RU2202801C2 - Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума - Google Patents
Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума Download PDFInfo
- Publication number
- RU2202801C2 RU2202801C2 RU98106367A RU98106367A RU2202801C2 RU 2202801 C2 RU2202801 C2 RU 2202801C2 RU 98106367 A RU98106367 A RU 98106367A RU 98106367 A RU98106367 A RU 98106367A RU 2202801 C2 RU2202801 C2 RU 2202801C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- erythrocytic
- red blood
- preparing
- blood cells
- suspension
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к производству эритроцитарных диагностикумов для реакции пассивной гемагглютинации для индикации антител к различным бактериям. Сущностью изобретения является проведение сенсибилизации эритроцитов барана в присутствии водных растворов слабых полимерных карбокси- и тетразолсодержащих кислот молекулярной массы 40-2000 кД, при концентрации водных растворов полимеров 0,2-0,8 мг/мл и объемном соотношении со взвесью эритроцитов 1:1. Техническим результатом является повышение чувствительности эритроцитарного диагностикума. 3 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к производству эритроцитарных диагностикумов для реакции пассивной гемагглютинации применительно к индикации антител к различным бактериям.
Известны способы сенсибилизации эритроцитов путем обработки их растворами танина с последующей конъюгацией с антигеном [1].
Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ сенсибилизации 20-50% взвеси эритроцитов 5-ю объемами сыворотки сенситина с применением в качестве связующего агента двух объемов 0,3-0,5% раствора СrСl3 в течение 5 мин при 18-20oС и рН 6,5-7,0 [2,3].
Недостатком известных способов является низкая чувствительность диагностикумов.
Техническим результатом предлагаемого способа является повышение чувствительности эритроцитарного диагностикума.
Технический результат достигается путем сенсибилизации эритроцитов водным раствором слабых полимерных кислот концентрации 0,2-0,8 мг/мл при объемном соотношении взвеси эритроцитов и раствора полимерной кислоты 1:1.
Авторами в качестве полимерных кислот были использованы образцы полиакриловой кислоты (75, 750 и 2000 кД), полиметакриловой кислоты (1000 кД), поли-5-винилтетразола (40 и 500 кД). Для сенсибилизации эритроцитов применяли дифтерийный микробный антиген (поверхностный белок 64 кД), лактобактерин (L. fermentum 90TC4) и бифидобактерин (В. bifidum 1, 791).
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Приготовление эритроцитарных диагностикумов для определения антител к коринебактериям дифтерии, лактобактериям и бифидобактериям.
Для приготовления диагностикума используют эритроциты барана. Взятие крови у барана проводят из яремной вены по 300 мл в антикоагулянт (5%-ный раствор цитрата натрия). Эритроциты сразу отмывают охлажденным физиологическим раствором 3 раза на центрифуге при 15000-20000 g. Формалинизацию эритроцитов проводят по методу Weinbach. Из отмытых эритроцитов готовят 8%-ную взвесь клеток на физиологическом растворе. К одному объему взвеси добавляют равный объем фиксирующего раствора (3%-ный раствор формальдегида на физиологическом растворе с рН 7,0-7,2, профильтрованный через бумажный фильтр), смесь помещают в термостат при +37oС на 20 ч, периодически перемешивая. После этого эритроциты отмывают физиологическим раствором 3 раза при 15000-20000 g и хранят в консерванте (0,03%-ный формальдегид) в виде 20%-ной взвеси клеток.
Перед сенсибилизацией эритроциты отмывают один раз при 15000-20000 g охлажденным физиологическим раствором и определяют агглютинацию клеток. Для этого в лунки пластины микротитратора "Такачи" вносят по 0,1 мл 0,2%-ной взвеси отмытых эритроцитов в 0,9%-ном растворе хлорида натрия. В случае отсутствия спонтанной агглютинации клетки оседают через 1-1,5 ч в виде точки с резко очерченными краями. Такие эритроциты используют для приготовления диагностикума.
К одному объему 20%-ной взвеси отмытых от формалина эритроцитов добавляют равный объем раствора полимера или хлорида хрома СrС13, перемешивают 2 ч при комнатной температуре и добавляют 0,5 объема раствора антигена. Смесь выдерживают 30 мин на водяной бане при 56oС и 30 мин при комнатной температуре при постоянном перемешивании. Далее отмывают эритроциты от несвязанного белка три раза физиологическим раствором при 15000-20000 g в течение 5 мин. Готовят 0,8%-ную взвесь сенсибилизированных эритроцитов на физиологическом растворе с добавлением консерванта (азида натрия), взмучивают и подвергают контролю. Для контроля используют иммунную кроличью сыворотку, содержащую соответствующие антитела. Методика проведения анализа, учета ложноположительных реакций и обработки результатов соответствует общепринятой в методе пассивной гемагглютинации.
Пример 2. Влияние природы полимерной кислоты и ее концентрации на чувствительность диагностикума.
Зависимость чувствительности эритроцитарного диагностикума от концентрации полимерной кислоты определяют на примере полиметакриловой кислоты с молекулярной массой 1000 кД с использованием сывороток больных-носителей дифтерийных антител. Результаты, представленные в табл. 1, указывают на достаточно высокую чувствительность диагностикума при концентрации полимера 0,2-0,8 мг/мл. Повышение или понижение концентрации полимера не увеличивает чувствительность, но повышает вероятность спонтанной агглютинации эритроцитов.
Влияние природы полимера на чувствительность диагностикума изучено при концентрации полимера 0,8 мг/мл. Как показывают результаты табл. 2, диагностикумы на основе всех исследованных полимерных кислот обладают достаточно высокой чувствительностью, которая повышается при увеличении молекулярной массы полимера.
Пример 3. Сравнительная характеристика диагностикумов на основе полимерной кислоты и хлорида хрома при определении бактериальных антител.
Для исследования влияния связывающего агента на чувствительность эритроцитарных диагностикумов готовят диагностикумы на основе дифтерийного микробного антигена (поверхностный белок 64 кД), лактобактерина (L. fermentum 90TC4) и бифидобактерина (В. bifidum 1).
В качестве связывающего агента применяют полиметакриловую кислоту (1000 кД, 0,8 мг/мл) и раствор СrС13 с концентрацией 0,3%, обычно применяемой при приготовлении эритроцитарных диагностикумов.
В качестве исследуемых объектов были использованы сыворотки пациентов ожогового центра (100 человек), новорожденных детей (40) и рожениц (40). В табл. 3 представлены данные по сывороткам только с положительной реакцией.
Использование в РПГА диагностикумов, приготовленных с использованием слабой полимерной кислоты, позволяет повысить в 2-8 раз чувствительность к антителам по сравнению с диагностикумами, приготовленными по известной методике с использованием хлорида хрома.
Литература
1. Кондрашина Н.Н., Берестень С.Ф., Шмелева Е.А. // А.с. СССР 1471857, 1988 г.
1. Кондрашина Н.Н., Берестень С.Ф., Шмелева Е.А. // А.с. СССР 1471857, 1988 г.
2. Каральник Б.В. Эритроцитарные реагенты в клинической иммунологии // Иммунология, 1995. 3. С.4-6.
3. Перадзе Т.В. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. М.: Медицина, 1985. С.100-106.
Claims (1)
- Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума путем сенсибилизации антигенами формалинизированных эритроцитов барана, отличающийся тем, что сенсибилизацию проводят в присутствии водных растворов слабых полимерных карбокси- и тетразолсодержащих кислот молекулярной массы 40-2000 кД, при этом концентрация водных растворов полимеров составляет 0,2-0,8 мг/мл при объемном соотношении со взвесью эритроцитов 1:1.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98106367A RU2202801C2 (ru) | 1998-04-07 | 1998-04-07 | Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98106367A RU2202801C2 (ru) | 1998-04-07 | 1998-04-07 | Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU98106367A RU98106367A (ru) | 2000-02-10 |
RU2202801C2 true RU2202801C2 (ru) | 2003-04-20 |
Family
ID=20204384
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98106367A RU2202801C2 (ru) | 1998-04-07 | 1998-04-07 | Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2202801C2 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2534558C2 (ru) * | 2012-10-25 | 2014-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Лимнологический институт Сибирского отделения Российской академии наук (ЛИН СО РАН) | Способ получения антител на основе фракций поли-1-винилимидазола |
RU2714305C1 (ru) * | 2019-08-19 | 2020-02-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный аграрный научный центр Республики Дагестан" | Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) |
-
1998
- 1998-04-07 RU RU98106367A patent/RU2202801C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Иммунологическая диагностика вирусных инфекций./Под ред. Перадзе Т.В. - М.: Медицина, 1985, с.100-101. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2534558C2 (ru) * | 2012-10-25 | 2014-11-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Лимнологический институт Сибирского отделения Российской академии наук (ЛИН СО РАН) | Способ получения антител на основе фракций поли-1-винилимидазола |
RU2714305C1 (ru) * | 2019-08-19 | 2020-02-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный аграрный научный центр Республики Дагестан" | Способ изготовления бруцеллезного эритроцитарного антигена для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1289877C (en) | Water-insoluble particle and immunoreactive reagent, analytical elementsand methods of use | |
EP0302715B1 (en) | Avidin- and biotin-immobilized reagents, analytical elements and methods of use | |
JP3110839B2 (ja) | スクシンイミド含有ポリマー由来の生物学的活性試薬の製造方法及びそれを含んでなる分析要素並びにその用途 | |
EP0321261B1 (en) | Use of immobilized biotinylated receptor in test device, kit and method for determining a ligand | |
US5374516A (en) | Avidin-and biotin immobilized reagents and methods of use | |
JPH076983B2 (ja) | 抗体の迅速検出のための組成物、診断キット及び方法 | |
US4118349A (en) | Process for the manufacture of polystyrene latex compounds | |
EP0323692B1 (en) | Water-insoluble reagent, elements containing same and methods of use | |
RU2202801C2 (ru) | Способ приготовления эритроцитарного антигенного диагностикума | |
US5177023A (en) | Water-insoluble reagent elements containing same and methods of use | |
US4828978A (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
KR920002183B1 (ko) | 성인 t세포 백혈병 바이러스 항체 검출용 시약의 제조방법 | |
EP0280556B1 (en) | Water-insoluble particle and immunoreactive reagent, analytical elements and methods of use | |
RU2452962C2 (ru) | Способ и тест-система определения циркулирующих иммунных комплексов | |
JPH0616048B2 (ja) | フィブロネクチンの免疫学的測定 | |
JP2654932B2 (ja) | C−反応性蛋白質測定用試薬 | |
RU2429483C2 (ru) | Способ получения эритроцитарного антигенного диагностикума | |
EP0280561B1 (en) | Agglutination reagent and method of preparing same | |
RU2526820C1 (ru) | Способ титрования групповых антител системы аво | |
JP3095478B2 (ja) | 免疫学的凝集反応粒子の製造方法 | |
JP2571383B2 (ja) | 生体成分中のヒト・ヘモグロビンの測定方法及び測定用試薬キット | |
RU2142807C1 (ru) | Способ приготовления эритроцитарного иммунодиагностикума и способ оценки иммунорезистентности организма | |
SU1033140A1 (ru) | Способ получени диагностикума дл вы влени антидигоксиновых антител | |
SU1634284A1 (ru) | Способ получени иммунореагента дл вы влени антигенсв зывающих лимфоцитов в реакции розеткообразовани | |
KR100193746B1 (ko) | 화학수정에 의해 응집성이 감소된 적혈구 및 그의제조방법 |