RU2183970C1 - Method to obtain bacterial allergens - Google Patents

Method to obtain bacterial allergens Download PDF

Info

Publication number
RU2183970C1
RU2183970C1 RU2001102725A RU2001102725A RU2183970C1 RU 2183970 C1 RU2183970 C1 RU 2183970C1 RU 2001102725 A RU2001102725 A RU 2001102725A RU 2001102725 A RU2001102725 A RU 2001102725A RU 2183970 C1 RU2183970 C1 RU 2183970C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
concentration
microbial
suspension
culture
allergen
Prior art date
Application number
RU2001102725A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
В.Н. Федосеева
В.А. Камышева
Original Assignee
ООО "Медалл"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ООО "Медалл" filed Critical ООО "Медалл"
Priority to RU2001102725A priority Critical patent/RU2183970C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2183970C1 publication Critical patent/RU2183970C1/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine, allergology. SUBSTANCE: method deals with obtaining bacterial allergens out of microbial cells and their metabolites obtained out of highly allergenic strains of conditionally pathogenic microorganisms isolated from respiratory tract mucosa in patients suffering bronchial asthma. EFFECT: higher efficiency of allergen for specific allergological diagnostics of infectious- allergic respiratory diseases.

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно аллергологии, и касается получения бактериальных аллергенов. The invention relates to medicine, namely allergology, and for the production of bacterial allergens.

Известен способ получения бактериальных аллергенов, например, мелиоидозного аллергена, характеризующийся тем, что бактериальную массу культивируют на плотной питательной среде, затем инактивируют ацетоном в соотношении 1:3 при 20-30oС в течение суток, полученный препарат дезинтегрируют ультразвуком мощностью 75-100 Вт, частотой 18-22 кГц 25-30 мин, центрифугируют при 10000±10 g 25-30 мин и высаливают сульфатом аммония при 40±0,5% насыщения (патент RU 1621229, 1988 г., А 61 К 39/02).A known method for producing bacterial allergens, for example, a melioid allergen, characterized in that the bacterial mass is cultivated on a solid nutrient medium, then inactivated with acetone in a ratio of 1: 3 at 20-30 o C for a day, the resulting preparation is disintegrated with ultrasound power of 75-100 watts , a frequency of 18-22 kHz 25-30 minutes, centrifuged at 10000 ± 10 g 25-30 minutes and salted out with ammonium sulfate at 40 ± 0.5% saturation (patent RU 1621229, 1988, A 61 K 39/02).

Задачей настоящего изобретения является получение аллергена для специфической аллергологической диагностики и терапии инфекционно-аллергических заболеваний дыхательных путей. The objective of the present invention is to obtain an allergen for specific allergological diagnosis and therapy of infectious-allergic diseases of the respiratory tract.

Для решения поставленной задачи используют аллерген, представляющий собой взвесь микробных клеток и их метаболитов, полученную из высокоаллергенных штаммов условно-патогенных микроорганизмов, выделенных со слизистых дыхательного тракта больных бронхиальной астмой. To solve this problem, an allergen is used, which is a suspension of microbial cells and their metabolites obtained from highly allergenic strains of conditionally pathogenic microorganisms isolated from the mucous membranes of the respiratory tract of patients with bronchial asthma.

Выращивание культуры ведут на целлофановых дисках на питательной среде, включающей 1% глюкозы и 7% дефибринированной кроличьей крови при 37oС с концентрацией взвеси 10 млрд. микробных тел/мл, далее микробную взвесь смывают физраствором с 0,3% фенола при рН 7,0-7,2, инактивируют при 37oС в течение 18-20 ч и последовательно разводят сначала физраствором с 0,4% фенола до концентрации 1 млрд. микробных клеток в 1 мл, а затем разводящей жидкостью до концентрации 300-500 млн. микробных клеток в 1 мл.Cultivation is carried out on cellophane disks in a nutrient medium, including 1% glucose and 7% defibrinated rabbit blood at 37 ° C with a suspension concentration of 10 billion microbial bodies / ml, then the microbial suspension is washed with saline with 0.3% phenol at pH 7, 0-7.2, inactivate at 37 o C for 18-20 hours and subsequently diluted first with saline with 0.4% phenol to a concentration of 1 billion microbial cells in 1 ml, and then with a diluting liquid to a concentration of 300-500 million microbial cells in 1 ml.

Конкретные примеры осуществления способа. Specific examples of the method.

Пример 1. Example 1

Способ получения аллергена Neisseria perflava. A method of obtaining an allergen Neisseria perflava.

Для получения аллергена используют штаммы 57 и 11, характеризующиеся следующими признаками:
а) морфологические и тинкториальные свойства - грамотрицательные диплококки, 0,6-0,8 мкм в диаметре;
б) культуральные биохимические свойства - на плотных средах с добавлением 5-7% кроличьих эритроцитов при 37±1oС дает рост в виде мелких, округлых, блестящих, полупрозрачных, слегка беловатых (желтоватых) колоний слизистой консистенции. Колонии на агаре с декстрозой мелкие, круглые, слегка возвышенные. Кислота - на декстрозе, мальтозе, левулезе, сахарозе. Оптимум температуры 37oС;
в) вирулентные и токсикогенные свойства - не токсикогенен, вирулентность - 1) вызывает вульвовагиниты; 2) свежевыделенные штаммы имеют пили и паразитируют на клетках слизистых дыхательного тракта и вагины.
To obtain an allergen use strains 57 and 11, characterized by the following features:
a) morphological and tinctorial properties - gram-negative diplococci, 0.6-0.8 microns in diameter;
b) cultural biochemical properties - on solid media with the addition of 5-7% rabbit erythrocytes at 37 ± 1 o C gives growth in the form of small, round, shiny, translucent, slightly whitish (yellowish) colonies of mucous consistency. Colonies on agar with dextrose are small, round, slightly elevated. Acid - on dextrose, maltose, levulosis, sucrose. The optimum temperature of 37 o C;
c) virulent and toxicogenic properties - non-toxicogenic, virulence - 1) causes vulvovaginitis; 2) freshly isolated strains have drank and parasitize on the cells of the mucous membranes of the respiratory tract and vagina.

Для изготовления аллергена Нейссерии перфлава используют производственные штаммы Нейссерии перфлава 57, 11, депонированные в коллекции музея живых культур ГИСК им. Л.А. Тарасевича. For the manufacture of allergens, Neyseria perflav is used in production strains of Neyseriya perflav 57, 11, deposited in the collection of the Museum of Living Culture GISK im. L.A. Tarasevich.

Для изготовления аллергена используют микробные суспензии. Для этого сухие лиофильные штаммы засевают на скошенном мясопептонном агаре с 7% дефибринированной стерильной кроличьей крови. Мясопептонный агар, содержащий 1% глюкозы, необходимо растопить в водяной бане, охладить до 56oС и в стерильных условиях добавить 7 мл дефибринированной кроличьей крови. Полученную смесь разливают в стерильные пробирки и помещают в специальные штативы для получения скошенного агара, подсушивают и ставят в термостат на 18-20 ч при 37oС. В работе используют только культуры, прошедшие контроль на стерильность.Microbial suspensions are used to make the allergen. To do this, dry lyophilic strains are seeded on beveled meat and peptone agar with 7% defibrinated sterile rabbit blood. Meat peptone agar containing 1% glucose must be melted in a water bath, cooled to 56 o C and under sterile conditions add 7 ml of defibrinated rabbit blood. The resulting mixture is poured into sterile tubes and placed in special racks to obtain mowed agar, dried and placed in a thermostat for 18-20 hours at 37 o C. Only sterile cultures have been used in the work.

Контроль лиофильной культуры Нейссерия перфлава осуществляется путем внесения в ампулу 1 мл физиологического раствора и посева на скошенный агар, после чего пробирка помещается в термостат при 37oС на 18-20 ч.The lyophilic culture of Neyseriya perflav is controlled by adding 1 ml of physiological solution to the ampoule and plating on mowed agar, after which the tube is placed in a thermostat at 37 ° C for 18-20 hours.

Определение чистоты посевного материала проводят под микроскопом ММБ-1: в предварительно отобранные пробирки со скошенным агаром вносят культуру со всех посевов, подсушивают и окрашивают по Граму. Чистые культуры смывают с агара 0,5 мл физиологического раствора. Концентрацию взвеси доводят физиологическим раствором до 10 млрд. клеток. The purity of the inoculum is determined under the microscope MMB-1: the culture from all crops is introduced into pre-selected tubes with beveled agar, dried and stained with Gram. Pure cultures are washed with agar of 0.5 ml saline. The concentration of the suspension is adjusted with physiological saline to 10 billion cells.

Получение маточной микробной взвеси. Obtaining uterine microbial suspension.

Стеклянная посуда, используемая в работе, стерилизуется в сухо-жарочном шкафу при 18oС в 1 ч, целлофановые диски стерилизуют в течение трех дней в автоклаве текучим паром по 30 мин.The glassware used in this work is sterilized in a dry oven at 18 o C for 1 h, cellophane discs are sterilized for three days in an autoclave with fluid steam for 30 minutes.

Для производственного посева используется питательная среда, состоящая из мясопептонного агара, содержащего 1% глюкозы и 7% дефибринированной кроличьей крови. Питательную среду разливают в чашки Петри таким образом, чтобы слой агара был равен 10 мм, после чего чашки помещают в термостат на сутки при 37oС. На поверхность агаровой пластинки в каждую чашку укладывают целлофановый диск, диаметр которого должен быть на 10 мм больше диаметра используемых в работе чашек Петри. Подготовленный диск прижимают пинцетом к краям чашки для образования целлофанового бортика высотой до 1 см.For production inoculation, a nutrient medium is used, consisting of meat peptone agar containing 1% glucose and 7% defibrinated rabbit blood. The nutrient medium is poured into Petri dishes so that the agar layer is 10 mm, after which the plates are placed in a thermostat for a day at 37 ° C. On the surface of the agar plate, a cellophane disk is placed in each plate, the diameter of which should be 10 mm larger than the diameter used in the work of Petri dishes. The prepared disk is pressed with tweezers to the edges of the cup to form a cellophane edge up to 1 cm high.

Засевают 18-20-часовую маточную микробную смесь. Плотность посева - 0,1 мл микробной взвеси (с концентрацией 10 млрд. микр. тел/мл) на одну чашку Петри. Нанесенную на целлофан культуру микроба стерильным стеклянным шпателем равномерно распределяют по поверхности целлофана. An 18-20-hour uterine microbial mixture is inoculated. Sowing density - 0.1 ml of microbial suspension (with a concentration of 10 billion mic. Tel / ml) per Petri dish. The microbe culture applied to cellophane with a sterile glass spatula is evenly distributed over the surface of the cellophane.

Чашки с посевным материалом помещают в термостат ЗЦ-1125М на 18-20 ч при температуре 37oС. В течение срока выращивания посевов термостат не открывают для предотвращения загрязнения посевов.Cups with seeds are placed in the thermostat ZTs-1125M for 18-20 hours at a temperature of 37 o C. During the period of cultivation of crops, the thermostat is not opened to prevent contamination of crops.

По истечении срока инкубации чашки с посевами извлекают из термостата, изучают рост макро- и микроскопически. Чашки с неоднородным ростом бракуют. At the end of the incubation period, the plated cups are removed from the thermostat, the growth is studied macro- and microscopically. Cups with uneven growth are rejected.

Смыв культуры с целлофана производят следующим образом: в чашку Петри наливают 1-2 мл физиологического раствора, содержание - 0,009 г в 1 мл готового препарата с 0,3% фенола и дистиллированную воду и при помощи стерильного шпателя смывают культуру. Жидкость для смыва культуры должна иметь рН 7,0-7,2. Чашку Петри при смыве слегка наклоняют и полученную микробную взвесь переносят пипеткой в стерильный флакон. Проверяют чистоту полученной маточной микробной взвеси путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму. Бактериоскопически чистые маточные взвеси сливают в один сосуд и определяют концентрацию по стандарту мутности. The culture was washed off with cellophane as follows: 1-2 ml of physiological solution was poured into a Petri dish, the content was 0.009 g in 1 ml of the finished preparation with 0.3% phenol and distilled water, and the culture was washed with a sterile spatula. The flushing fluid should have a pH of 7.0-7.2. When washing, the Petri dish is slightly tilted and the resulting microbial suspension is pipetted into a sterile vial. Check the purity of the obtained uterine microbial suspension by microscopy of smears stained by Gram. Bacterioscopically clean uterine suspensions are poured into one vessel and the concentration is determined according to the turbidity standard.

После определения микробного стандарта, маточную микробную смесь разводят физиологическим раствором с 0,4% фенола, рН 7,0-7,2 до концентрации в 1 мл 10 млрд. микробных клеток. After determining the microbial standard, the uterine microbial mixture is diluted with physiological saline with 0.4% phenol, pH 7.0-7.2 to a concentration of 10 billion microbial cells in 1 ml.

Сосуд с маточной взвесью в физиологическом растворе помещают для инактивации в термостат при температуре 37oС на 18-20 ч. В течение периода инактивации маточную взвесь периодически встряхивают.A vessel with a uterine suspension in physiological solution is placed for inactivation in a thermostat at a temperature of 37 o C for 18-20 hours. During the inactivation period, the uterine suspension is periodically shaken.

Маточную микробную взвесь разводят физиологическим раствором с 0,4% фенола, рН 7,0-7,2, до концентрации 1 млрд. микробных клеток в 1 мл и сохраняют в холодильнике при температуре от 4 до 8oС.Uterine microbial suspension is diluted with physiological saline with 0.4% phenol, pH 7.0-7.2, to a concentration of 1 billion microbial cells in 1 ml and stored in a refrigerator at a temperature of from 4 to 8 o C.

Разведение маточного аллергена проводят в боксе в асептических условиях с применением стерильной приточной вентиляции стерильной разводящей жидкостью до концентрации 400±100 млн. микробных клеток в 1 мл. По окончании разведения содержимое бутыли тщательно перемешивают. Разводящая жидкость представляет собой физиологический раствор с 0,4% фенола. Используется для разведения аллергена при проведении специфической гипосенсибилизирующей иммунотерапии и при постановке кожных проб в качестве тест-контрольной жидкости. Жидкость прозрачная, бесцветная. Dilution of the uterine allergen is carried out in boxing under aseptic conditions using sterile supply ventilation with a sterile diluting liquid to a concentration of 400 ± 100 million microbial cells in 1 ml. At the end of the dilution, the contents of the bottle are thoroughly mixed. The diluting liquid is a physiological solution with 0.4% phenol. It is used to dilute allergen during specific hyposensitizing immunotherapy and when staging skin samples as a test control fluid. The liquid is clear, colorless.

Получение нативного аллергена Staphylococci aureus. Obtaining a native allergen Staphylococci aureus.

Нативный аллерген Staphylococci aureus представляет собой взвесь микробных клеток и продуктов их метаболизма в физиологическом растворе с фенолом. Для изготовления препаратов используют штаммы Волкова и Буганова, выделенные со слизистой бронхов больных инфекционно-аллергической бронхиальной астмой. The native allergen Staphylococci aureus is a suspension of microbial cells and their metabolic products in physiological saline with phenol. For the manufacture of drugs using strains of Volkov and Buganov isolated from the bronchial mucosa of patients with infectious-allergic bronchial asthma.

Нативные аллергены Staphylococci aureus - мутная гомогенная жидкость беловатого или слегка желтоватого цвета. Препарат стерилен, безвреден при подкожном введении белым мышам, специфически активен и имеет рН 7,0-7,4. Native allergens Staphylococci aureus is a turbid, homogeneous, whitish or slightly yellowish liquid. The drug is sterile, harmless by subcutaneous administration to white mice, is specifically active and has a pH of 7.0-7.4.

Готовый препарат содержит 1 млрд. микробных клеток в 1 мл. The finished product contains 1 billion microbial cells in 1 ml.

Нативные аллергены Staphylococci aureus предназначены для выявления сенсибилизации к белому стафилококку и проведения специфической гипосенсибилизирующей терапии больным, страдающим заболеваниями инфекционно-аллергической природы. Native allergens Staphylococci aureus are designed to detect sensitization to white staphylococcus and specific hypersensitizing therapy for patients suffering from diseases of an infectious-allergic nature.

Производственные штаммы выделены со слизистой бронхов при бронхоскопии больных инфекционно-аллергической бронхиальной астмой. Для изготовления нативного аллергена Staphylococci aureus используют штаммы Волкова и Буганова. Штаммы типичны по морфологическим и культуральным особенностям для стафилококковой группы микробов. Production strains isolated from the bronchial mucosa during bronchoscopy of patients with infectious-allergic bronchial asthma. For the manufacture of the native allergen Staphylococci aureus, Volkov and Buganov strains are used. Strains are typical in morphological and cultural features for the staphylococcal group of microbes.

Вся работа по выращиванию культур проводится на мясопептонном агаре с добавлением 7% дефибринированной кроличьей крови. Среду разливают в чашки Петри так, чтобы слой агара был равен 10 мм. После разлива чашки с кровяным агаром помещают в термостат и выдерживают сутки при температуре 37oС. Убедившись в стерильности питательной среды, проводят подготовку чашек для посевов. Для этого с помощью двух стерильных пинцетов на поверхность кровяного агара накладывают стерильный целлофановый диск, чтобы по краю чашки образовался невысокий бортик из целлофана. Последний необходим для того, чтобы при смыве культуры с поверхности диска жидкость не попадала на питательную среду. Целлофан, помещенный на кровяной агар, увлажняют небольшим количеством физиологического раствора и тщательно разглаживают поверхность диска при помощи стеклянного шпателя, чтобы не допустить образования воздушной прослойки между питательной средой и целлофановым диском. Подготовленные таким образом чашки Петри помещают в термостат на 18-20 ч для проверки стерильности целлофана.All work on growing crops is carried out on meat peptone agar with the addition of 7% defibrinated rabbit blood. The medium is poured into Petri dishes so that the agar layer is 10 mm. After the spill, the cups with blood agar are placed in a thermostat and incubated for a day at a temperature of 37 o C. Having ascertained the sterility of the nutrient medium, prepare the cups for crops. To do this, using two sterile tweezers, a sterile cellophane disk is placed on the surface of the blood agar so that a low rim of cellophane is formed along the edge of the cup. The latter is necessary so that when the culture is washed off the surface of the disk, the liquid does not enter the nutrient medium. Cellophane placed on blood agar is moistened with a small amount of physiological saline and the surface of the disk is thoroughly smoothed with a glass spatula to prevent the formation of an air gap between the nutrient medium and the cellophane disk. Thus prepared Petri dishes are placed in a thermostat for 18-20 hours to check the sterility of cellophane.

Маточные культуры Staphylococci aureus Волкова, Буганова отливают на скошенный мясопептонный агар с 7% дефибринированной кроличьей крови /МПКА/ и через 18-20 ч выращивания при 37oС из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Граму и просматривают под микроскопом для определения чистоты посевного материала.Uterine cultures of Staphylococci aureus Volkova, Buganova are cast onto beveled meat and peptone agar with 7% defibrinated rabbit blood / MPCA / and after 18-20 hours of growth at 37 ° C, smears are prepared from each tube, stained with Gram and examined under a microscope to determine the purity of the seed .

Чистые культуры смывают с косого агара 0,5 мл физиологического раствора. Концентрацию взвеси физиологическим раствором доводят до 10 млрд. клеток/мл по стандарту мутности. Далее производят посев культур на питательные среды, покрытые целлофановыми дисками. Pure cultures are washed with 0.5 ml saline from oblique agar. The concentration of the suspension with physiological saline is adjusted to 10 billion cells / ml according to the turbidity standard. Next, they sow crops on culture media coated with cellophane discs.

Каждый штамм микробов высевают из расчета на 1 чашку Петри 0,1 мл микробной взвеси (концентрация 10 млрд. клеток/мл). Each strain of microbes is seeded per 1 Petri dish with 0.1 ml of microbial suspension (concentration of 10 billion cells / ml).

Нанесенную на целлофан культуру микроба стерильным стеклянным шпателем равномерно распределяют по поверхности целлофана. Чашки с посевами помещают в термостат в течение 18-20 ч при температуре 37oС.The microbe culture applied to cellophane with a sterile glass spatula is evenly distributed over the surface of the cellophane. Cups with crops are placed in a thermostat for 18-20 hours at a temperature of 37 o C.

Через 20 ч с выросших на целлофане культур готовят мазки и окрашивают по Граму. Биологически чистую культуру смывают с поверхности целлофанового диска 2-3 мл физиологического раствора, содержащего 0,2-0,3% фенола (карболовой кислоты). Количество карболовой кислоты, добавляемой к физиологическому раствору, определяется концентрацией "смыва". "Смыв" культуры с целлофана физиологическим раствором с фенолом представляет собой маточную взвесь аллергена. After 20 hours, smears are prepared from the cultures grown on cellophane and stained according to Gram. A biologically pure culture is washed off the surface of a cellophane disk with 2-3 ml of physiological solution containing 0.2-0.3% phenol (carbolic acid). The amount of carbolic acid added to physiological saline is determined by the concentration of “flush”. The “flushing” of the culture with cellophane with physiological saline with phenol is a uterine suspension of the allergen.

Далее проводят определение концентрации маточной взвеси по бактериологическому стандарту мутности. Взвесь микробных тел в физиологическом растворе с фенолом выдерживают в термостате при температуре 37oС в течение 36-72 ч.Next, determine the concentration of uterine suspension according to the bacteriological standard of turbidity. A suspension of microbial bodies in physiological saline with phenol is kept in a thermostat at a temperature of 37 o C for 36-72 hours

При наличии полной стерильности маточной взвеси аллергена производят разведение аллергена до концентрации 1 млрд. клеток/мл. При этом исходят из концентрации, определенной непосредственно после смыва микробных тел с целлофанового диска. Разведение маточной взвеси производят физиологическим раствором без добавления консерванта. Это позволяет получить нативный аллерген в концентрации 1 млрд. клеток/мл с минимальным содержанием фенола в препарате. In the presence of complete sterility of the uterine suspension of the allergen, the allergen is diluted to a concentration of 1 billion cells / ml. In this case, they proceed from the concentration determined immediately after the washing off of the microbial bodies from the cellophane disk. Dilution of uterine suspension is carried out with saline without the addition of a preservative. This allows you to get a native allergen at a concentration of 1 billion cells / ml with a minimum phenol content in the drug.

Допустимая конечная концентрация консерванта в препарате - 0,04% от общего объема. The permissible final concentration of preservative in the preparation is 0.04% of the total volume.

После разведения маточной взвеси аллергена до концентрации 1 млрд. клеток/мл проводят контроль препарата по:
1) физическим свойствам;
2) чистоте;
3) стерильности;
4) безвредности.
After diluting the uterine suspension of the allergen to a concentration of 1 billion cells / ml, the drug is monitored by:
1) physical properties;
2) cleanliness;
3) sterility;
4) harmlessness.

Нативный бактериальный аллерген Staphylococci aureus используют для проведения специфической гипосенсибилизирующей терапии больным инфекционно-аллергической бронхиальной астмой. The native bacterial allergen Staphylococci aureus is used to carry out specific hyposensitizing therapy for patients with infectious-allergic bronchial asthma.

Для проведения лечения готовят смесь аллергенов из числа тех, на которые у больного были получены положительные кожно-аллергические и провокационные тесты. При этом аллергены в равных количествах в концентрации 1 млрд. клеток/мл смешивают во флаконе. For treatment, a mixture of allergens is prepared from among those for which the patient received positive skin-allergic and provocative tests. In this case, allergens in equal amounts at a concentration of 1 billion cells / ml are mixed in a vial.

Для получения десятикратных разведении смеси используют контрольную жидкость, которая в данном случае может служить в качестве разводящей жидкости. Для разведения аллергена берут 4 флакона с контрольной жидкостью, в каждом из которых содержится по 1,8 мл указанной жидкости. В первый флакон вносят 0,2 мл составленной для лечения смеси аллергенов в концентрации 1 млрд. клеток/мл. Таким образом, исходная смесь разведена в 10 раз и концентрация аллергена при этом будет равна 100 млн. клеток/мл, 0,2 мл разведенного аллергена переносят в следующий флакон с контрольной жидкостью и получают аллерген в концентрации 10 млн. клеток/мл. Таким образом, получают последующие разведения: 1 млн. клеток/мл и 100000 млн. клеток/мл. С последнего разведения обычно начинают лечение. To obtain a ten-fold dilution of the mixture, a control liquid is used, which in this case can serve as a dilution liquid. To dilute the allergen take 4 bottles with a control liquid, each of which contains 1.8 ml of the specified liquid. In the first vial, 0.2 ml of the mixture of allergens compiled for treatment is added at a concentration of 1 billion cells / ml. Thus, the initial mixture is diluted 10 times and the allergen concentration in this case will be equal to 100 million cells / ml, 0.2 ml of the diluted allergen is transferred to the next bottle with a control liquid and an allergen at a concentration of 10 million cells / ml is obtained. Thus, the following dilutions are obtained: 1 million cells / ml and 100,000 million cells / ml. With the last dilution, treatment is usually started.

При тяжелом течении болезни и резко выраженной кожной чувствительности, особенно с синдромными реакциями, безопаснее начинать лечение с разведения 10000 микробных клеток в 1 мл. In severe cases of the disease and pronounced skin sensitivity, especially with syndromic reactions, it is safer to start treatment with a dilution of 10,000 microbial cells in 1 ml.

Бактериальные аллергены, полученные предложенным способом, предназначены для специфической аллергологической диагностики инфекционно-аллергических заболеваний дыхательных путей. Bacterial allergens obtained by the proposed method are intended for specific allergological diagnosis of infectious and allergic diseases of the respiratory tract.

Claims (1)

Способ получения бактериальных аллергенов, включающий выращивание культуры на плотной питательной среде с последующим ее инактивированием и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что культивируют микробные клетки, полученные из высокоаллергенных штаммов условно патогенных микроорганизмов, выделенных со слизистой дыхательного тракта больных бронхиальной астмой, при этом выращивание культуры ведут на питательной среде, содержащей 1% глюкозы и 7% дефибринированной кроличьей крови на целлофановых дисках и концентрацией взвеси 10 млрд микробных тел/мл, далее культуру смывают физраствором с 0,3% фенолом при pH 7,0-7,2, инактивируют при 37oС в течение 18-20 ч, микробную взвесь последовательно разводят физраствором с 0,4% фенола до концентрации 1 млрд микробных клеток/мл, а затем разводящей жидкостью до концентрации 300-500 млн микробных клеток в 1 мл.A method of producing bacterial allergens, including growing a culture on a solid nutrient medium, followed by its inactivation and separation of the target product, characterized in that microbial cells obtained from highly allergenic strains of conditionally pathogenic microorganisms isolated from the mucosa of the respiratory tract of patients with bronchial asthma are cultivated, while growing the culture lead on a nutrient medium containing 1% glucose and 7% defibrinated rabbit blood on cellophane discs and a suspension concentration 10 billion microbial bodies / ml, then the culture is washed off with saline with 0.3% phenol at pH 7.0-7.2, inactivated at 37 o C for 18-20 hours, the microbial suspension is sequentially diluted with saline with 0.4% phenol to a concentration of 1 billion microbial cells / ml, and then a diluting liquid to a concentration of 300-500 million microbial cells in 1 ml.
RU2001102725A 2001-01-31 2001-01-31 Method to obtain bacterial allergens RU2183970C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102725A RU2183970C1 (en) 2001-01-31 2001-01-31 Method to obtain bacterial allergens

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2001102725A RU2183970C1 (en) 2001-01-31 2001-01-31 Method to obtain bacterial allergens

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2183970C1 true RU2183970C1 (en) 2002-06-27

Family

ID=20245409

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2001102725A RU2183970C1 (en) 2001-01-31 2001-01-31 Method to obtain bacterial allergens

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2183970C1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2601123C1 (en) * 2015-07-10 2016-10-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИВС им. И.И. Мечникова" РАМН) STRAIN OF Candida albicans varietas stellatoidea FOR PRODUCING DIAGNOSTIC ALLERGEN

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЖИРОВА С.Н. Получение аллергенного препарата из тараканов Blattella germanica для диагностики аллергии. Автореф. канд. дисс. - М., 1997. СИПИЦИНА Н.Е. Получение и иммунологическая характеристика аллергена из клещей Dermatophagoides farinae. Автореф. канд. дисс. - М., 1998. РАХМАН Ю.А. и др. Усовершенствование технологии получения пыльцевых аллергоидов. Проблемы медицинской иммунобиотехнологии. - Л., 1990, с.80-81. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2601123C1 (en) * 2015-07-10 2016-10-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИВС им. И.И. Мечникова" РАМН) STRAIN OF Candida albicans varietas stellatoidea FOR PRODUCING DIAGNOSTIC ALLERGEN

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111172074B (en) Bifidobacterium lactis Probio-M8 capable of relieving and improving Alzheimer symptoms and application
Reyn Recent developments in the laboratory diagnosis of gonococcal infections
RU2455355C1 (en) Pseudomonas aeruginosa BACTERIOPHAGE STRAIN USED AS BASE FOR PREPARING ASEPTIC FOR P AERUGINOSA
CN106367393B (en) Prostate Carcinoma of Mice circulating tumor cell system and the separation of prostate cancer circulating tumor cell and cultural method
CN110205355A (en) A kind of highly sensitive detection culture medium of microorganism and its preparation method and application
RU2183970C1 (en) Method to obtain bacterial allergens
JP2017512477A (en) Preparation of small colony varieties of therapeutic bacteria
RU2538158C1 (en) Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle
RU2098486C1 (en) Method of bacteremia diagnosis
RU2725733C1 (en) Transport liquid nutrient medium for maintaining the viability of the brucellous microbe
RU2247775C1 (en) Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis
RU2190015C1 (en) Strain lactobacillus brevis ba-13 used for probiotic preparations and foodstuffs preparing
RU2624511C1 (en) Method of evaluating efficiency of phagotherapy in treatment of infections diseases
RU2818361C1 (en) Strain of bacteria streptococcus dysgalactiae for making biopreparations for specific prevention of mastitis in cows
CN115364107B (en) Application of lithocholic acid
RU2154822C1 (en) Method of isolation of bacterium of genus lactobacillus from clinical material
RU2756696C1 (en) Selective nutritional medium for isolation of mushrooms of malassezia furfur species
RU2717535C1 (en) Method for extracting pure culture of pasteurellosis activator pasteurella multocida
RU2818959C1 (en) Pasteurella multocida "pm - b" bacterium strain for manufacture of biopreparations for specific prevention of pasteurellosis (hemorrhagic septicemia) in cattle caused by serogroup b pasteurella
RU2247570C2 (en) Method for estimation of specific activity of different medicinal formulation probiotics and industrial strains by level of their adhesive activity
RU2188422C2 (en) Method for diagnosing the cases of chronic tonsillitis
RU2748808C1 (en) Dense universal nutrient medium for growing brucella biomass
RU2346052C1 (en) Two-phase nutrient medium for isolating brucellosis microbe
RU2299237C2 (en) Nutrient medium for isolation of fungi of genus candida
RU2401862C2 (en) Method of isolating enterococcus from fresh pathological material

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080201