RU2043770C1 - Способ получения вакцины против некробактериоза животных - Google Patents
Способ получения вакцины против некробактериоза животных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2043770C1 RU2043770C1 RU93008462/13A RU93008462A RU2043770C1 RU 2043770 C1 RU2043770 C1 RU 2043770C1 RU 93008462/13 A RU93008462/13 A RU 93008462/13A RU 93008462 A RU93008462 A RU 93008462A RU 2043770 C1 RU2043770 C1 RU 2043770C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- antigens
- complex water
- water soluble
- fusobacterium necrophorum
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Использование: ветеринарная микробиология, способ получения вакцины, профилактика некробактериоза животных. Сущность изобретения: вакцина содержит в качестве антигенов адсорбированные комплесные водорастворимые антигены, извлекаемые из микробных клеток штаммов Fusobacterium necrophorum Н-89-5 и Н-89-29 ДЕП НИИСХ Крайнего Севера, относящихся к I и II серотипам, путем воздействия фермента, разрушающего клеточную оболочку. Штаммы выращивают раздельно, биомассу отделяют от культуральной жидкости, микробные клетки разрушают, антигены оптимизируют по количеству микробного белка, смешивают их в равных по белку объемах и адсорбируют. При этом микробные клетки разрушают воздействием на ее оболочку ферментом в водной среде, центрифугируют, надосадок инактивируют формалином, разводят дистиллированной водой, к полученным комплексным водорастворимым антигенам после объединения добавляют 30% гидроокиси алюминия (3%-ный раствор) при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины в об. комплексный водорастворимый антиген Fusobacterium necrophorum I серотипа 30 40, комплексный водорастворимый антиген Fusobacterium necrophorum II серотипа 30 40, формалин 0,3 0,4, гидроокись алюминия (3%-ный раствор) 25 30.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой способ получения вакцины, используемой для профилактики некробактериоза животных.
Некробактериоз инфекционное заболевание, поражающее все виды с/х животных и прежде всего северных оленей, крупный рогатый скот, овец, свинец. Заболевание сопровождается гнойно-некротическим поражением нижних отделов конечностей, при генерализованной форме поражается ротовая полость, внутренние органы, головной мозг.
Ежегодно некробактеризом заболевает от 20 до 40% домашних оленей. Во многих регионах страны регистрируют до 15-30% и более больных некробактериозом овец и крупного рогатого скота. При этом животные теряют упитанность, продуктивность, подавляющая часть подвергается преждевременному вынужденному убою. Несмотря на то, что разработкой специфических средств борьбы с данным заболеванием занимались многие отечественные и зарубежные исследователи [1-3] все работы заканчивались на стадии лабораторных экспериментов и имели весьма противоречивые результаты. Был разработан способ приготовления противонекробактериозной вакцины, наработаны и испытаны в производственных условиях на северных оленях и крупном рогатом скоте лабораторные и опытно-промышленные партии.
Вакцина показала высокую профилактическую эффективность, однако при приготовлении опытно-промышленных партий выявилась нетехнологичность способа. Так, очень трудоемка и длительна операция по извлечению комплексных водорастворимых антигенов. Полученную сухую биомассу следует разбивать на небольшие партии (по 200 г), заливать дистиллированной водой и 3-4 раза пропускать через дезинтегратор, каждый раз перенося смесь из дезинтегратора в центрифужные стаканы, уравновешивая их, центрифугируя по 30 мин, затем после отделения надосадка (антиген) вновь возвращая с новой порцией дистиллированной воды в дезинтегратор. Много труда и времени занимает 3-кратная обработка биомассы ацетоном (при такой же кратности последующего центрифугирования, высок расход ацетона, что значительно повышает себестоимость вакцины. В условиях промышленного производства оказалась невозможной и операция по диализу антигенов против водопроводной и дистиллированной воды. Все перечисленное ставит под вопрос возможность большеобъемного серийного промышленного производства вакцины указанным способом.
Целью изобретения является повышение технологичности способа изготовления противонекробактериозной вакцины, снижение затрат труда и времени на ее производство.
Поставленная цель достигается тем, что в способе изготовления вакцины против некробактериоза, включающем раздельное выращивание производственных культур Fusobacterium necrophorum разных серотипов, отделение биомассы от культуральной жидкости, разрушение микробной клетки, оптимизацию антигенов по количеству микробного белка, смешивание антигенов в равных по белку объемах и адсорбирование, согласно изобретению используют нативную биомассу, разрушают микробную клетку воздействием на ее оболочку ферментом в водной среде, центрифугируют, надосадок инактивируют формалином, разводят дистиллированной водой до необходимой концентрации белка, к полученным комплексным водорастворимым антигенам после объединения добавляют гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов на 1 л вакцины, Комплексные водорастворимые антигены F.necrophorum I серотипа 30-40 Комплексные водорастворимые антигены F.necrophorum II серотипа 30-40 Формалин 0,3-0,4 Гидроокись алюминия (3-ный р-р) 25-30
П р и м е р 1. Для изготовления противонекробактериозной вакцины использовали штаммы Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей. Штаммы депонированы ВГНКИ вет. препаратов в коллекции микроорганизмов НИИСХ Крайнего Севера. Производственные штаммы выращивали в реакторах раздельно на среде Китт-Тароцци (рН 7,4-7,6) в течение 36-48 ч при температуре 37-38оС. Из реактора культуру подавали на суперцентрифугу, культуральную жидкость уничтожали, а нативную биомассу собирали в стерильную емкость, добавляли стерильную дистиллированную воду, и ставили на 1-2 сут в холодильник. После этого раствор подогревали, подщелачивали и добавляли фермент протосубтиллин. ГХ-3 с активностью не менее 100 ед. Смесь тщательно перемешивали и выдерживали в термостате в течение 1,5-2 ч, взбалтывая через каждые 20 мин и периодически отбирая пробы на белок. При достижении в растворе нужной концентрации белка гидролиз прекращали. Закончив гидролиз, раствор биомассы центрифугировали при 3 тыс. оборотах в минуту, осадок уничтожали, а надосадок сливали в емкость, добавляли 0,4% формалина и ставили в термостат на 3-5 дней. По окончании этого срока определяли содержание белка, доводя его до необходимой концентрации добавлением стерильной дистиллированной воды. Растворы антигенов обоих серотипов объединяли в равных по белку и объему соотношениях (50:50), добавляли к смеси 30% гидроокиси алюминия, тщательно перемешивали в течение 2-3 ч и оставляли при комнатной температуре на 2-3 дня, проверяя полноту адсорбции. Содержание несвязанного белка в вакцине не должно превышать 1,2 мг/мл. Вакцину проверяли на стерильность, безвредность, после чего расфасовывали и этикетировали.
П р и м е р 1. Для изготовления противонекробактериозной вакцины использовали штаммы Fusobacterium necrophotum Н-89-5 и Н-89-29, относящиеся к I и II серотипам, полученные от северных оленей. Штаммы депонированы ВГНКИ вет. препаратов в коллекции микроорганизмов НИИСХ Крайнего Севера. Производственные штаммы выращивали в реакторах раздельно на среде Китт-Тароцци (рН 7,4-7,6) в течение 36-48 ч при температуре 37-38оС. Из реактора культуру подавали на суперцентрифугу, культуральную жидкость уничтожали, а нативную биомассу собирали в стерильную емкость, добавляли стерильную дистиллированную воду, и ставили на 1-2 сут в холодильник. После этого раствор подогревали, подщелачивали и добавляли фермент протосубтиллин. ГХ-3 с активностью не менее 100 ед. Смесь тщательно перемешивали и выдерживали в термостате в течение 1,5-2 ч, взбалтывая через каждые 20 мин и периодически отбирая пробы на белок. При достижении в растворе нужной концентрации белка гидролиз прекращали. Закончив гидролиз, раствор биомассы центрифугировали при 3 тыс. оборотах в минуту, осадок уничтожали, а надосадок сливали в емкость, добавляли 0,4% формалина и ставили в термостат на 3-5 дней. По окончании этого срока определяли содержание белка, доводя его до необходимой концентрации добавлением стерильной дистиллированной воды. Растворы антигенов обоих серотипов объединяли в равных по белку и объему соотношениях (50:50), добавляли к смеси 30% гидроокиси алюминия, тщательно перемешивали в течение 2-3 ч и оставляли при комнатной температуре на 2-3 дня, проверяя полноту адсорбции. Содержание несвязанного белка в вакцине не должно превышать 1,2 мг/мл. Вакцину проверяли на стерильность, безвредность, после чего расфасовывали и этикетировали.
Таким образом в примере 1 конкретного выполнения вакцина содержала 30% гидроокиси алюминия (ГОА) и по 35% каждого из антигенов.
П р и м е р 2. Все приемы способа (выращивание производственных культур, получение биомассы, оптимизацию антигенов по белку, адсорбирование) осуществляют аналогично операциям, описанным в примере 1, на разрушение микробной клетки ведут панкреатином, добавляя его из расчетa 10,5-13,5 г (в зависимости от активности) на 100 г микробного белка. Выход антигена из 100 г биомассы при использовании панкреатина оказался равным таковому при использовании протосубтиллина, однако панкреатин разрушает не только микробную стенку, но и ведет к разрушению внутриклеточного белка и большому накоплению аминного азота (до 350-400 мг/%) в растворах антигена.
П р и м е р 3. Все приемы способа (выращивание производственных культур, получение биомассы, разрушение микробных клеток, оптимизацию антигенов по белку) осуществляли аналогично операциям, описанным в примере 1, но антигены брали в соотношении один к другому нe 55:55, а 40:60. Однако, как показали исследования сывороток, взятых от кроликов, иммунизированных такими вакцинами, количество антител на антиген, взятый в меньшем объеме, уступало таковым, образованным на антиген, взятый в большем объеме, что вело к некоторому увеличению числа заболевших некробактериозом иммунизированных животных при заражении их штаммом, аналогичным антигену, введенному в вакцину в меньшей концентрации.
П р и м е р 4. Все приемы способа осуществляли аналогично операциям, описанным в примере 1, но долю адсорбента в вакцине брали равной 20 и 35% В первом случае это вело к значительному увеличению в вакцине несвязанного белка (свыше 2 мг/мл) и, таким образом, к повышению токсичности вакцины и гибели лабораторных животных в ответ на подкожное введение в дозах, необходимых при контроле вакцины в соответствии с техническими условиями. Во втором случае доля несвязанного белка снижалась по сравнению с использованием 30% ГОА незначительно (на 0,1-0,2 мг/мл), однако увеличивало в вакцине и так высокое содержание адсорбента при соответствующем снижении основного действующего вещества-антигена.
П р и м е р производственной проверки. В период с февраля 1991 г. по март 1992 г. на Краснодарской биофабрике было изготовлено 6 опытно-промышленных серий противонекробактериозной вакцины, в том числе четыре серии (1-4) на основе антигенов, выделенных из микробных клеток механическим (гомогенизатор, коллоидная мельница) и две (5-6) ферментативным путем по заявляемому способу. Письмом от 24.04.92 N 22-4/339 Главное управление ветеринарии РФ разрешило провести комиссионные испытания вакцины в Краснодарском крае, где в шести хозяйствах пяти районов было привито около 13 тыс.голов крупного рогатого скота вакциной серий 1-4 и около 2 тыс. 5, 6. Хозяйства много лет подряд неблагополучны по некробактериозу, ежегодная заболеваемость поголовья составляет 25-30% Вакцину вводили подкожно, в среднюю треть шеи, одно- и двукратно в дозе 6 мл. Результаты испытаний показали, что все серии обладают высокой профилактической активностью, снижая заболеваемость в 17-50 раз, либо вообще предохраняя от некробактериоза 100% поголовья, причем ферментные вакцины не уступали по активности, а в некоторых случаях даже превосходили вакцину, приготовленную на основе антигенов, полученных при механическом разрушении микробных клеток.
Таким образом, данные комплексной производственной проверки подтвердили, что заявляемый способ позволяет получать высокоэффективную инактивированную вакцину против некробактериоза животных.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ, включающий раздельное выращивание производственных культур Fusobacterium necrophorum I и II серотипов, отделение биомассы от культуральной жидкости, разрушение микробных клеток, выделение комплексных водорастворимых антигенов из жидкой фракции, стандартизацию полученных антигенов по количеству микробного белка, смешивание их в равных соотношениях по белку, добавление адъюванта-адсорбента с получением целевого продукта, отличающийся тем, что разрушение проводят с помощью протеолитического фермента, выделенные антигены инактивируют формалином, в качестве адъюванта-адсорбента используют 3%-ный раствор гидроксида алюминия и получают целевой продукт следующего состава, об.Комплексный водорастворимый антиген Fusobacterium necrophorum I серотипа 30 40
Комплексный водорастворимый антиген Fusobacterium necrophorum II серотипа 30 40
Формалин 0,3 0,4
Гидроксид алюминия (3%-ный раствор) 25 30
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93008462/13A RU2043770C1 (ru) | 1993-02-15 | 1993-02-15 | Способ получения вакцины против некробактериоза животных |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93008462/13A RU2043770C1 (ru) | 1993-02-15 | 1993-02-15 | Способ получения вакцины против некробактериоза животных |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2043770C1 true RU2043770C1 (ru) | 1995-09-20 |
RU93008462A RU93008462A (ru) | 1996-03-10 |
Family
ID=20137255
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93008462/13A RU2043770C1 (ru) | 1993-02-15 | 1993-02-15 | Способ получения вакцины против некробактериоза животных |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2043770C1 (ru) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6632439B2 (en) * | 1999-09-29 | 2003-10-14 | Novartis Animal Health, Inc. | Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine |
RU2539105C1 (ru) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
CN106267180A (zh) * | 2016-09-09 | 2017-01-04 | 吉林特研生物技术有限责任公司 | 一种坏死梭杆菌无细胞抗原及其制备方法和制备的疫苗 |
RU2701376C1 (ru) * | 2018-11-19 | 2019-09-26 | Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" | Способ комплексного лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
-
1993
- 1993-02-15 RU RU93008462/13A patent/RU2043770C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
1. Garcia M.M., Mc Kay K.A. Canad.J.comp. Med. 1978, v.42, 1, p.121-127. * |
2. Cakala S., Borkowski Med.Vrter., 1979, v.35, N 12, p.743-746. * |
3. Патент РФ N 1828598, кл. A 61K 39/02, опублик. 1993. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6632439B2 (en) * | 1999-09-29 | 2003-10-14 | Novartis Animal Health, Inc. | Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine |
RU2539105C1 (ru) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
CN106267180A (zh) * | 2016-09-09 | 2017-01-04 | 吉林特研生物技术有限责任公司 | 一种坏死梭杆菌无细胞抗原及其制备方法和制备的疫苗 |
RU2701376C1 (ru) * | 2018-11-19 | 2019-09-26 | Федеральное казенное предприятие "Армавирская биологическая фабрика" | Способ комплексного лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Thongthai et al. | Studies on the virulence of Neisseria gonorrhoeae I. relation of colonial morphology and resistance to phagocytosis by polymorphonuclear leukocytes | |
CN101612396B (zh) | 一种犬瘟热活疫苗及其制备方法 | |
CN103160555A (zh) | 一种促进产气荚膜梭菌高产外毒素的培养基及其培养方法和其应用 | |
RU2043770C1 (ru) | Способ получения вакцины против некробактериоза животных | |
Carter | A serological study of Pasteurella haemolytica | |
US4472378A (en) | Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same | |
RU2428202C1 (ru) | Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят | |
US3401219A (en) | Moraxella bovis infectious bovine keratoconjunctivitis steam-killed bacterin | |
PILEHCHIAN et al. | Large scale production of Blackleg vaccine by fermenter and enriched culture medium in Iran | |
CN105169380A (zh) | 一种兔病毒性出血症和多杀性巴氏杆菌病二联蜂胶灭活疫苗及其制备方法 | |
US4229434A (en) | Vaccine for prophylaxis of trichophytosis in horse and method of preparing same | |
CN1724068A (zh) | 禽霍乱强化灭活疫苗的制备方法 | |
SU997599A3 (ru) | Способ получени гетеровакцины дл лечени синдрома трихомонада | |
US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
CN108273051B (zh) | 猪a型产气荚膜梭菌灭活疫苗的快速高效制备方法 | |
RU2109519C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против некробактериоза животных | |
RU2316345C1 (ru) | Способ изготовления вакцины ассоциированной против колибактериоза, сальмонеллеза, стрептококкоза и энтерококковой инфекции нутрий | |
US4762712A (en) | Anti-mastitis polyvalent vaccine, method of administration and method for production thereof | |
RU2764600C1 (ru) | Вакцина против эшерихиоза телят и поросят | |
RU2325183C1 (ru) | Способ получения вакцины против эшерихиоза животных | |
RU2288002C1 (ru) | Способ изготовления вакцины против энтерококковой инфекции нутрий | |
CN103721254A (zh) | 猪a型产气荚膜梭菌氢氧化铝灭活疫苗的制备方法 | |
RU2129441C1 (ru) | Вакцина, ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят | |
KR100787830B1 (ko) | 돈단독균 불활화항원에 돈단독균 특이정제단백 항원을 첨가한 돈단독균 불활화백신의 제조방법 | |
RU2813752C1 (ru) | Способ получения гидроокись алюминиевой масляной вакцины против эшерихиоза телят и поросят |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20030908 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120216 |