RU2170577C2

RU2170577C2 - Фармацевтическая композиция, содержащая n-хлорфенилкарбамат или n-хлорфенилтиокарбамат, композиция стандартной лекарственной формы и способ лечения рака

Info

Publication number: RU2170577C2
Application number: RU97118418/14A
Authority: RU
Inventors: Джеймс Бергер Кэмден
Original assignee: Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани
Priority date: 1995-04-12
Filing date: 1996-04-11
Publication date: 2001-07-20
Also published as: EP0820281B1; NO974696D0; US6251870B1; TW422685B; CA2217953A1; IL117874A0; ATE367808T1; CN1181701A; NO974696L; PL322732A1; BR9604973A; AU5389896A; KR19980703829A; WO1996032104A1; NZ305785A; AU714056B2; US5932604A; CA2217953C; HUP9900901A3; EP0820281A1

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, ингибирующей рост злокачественных новообразований и опухолей у млекопитающих, в частности у человека и теплокровных животных, и способа лечения рака. Композиция также эффективна против вирусов. Композиция содержит N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы, которые являются системными гербицидами. Композиция может также содержать наряду с N-хлорфенилкарбаматами и N-хлорфенилтиокарбаматами химиотерапевтические средства и, необязательно, потенцирующее средство. Описана также композиция для лечения вирусных инфекций у животных или людей, содержащая безопасное и эффективное количество N-хлорфенилкарбаматов и N-хлорфенилтиокарбаматов и потенцирующее средство. Композиция эффективна без воздействия или с мягким воздействием на нормальные клетки. 3 с. и 14 з.п.ф-лы, 2 табл.

Description

Изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, которая ингибирует рост злокачественных новообразований и опухолей у млекопитающих, в частности у людей и теплокровных животных. Композиция эффективна также против вирусов. Композиция содержит N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы, которые являются системными гербицидами. Другая композиция содержит N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы наряду с потенцирующими средствами или химиотерапевтическими средствами, или антивирусными лекарствами.

Предпосылки к созданию изобретения
Злокачественные новообразования являются одной из главных причин смерти животных и людей. Точная причина рака неизвестна, но связь некоторых видов деятельности, таких как курение или подверженность воздействию канцерогенов, с возникновением некоторых типов злокачественных новообразований и опухолей была показана многими исследователями.

Многие типы химиотерапевтических средств зарекомендовали себя как эффективные против злокачественных новообразований и опухолевых клеток, но не все типы злокачественных новообразований и опухолей реагируют на эти средства. К сожалению, многие из этих средств разрушают также и нормальные клетки. Точный механизм действия этих химиотерапевтических средств не всегда известен.

Несмотря на успехи в области лечения рака, главными лечебными мероприятиями в настоящее время являются хирургия, облучение и химиотерапия. Химиотерапевтические подходы показаны для борьбы со злокачественными новообразованиями, которые образуют метастазы, или с такими, которые являются особенно агрессивными. Такие цитоцидные или цитостатические средства прекрасно воздействуют на злокачественные новообразования с большими ростовыми факторами, т. е. на такие, клетки которых быстро делятся. К настоящему времени гормоны, в частности эстроген, протестерон и тестостерон, и некоторые антибиотики, продуцируемые различными микробами, алкилирующие средства и антиметаболиты образуют массу терапевтических средств, доступных для онкологов. Чрезвычайно желательными были бы идеально цитотоксичные средства, которые имеют специфичность к раковым и опухолевым клеткам, и в то же время не поражают нормальные клетки. К сожалению, такие не были найдены, и вместо этого применяют средства, которые нацелены на особенно быстро делящиеся клетки (как опухолевые, так и нормальные).

Очевидно, что прорывом в этой области была бы разработка материалов, которые могли бы находить опухолевые клетки из-за некоторой уникальной специфичности к ним. Альтернативно, желательными были бы материалы, которые были бы цитотоксичными по отношению к опухолевым клеткам и в то же время оказывали мягкое воздействие на нормальные клетки.

Поэтому целью этого изобретения является обеспечение фармацевтической композиции, которая является эффективной для ингибирования роста опухолей и злокачественных новообразований у млекопитающих без воздействия или с мягким воздействием на нормальные клетки.

Более конкретно, целью этого изобретения является обеспечение противораковой композиции, содержащей фармацевтический носитель и N-хлорфенилкарбамат или производное N-хлорфенилтиокарбамат, как определено здесь, наряду со способом лечения таких злокачественных новообразований.

Эти композиции являются эффективными также и против вирусов. Поэтому еще одной целью изобретения является обеспечение композиции, эффективной против ВИЧ, герпеса, гриппа, риновирусов и тому подобного.

Еще одной целью изобретения является обеспечение композиции, эффективной против ВИЧ, герпеса, гриппа, риновирусов и тому подобного, в которой используется потенцирующее средство для улучшения эффективности композиции. Эти и другие цели станут очевидными из следующего подробного описания этого изобретения.

Краткое описание изобретения
Фармацевтическая композиция для лечения млекопитающих, и, в частности, теплокровных животных и людей, содержащая фармацевтический носитель и эффективное количество противоракового соединения, выбранного из группы, состоящей из N-хлорфенилкарбаматов и N-хлорфенилтиокарбаматов формулы

где n равно от 1 до 3, X является кислородом или серой и R выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и низшего алкенила, циклогексила, фенилалкила, имеющих вплоть до 8 атомов углерода и фенила, и фармацевтически приемлемых солей этих соединений с неорганической или органической кислотой.

Эти композиции могут быть использованы для ингибирования роста карцином и других злокачественных опухолей у людей или животных путем введения эффективного количества N-хлорфенилкарбаматов и N-хлорфенилтиокарбаматов либо перорально, ректально, местно, либо парентерально, внутривенно, либо непосредственной инъекцией вблизи опухоли или в нее. Эти композиции эффективны для уничтожения или замедления роста опухолей, однако являются более безопасными, чем адриамицин, для нормальных здоровых клеток. Композиции пригодны также для лечения вирусных инфекций.

Композиции могут быть также использованы в сочетании с потенцирующими средствами и химиотерапевтическими средствами.

Подробное описание изобретения
А. ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Как используется здесь, термин "содержащая" обозначает различные компоненты, которые могут быть совместно использованы в фармацевтической композиции этого изобретения. Соответственно, термины "состоящая, в основном, из" и "состоящая из" включаются в термин содержащая.

Как используется здесь, "фармацевтически приемлемый" компонент является таким, который пригоден для использования людьми и/или животными без нежелательных вредных побочных эффектов (таких как токсичность, раздражение и аллергическая реакция), соразмерных с разумным отношением пользы/риск.

Как используется здесь, термин "безопасное и эффективное количество" относится к количеству компонента, которое является достаточным для создания желательного терапевтического отклика без чрезмерных вредных побочных эффектов (таких как токсичность, раздражение или аллергическая реакция), соразмерных с разумным отношением польза/риск, при использовании в соответствии с настоящим изобретением. Конкретное "безопасное и эффективное количество", очевидно, будет изменяться в связи с такими факторами, как конкретное состояние, подвергаемое лечению, физическое состояние пациента, тип млекопитающего, подвергаемого лечению, продолжительность лечения, характер сопутствующей терапии (если имеется) и конкретные используемые препараты и структура соединений или их производных.

Как используется здесь, "фармацевтические аддитивные соли" включают фармацевтически приемлемую соль противоракового соединения. Они включают соли аминов с органическими и неорганическими кислотами. Предпочтительными солями с кислотами являются гидрохлориды, ацетаты, салицилаты, нитраты и фосфаты.

Как используется здесь, "фармацевтическим носителем" является фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующее вещество или носитель для доставки противоракового соединения животному или человеку. Носитель может быть жидким или твердым, и его выбирают с учетом предполагаемого способа введения.

Как используется здесь, "рак" относится ко всем типам карцином или новообразований, или опухолей, обнаруженных у млекопитающих.

Как используется здесь, "противораковыми соединениями" являются N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы.

Как используется здесь, "вирусы" включают вирусы, которые вызывают болезни (вирусная инфекция) у человека и других теплокровных животных, такие как вирус ВИЧ, герпес, грипп и риновирусы.

Как используется здесь, "потенцирующими средствами" являются материалы, такие как трипролидин и его цис-изомер, которые используются в сочетании с N-хлорфенилкарбаматами и N-хлорфенилтиокарбаматами. Потенцирующие средства могут влиять на иммунную систему или повышать эффективность лекарств.

Как используется здесь, "химиотерапевтические средства" включают взаимодействующие с ДНК агенты, антиметаболиты, взаимодействующие с тубулином агенты, гормональные агенты и другие, такие как аспарагиназа или гидроксимочевина.

Б. ПРОТИВОРАКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ
Противораковыми соединениями являются N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы, которые известны из-за их гербицидных активностей. Они являются системными гербицидами, используемыми для предотвращения произрастания и искоренения некоторых растений или сорняков. Системные гербициды отличаются от других гербицидов по их способности абсорбироваться растением и перемещаться в растении. Эта системная способность не является необходимым требованием для соединений этого изобретения.

Соединения имеют следующую структуру

где n равно от 1 до 3, X является кислородом или серой и R выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила и низшего алкенила, циклогексила, фенилалкила, имеющих вплоть до 8 атомов углерода и фенила, и фармацевтически приемлемых солей этих соединений.

Предпочтительными соединениями являются те, в которых R является алкилом с 1-4 атомами углерода, предпочтительно, изопропилом и X обозначает кислород, n равно 1 и группа хлора находится в положении 3 на фенильной группе. Наиболее предпочтительным соединением является N-3-хлорфенилкарбамат.

Эти соединения получают в соответствии со способом, описанным в патенте США 2695225, выданном Witman (1954) и в патенте США 2734911, выданном Strain (1956).

В. ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА
Химиотерапевтические средства, в основном, сгруппированы как взаимодействующие с ДНК агенты, антиметаболиты, взаимодействующие с тубулином агенты, гормональные агенты и другие, такие как аспарагиназа или гидроксимочевина. Каждая из этих групп химиотерапевтических средств может быть далее разделена по типу активности или соединения. Химиотерапевтические средства, используемые в сочетании с N-хлорфенилкарбаматами и N-хлорфенилтиокарбаматами, включают членов из всех этих групп. Более подробное обсуждение химиотерапевтических средств и способа их введения смотри в публикации Dorr et al. , Cancer Chemotherapy Handbook, 2d edition, pages 15-34, Appleton & Lange (Connecticut, 1994), включенной здесь ссылкой.

Взаимодействующие с ДНК агенты включают алкилирующие агенты, например, Цисплатин, Циклофосфамид, Алтретамин; агенты, разрушающие цепь ДНК, такие как Блеомицин; интеркалирующие ингибиторы топоизомеразы 11, например, Дактиномицин и Доксорубицин; неинтеркалирующие ингибиторы топоизомеразы 11, такие как Этопозид и Тенипозид, и связующее малых бороздок ДНК Пликамидин.

Алкилирующие агенты образуют ковалентные химические аддукты с клеточными молекулами ДНК, РНК и белка и с более мелкими аминокислотами, глутатионом и подобными химическими продуктами. В основном, эти алкилирующие агенты реагируют с нуклеофильным атомом клеточного компонента, такого как амино, карбоксил, фосфат, сульфгидрильная группа в нуклеиновых кислотах, белках, аминокислотах или глутатионе. Механизм и роль этих алкилирующих агентов в терапии рака не совсем понятны. Типичные алкилирующие агенты включают:
Азотные горчичники, такие как Хлорамбуцил, Циклофосфамид, Изофамид, Мехлоретамин, Мелфалан, Урациловая горчица;
Азиридин, такой как Тиотепа;
метансульфонатные сложные эфиры, такие как Бусулфан;
нитрозомочевины, такие как Кармустин, Ломустин, Стрептозоцин;
комплексы платины, такие как Цисплатин, Карбоплатин;
биоредуктивный алкилирующий агент, такой как Митомицин и Прокарбазин, Дакарбазин и Алтретамин;
агенты, разрушающие цепь ДНК, включают Блеомицин;
ингибиторы ДНК топоизомеразы 11 включают следующее:
интеркаляторы, такие как Амсакрин, Дактиномицин, Даунорубицин, Доксорубицин, Идарубицин и Митоксантрон;
неинтеркаляторы, такие как Этопозид и Тенипозид.

Связующим малых бороздок ДНК является Пликамидин.

Антиметаболиты вмешиваются в продуцирование нуклеиновых кислот тем или иным из двух главных механизмов. Некоторые из лекарств ингибируют продуцирование трифосфатов дезоксирибонуклеозидов, которые являются непосредственными предшественниками синтеза ДНК, ингибируя тем самым репликацию ДНК. Некоторые из соединений являются, по существу, подобными пуринам или пиримидинам настолько, чтобы быть способными замещать их в анаболических нуклеотидных путях. Эти аналоги могут быть затем заместителями в ДНК и РНК вместо их нормальных функциональных двойников. Используемые здесь антиметаболиты включают:
антагонисты фолата, такие как Метотрексат и триметрексат,
антагонисты пиримидина, такие как фторурацил, Фтордезоксиуридин, CB3717, Азацитидин, Цитарабин и Флоксуридин,
антагонисты пурина включают Меркаптопурин, 6-Тиогуанин, Флударабин, Пентостатин;
модифицированные аналоги сахара включают Циктрабин, Флударабин;
ингибиторы рибонуклеотид-редуктазы включают гидроксимочевину.

Агенты, взаимодействующие с тубулином, действуют путем связывания со специфическими сайтами на тубулине, белке, который полимеризуется с образованием целлюлярных микротрубочек. Микротрубочки являются существенными элементами клеточной структуры. Когда взаимодействующие агенты связываются с белком, клетка не может формировать микротрубочки. Взаимодействующие с тубулином агенты включают Винкристин и Винбластин, оба алкалоида и Паклитаксел.

Гормональные агенты также являются полезными при лечении злокачественных новообразований и опухолей. Их применяют при гормонально чувствительных опухолях и обычно выделяют из натуральных источников. Они включают:
эстрогены, конъюгированные эстрогены и Этинил-Эстрадиол и Диэтилстилбестерол, Хлортрианизен и Иденестрол;
прогестины, такие как капроат Гидроксипрогестерона, Медроксипрогестерон и Мегестрол;
андрогены, такие как тестостерон, пропионат тестостерона, флуоксиместерон, метилтестостерон;
Кортикостероиды надпочечников получают из натурального кортизола или гидрокортизона надпочечников. Их используют из-за их благоприятного противовоспалительного эффекта, а также из-за способности некоторых из них ингибировать митотические деления и останавливать синтез ДНК. Эти соединения включают Преднизон, Дексаметазон, Метилпреднизолон и Преднизолон.

Гормональные агенты, высвобождающие лютеинизирующий гормон, или антагонисты гормона, высвобождающего гонадотропин, применяют, главным образом, при лечении рака простаты. Они включают ацетат леупролида и ацетат гозерелина. Они предотвращают биосинтез стероидов в яичках.

Антигормональные антигены включают:
антиэстрогенные агенты, такие как Тамосифен;
антиандрогенные агенты, такие как Флутамид; и
антиадренальные агенты, такие как Митотан и Аминоглутетимид.

Гидроксимочевина проявляет себя в действии, главным образом, через ингибирование фермента рибонуклеотидредуктазы.

Аспарагиназа является ферментом, который превращает аспарагин в нефункциональную аспарагиновую кислоту и поэтому блокирует синтез белка в опухоли.

Таксол является предпочтительным химиотерапевтическим средством.

Г. ПОТЕНЦИРУЮЩИЕ СРЕДСТВА
"Потенцирующим средством" может быть любой материал, который совершенствует или повышает эффективность фармацевтической композиции или действует на иммунную систему. Одним таким потенцирующим средством является трипролидин и его цис-изомер, которые используются в сочетании с химиотерапевтическими средствами и N-хлорфенилкарбаматами и N-хлорфенилтиокарбаматами. Трипролидин описан в US 5114951 (1992). Другим потенцирующим средством является прокодазол, 1H-бензимидазол-2-пропановая кислота; [ β-(2-бензимидазол)-пропионовая кислота; 2-(2-карбоксиэтил)бензимидазол; пропазол]. Прокодазол является неспецифическим активным иммунозащитным средством против вирусных и бактериальных инфекций и может быть использован с заявленными здесь композициями. Он эффективен только с N-хлорфенилкарбаматами и N -хлорфенилтиокарбаматами при лечении злокачественных новообразований, опухолей, лейкоза и вирусных инфекций или в сочетании с химиотерапевтическими средствами.

Обычно используют количество, эффективное для улучшения активности фармацевтической композиции.

Пропионовая кислота и ее соли и эфиры также могут быть использованы в сочетании с заявленными здесь фармацевтическими композициями.

К этим композициям могут быть добавлены витамины антиоксиданты, такие как витамины A, C и E и бета-каротин.

Д. ДОЗИРОВКА
Любая подходящая дозировка может быть задана в способе этого изобретения. Тип соединения и носителя и количество будут широко варьироваться в зависимости от вида теплокровного животного или человека, массы тела и разновидности опухоли, подлежащей лечению. Обычно используют дозировку между около 2 миллиграмм (мг) на килограмм (кг) массы тела и около 400 мг на кг массы тела. Предпочтительно, используют от 15 мг до около 150 мг/кг массы тела. Обычно дозировка для человека ниже, чем для небольших теплокровных животных, таких как мыши. Стандартная доза может содержать единственное соединение или его смесь с другими соединениями или другими ингибирующими рак соединениями. Стандартная доза может также содержать разбавители, наполнители, носители и тому подобное. Доза может быть в твердой или гелеобразной форме, такой как драже, таблетки, капсулы и тому подобное, или в жидкой форме, пригодной для перорального, ректального, местного или парентерального введения, или внутривенного введения, или введения путем инъекции в место опухоли или вокруг нее.

Диапазон и отношение N-хлорфенилкарбаматов и N-хлорфенилтиокарбаматов к химиотерапевтическому средству будут зависеть от типа рака или опухоли, подлежащих лечению, и конкретного химиотерапевтического средства. Используемое количество химиотерапевтического средства может быть ниже, чем количество N-хлорфенилкарбаматов и N-хлорфенилтиокарбаматов, и может находиться в диапазоне от 0,5 мг/кг массы тела до около 400 мг/кг массы тела.

Е. ФОРМЫ ДОСТАВКИ ДОЗИРОВАННОГО СРЕДСТВА
Противораковые соединения обычно смешивают с фармацевтически приемлемым носителем. Этот носитель может быть твердым или жидким, и тип его обычно выбирают на основе предполагаемого типа введения. Активный агент может совместно вводиться в форме таблетки или капсулы, как агломерированный порошок или в жидкой форме. Примеры твердых носителей включают лактозу, сахарозу, желатин и агар. Капсула или таблетки могут быть легко составлены и легко могут быть приготовлены для проглатывания или жевания; другие твердые формы включают гранулы и объемные порошки. Таблетки могут содержать подходящие связующие, смазки, разбавители, дезинтегрирующие вещества, окрашивающие вещества, вкусовые вещества, вещества, вызывающие текучесть и расплавляющие вещества. Примеры жидких дозированных лекарственных форм включают растворы или суспензии в воде, фармацевтически приемлемых жирах или маслах, спиртах или других органических растворителях, включая сложные эфиры, эмульсии, эликсиры, сиропы, растворы и/или суспензии, восстановленные из не выделяющих газа гранул, и выделяющие газ препараты, восстановленные из выделяющих газ гранул. Такие жидкие лекарственные формы могут содержать, например, подходящие растворители, консерванты, эмульгаторы, суспендирующие вещества, разбавители, подслащиватели, загустители и расплавляющие вещества. Пероральные лекарственные формы могут содержать вкусовые и окрашивающие вещества. Парентеральные и внутривенные формы должны также содержать минеральные добавки и другие материалы для придания им совместимости с типом инъекции или выбранной системой доставки.

Конкретные примеры фармацевтически приемлемых носителей и наполнителей, которые могут быть использованы для составления пероральных лекарственных форм настоящего изобретения, описаны в патенте США N 3903297, выданном Robert 2 сент. 1975. Методики и композиции для приготовления лекарственных форм, применимых в настоящем изобретении, описаны в следующих ссылках: 7 Modern Pharmaceutics, Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, Editors, 1979); Lieberman et al. , Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (1981); and Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 2nd Edition (1976).

Ж. СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ
Способ лечения может быть любым подходящим способом, который является эффективным для лечения конкретного типа вируса или опухоли, подлежащих лечению. Лечение может осуществляться пероральным, ректальным, местным, парентеральным, внутривенным введением или инъекцией в место опухоли или вокруг нее и тому подобное. Способ доставки эффективного количества также варьируется в зависимости от типа опухоли, подлежащей лечению. Предполагается, что парентеральное лечение путем внутривенного, подкожного и внутримышечного применения соединений в составе с подходящим носителем, дополнительным ингибирующим рак соединением или соединениями или разбавителем для облегчения применения будет предпочтительным способом введения соединений теплокровным животным.

Способ лечения вирусных инфекций может быть осуществлен путем перорального, ректального, местного или внутривенного введения. Реальное время и дозировка будут зависеть от типа вируса, требующего лечения, и желательных уровней в крови.

Следующие примеры являются иллюстративными и их не следует воспринимать как ограничивающие объем изобретения.

Исследование опухолевых клеток толстой кишки, молочной железы и легких
Следующие испытания клеточных культур проводили для исследования токсичности соединений N-хлорфенилкарбаматов и N- хлорфенилтиокарбаматов для опухолевых клеток толстой кишки, молочной железы и легких человека. Жизнеспособность клеток проверяли путем наблюдения восстановления ММТ (бромида 3-[4,5- диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия). ММТ проба является хорошо известной мерой жизнеспособности клеток.

Опухолевые клетки толстой кишки (HT29) из Американской коллекции типовых культур (АТСС) и клетки молочной железы (MX1 из клеточных линий из АТСС) культивировали в минимальной питательной среде Игла с 10% околоплодной коровьей сывороткой. Опухолевые клетки легких (A549 из клеточных линий АТСС) культивировали в среде F12 Хама с 10% околоплодной коровьей сывороткой.

Опухолевые клетки пассировали и высевали в колбы для культивирования при желательных плотностях клеток. Культуральную среду декантировали, а пласты клеток промывали дважды физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS). Клетки трипсинизировали и растирали в порошок до пересева в колбы. Если не указано иначе, культуры инкубировали при 37±1^oC в увлажненной атмосфере из 5±1% диоксида углерода в воздухе. Культуры инкубировали, пока они не стали конфлюэнтными на 50-80%.

Клетки пассировали, когда колбы субконфлюэнтны. Среду отсасывали из колб и клеточные пласты промывали дважды PBS. Затем в каждую колбу добавляли раствор трипсина, чтобы покрыть клеточный пласт. Раствор трипсина удаляли через 30-60 секунд и колбы инкубировали при комнатной температуре от двух до шести минут. Когда 90% клеток были удалены, добавляли ростовую среду. Клетки удаляли гомогенизацией и переносили в стерильную центрифужную пробирку. Определяли концентрацию клеток в суспензии и осуществляли подходящее разбавление, чтобы получить плотность 5000 клеток/мл. Клетки пересевали в соответствующие лунки 96- луночных биоаналитических планшетов (200 микролитров клеточной суспензии на лунку). Во все оставшиеся лунки добавляли PВS, чтобы обеспечить влажность. Планшеты затем инкубировали в течение ночи перед обработкой пробным изделием.

Каждую дозу пробного изделия испытывали путем обработки четырех одинаковых лунок культур 100 микролитрами каждого разбавления. Эти лунки, обозначенные как контроли растворителя, получали дополнительные 100 микролитров контроля-метанола; лунки - отрицательные контроли получали дополни тельные 100 микролитров обрабатывающей среды. PBS добавляли в остальные лунки, не обработанные пробным изделием или средой. Планшеты затем инкубировали примерно 5 суток.

В конце 5-суточной инкубации каждую группу доз исследовали под микроскопом для оценки токсичности. В среде обработки устанавливали разбавление 0,5 мг/мл МТТ и разбавленную среду фильтровали через 0,45-микрометровый фильтр для удаления нерастворенных кристаллов. Из лунок биоаналитического планшета декантировали среду. Немедленно после этого во все опытные лунки добавляли 2000 микролитров отфильтрованного раствора МТТ, за исключением двух необработанных (пустых) контрольных опытных лунок. Две контрольные лунки получали 200 микролитров среды обработки. Планшеты возвращали в инкубатор примерно на 3 часа. После инкубирования среду, содержащую МТТ, декантировали. В каждую лунку добавляли избыток среды и планшеты встряхивали при комнатной температуре около 2 часов.

Оптическую плотность при 550 нм (OD₅₅₀) каждой лунки измеряли планшет-ридером VMax, Molecular Devices (Menlo Park, CA).

Рассчитывали средние значения OD₅₅₀ для лунок контроля растворителя, и для лунок каждого разбавления опытного изделия, и для каждой из контрольных лунок, и для положительного контроля. Среднее значение OD₅₅₀ для контрольных лунок вычитали из среднего значения для лунок контроля растворителя и для лунок с опытным изделием, соответственно, чтобы получить соответствующее значение OD₅₅₀.

Кривые доза-отклик получали как полулогарифмический график с % контроля по ординате (линейная) и концентрацией опытного изделия по абсциссе (логарифмическая). EC₅₀ интерполировали из графиков для каждого опытного изделия.

Для опытных изделий, вводимых в метаноле, получали отдельные отклики для коррекции данных метанола.

В качестве положительного контроля использовали адриамицин. Во всех случаях он являлся более токсичным, чем любой из опытных материалов, на один или два log. Адриамицин является одним из наиболее сильных средств, используемых в настоящее время, и имеет значительные побочные эффекты. Максимальная концентрация в плазме других достаточно эффективных химиотерапевтических средств может быть в 10-50 раз выше, чем концентрация Адриамицина. EC₅₀ - это концентрация, при которой погибает половина клеток.

В нормальных здоровых клетках были получены результаты, приведенные в табл. 2.

Эти эксперименты показывают, что такие композиции являются эффективными для уничтожения опухолевых клеток без заметного повреждения здоровых клеток.

Другая активность
В дополнение к их комбинации с химиотерапевтическими средствами и потенцирующими средствами N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы могут быть объединены с фунгицидами, гербицидами или другими антивирусными средствами. Предпочтительные гербициды и фунгициды включают карбендазим, флуоконазол, беномил, глифосат и пропикодазол.

N-Хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы являются также эффективными против вирусов, включая риновирус, ВИЧ, вирусы герпеса и гриппа. При лечении вирусных инфекций N-хлорфенилкарбаматы и N-хлорфенилтиокарбаматы могут быть объединены с другими антивирусными средствами для эффективного лечения вирусных инфекций.

Предполагается, что многие гербициды сами или в сочетании с другими гербицидами и фунгицидами проявят полезный противоопухолевый эффект.

Claims

1. Фармацевтическая композиция для лечения вирусной инфекции, злокачественного новообразования или опухоли, содержащая безопасное и эффективное количество N-хлорфенилкарбамата или N-хлорфенилтиокарбамата формулы

где n равно от 1 до 3;
X выбран из группы, состоящей из кислорода и серы;
R выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила, низшего алкенила, циклогексила, фенила и фенилалкила, имеющих вплоть до 8 атомов углерода,
и фармацевтически приемлемых солей этих соединений с неорганической или органической кислотой.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая дополнительно безопасное и эффективное количество химиотерапевтического средства.

3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, содержащая фармацевтически приемлемый носитель.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, 2 или 3, где R является алкилом, имеющим от 1 до 4 атомов углерода, n равно 1, Х является кислородом и хлор находится в положении 3 фенила.

5. Фармацевтическая композиция по пп.2, 3 или 4, где указанное химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из взаимодействующих с ДНК агентов, антиметаболитов, взаимодействующих с тубулином агентов, гормональных агентов, аспарагиназы и гидроксимочевины.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанное химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из аспарагиназы, гидроксимочевины, цисплатина, циклофосфамида, алтретамина, блеомицина, дактиномицина, доксорубицина, этопозида, тенипозида, таксола, пликамицина, метотрексата, фторурацила, фтордезоксиуридина, N-(4-(N-((2-амино-4-гидрокси-6-хиназолил)метил)проп-2-иниламино)бензоил)-L-глутаминовой кислоты, (СВ 3717), азацитидина, флоксуридина, меркаптопурина, 6-тиогуанина, флударабина, пентостатина и цитарабина.

7. Фармацевтическая композиция по п.1, 2, 3, 4, 5 или 6, которая дополнительно содержит потенцирующее средство.

8. Способ лечения рака у теплокровных млекопитающих, включающий введение от около 2 мг/кг массы тела до около 400 мг/кг массы тела фармацевтической композиции по п.1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.

9. Способ по п.8, где указанный N-хлорфенилкарбамат вводят перорально, энтерально, внутривенно, парентерально или инъекцией в место опухоли или вокруг нее.

10. Композиция стандартной лекарственной формы, эффективной для лечения злокачественного новообразования, опухоли или вирусной инфекции, содержащая N-хлорфенилкарбамат или N-хлорфенилтиокарбамат формулы

где X выбран из группы, состоящей из кислорода и серы;
n равно от 1 до 3,
R выбран из группы, состоящей из водорода, низшего алкила, низшего алкенила, циклогексила, фенила и фенилалкила, имеющих вплоть до 8 атомов углерода,
и фармацевтически приемлемых солей этих соединений с органической или неорганической кислотой, и безопасный и эффективный носитель.

11. Композиция стандартной лекарственной формы по п.10, где указанным карбаматом является N-3-хлорфенилкарбамат и где вводят от около 2 мг/кг массы тела до около 400 мг/кг массы тела указанного N-3-хлорфенилкарбамата.

12. Композиция стандартной лекарственной формы по п.10 или 11, где указанная фармацевтически приемлемая аддитивная соль выбрана из группы, состоящей из гидрохлорида, фосфата, нитрата, ацетата, салицилата и их смесей.

13. Композиция стандартной лекарственной формы по п.12, дополнительно содержащая безопасное и эффективное количество химиотерапевтического средства.

14. Композиция стандартной лекарственной формы по п.10, 11, 12 или 13, где указанное химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из взаимодействующих с ДНК агентов, антиметаболитов, взаимодействующих с тубулином агентов, гормональных агентов, аспарагиназы и гидроксимочевины.

15. Композиция стандартной лекарственной формы по п.14, где указанное химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из аспарагиназы, гидроксимочевины, цисплатина, циклофосфамида, алтретамина, блеомицина, дактиномицина, доксорубицина, этопозида, тенипозида, таксола, пликамицина, метотрексата, фторурацила, фтордезоксиуридина, СВ3717, азацитидина, флоксуридина, маркаптопурина, 6-тиогуанина, флударабина, пентостатина и цитарабина.

16. Композиция стандартной лекарственной формы по п.15, где вводят от около 2 мг/кг массы тела до около 400 мг/кг массы тела указанного N-3-хлорфенилкарбамата.

17. Композиция стандартной лекарственной формы по п.11, 12, 13, 14 или 15, дополнительно содержащая безопасное или эффективное количество потенцирующего средства.

Приоритет по пунктам:
12.04.1995 по пп.1, 10 - 12;
04.08.1995 по пп.2 - 9, 13 - 17.