RU2167940C2

RU2167940C2 - Nutrient medium for pseudotuberculosis microbe isolation

Info

Publication number: RU2167940C2
Application number: RU99111061A
Authority: RU
Inventors: О.Г. Татарникова; В.И. Кузнецов; С.В. Балахонов; Э.С. Каретникова; Л.С. Липаева; А.А. Болдина; С.А. Белькова
Original assignee: Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
Priority date: 1999-05-26
Filing date: 1999-05-26
Publication date: 2001-05-27

Abstract

FIELD: medicinal microbiology, biotechnology. SUBSTANCE: nutrient medium has nutrient base, casein and food yeast hydrolyzates, agar, sodium hydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate, manganese sulfate, sodium citrate, glucose, urea, bile, bromothymol blue and distilled water. Nutrient medium ensures to grow of epidemically significant strains pYV⁺ of pseudotuberculosis microorganism with different plasmid spectrum as colonies with diameter below 1.5 mm in 24 h of incubation at 28 C and 37 C and provides the growth of 5-6 colonies after plating 10 microbe cells. Invention can be used for isolation of pseudotuberculosis microbe from infected material. EFFECT: enhanced sensitivity and rate of cultures growth. 2 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии и биотехнологии и может быть использовано для выделения псевдотуберкулезного микроба из инфицированного материала. The invention relates to medical microbiology and biotechnology and can be used to isolate a pseudotuberculosis microbe from infected material.

Совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза связано с применением различных дифференциально-диагностических питательных сред для выделения псевдотуберкулезного микроба. Но сроки роста возбудителя на применяемых средах достаточно длительны, и поэтому существует необходимость в разработке чувствительных питательных сред, на которых наблюдается отчетливо различимый рост возбудителей псевдотуберкулеза с различным плазмидным спектром через 24-26 ч. Improving the laboratory diagnosis of pseudotuberculosis is associated with the use of various differential diagnostic culture media for the isolation of a pseudotuberculosis microbe. But the growth time of the pathogen on the media used is quite long, and therefore there is a need to develop sensitive nutrient media on which there is a clearly visible growth of pathogens of pseudotuberculosis with a different plasmid spectrum after 24-26 hours.

Известна питательная среда для выделения возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза, содержащая панкреатический гидролизат рыбной муки, желчь, глюкозу, мочевину, натрий хлористый, натрий углекислый, бромтимоловый синий, агар (патент N 2101342 РФ). A known nutrient medium for the isolation of pathogens of intestinal yersiniosis and pseudotuberculosis containing pancreatic hydrolyzate of fish meal, bile, glucose, urea, sodium chloride, sodium carbonate, bromothymol blue, agar (RF patent No. 2101342).

Недостаток известной среды заключается в том, что через 24 ч инкубации при температуре 28^oC на среде отмечается рост псевдотуберкулезного микроба в виде колоний диаметром менее 0,5 мм. Рост колоний диаметром 1,5-2 мм наблюдается только через 48 ч. Кроме того, при 37^oC среда обеспечивает рост не всех эпидемически значимых клонов возбудителя псевдотуберкулеза.A disadvantage of the known medium is that after 24 hours of incubation at a temperature of 28 ^° C., the medium shows an increase in the pseudotuberculosis microbe in the form of colonies with a diameter of less than 0.5 mm. The growth of colonies with a diameter of 1.5-2 mm is observed only after 48 hours. In addition, at 37 ^o C, the environment does not provide the growth of all epidemiologically significant clones of the causative agent of pseudotuberculosis.

Целью изобретения является повышение чувствительности среды и скорости роста бактерий, культивируемых на ней. The aim of the invention is to increase the sensitivity of the medium and the growth rate of bacteria cultured on it.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба содержит питательную основу (гидролизаты казеина и кормовых дрожжей), агар, минеральные соли (натрий фосфорнокислый, калий фосфорнокислый, марганец сернокислый), натрий лимоннокислый, глюкозу, мочевину, желчь, бромтимоловый синий и дистиллированную воду при следующем количественном соотношении компонентов, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0 - 13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1 - 1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8 - 8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9 - 2,1
Натрий лимоннокислый - 1,9 - 2,1
Марганец сернокислый - 0,018 - 0,022
Глюкоза - 4,8 - 5,2
Мочевина - 2,4 - 2,6
Желчь (порошок) - 4,8 - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,126 - 0,130
Агар - 11,0 - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 л
Сопоставительный анализ с прототипом показал, что предлагаемая питательная среда отличается от известной тем, что она содержит гидролизаты казеина и кормовых дрожжей, натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, натрий лимоннокислый, марганец сернокислый в предлагаемых количественных соотношениях компонентов. Таким образом, данная питательная среда соответствует критерию изобретения "новизна".This goal is achieved in that the nutrient medium for the isolation of the pseudotuberculosis microbe contains a nutrient base (casein and fodder yeast hydrolysates), agar, mineral salts (sodium phosphate, potassium phosphate, manganese sulfate), sodium citrate, glucose, urea, bile, and bromothymol blue distilled water in the following quantitative ratio of components, g:
Casein hydrolyzate (powder) - 11.0 - 13.0
Hydrolyzed fodder yeast (powder) - 1.1 - 1.3
Disubstituted sodium phosphate - 7.8 - 8.2
Monosubstituted potassium phosphate - 1.9 - 2.1
Sodium citrate - 1.9 - 2.1
Manganese sulfate - 0.018 - 0.022
Glucose - 4.8 - 5.2
Urea - 2.4 - 2.6
Bile (powder) - 4.8 - 5.2
Bromothymol blue - 0.126 - 0.130
Agar - 11.0 - 13.0
Distilled water - Up to 1 L
Comparative analysis with the prototype showed that the proposed nutrient medium differs from the known one in that it contains casein and fodder yeast hydrolysates, disubstituted sodium phosphate, monosubstituted potassium phosphate, sodium citrate, manganese sulfate in the proposed quantitative proportions of the components. Thus, this nutrient medium meets the criteria of the invention of "novelty."

Проведенный анализ патентной и научно-технической литературы показал, что предлагаемое техническое решение отличается не только от прототипа, но и других технических решений в данной и смежных отраслях. Так, авторами не найдена питательная среда для выделения псевдотуберкулезного микроба, которая содержала бы предлагаемые ингредиенты в предлагаемом количественном соотношении компонентов. А именно, данный состав среды позволяет повысить ее чувствительность в отношении штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром и добиться его роста в виде колоний диаметром до 1,5 мм через 24 ч инкубации при температуре 28 и 37^oC.The analysis of patent and scientific and technical literature showed that the proposed technical solution differs not only from the prototype, but also other technical solutions in this and related industries. So, the authors did not find a nutrient medium for the isolation of a pseudotuberculosis microbe that would contain the proposed ingredients in the proposed quantitative ratio of the components. Namely, this composition of the medium allows to increase its sensitivity to strains of a pseudotuberculosis microbe with a different plasmid spectrum and to achieve its growth in the form of colonies with a diameter of up to 1.5 mm after 24 hours of incubation at a temperature of 28 and 37 ^o C.

Данная среда может быть использована в медицинской микробиологии. This medium can be used in medical microbiology.

Питательную среду готовят смешиванием сухих компонентов в следующем количественном соотношении, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0 - 13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1 - 1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8 - 8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9 - 2,1
Натрий лимоннокислый - 1,9 - 2,1
Марганец сернокислый - 0,018 - 0,022
Глюкоза - 4,8 - 5,2
Мочевина - 2,4 - 2,6
Желчь (порошок) - 4,8 - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,126 - 0,130
Агар - 11,0 - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Полученную навеску среды размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения при перемешивании, кипятят в течение 5-7 мин до полного расплавления агара, охлаждают до температуры 45-50^oC, тщательно взбалтывают и разливают в стерильные чашки Петри.The nutrient medium is prepared by mixing dry components in the following quantitative ratio, g:
Casein hydrolyzate (powder) - 11.0 - 13.0
Hydrolyzed fodder yeast (powder) - 1.1 - 1.3
Disubstituted sodium phosphate - 7.8 - 8.2
Monosubstituted potassium phosphate - 1.9 - 2.1
Sodium citrate - 1.9 - 2.1
Manganese sulfate - 0.018 - 0.022
Glucose - 4.8 - 5.2
Urea - 2.4 - 2.6
Bile (powder) - 4.8 - 5.2
Bromothymol blue - 0.126 - 0.130
Agar - 11.0 - 13.0
Distilled water - Up to 1 liter
The resulting sample of the medium is stirred in 1 liter of distilled water, brought to a boil with stirring, boiled for 5-7 minutes until the agar is completely melted, cooled to a temperature of 45-50 ^o C, thoroughly shaken and poured into sterile Petri dishes.

Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.Inoculated plates are incubated at a temperature of 28 or 37 ^o C for 24 hours

Пример 1. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 11,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,1
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 7,8
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,9
Натрий лимоннокислый - 1,9
Марганец сернокислый - 0,018
Глюкоза - 4,8
Мочевина - 2,4
Желчь (порошок) - 4,8
Бромтимоловый синий - 0,126
Агар - 11,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.Example 1. A nutrient medium is prepared as described above, using the following quantitative composition, g:
Casein Hydrolyzate (Powder) - 11.0
Hydrolyzed fodder yeast (powder) - 1.1
Sodium phosphate disubstituted - 7.8
Monosubstituted potassium phosphate - 1.9
Sodium Citrate - 1.9
Manganese sulfate - 0.018
Glucose - 4.8
Urea - 2.4
Bile (powder) - 4.8
Bromothymol blue - 0.126
Agar - 11.0
Distilled water - Up to 1 liter
Inoculated plates are incubated at a temperature of 28 or 37 ^o C for 24 hours

Пример 2. Питательную среду готовят, как описано выше, при этом используют следующий количественный состав, г:
Гидролизат казеина (порошок) - 13,0
Гидролизат кормовых дрожжей (порошок) - 1,3
Натрий фосфорнокислый двузамещенный - 8,2
Калий фосфорнокислый однозамещенный - 2,1
Натрий лимоннокислый - 2,1
Марганец сернокислый - 0,022
Глюкоза - 5,2
Мочевина - 2,6
Желчь (порошок) - 5,2
Бромтимоловый синий - 0,130
Агар - 13,0
Вода дистиллированная - До 1 литра
Засеянные чашки инкубируют при температуре 28 или 37^oC в течение 24 ч.Example 2. The nutrient medium is prepared as described above, while using the following quantitative composition, g:
Casein hydrolyzate (powder) - 13.0
Hydrolyzed fodder yeast (powder) - 1.3
Disubstituted Sodium Phosphate - 8.2
Monosubstituted potassium phosphate - 2.1
Sodium Citrate - 2.1
Manganese sulfate - 0.022
Glucose - 5.2
Urea - 2.6
Bile (powder) - 5.2
Bromothymol blue - 0.130
Agar - 13.0
Distilled water - Up to 1 liter
Inoculated plates are incubated at a temperature of 28 or 37 ^o C for 24 hours

Чувствительность предлагаемой среды и скорость роста возбудителя псевдотуберкулеза оценивали путем посева 10 и 100 микробных клеток суточной агаровой культуры штаммов псевдотуберкулезного микроба с различным плазмидным спектром через 24-48 ч инкубации при температуре 28 и 37^oC.The sensitivity of the proposed environment and the growth rate of the causative agent of pseudotuberculosis was assessed by plating 10 and 100 microbial cells of the daily agar culture of pseudotuberculosis microbe strains with different plasmid spectra after 24-48 hours of incubation at a temperature of 28 and 37 ^o C.

Результаты роста псевдотуберкулезного микроба на предлагаемой среде приведены в табл. 1 и 2. Среда значительно ускоряет рост возбудителя псевдотуберкулеза: через 24 ч наблюдается рост колоний диаметром до 1,5 мм; на среде-прототипе в эти же сроки размер колоний менее 0,5 мм. The growth results of the pseudotuberculosis microbe in the proposed environment are given in table. 1 and 2. The environment significantly accelerates the growth of the causative agent of pseudotuberculosis: after 24 hours, growth of colonies with a diameter of up to 1.5 mm is observed; on the prototype medium in the same time the size of the colonies is less than 0.5 mm

Предлагаемая среда обладает высокой чувствительностью, обеспечивающей рост 5-6 колоний при посеве 10 микробных клеток через 24 ч инкубации. The proposed environment has a high sensitivity, ensuring the growth of 5-6 colonies when plating 10 microbial cells after 24 hours of incubation.

Среда обеспечивает рост эпидемически значимых pYV⁺ штаммов псевдотуберкулезного микроба при 37^oC через 24 ч инкубации, тогда как на среде-прототипе при этой температуре даже через 48 ч инкубации рост полностью отсутствует.The medium provides the growth of epidemically significant pYV ⁺ strains of the pseudotuberculosis microbe at 37 ^° C after 24 hours of incubation, whereas on the prototype medium at this temperature even after 48 hours of incubation, growth is completely absent.

Claims

A nutrient medium for the isolation of a pseudotuberculosis microbe, containing a nutrient base, agar, mineral salts, glucose, urea, bile, bromothymol blue and distilled water, characterized in that it additionally contains sodium citrate, from the nutrient bases, the medium contains casein and fodder yeast hydrolysates, and from mineral salts - sodium phosphate disubstituted, potassium phosphate monosubstituted and manganese sulfate in the following ratio of components, g / l:
Casein hydrolyzate (powder) - 11.0-13.0
Hydrolyzed fodder yeast (powder) - 1.1-1.3
Disubstituted sodium phosphate - 7.8-8.2
Monosubstituted potassium phosphate - 1.9-2.1
Sodium citrate - 1.9-2.1
Manganese sulfate - 0.018-0.022
Glucose - 4.8-5.2
Urea - 2.4-2.6
Bile (powder) - 4.8-5.2
Bromothymol blue - 0.126-0.130
Agar - 11.0-13.0
Distilled water - Up to 1 L