (en) | 2004-06-30 |
| AR054291A1 (es) | 2007-06-20 |
| AU744680B2 (en) | 2002-02-28 |
| KR20010013901A (ko) | 2001-02-26 |
| US6133025A (en) | 2000-10-17 |
| ES2224382T3 (es) | 2005-03-01 |
| ATE270341T1 (de) | 2004-07-15 |
| EP1032418A1 (en) | 2000-09-06 |
| HUP0003971A3 (en) | 2003-03-28 |
| CN1278185A (zh) | 2000-12-27 |
| JP2002505586A (ja) | 2002-02-19 |
| CN1263861C (zh) | 2006-07-12 |
| EP1032418A4 (en) | 2002-01-02 |
| DE69824881D1 (de) | 2004-08-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Smith et al. | Antiviral effect of an oligo (nucleoside methylphosphonate) complementary to the splice junction of herpes simplex virus type 1 immediate early pre-mRNAs 4 and 5. | |
| Delecluse et al. | Propagation and recovery of intact, infectious Epstein–Barr virus from prokaryotic to human cells | |
| US5707618A (en) | Adenovirus vectors for gene therapy | |
| Delecluse et al. | A first-generation packaging cell line for Epstein–Barr virus-derived vectors | |
| US6153436A (en) | Method of gene delivery using wildtype adeno associated viral (AAV) vectors with insertions | |
| WO1995029993A1 (en) | Gene delivery vector using plasmid dna packaged into an adenovirus and a packaging cell line | |
| McKinnon et al. | Tn5 mutagenesis of the transforming genes of human adenovirus type 5 | |
| RU2240348C2 (ru) | Последовательность нуклеиновой кислоты, которая обеспечивает поддержание эписомальной репликации в клетке млекопитающего, и вектор ее включающий | |
| Hübscher et al. | The genetics of adeno-associated virus | |
| Smith et al. | In vivo episomal maintenance of a herpesvirus saimiri-based gene delivery vector | |
| US5716845A (en) | Immortalized lymphocytes for production of viral-free proteins | |
| US7148341B2 (en) | AAV DNA comprising helper virus sequences | |
| US6291246B1 (en) | DNA virus vectors and methods for their preparation | |
| US6436693B1 (en) | Method for helper virus-free packaging of a gene vector DNA | |
| KR100548187B1 (ko) | 헬퍼바이러스 없이 유전자 벡터dna를 패키징하는 방법 | |
| Lagenaur et al. | Regulation of Epstein-Barr virus promoters in oral epithelial cells and lymphocytes | |
| CA2154854C (en) | Immortalized lymphocytes for production of viral-free proteins | |
| MXPA99011726A (es) | Replicones de virus de epstein-barr compactos | |
| CN117431233A (zh) | 一种超小型rna碱基编辑器及其应用 | |
| Arsenakis et al. | Herpes Virus Vectors | |
| Kennedy et al. | Virus-based vectors for gene expression in mammalian cells: Epstein-Barr virus | |
| Adachi et al. | Activation of HIV-1 enhancer sequence by vaccinia virus. | |
| MXPA95003231A (en) | Immortalized lymphocytes for the production of vi-free propelles | |
| Chou | FUNCTIONAL ANALYSIS OF THE A SEQUENCE OF HERPES SIMPLEX VIRUS 1. | |
| Lin et al. | Disease-Inducible Transgene Expression |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090415 |