RU2224528C2 - Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных - Google Patents
Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2224528C2 RU2224528C2 RU2001120729/15A RU2001120729A RU2224528C2 RU 2224528 C2 RU2224528 C2 RU 2224528C2 RU 2001120729/15 A RU2001120729/15 A RU 2001120729/15A RU 2001120729 A RU2001120729 A RU 2001120729A RU 2224528 C2 RU2224528 C2 RU 2224528C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptides
- sodium chloride
- biologically active
- chloride solution
- cnss
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и касается способа получения активных веществ, а именно пептидов КНСС из сырья животного происхождения, обладающих антиандрогенной и антиэстрогенной активностью. Пояснично-крестцовый отдел спинного мозга животных гомогенизируют в растворе хлорида натрия при соотношении 1:10, 1:15, экстрагируют экстракт, дважды насыщают сульфатом аммония и поэтапно центрифугируют в течение 25-30 мин при 6000-9000 об/мин, при первом осадок отбрасывают, а при втором его растворяют в 0,8-1%-ном растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре в пределах 220-280 нм и целевой продукт лиофилизируют. Технический результат: способ экологически безвреден, нетрудоемок, экономичен, сокращает время экстрагирования и получения осадка и позволяет получить активные пептиды высокой чистоты. 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине и касается способа получения биологически активных веществ, а именно пептидов КНСС [1] из сырья животного происхождения.
Известен способ получения биологически активного вещества из сырья животного происхождения, обладающего антиандрогенной и антиэстрогенной активностью [2]. Он включает гомогенизацию спинного мозга, экстрагирования биологически активного вещества раствором хлорида натрия, центрифугирования водной взвеси мозга, осаждения вещества сульфатом аммония, растворения осадка в растворе хлорида натрия, обессоливания, хроматографирования и лиофильной сушки вещества.
Недостатком данного способа является получение смеси других веществ вместе с биологически активными пептидами КНСС, что при их применении в медицинской практике может вызвать нежелательные побочные эффекты. Кроме того, получение активного вещества из осадка достигалось фильтрованием, значительно удлиняющим время выделения конечного продукта.
Задача изобретения: получение биологически активных пептидов КНСС позвоночных, очищенных от других веществ.
Достигается это путем гомогенизации пояснично-крестцового отдела спинного мозга позвоночных, экстрагирования биологически активных пептидов раствором хлорида натрия, осаждением пептидов сульфатом аммония, растворением осадка в растворе хлорида натрия, обессоливания, хроматографирования в УФ-спектре и лиофильной сушке пептидов.
Способ осуществляется следующим образом: гомогенизируют пояснично-крестцовый отдел спинного мозга позвоночных и экстрагируют пептиды при 10-15oС в течение, например, 25-30 минут в 0,8-1% растворе хлорида натрия в сочетании 1:10-1:15 с добавлением ЭДТА до 0,05%. Центрифугируют взвесь мозга в течение 25-30 минут при 6000-9000 об/мин при 5-10oС, дважды осаждают сульфатом аммония при 5-10oС.
При первом 9% насыщении осаждают высокомолекулярные белки, отбрасывают их и повторным насыщением экстракта сульфатом аммония до 39-40% осаждают биологически активные пептиды, растворяют осадок в 0,85-1%-ном растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре с получением очищенных пептидов, лиофилизируют их. Выход активных пептидов составляет 250 мкг на 1 кг сырья. Полученные таким способом пептиды обладают выраженной антиандрогенной (табл. 1) и антиэстрогенной (табл.2) активностью. Они имеют молекулярную массу 1300, что подтверждено методом тонкослойной хроматографии. Пептиды разрушаются протеазами, инактивируются при кипячении или содержании их в термостате при 37oС в течение 1 часа. Они осаждаются депротеинизирующими средствами: хлоридом натрия, сернокислым аммонием, тетрауксусной кислотой.
При использовании в качестве сырья пояснично-крестцового отдела спинного мозга предлагаемые в способе параметры температуры, среды, концентрации эстрагена, его соотношение с гомогенатом мозга, скорость центрифугирования являются оптимально допустимыми. Так использование мозга на всем протяжении увеличивает долю балластных веществ, энергии, объема исходного гомогената и времени получения конечного продукта. Экстрагирование ниже 10oС ведет к возрастанию времени экстракции пептидов более 1,5 часа, а выше 15oС происходит частичная их инактивация.
Концентрация раствора хлорида натрия менее 0,8% снижает степень экстракции пептидов, их выход и увеличивает время этого процесса, а выше 1% способствует осаждению части пептидов, снижая их выход.
Соотношение эстрагена с гомогенатом мозга менее 1:10 уменьшает степень экстракции пептидов и их выход, а увеличение больше чем 1:15 не дает положительного эффекта.
Центрифугирование взвеси мозга при скорости ниже 6000 об/мин ухудшает осаждение взвешенных частиц мозга и увеличивает время этого процесса до 1 часа, а скорость более 9000 об/мин не повышает эффективность отделения взвешенных частиц мозга.
Центрифугирование при 5-10oС необходимо для сохранения активности термолабильных пептидов. Снижение температуры менее 5oС удлиняет время осаждения взвешенных частиц до 1 часа, выше 10oС - приводит к снижению активности пептидов.
Пример 1. Берут 100 г свежего или замороженного спинного мозга животного на протяжении пояснично-крестцового отдела, гомогенизируют на волчке. Гомогенат заливают 10 частями 0,8% раствора хлорида натрия с добавлением 0,05% ЭДТА. Экстракцию проводят при 10oС в течение 30 мин при постоянном встряхивании. Центрифугируют взвесь мозга в течение 25 мин на рефрижераторной центрифуге при 10oС со скоростью 9000 об/мин, осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость дважды насыщают сульфатом аммония при 15oС. Первым 9% насыщением сульфата аммония осаждают высокомолекулярные белки, которые отделяют центрифугированием при 6000 об/мин на рефрижераторной центрифуге при 10oC в течение 20 мин и отбрасывают. Надосадочную жидкость вновь насыщают до 39% сульфатом аммония, осаждая биологически активные пептиды КНСС. Осадок получают путем центрифугирования при 10oС на рефрижераторной центрифуге в течение 30 мин со скоростью 9000 об/мин. Надосадочную жидкость отбрасывают. Полученный осадок растворяют в 0,85% растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре в пределах от 220 до 280 нм и лиофилизуют чистые пептиды. Выход активного вещества составляет 25 мкг, т.е. 250 мкг на 1 кг сырья.
Пример 2. Берут 100 г свежего или замороженного спинного мозга животного на протяжении пояснично-крестцового отдела, гомогенизируют на волчке. Гомогенат заливают 15 частями 0,9%-ного раствора хлорида натрия с добавлением 0,05% ЭДТА. Экстракцию проводят при 12oС в течение 30 мин при постоянном встряхивании. Центрифугируют взвесь мозга в течение 30 мин на рефрижераторной центрифуге при 5oС со скоростью 8000 об/мин, осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость дважды насыщают сульфатом аммония при 15oС. Первым 10% насыщением сульфата аммония осаждают высокомолекулярные белки, которые отделяют центрифугированием при 6000 об/мин на рефрижераторной центрифуге в течение 25 мин и отбрасывают. Вторым - 40% насыщением сульфатом аммония осаждают биологически активные пептиды КНСС. Осадок получают центрифугированием при 8000 об/мин при 7oС на рефрижераторной центрифуге в течение 30 мин. Надосадочную жидкость отбрасывают. Полученный осадок растворяют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре в пределах от 230 до 280 нм и лиофилизуют чистые пептиды. Выход активного вещества составляет 25 мкг, т.е. 250 мкг на 1 кг сырья.
Пример 3. Берут 100 г свежего или замороженного спинного мозга животного на протяжении пояснично-крестцового отдела, гомогенизируют на волчке. Гомогенат заливают 15 частями 1%-ного раствора хлорида натрия с добавлением 0,05% ЭДТА. Экстракцию проводят при 15oС в течение 25 мин при постоянном встряхивании. Центрифугируют взвесь ткани мозга в течение 28 мин на рефрижераторной центрифуге при 8oС со скоростью 7000 об/мин, осадок отбрасывают, а надосадочную жидкость дважды насыщают сульфатом аммония при 14oС. Первым 10% насыщением сульфата аммония осаждают высокомолекулярные белки, которые отделяют центрифугированием при 7000 об/мин на рефрижераторной центрифуге в течение 30 мин и отбрасывают. Вторым 39% насыщением надосадочной жидкости сульфатом аммония осаждают биологически активные пептиды КНСС. Осадок получают центрифугированием при 9000 об/мин при 10oС в течение 25 мин. Надосадочную жидкость отбрасывают. Полученный осадок растворяют в 0,85%-ном растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре в пределах от 250 до 280 нм и лиофилизуют чистые пептиды. Выход активных пептидов составляет 25 мкг, т.е. 250 мкг на 1 кг сырья.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет сократить время выделения, сэкономить энергию и получить биологически активные пептиды КНСС позвоночных в высокой степени чистоты.
Источники информации
1. Бахтинов А. Инкреторная функция каудального отдела спинного мозга и его физиологическое значение // Мед. Газета - 1997. - 22 - С.7
2. Бахтинов А.П. Патент РФ 2074726 на изобретение "Способ получения биологически активного вещества, обладающего антиандрогенной и антиэстрогенной активностью".
1. Бахтинов А. Инкреторная функция каудального отдела спинного мозга и его физиологическое значение // Мед. Газета - 1997. - 22 - С.7
2. Бахтинов А.П. Патент РФ 2074726 на изобретение "Способ получения биологически активного вещества, обладающего антиандрогенной и антиэстрогенной активностью".
Claims (1)
- Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы позвоночных, обладающих антиандрогенной и антиэстрогенной активностью, заключающийся в том, что пояснично-крестцовый отдел спинного мозга животных гомогенизируют с 0,8-1%-ным раствором хлорида натрия при соотношении 1:10, 1:15, экстрагируют в нем в течение 25-30 мин при 10-15°С, экстракт дважды насыщают сульфатом аммония и поэтапно центрифугируют 25-30 мин при 6000-9000 об/мин, при первом осадок отбрасывают, а при втором его растворяют в 0,8-1%-ном растворе хлорида натрия, обессоливают, хроматографируют в УФ-спектре в пределах 220-280 нм и целевой продукт лиофилизируют.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001120729/15A RU2224528C2 (ru) | 2001-07-24 | 2001-07-24 | Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2001120729/15A RU2224528C2 (ru) | 2001-07-24 | 2001-07-24 | Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2001120729A RU2001120729A (ru) | 2003-06-27 |
RU2224528C2 true RU2224528C2 (ru) | 2004-02-27 |
Family
ID=32172028
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2001120729/15A RU2224528C2 (ru) | 2001-07-24 | 2001-07-24 | Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2224528C2 (ru) |
-
2001
- 2001-07-24 RU RU2001120729/15A patent/RU2224528C2/ru not_active IP Right Cessation
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4294753A (en) | Bone morphogenetic protein process | |
US3973002A (en) | Antihemophilic factor | |
US4621631A (en) | Process for the production of a bonded collagen fiber sheet | |
US20070166798A1 (en) | Isolating chondroitin sulfate | |
ES2207248T3 (es) | Componentes de bajo peso molecular del cartilago de tiburon, procesos de obtencion y usos terapeuticos de los mismos. | |
KR101916759B1 (ko) | 고농도, 고순도의 동종 콜라겐 제조 방법 및 동종 콜라겐 지지체의 제조방법 | |
EP0101063A2 (de) | Neues Polypeptid mit Wirkung auf das Immunsystem, Verfahren zu seiner Isolierung und Reinigung, seine Verwendung und dieses enthaltende Mittel | |
US4216204A (en) | Medical protein hydrolysate, process of making the same and processes of utilizing the protein hydrolysate to aid in healing traumatized areas | |
RU2224528C2 (ru) | Способ получения биологически активных пептидов каудальной нейросекреторной системы (кнсс) позвоночных | |
RU2074726C1 (ru) | Способ получения биологически активного вещества, обладающего антиандрогенной и антиэстрогенной активностью | |
RU2049472C1 (ru) | Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат" | |
ES2358110T3 (es) | Proceso de extracción mejorado. | |
RU2049471C1 (ru) | Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат" | |
RU2080865C1 (ru) | Способ получения гемоглобина | |
US4394374A (en) | Thymus gland extracts | |
SU1108102A1 (ru) | Способ получени пероксидазы | |
JPH05310799A (ja) | ムチンの精製方法 | |
RU2038087C1 (ru) | Способ получения вещества из кожи свиньи, влияющего на пролиферацию и дифференцировку кератиноцитов человека | |
EP0396402A2 (en) | Cell growth activators | |
RU2062619C1 (ru) | Способ получения препарата фолликулостимулирующего гормона из аденогипофизов животных | |
SU706088A1 (ru) | Способ получени гидролизата печени свиньи | |
SU907070A1 (ru) | Способ получени фибринолитического фермента | |
RU2125888C1 (ru) | Способ получения мономерного альбумина | |
RU2077537C1 (ru) | Способ получения овомукоида | |
RU2105559C1 (ru) | Способ получения цитохрома с |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090725 |