RU2174557C1 - Способ получения гиалуронидазы стрептококковой - Google Patents
Способ получения гиалуронидазы стрептококковой Download PDFInfo
- Publication number
- RU2174557C1 RU2174557C1 RU2000129001A RU2000129001A RU2174557C1 RU 2174557 C1 RU2174557 C1 RU 2174557C1 RU 2000129001 A RU2000129001 A RU 2000129001A RU 2000129001 A RU2000129001 A RU 2000129001A RU 2174557 C1 RU2174557 C1 RU 2174557C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyaluronidase
- streptococcus
- enzyme
- filtrate
- strain
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения гиалуронидазы стрептококковой бактериального происхождения, используемой при диагностике стрептококковых инфекций. Способ заключается в том, что культивируют штамм-продуцент гемолитического стрептококка, выделенный от больного скарлатиной, продуцирующий только гиалуронидазу, трех - пятикратно пассируют на комбинированном скарлатинозном бульоне, культуральную жидкость отделяют фильтрацией через систему "Миллипор", к фильтрату добавляют сернокислый аммоний, тщательно перемешивают и выдерживают при температуре 4 ± 2°С. Отделение фермента производят на сепараторе при 9000 об/мин. Техническим результатом является получение высокоактивного стандартного препарата гиалуронидазы стрептококковой с активностью до 20000 МД HyS в 1 мл, сокращение и упрощение технологического процесса и повышение выхода готового препарата. 1 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения гиалуронидазы стрепрококковой бактериального происхождения, используемой при диагностике стрептококковых инфекций. Определение антигиалуронидазы в сыворотке крови используют для выявления скрыто протекающих форм ревмокардита, для оценки активности ревмокардического процесса, а также для дифференциации ревматизма от инфекционного полиартрита.
Известен способ получения гиалуронидазы стрепрококковой (А.с. N 173887, кл. МПК: C 12 N 9/26, 1965 г.), заключающийся в том, что культивируют штамм-продуцент гемолитического стрептококка "Китанин" на среде А.П.Конникова. Для выделения гиалуронидазы культуральную жидкость отделяют от клеток центрифугированием или путем фильтрации через слой асбеста, производят обработку (фракционирование) фильтрата сернокислым аммонием в три стадии. Фильтраты выдерживают, после чего осадок отделяют центрифугированием, надосадочную жидкость еще раз обрабатывают сульфатом аммония. К полученным диализатам добавляют холестерин и в течение 15-20 минут встряхивают на шуттель-аппарате. Диализаты, обработанные холестерином, фильтруют и высушивают (из замороженного состояния) в вакуумном аппарате.
Однако известный способ имеет существенные недостатки. Используемый штамм "Китанин" продуцирует не только гиалуронидазу, но и другие ферменты, в связи с чем необходимо проведение трехкратного фракционирования фильтрата сернокислым аммонием. Это удлиняет и усложняет технологический процесс, приводит к потере активности фермента и снижению выхода готового препарата.
Целью предлагаемого изобретения является получение стандартного препарата с высокой активностью и минимальными потерями выхода готового препарата.
Сущность изобретения заключается в том, что фермент выделяют и концентрируют сернокислым аммонием, стерилизуют через систему "Миллипор" и стандартизируют, используя отраслевой стандартный образец антигиалуронидазы стрептококковой (ОСО АГС), приготовленный на основании тест-фермента, оттитрованного по международному стандарту активности гиалуронидазы тестикулярной.
Пример.
В четверти с комбинированным скарлатинозным бульоном (2 л) засевают 4-х часовую культуру гемолитического стрептококка группы А, IV типа, штамма N 6, выделенного от больного скарлатиной, продуцирующего только гиалуронидазу. Выращивание культуры производят при 37oC в течение 18-24 часов.
Предварительно перед массовым засевом культуры ампулу со штаммом вскрывают и высевают на 5%-ный кровяной бульон и выращивают в течение 24 часов.
Затем культуру трех-пятикратно пассируют на комбинированном бульоне. Штамм при выращивании должен продуцировать гиалуронидазу не менее 500 МД HyS.
После 24-х часового выращивания и проверки культуры на чистоту культуральную жидкость отделяют путем фильтрации через систему "Миллипор".
К фильтрату добавляют заранее приготовленный сернокислый аммоний до 0,8% насыщения. Содержимое бутыли тщательно перемешивают до полного растворения сернокислого аммония и образования пленки фермента. Затем бутыли помещают в камеру при температуре (4±2)oC на двое суток.
Отделение осадка гиалуронидазы из фильтрата производят на сепараторе АСГ-3 при 9000 оборотов в минуту.
Удаление сернокислого аммония из концентрата производят путем диализа против проточной водопроводной воды в течение двух суток. Активность гиалуронидазы определяют по ее способности препятствовать образованию сгустка гиалуроновой кислоты при добавлении уксусной кислоты.
При разведении концентрированного фермента получают препарат с активностью от 1000 до 20000 МД HyS в 1 мл.
Полученный фермент подвергают стерилизующей фильтрации через систему "Миллипор", стерилизующий фильтр 0,2 мкм, с минимальными потерями около 5% и сохранением исходной активности. После проведения контроля на стерильность и активность фермент лиофильно высушивают. Определение опытных доз гиалуронидазы производят со стандартной антигиалуронидазой ОСО.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить высокоактивный стандартный препарат гиалуронидазы стрепрококковой с активностью до 20000 МД HyS в 1 мл с минимальными потерями выхода готового препарата до 5%.
Одной ампулы препарата достаточно для определения антигиалуронидазы в сыворотках от 5 до 20 больных.
Claims (2)
1. Способ получения гиалуронидазы стрептококковой, включающий культивирование штамма-продуцента гемолитического стрептококка, отделение культуральной жидкости путем фильтрации, обработку фильтрата сернокислым аммонием, отделение фермента из фильтрата и его высушивание, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм, выделенный от больного скарлатиной, продуцирующий только гиалуронидазу, культуру трех-пятикратно пассируют на комбинированном скарлатинозном бульоне, при этом штамм при выращивании должен продуцировать гиалуронидазу не менее 500 минимальных ферментативных доз (МД HyS), культуральную жидкость отделяют путем фильтрации через систему "Миллипор", к фильтрату добавляют сернокислый аммоний до 0,8% насыщения, тщательно перемешивают до образования пленки фермента и выдерживают при температуре (4 ± 2)°С, отделение фермента из фильтрата производят на сепараторе при 9000 об/мин, причем полученный концентрированный фермент при разведении обладает активностью от 1000 до 20000 МД HyS в 1 мл.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что различные разведения препарата подвергают стерилизующей фильтрации через систему "Миллипор" на фильтре 0,2 мкм.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129001A RU2174557C1 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Способ получения гиалуронидазы стрептококковой |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000129001A RU2174557C1 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Способ получения гиалуронидазы стрептококковой |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2174557C1 true RU2174557C1 (ru) | 2001-10-10 |
Family
ID=20242359
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000129001A RU2174557C1 (ru) | 2000-11-22 | 2000-11-22 | Способ получения гиалуронидазы стрептококковой |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2174557C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2586144C1 (ru) * | 2015-07-23 | 2016-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Способ производства пищевой добавки из проращенных семян фасоли сорта "победитель" |
RU2671537C2 (ru) * | 2016-09-01 | 2018-11-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Самсон-Мед" | Препарат гиалуронидазы и способ его получения |
-
2000
- 2000-11-22 RU RU2000129001A patent/RU2174557C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Острая и хроническая стрептококковая инфекция./Под ред. чл.корр. АМН СССР проф. ИОФФЕ В.И. и проф.ВОЛОВИКА А.Б., АМН СССР, "Медицина", Ленинградское отделение 1967 г, с. 18-21. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2586144C1 (ru) * | 2015-07-23 | 2016-06-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" | Способ производства пищевой добавки из проращенных семян фасоли сорта "победитель" |
RU2671537C2 (ru) * | 2016-09-01 | 2018-11-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Самсон-Мед" | Препарат гиалуронидазы и способ его получения |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Fishman | Antibody formation in vitro | |
DK173681B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af hyaluronsyre ud fra en hyaluronsyreproducerende streptococbakterie | |
Epstein et al. | Some observations on the preparation and properties of the substrate of lysozyme | |
KR20020069863A (ko) | 단백질 및 다당류를 이용한 이중코팅 유산균 원말의제조방법 | |
SU1423002A3 (ru) | Способ получени белка,понижающего содержание холестерина в крови млекопитающих животных | |
IE47149B1 (en) | Vaccine | |
RU2174557C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы стрептококковой | |
NO159394B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av immunogene kapselformede polyosider fra kapselbakterier. | |
US3875007A (en) | Lipid metabolism improving and anti-atheromatic agent | |
SU1732815A3 (ru) | Способ получени гипотриглицеридально-активных полисахаридов | |
US4695541A (en) | Enzymatic detection of bacterial capsular polysaccharide antigens | |
RU2687973C9 (ru) | Способ получения лекарственного средства коллализин®, лиофилизата для приготовления раствора для местного и парентерального применения для лечения фибропролиферативных заболеваний | |
US3509024A (en) | Aspergillopeptidase for use in therapy and a process for the preparation thereof | |
JPS5852227A (ja) | 淋菌からの免疫原性複合体 | |
RU2143280C1 (ru) | Способ получения o-антигена холерного очищенного | |
US3622462A (en) | Process for manufacture of an enzyme preparation | |
Jobling et al. | STUDIES IN FERMENT ACTION: VII. TOXIC SPLIT PRODUCTS OF BACILLUS TYPHOSUS. | |
US2268955A (en) | Bacterial product and bacteria strain and process of producing the same | |
US3708576A (en) | Novel anti-inflammatory substances and production thereof | |
RU2283135C1 (ru) | Способ выделения очищенных полисахаридов менингококков серогрупп а и с | |
US3959467A (en) | Lipid metabolism improving and anti-atheromatic agent | |
Levy | Some physical properties of enzymes | |
JPH03505200A (ja) | 治療活性のある、特に傷治療または老人医学に用いる作用物質およびかかる作用物質を含む製剤の製造方法 | |
Hindle et al. | A soluble specific substance in spirochaetes | |
RU2033174C1 (ru) | Способ получения ингибитора калликреина плазмы крови |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171123 |