RU2168334C1

RU2168334C1 - Способ получения пирогенала

Info

Publication number: RU2168334C1
Application number: RU2000102786/14A
Authority: RU
Inventors: Т.П. Малофеева; В.А. Колесникова; П.З. Будницкая
Priority date: 2000-02-08
Filing date: 2000-02-08
Publication date: 2001-06-10

Abstract

Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способа получения пирогенала. Сущность изобретения состоит в том, что способ получения пирогенала включает культивирование микробной массы культур Sal. Typhose и Ps. aeruginosa, ферментативный гидролиз, отделение осадка, концентрирование гидролизата, поэтапную обработку целевого продукта органическим растворителем с последующим высушиванием, при этом культивирование проводят с добавлением ростовых факторов в течение 12-15 ч, добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%, выдерживают не менее 3 ч, концентрацию гидролизата осуществляют методом лиофилизации, получают препарат, содержащий углеводы 40±10%, белок не более 3%, нуклеиновые кислоты не более 5%. Технический результат: предлагаемый способ позволяет обезопасить и сократить технологический процесс, а также стандартизировать выпускаемый препарат.

Description

Изобретение относится к медицине, фармацевтической промышленности и касается способов получения пирогенала (липополисахарида), используемого при изготовлении пирогенала инъекционного и пирогенала в ректальных свечах, применяемых для лечения различных заболеваний.

Известен способ получения пирогенала (1), включающий культивирование микробной массы в реакторе (40-42 ч), работу с живой биомассой, упаривание гидролизата микробной массы.

Однако этот способ длителен, трудоемок, а работа с живой биомассой биологически опасна. Кроме того, пирогенал, получаемый таким способом, не имеет физико-химической характеристики, позволяющей судить о степени очистки и стандартности выпускаемого препарата.

Предлагаемый способ позволяет обезопасить и сократить технологический процесс, уменьшить число выращиваний микробной массы и стандартизировать выпускаемый препарат.

Это достигается путем сокращения времени выращивания микробной массы в реакторе, обезвреживания культуральной жидкости в конце выращивания, замены упаривания гидролизата на лиофилизацию и введения физико-химических методов контроля.

Пример. В реактор с полусинтетической средой засевают суточную культуру S. typhi или Ps.aeruginosa. Выращивание культуры проводят при 37^oC с постоянным перемешиванием, аэрацией, добавлением ростовых факторов и поддерживанием уровня pH среды в течение 12-15 ч. Эти условия культивирования позволяют получить большой выход микробной массы (15-16 млрд./мл микробных клеток). В конце выращивания культуры в реактор добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%. Экспозиция не менее 3 часов.

Полученную обезвреженную биомассу суспендируют в дистиллированной воде из расчета 0,5 л воды на 10 г сухой биомассы и доводят pH среды до 8,0-8,2 добавлением 2 н. щелочи. К смеси добавляют 0,05 г фермента и проводят гидролиз в бутыли емкостью 10 л в течение 5 суток. Для предохранения смеси от прорастания добавляют 30-40 мл толуола. Во время гидролиза pH среды поддерживают на исходном уровне добавлением щелочи. Через 2,5 суток добавляют еще 0,05 г фермента. По окончании гидролиза осадок отделяют от гидролизата сепарированием или центрифугированием.

Гидролизат микробной массы концентрируют методом лиофилизации. Лиофилизат растворяют в 1 л дистиллированной воды и при энергичном перемешивании вливают в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5% ацетата натрия. Выпавший осадок после 18-20 ч отстаивания отделяют центрифугированием, четыре - пять раз растворяют в небольших порциях (по 20 мл) нагретой до кипения воды, каждый раз отделяя раствор центрифугированием. Нерастворившийся осадок отбрасывают, а водные растворы, соединенные вместе, вливают при энергичном перемешивании в шесть объемов 95%-ного фенола, нагретого до 60-65^oC. Выпавший осадок через 18-20 ч отделяют центрифугированием и вновь несколько раз обрабатывают горячей водой.

Соединенные водные вытяжки повторно вливают в шесть объемов 95%-ного фенола при 60-65^oC. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, многократно обрабатывают нагретой до кипения водой и диализуют против водопроводной воды до полного удаления фенола. После дополнительного диализа против дистиллированной воды в течение суток диализат центрифугируют. Осадок отбрасывают, а активное вещество выделяют вливанием надосадочной жидкости в десять объемов 96-градусного этанола, содержащего 0,5% ацетата натрия. Выпавший липополисахарид отделяют центрифугированием, промывают спиртом и ацетоном. Далее высушивают на воздухе.

Полученный вышеописанным способом пирогенал имеет следующие физико-химические показатели: углеводы - (40±10)%; белок - не более 3%; нуклеиновые кислоты - не более 5%.

Пирогенал применяют для изготовления пирогенала инъекционного и пирогенала в ректальных свечах, используемых для лечения различных заболеваний.

Литература
1. Планельес Х.Х., Будницкая П.З. Авторское свидетельство N 169198, Бюллетень N 6, 11.03.1965 г.

Claims

1. Способ получения пирогенала, включающий культивирование микробной массы культур Sal. Typhose и Ps. aeruginosa, ферментативный гидролиз, отделение осадка, концентрирование гидролизата, поэтапную обработку целевого продукта органическим растворителем с последующим высушиванием, отличающийся тем, что культивирование проводят с добавлением ростовых факторов в течение 12 - 15 ч, добавляют формалин до конечной концентрации формальдегида 0,2%, выдерживают не менее 3 ч, концентрацию гидролизата осуществляют методом лиофилизации, получают препарат, содержащий углеводы 40 ± 10%, белок не более 3%, нуклеиновые кислоты не более 5%.