RU2234289C2 - Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology - Google Patents

Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology Download PDF

Info

Publication number
RU2234289C2
RU2234289C2 RU2002129337/15A RU2002129337A RU2234289C2 RU 2234289 C2 RU2234289 C2 RU 2234289C2 RU 2002129337/15 A RU2002129337/15 A RU 2002129337/15A RU 2002129337 A RU2002129337 A RU 2002129337A RU 2234289 C2 RU2234289 C2 RU 2234289C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hours
purified water
tissue
washed
ophthalmology
Prior art date
Application number
RU2002129337/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2002129337A (en
Inventor
Х.П. Тахчиди (RU)
Х.П. Тахчиди
А.Ф. Панасюк (RU)
А.Ф. Панасюк
Е.В. Ларионов (RU)
Е.В. Ларионов
С.В. Новиков (RU)
С.В. Новиков
Г.Д. Леонтьева (RU)
Г.Д. Леонтьева
А.В. Кобелевский (RU)
А.В. Кобелевский
Original Assignee
Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н.Федорова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н.Федорова filed Critical Государственное учреждение Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н.Федорова
Priority to RU2002129337/15A priority Critical patent/RU2234289C2/en
Publication of RU2002129337A publication Critical patent/RU2002129337A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2234289C2 publication Critical patent/RU2234289C2/en

Links

Landscapes

  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, ophthalmology.
SUBSTANCE: method involves using human or animal connective tissue. After mechanical treatment tissue is cut for bands with length from 1.0 to 3.0 cm, width from 0.5 to 2.0 cm and through holes are cut out with diameter 1-2 mm and density 1-3 per cm2, not less. Then bands are placed successively in 6% hydrogen peroxide solution for from 1 to 3 h, in 4 M urea solution for from 15 to 24 h and then in 2 M sodium chloride solution for from 15 to 24 h, washed out with purified water for from 10 to 24 h, treated three times with mixture of chloroform and ethyl alcohol in the ratio = 1:1 for from 10 to 24 h, washed out with purified water for from 1 to 10 h at constant change and stirring, dried, lyophilized and sterilized by the dose from 1.7 to 2.5 Mgrad. Invention provides enhancing the quality of biomaterial for application in ophthalmology, by reducing its antigenic properties and enhancing bioavailability.
EFFECT: improved preparing method, enhanced and valuable properties of biomaterial.
1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к офтальмологии, и может быть использовано для изготовления материалов при оперативном лечении миопии средней и высокой степени для получения биоматериала для склеропластики, для получения дренажей при оперативном лечении глаукомы и получении растворов коллагена при лечении миопии легкой и средней степени и оперативном лечении пресбиопии.The invention relates to medicine, and more particularly to ophthalmology, and can be used for the manufacture of materials in the surgical treatment of medium and high degree myopia to obtain biomaterial for scleroplasty, for the production of drains in the surgical treatment of glaucoma and the production of collagen solutions in the treatment of mild and moderate myopia and surgical treatment of presbyopia.

Известен способ получения биоматериала для использования в офтальмологии, который осуществляется путем обработки биоматериала - перикарда сельскохозяйственных животных, который механически очищают, заливают 0,9% раствором хлорида натрия и дистиллированной водой, после чего помещают в раствор аммиака и этилового спирта, затем отмывают водой и заливают этиловым спиртом (Патент РФ №2054283 от 20 февраля 1996 г.), который выбран за прототип, поскольку наиболее близок по своему техническому решению к предлагаемому изобретению.A known method of producing biomaterial for use in ophthalmology, which is carried out by processing biomaterial - pericardium of farm animals, which is mechanically cleaned, filled with 0.9% sodium chloride solution and distilled water, then placed in a solution of ammonia and ethyl alcohol, then washed with water and poured ethyl alcohol (RF Patent No. 2054283 of February 20, 1996), which is selected as the prototype, because it is closest in its technical solution to the proposed invention.

Недостатками указанного способа является то, что такая обработка не обеспечивает полное освобождение ткани от антигенов коллагена, липидов, фосфолипидов, липопротеидов и других жиросодержащих веществ, которые присутствуют в указанных тканях в больших количествах и снижают его биосовместимость.The disadvantages of this method is that this treatment does not provide complete release of tissue from collagen antigens, lipids, phospholipids, lipoproteins and other fat-containing substances that are present in large amounts in these tissues and reduce its biocompatibility.

Задачей изобретения является повышение качества биоматериала для использования в офтальмологии путем снижения его антигенных свойств и повышения биосовместимости.The objective of the invention is to improve the quality of biomaterial for use in ophthalmology by reducing its antigenic properties and increasing biocompatibility.

Техническим результатом, достигаемым при использовании изобретения, является получение биосовместимого низкоантигенного материала, который может широко использоваться для получения ряда изделий медицинского назначения, таких как материал для склеропластики, антиглаукоматозные дренажи и изделий для хирургического лечения пресбиопии.The technical result achieved by using the invention is to obtain a biocompatible low antigenic material, which can be widely used to obtain a number of medical devices, such as material for scleroplasty, anti-glaucomatous drains and products for the surgical treatment of presbyopia.

Технический результат достигается тем, что используют соединительную ткань животных или человека, которую после механической обработки нарезают на полоски длиной от 1,0 до 3,0 см и шириной от 0,2 до 2,0 см, вырезают сквозные отверстия диаметром 1-2 мм с плотностью не менее 1-3 на 1 см2 и помещают последовательно в 6% раствор перекиси водорода от 1 до 3 ч, в раствор 4 М мочевины от 5 до 10 часов, затем в 2 М раствор хлорида натрия от 2 до 10 ч, отмывают водой очищенной от 10 до 24 ч и трижды обрабатывают в смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 1:1 от 10 до 24 ч, отмывают водой очищенной от 1 до 10 ч при постоянной смене и перемешивании, высушивают, лиофилизируют и стерилизуют дозой от 1,7 до 2, 5 Мрад.The technical result is achieved by using animal or human connective tissue, which, after machining, is cut into strips 1.0 to 3.0 cm long and 0.2 to 2.0 cm wide, through holes 1-2 mm in diameter are cut with a density of at least 1-3 per 1 cm 2 and placed sequentially in a 6% solution of hydrogen peroxide from 1 to 3 hours, in a solution of 4 M urea from 5 to 10 hours, then in a 2 M solution of sodium chloride from 2 to 10 hours, washed with purified water from 10 to 24 hours and treated three times in a mixture of chloroform and ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 from 10 to 2 4 hours, washed with purified water for 1 to 10 hours with constant change and stirring, dried, lyophilized and sterilized with a dose of 1.7 to 2.5 Mrad.

Материалом для получения изделий является соединительная ткань ряда органов - твердая мозговая оболочка, перикард, склеральная оболочка глаза человека или животных, перитонеальная оболочка, кожа, кость или интерстициальная оболочка тонкого кишечника. Эти ткани в основном состоят из коллагена I или II типа, который характеризуется низкой растворимостью и высокой коллагенолитической устойчивостью. Этот тип коллагена является наиболее распространенным в изделиях медицинского назначения, имплантируемых в ткани.The material for obtaining the products is the connective tissue of a number of organs - the dura mater, pericardium, scleral membrane of the human or animal eye, peritoneal membrane, skin, bone or interstitial membrane of the small intestine. These tissues are mainly composed of type I or type II collagen, which is characterized by low solubility and high collagenolytic resistance. This type of collagen is most common in tissue implantable medical devices.

Технология приготовления таких биоимплантатов требует начальной механической обработки ткани, когда ткань первоначально очищается от остатков мягких тканей и крови.The technology for the preparation of such bioimplants requires initial mechanical processing of the tissue, when the tissue is initially cleaned of residues of soft tissues and blood.

После такой обработки ткань нарезают острым инструментом на полоски длиной не менее 1,0, шириной не менее 0,2 см, поскольку эти размеры являются наиболее оптимальными при обработке ткани растворами.After this treatment, the fabric is cut with a sharp tool into strips of at least 1.0 length and at least 0.2 cm wide, since these sizes are the most optimal when processing tissue with solutions.

Максимальные размеры полосок или кусочков длиной до 3,0 см и шириной 2,0 см определены опытным путем при обработке тканей с целью отмывки от белков. При завышении размеров возникают трудности с доступностью химических агентов к субстрату и неполное удаление белков и других активных молекул.The maximum sizes of strips or slices up to 3.0 cm long and 2.0 cm wide are determined empirically when processing fabrics for the purpose of washing from proteins. When oversized, there are difficulties with the availability of chemical agents to the substrate and incomplete removal of proteins and other active molecules.

После нарезки в ткани вырезают сквозные отверстия диаметром 1-2 мм с плотностью не менее 2-3 на 1 см2. Эти отверстия способствуют как лучшей отмывки ткани, так и лучшему ее врастанию в орган или место имлантации.After cutting, through holes with a diameter of 1-2 mm with a density of at least 2-3 per 1 cm 2 are cut out in the fabric. These holes contribute to both better washing of the tissue and its better growth into the organ or place of implantation.

При диаметре отверстия в ткани менее 1 мм доступность растворов в нее затрудняется или становится невозможной, а при диаметре более 2,0 см механическая прочность ткани снижается. Число отверстий или их плотность должна быть не менее 2-3 отверстий на 1 см2, поскольку является оптимальной для обработки и, что самое основное, для лучшей фиксации материала в том органе, куда этот материал помещается. В случае высокой твердости ткани отверстия высверливаются сверлом соответствующего диаметра.With a hole diameter of less than 1 mm in the fabric, the availability of solutions to it becomes difficult or impossible, and with a diameter of more than 2.0 cm, the mechanical strength of the fabric decreases. The number of holes or their density should be at least 2-3 holes per 1 cm 2 , because it is optimal for processing and, most importantly, for better fixation of the material in the organ where this material is placed. In the case of high hardness of the fabric, the holes are drilled with a drill of the appropriate diameter.

Любая биологическая ткань, которая используется при изготовлении имплантатов, потенциально содержит то или иное количество патогенных бактерий (FISHMAN J. А. (1998). Infection and Xenotransplantation: Developing Strategies to Minimize Risk. Annals NYAS Online 862:52-66). В другом случае биологическая ткань имеет естественную окраску, обусловленную наличием пигментов. С целью первичной деконтаминации и обесцвечивания ткань помещают в 6% раствор перекиси водорода от 1 до 3 ч. При обработке ткани менее 1 ч проходит неполная деконтаминация исходного сырья и неполное обесцвечивание ткани, например склеры. При обработке ткани свыше 3 ч могут начаться структурные изменения стромального коллагена, что может затем отразиться на основных свойствах конечного продукта.Any biological tissue used in the manufacture of implants potentially contains a certain amount of pathogenic bacteria (FISHMAN J. A. (1998). Infection and Xenotransplantation: Developing Strategies to Minimize Risk. Annals NYAS Online 862: 52-66). In another case, the biological tissue has a natural color due to the presence of pigments. For the purpose of primary decontamination and bleaching, the tissue is placed in a 6% hydrogen peroxide solution for 1 to 3 hours. When processing the tissue for less than 1 hour, incomplete decontamination of the feedstock and incomplete bleaching of the tissue, such as sclera, take place. When processing tissue for more than 3 hours, structural changes in stromal collagen may begin, which can then affect the basic properties of the final product.

Устойчивость различных типов соединительной ткани, содержащих коллаген к действию растворов, различна по месту воздействия или по доступности белков, или протеогликанов, которые являются основными антигенами ткани. Кроме того, многие из них нарушают или разрушают структуру ткани. К веществам, расщепляющим белки без разрушающего действия на коллаген, относится мочевина, которая применена в качестве протеолитического вещества. Гидролитическая концентрация мочевины 4 М установлена для многих типов белков экспериментально (Hakamata et al "HIFV" 1986 28(5) 71525). При низкой плотности соединительной ткани - склера, твердая мозговая оболочка, перикард, а также при небольших размерах плотной костной пластинки время обработки ткани занимает не менее 15 ч. Меньшее время обработки материала будет недостаточным. Большая плотность ткани и ее большие размеры требуют большего времени обработки до 24 ч. Обработка свыше 24 ч, может приводить к деструкции коллагена.The resistance of various types of connective tissue containing collagen to the action of solutions varies in the place of exposure or in the availability of proteins, or proteoglycans, which are the main antigens of the tissue. In addition, many of them disrupt or destroy the structure of the tissue. Substances that break down proteins without a damaging effect on collagen include urea, which is used as a proteolytic substance. The hydrolytic concentration of urea 4 M was established experimentally for many types of proteins (Hakamata et al "HIFV" 1986 28 (5) 71525). With a low density of connective tissue - sclera, dura mater, pericardium, as well as with a small dense bone plate, the tissue processing time takes at least 15 hours. Less material processing time will be insufficient. Large tissue density and its large size require a longer processing time of up to 24 hours. Processing of more than 24 hours can lead to collagen destruction.

Для удаления белковых субстратных комплексов применяют обработку материала гипертоническим 2 М раствором хлорида натрия от 15 до 24 ч. Минимальная и максимальная экстракция белков по времени установлена экспериментально по биохимическим анализам.To remove protein substrate complexes, the material is treated with a hypertonic 2 M sodium chloride solution from 15 to 24 hours. The minimum and maximum protein extraction over time has been established experimentally by biochemical analysis.

Вода очищенная - деионизованная вода высокой степени очистки от солей металлов и других примесей является предпочтительнее других типов воды. Время отмывки в воде очищенной определено по определению иона хлорида в смывной порции. Минимальное время отмывки от избытка хлорида натрия определено в 10 ч. Это время выхода комплекса из материала, заметно разбухающего при обработке и соответственно менее плотного по своей структуре. Через 24 ч после отмывки выход соли и белка прекращается.Purified water - highly purified deionized water from metal salts and other impurities is preferable to other types of water. The washing time in purified water is determined by the definition of chloride ion in the wash portion. The minimum washing time from an excess of sodium chloride was determined to be 10 hours. This is the time the complex exits from a material that noticeably swells during processing and is accordingly less dense in structure. 24 hours after washing, the salt and protein yield ceases.

Качество обработки материала определяли для протегликанов методом Frndel спектрофотометрически по окрашиванию 1,9-диметиленовым синим при длине волны 535 нм.The processing quality of the material was determined for proteoglycans by the Frndel method spectrophotometrically by staining with 1.9-dimethylene blue at a wavelength of 535 nm.

Выход белка определяли фармакопейным методом по Lowry спектроскопически при длине волны 400 нм и наличие остатков коллагена в смывах методом определения оксипролина по Кьельдалю. Избыток соли определяли качественной реакцией на СГ.Protein yield was determined spectroscopically at Lowry by the Pharmacopoeia method at a wavelength of 400 nm and the presence of collagen residues in swabs by the Kjeldahl method for determining hydroxyproline. Excess salt was determined by a qualitative reaction to SG.

В соединительной ткани содержится значительное количество липидов и их соединений с белками и углеводами. В обработанной ткани могут находиться эндотоксины - липополисахариды активные антигены, которые могут обуславливать различные воспалительные осложнения. Это явилось основой для введения в способ обработку в смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 1:1 на той стадии, когда основная строма материала уже обработана и очищена. Обработку ткани в смеси проводят от 10 до 24 ч, что определяется по количеству содержания липидов на 1 г ткани по сухому весу. Материал обрабатывают в смеси не менее 10 ч поскольку за это время липиды выходят из менее плотной ткани, а через 24 часа от начала обработки их выход из ткани прекращается.Connective tissue contains a significant amount of lipids and their compounds with proteins and carbohydrates. Endotoxins, lipopolysaccharides, active antigens that can cause various inflammatory complications, can be in the treated tissue. This was the basis for introducing into the method the treatment in a mixture of chloroform and ethyl alcohol in a 1: 1 ratio at the stage when the main stroma of the material has already been processed and purified. Processing the tissue in the mixture is carried out from 10 to 24 hours, which is determined by the amount of lipid content per 1 g of tissue by dry weight. The material is treated in a mixture for at least 10 hours since during this time the lipids exit the less dense tissue, and after 24 hours from the start of processing, their exit from the tissue ceases.

Отмывание материала от смеси проводят трижды водой очищенной при постоянной смене воды на новую и с перемешиванием материала на магнитной мешалке, что позволяет обеспечить лучшую доступность раствору. Для материала с меньшей плотностью - твердая мозговая оболочка, перикард, склера - достаточно отмывать ткань в течение 1 ч, а более плотную ткань, хрящ, кость до 10 ч, поскольку после этого времени спирт в промывной воде не определяется.The washing of the material from the mixture is carried out three times with purified water with a constant change of water to a new one and with mixing of the material on a magnetic stirrer, which allows for better accessibility to the solution. For a material with a lower density - the dura mater, pericardium, sclera - it is enough to wash the tissue for 1 hour, and a denser tissue, cartilage, bone up to 10 hours, because after this time alcohol is not detected in the wash water.

После этого материал высушивают при комнатной температуре, лиофилизируют и стерилизуют радиационным способом дозой от 1,7 до 2,5 Мрад.After that, the material is dried at room temperature, lyophilized and sterilized by a radiation method with a dose of 1.7 to 2.5 Mrad.

Краткая технология получения материалаBrief technology for obtaining material

Биологическую ткань очищают от механических примесей и крови, отмывают холодной водой и нарезают на полоски нужного размера, специальной прокаткой делают сквозные перфорации и помещают в 6% раствор перекиси водорода, затем 4 М мочевины, инкубируют в 2 М растворе хлорида натрия, отмывают водой. Отмытый материал помещают в смесь хлороформ : этанол, отмывают водой очищенной, высушивают, лиофилизируют и стерилизуют радиационным методом дозой 1,7-2,5 Мрад.The biological tissue is cleaned of mechanical impurities and blood, washed with cold water and cut into strips of the required size, through perforations are made by special rolling and placed in a 6% hydrogen peroxide solution, then 4 M urea, incubated in a 2 M sodium chloride solution, washed with water. The washed material is placed in a mixture of chloroform: ethanol, washed with purified water, dried, lyophilized and sterilized by a radiation method with a dose of 1.7-2.5 Mrad.

Приведенные выше действия приводят к снижению антигенности. Доказательства снижения антигенности получали при иммунизации животных материалами, полученными предлагаемым способом.The above actions lead to a decrease in antigenicity. Evidence of a decrease in antigenicity was obtained by immunizing animals with materials obtained by the proposed method.

Кроликов породы шиншилла, 15 животных, иммунизировали внутривенно и внутрибрюшинно водно-солевым экстрактом, выделенным из твердой мозговой оболочки человека (4 животных), перикарда быка (4 животных), склера свиньи (4 животных). В качестве контроля использовали материалы, обработанные по прототипу (8 животных).Chinchilla rabbits, 15 animals, were immunized intravenously and intraperitoneally with a water-salt extract isolated from the dura mater of humans (4 animals), bull pericardium (4 animals), pig sclera (4 animals). As control used materials processed according to the prototype (8 animals).

На 15 день после иммунизации у животных брали кровь, получали антисыворотку. Материал исследовали по методу Кунса-Уэллера, путем непрямой иммунофлуоресценции на флуоромикроскопе Оптон (Германия), для чего материал резали на криостате и помещали срезы на стекло, наносили антисыворотку в различных разведениях и меченные флуоресцеином антикроличьи Ig овцы, инкубировали в течение 15-30 мин и тщательно отмывали фосфатным буфером, заключали в глицерин и просматривали в микроскопе через отсекающий фильтр при длине волны 440 нм. Результаты этих исследований приведены в таблице.On the 15th day after immunization, animals were bled and received antiserum. The material was studied according to the Koons-Weller method, by indirect immunofluorescence on an Opton fluoromicroscope (Germany), for which the material was cut on a cryostat and placed on glass, antiserum was applied in various dilutions and fluorescein-labeled anti-rabbit Ig sheep were incubated for 15-30 minutes and thoroughly washed with phosphate buffer, enclosed in glycerol and viewed under a microscope through a cut-off filter at a wavelength of 440 nm. The results of these studies are shown in the table.

Figure 00000001
Figure 00000001

Таким образом видно, что предлагаемый способ обработки ткани позволяет снизить антигенность материала и таким образом повысить его биосовместимость и уменьшить число послеоперационных осложнений при применении данного материала в хирургической практике.Thus, it is seen that the proposed method of processing tissue allows to reduce the antigenicity of the material and thus increase its biocompatibility and reduce the number of postoperative complications when using this material in surgical practice.

Для лучшего понимания сущности изобретение поясняется примерами конкретного исполнения.For a better understanding of the essence of the invention is illustrated by examples of specific performance.

Пример 1. Приготовление материала для склеропластических операций и хирургического лечения миопии.Example 1. The preparation of material for scleroplastic surgery and surgical treatment of myopia.

Склеру свиньи механически очищают от примесей крови и пигмента и промывают холодной водой. Нарезают на полоски длиной 1,0 см, шириной 0,2 см и прокатывают специальным валиком, которым делают сквозные отверстия диаметром 1 мм с числом не менее 2 на 1 см2, споласкивают водой очищенной и помещают в 6% раствор перекиси водорода на 3 ч, споласкивают водой очищенной и помещают в 4 М раствор мочевины при комнатной температуре на 15 ч, отмывают водой очищенной и инкубируют в 2 М растворе хлорида натрия 2 ч и вновь отмывают водой очищенной до 10 ч.Sclera pigs are mechanically cleaned of impurities of blood and pigment and washed with cold water. Cut into strips 1.0 cm long, 0.2 cm wide and rolled with a special roller, which make through holes with a diameter of 1 mm with a number of at least 2 per 1 cm 2 , rinsed with purified water and placed in a 6% hydrogen peroxide solution for 3 hours , rinsed with purified water and placed in a 4 M urea solution at room temperature for 15 hours, washed with purified water and incubated in a 2 M sodium chloride solution for 2 hours and again washed with purified water for up to 10 hours

Проводят качественный контроль материала и после этого помещают материал в смесь хлороформ : этанол в соотношении 1:1 на 10 ч.A quality control of the material is carried out, and then the material is placed in a mixture of chloroform: ethanol in a ratio of 1: 1 for 10 hours.

Затем материал трижды промывают водой очищенной в течение 1 ч, при постоянной смене раствора на новый и постоянном перемешивании.Then the material is washed three times with purified water for 1 h, with a constant change of solution to a new and constant stirring.

Проводят контроль на липиды по окраске суданом.Carry out a lipid control by Sudan stain.

Обработанный таким образом материал высушивают при комнатной температуре, лиофилизируют, упаковывают и стерилизуют дозой 1,7 Мрад.The material thus treated is dried at room temperature, lyophilized, packaged and sterilized with a dose of 1.7 Mrad.

Аналогично обрабатывают и донорскую склеру человека после соответствующих серологических тестов.The donor sclera of a person is treated similarly after appropriate serological tests.

Материал используют для склеропластики при хирургическом лечении миопии и пресбиопии, а также в качестве антиглаукоматозных дренажей.The material is used for scleroplasty in the surgical treatment of myopia and presbyopia, as well as anti-glaucomatous drains.

Пример 2. Приготовление материала для склеропластических операций и операций при макулярной дистрофииExample 2. Preparation of material for scleroplastic operations and operations for macular degeneration

Перикард быка механически очищают от примесей крови и жира и промывают холодной водой, обработки нарезают на полоски длиной 2 см, шириной от 1,0 см и вырезают сквозные отверстия диаметром 1,5 мм с плотностью не менее 2 на 1 см2, помещают последовательно в 6% раствор перекиси водорода на 2 ч, промывают водой очищенной и помещают в раствор 4 М мочевины на 16 ч, затем в 2 М раствор хлорида натрия на 16 ч, отмывают водой очищенной от натрия и белка 16 ч. Проводят качественный контроль материала и после этого и трижды обрабатывают в смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 1:1 16 ч. Проводят контроль на липиды по окраске суданом, трижды отмывают водой очищенной 5 ч при постоянной смене и перемешивании, высушивают, лиофилизируют и стерилизуют дозой от 2,0 Мрад. Материал используют для склеропластики при хирургическом лечении миопии и макулярной дистрофии.The pericardium of a bull is mechanically cleaned of impurities of blood and fat and washed with cold water, the processing is cut into strips 2 cm long, 1.0 cm wide and through holes are cut with a diameter of 1.5 mm with a density of at least 2 per 1 cm 2 , placed sequentially in 6% hydrogen peroxide solution for 2 hours, washed with purified water and placed in a solution of 4 M urea for 16 hours, then in a 2 M solution of sodium chloride for 16 hours, washed with purified water from sodium and protein for 16 hours. A qualitative control of the material is carried out and after this and is treated three times in a mixture of chloroform and ethyl alcohol in a ratio of 1: 1. 16 hours to check that the color sudan lipids, washed three times with purified water for 5 hours at a constant change while stirring, dried, lyophilized and sterilized by 2.0 Mrad dose. The material is used for scleroplasty in the surgical treatment of myopia and macular degeneration.

Пример 3. Приготовление материала для склеропластических операций.Example 3. Preparation of material for scleroplastic surgery.

Твердую мозговую оболочку донора человека после проведения соответствующих серологических тестов механически очищают от примесей крови и жира и промывают холодной водой, обработки нарезают на полоски длиной 3,0 см, шириной 2,0 см и прокатывают специальным валиком, которым делают сквозные отверстия диаметром 1,0 мм с числом не менее 2 на 1 см2, споласкивают водой очищенной, помещают последовательно в 6% раствор перекиси водорода на 3 ч, в раствор 4 М мочевины на 24 ч, затем в 2 М раствор хлорида натрия на 24 ч, отмывают водой очищенной до 24 ч и Проводят качественный контроль материала, затем трижды обрабатывают в смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 1:1 до 24 ч, отмывают водой очищенной до 10 ч при постоянной смене и перемешивании. Проводят контроль на липиды по окраске суданом, высушивают, лиофилизируют и стерилизуют дозой 2, 5 Мрад.After conducting the appropriate serological tests, the dura of the human donor is mechanically cleaned of impurities of blood and fat and washed with cold water, the treatments are cut into strips 3.0 cm long, 2.0 cm wide and rolled with a special roller, which make through holes with a diameter of 1.0 mm with a number of at least 2 per 1 cm 2 , rinsed with purified water, placed sequentially in a 6% hydrogen peroxide solution for 3 hours, in a solution of 4 M urea for 24 hours, then in a 2 M solution of sodium chloride for 24 hours, washed with purified water up to 24 hours and spending material quality control, and then treated three times in a mixture of chloroform and ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 to about 24 hours, washed with purified water to 10 hours at a constant change and stirring. Control lipids by staining with Sudan, dried, lyophilized and sterilized with a dose of 2.5 Mrad.

Материал используют для склеропластики при хирургическом лечении миопии и для антиглаукоматозных дренажей.The material is used for scleroplasty in the surgical treatment of myopia and for anti-glaucomatous drains.

Использование предлагаемого способа позволяет унифицировать технологии по получению высококачественных низкоантигенных биоматериалов для офтальмологии с повышенной биосовместимостью. Применение таких биоматериалов значительно снизит безопасность их применения особенно при длительном нахождении имплантатов в организме.Using the proposed method allows to unify the technology for producing high-quality low-antigenic biomaterials for ophthalmology with increased biocompatibility. The use of such biomaterials will significantly reduce the safety of their use, especially when implants are in the body for a long time.

Claims (1)

Способ получения биоматериала для использования в офтальмологии, включающий механическую обработку биологической соединительной ткани растворами хлорида натрия и дистиллированной воды, аммиака и этилового спирта, отличающийся тем, что используют соединительную ткань животных или человека, которую после механической обработки нарезают на полоски длиной от 1,0 до 3,0 см, шириной от 0,5 до 2,0 см и вырезают сквозные отверстия диаметром 1-2 мм с плотностью не менее 1-3 на см2 помещают последовательно в 6%-ный раствор перекиси водорода от 1 до 3 ч, в раствор 4М мочевины от 15 до 24 ч, затем в 2М раствор хлорида натрия от 15 до 24 ч, отмывают водой очищенной от 10 до 24 ч и трижды обрабатывают в смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 1:1 от 10 до 24 ч, отмывают водой очищенной от 1 до 10 ч при постоянной смене и перемешивании, высушивают, лиофилизируют и стерилизуют дозой от 1,7 до 2,5 Мрад.A method of obtaining biomaterial for use in ophthalmology, including the mechanical treatment of biological connective tissue with solutions of sodium chloride and distilled water, ammonia and ethyl alcohol, characterized in that the connective tissue of animals or humans is used, which, after machining, is cut into strips from 1.0 to 3.0 cm, a width of 0.5 to 2.0 cm and cut through holes with a diameter of 1-2 mm with a density of at least 1-3 per cm 2 are placed sequentially in a 6% solution of hydrogen peroxide from 1 to 3 hours, in ra a target of 4M urea from 15 to 24 hours, then in a 2M sodium chloride solution from 15 to 24 hours, washed with purified water for 10 to 24 hours and treated three times in a mixture of chloroform and ethyl alcohol in a ratio of 1: 1 from 10 to 24 hours, washed purified water from 1 to 10 hours with constant change and stirring, dried, lyophilized and sterilized with a dose of 1.7 to 2.5 Mrad.
RU2002129337/15A 2002-11-05 2002-11-05 Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology RU2234289C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2002129337/15A RU2234289C2 (en) 2002-11-05 2002-11-05 Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2002129337/15A RU2234289C2 (en) 2002-11-05 2002-11-05 Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2002129337A RU2002129337A (en) 2004-05-10
RU2234289C2 true RU2234289C2 (en) 2004-08-20

Family

ID=33413168

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2002129337/15A RU2234289C2 (en) 2002-11-05 2002-11-05 Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2234289C2 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2476244C1 (en) * 2011-10-05 2013-02-27 Лариса Теодоровна Волова Method for preparing bioimplants of connective tissues
RU2607185C1 (en) * 2015-09-15 2017-01-10 Государственное бюджетное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней Академии наук Республики Башкортостан" Method of producing xenograft for ophthalmosurgery
RU2627453C1 (en) * 2016-06-07 2017-08-08 Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАУ МНТК "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова" Минздрава России) Method for homoscleral transplant manufacture

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2476244C1 (en) * 2011-10-05 2013-02-27 Лариса Теодоровна Волова Method for preparing bioimplants of connective tissues
RU2607185C1 (en) * 2015-09-15 2017-01-10 Государственное бюджетное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней Академии наук Республики Башкортостан" Method of producing xenograft for ophthalmosurgery
RU2627453C1 (en) * 2016-06-07 2017-08-08 Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГАУ МНТК "Микрохирургия глаза" им. акад. С.Н. Федорова" Минздрава России) Method for homoscleral transplant manufacture

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6743435B2 (en) Processing animal tissues by decellularizing, increasing surface area and acylating
CA2069450C (en) Process for preparing a material for osteoplasty from a natural bone tissue and material obtained by this process
US20050238688A1 (en) Method of preparing an immunologically inert graft material from body tissue and material made with the method
US9610383B2 (en) Method for producing a bone transplant material, and bone transplant material produced by same
US11529437B2 (en) Biological tissue matrix material, preparation method therefor and use thereof in otological repair material
RU2342162C1 (en) Method for bone tissue biomaterial obtaining, and material for osteoplasty and tissue engineering obtained by such method
US20210393396A1 (en) Dermal layer for grafting having improved graft survival rate and method for producing same
JPH04501077A (en) Preparation method of bovine pericardium material and its uses
JP2005500090A (en) Xenograft bone matrix for orthopedic applications
Asodiya et al. Preparation, characterization, and xenotransplantation of the caprine acellular dermal matrix
RU2234289C2 (en) Method for preparing biomaterial for application in ophthalmology
RU2721604C1 (en) Method for producing osteoplastic biomaterials from bone tissue
DK1978978T3 (en) Biocompatible tissue graft for implantation as well as the process for its preparation
JP2005532877A (en) Improved biological material phospholipid reduction and calcification reduction
US20130302435A1 (en) Xenograft soft tissue implants and methods of making and using
CN117500533A (en) Colored biological wound treatments for monitoring healing progression
RU2278655C1 (en) Method for production of biocompatible dental material
JPH07206888A (en) Placenta extract and its preparation
CN117120465A (en) Use of collagen particles for promoting folliculogenesis or angiogenesis
RU2281061C1 (en) Method for obtaining xenotransplants for ophthalmology
RU2278679C1 (en) Material for osteoplasty and method for production thereof
RU2290899C1 (en) Method for obtaining scleroplant biomaterial usable in ophthalmology
RU2607185C1 (en) Method of producing xenograft for ophthalmosurgery
RU2627453C1 (en) Method for homoscleral transplant manufacture
US20150344843A1 (en) Detergent treated biological tissue with low residual detergent and method of producing the same

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20041106