RU2684721C1 - Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria - Google Patents
Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria Download PDFInfo
- Publication number
- RU2684721C1 RU2684721C1 RU2018115358A RU2018115358A RU2684721C1 RU 2684721 C1 RU2684721 C1 RU 2684721C1 RU 2018115358 A RU2018115358 A RU 2018115358A RU 2018115358 A RU2018115358 A RU 2018115358A RU 2684721 C1 RU2684721 C1 RU 2684721C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- positive bacteria
- chloride
- pathogenic gram
- dnase activity
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 title claims abstract description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title abstract description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 26
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims abstract description 11
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 9
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 6
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 5
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 10
- 241000186781 Listeria Species 0.000 abstract description 9
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 abstract description 6
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 44
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 241000186805 Listeria innocua Species 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 241000186780 Listeria ivanovii Species 0.000 description 4
- 241000186807 Listeria seeligeri Species 0.000 description 4
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 4
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 3
- 241000186806 Listeria grayi Species 0.000 description 3
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 3
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710202013 Protein 1.5 Proteins 0.000 description 1
- 241001147693 Staphylococcus sp. Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к общей и медицинской микробиологии и может быть использовано как в научно-исследовательской, так и в практической работе для бактериологической диагностики патогенных грамположительных бактерий (например, рода Listeria, Staphylococcus sp.и др.) с целью выявления клинически значимых, вирулентных штаммов микроорганизмов в инфекционной патологии. Как известно, к роду Listeria относят грамположительные палочковидные бактерии, некоторые патогенные виды которых являются возбудителями заболеваний животных и человека. В последнее время в литературе стали описываться случаи заболевания людей, вызванные и другими видами листерий, считающихся непатогенными (Зайцева Е.А. «Система анализа микробиологических и молекулярно-генетических маркеров для выявления высоковирулентных штаммов Listeria monocytogenes»: дис. докт. мед. наук. Москва, 2010. 299 с).The invention relates to general and medical microbiology and can be used both in research and in practical work for the bacteriological diagnosis of pathogenic gram-positive bacteria (for example, of the genus Listeria, Staphylococcus sp. And others) in order to identify clinically significant, virulent strains of microorganisms in infectious pathology. It is known that Gram-positive rod-shaped bacteria belong to the genus Listeria, some pathogenic species of which are causative agents of animal and human diseases. Recently, human cases have been described in the literature caused by other types of Listeria that are considered non-pathogenic (Zaitseva, EA, “System for analyzing microbiological and molecular genetic markers for detecting highly virulent Listeria monocytogenes strains”: Ph.D. in Medical Sciences. Moscow, 2010. 299 c).
В настоящее время существуют разнообразные методики и среды для определения дезоксирибинуклеазной (ДНКазной) активности микроорганизмов (и т.д.). ДНКаза бактерий - фермент, деполимеризующий ДНК, выделяющуюся при гибели и некрозе лейкоцитов в месте инфекции. Многие ферменты являются маркерами патогенности штаммов возбудителей и их выявление необходимо для более полной характеристики выделяемых штаммов бактерий.Currently, there are a variety of techniques and environments for determining the deoxyribinuclease (DNase) activity of microorganisms (etc.). Bacteria DNase is an enzyme that depolymerizes DNA, which is released during the death and necrosis of leukocytes at the site of infection. Many enzymes are markers of pathogenicity of strains of pathogens and their identification is necessary for a more complete characterization of the strains of bacteria.
В отечественной литературе описаны следующие методы изучения ДНКазной активности:In the domestic literature describes the following methods for the study of DNAse activity:
1) Калиниченко Н.Ф., Овчаренко О.И., Бирюкова С.В. «Об определении ДНКазы у микроорганизмов» (ЖМЭИ, 1968, №12, с. 11-14), описывают методику изучения ДНКазы у микроорганизмов на жидкой среде с использованием надосадочной жидкости суточных культур микроорганизмов, с добавлением разных концентрациий MgCl2, ДНК (полученную из вилочковой железы телят) и НС1; метод Джеффриса - к агару добавляют ДНК, несколько капель CaCl2, на котором выращивают культуры микроорганизмов, и которые, в последующем заливали 1 H НС1.1) Kalinichenko N.F., Ovcharenko O.I., Biryukova S.V. “On the determination of DNase in microorganisms” (ZHMEI, 1968, No. 12, pp. 11-14), describes the method of studying DNase in microorganisms on a liquid medium using supernatant of daily cultures of microorganisms, with the addition of different concentrations of MgCl 2 , DNA (obtained from thymus gland calves) and HC1; Jeffreys method - DNA is added to the agar, a few drops of CaCl 2 , on which cultures of microorganisms are grown, and which, subsequently, are poured with 1 H HC1.
2) Изобретение SU 1693058 А1 (Кишиневский государственный медицинский университет) 23.11.1991 «Способ определения ДНКазной активности микроорганизмов».2) The invention of SU 1693058 A1 (Chisinau State Medical University) 11/23/1991 "Method for determining the DNase activity of microorganisms".
Наличие ДНКазной активности у микроорганизмов широко изучается в настоящее время за рубежом. Большинство сред для ее изучения импортного производства. Их используют для определения дезоксирибонуклеазной активности у бактерий и грибов, в первую очередь для идентификации клинических штаммов стафилококков.The presence of DNase activity in microorganisms is widely studied at present abroad. Most of the media for studying it is imported. They are used to determine the deoxyribonuclease activity in bacteria and fungi, primarily to identify clinical strains of staphylococci.
Известны среды для определения ДНКазы:Known environment for the determination of DNase:
1) в состав которой входит: ДНК, хлорид кальция, хлорид натрия, толуидиновый синий, трис, агар-агар;1) containing: DNA, calcium chloride, sodium chloride, toluidine blue, Tris, agar-agar;
2) два варианта среды:2) two medium options:
а) первый (М482) имеет в своем составе гидролизат казеина, папаиновый перевар соевой муки, ДНК, хлорид натрия, агар-агар;a) the first (M482) contains casein hydrolyzate, papain digestion of soy flour, DNA, sodium chloride, agar-agar;
б) второй (M1041) - триптозу, ДНК, хлорид натрия, толуидиновый синий, агар-агар; (производитель HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия, электронный ресурс www.himedialabs.ru/m482-m1041);b) the second (M1041) - tryptosis, DNA, sodium chloride, toluidine blue, agar-agar; (manufacturer HiMedia Laboratories Pvt. Limited, India, electronic resource www.himedialabs.ru/m482-m1041);
3) среда: ДНК, казеиновый пептон, соевый пептон, хлорид натрия, агар (Hispanlab/Laboratorios Conda, Испания, электронный ресурс, www.probiovet. com. ua/goods/item/?it=13&select=1);3) Wednesday: DNA, casein peptone, soy peptone, sodium chloride, agar (Hispanlab / Laboratorios Conda, Spain, electronic resource, www.probiovet. Com. Ua / goods / item /? It = 13 & select = 1);
4) ДНКазный агар с толуоидным синим, - триптоза, ДНК, хлорид натрия, агар, толуоидин синий (ЗАО «Dasnovamed», Россия, электронный ресурс www.dasnovamed.ru/content/view/30/1/);4) DNase agar with toluoic blue, - tryptosis, DNA, sodium chloride, agar, toluoidin blue (JSC “Dasnovamed”, Russia, electronic resource www.dasnovamed.ru/content/view/30/1/);
Недостатком вышеуказанных питательных сред, является то, что они, как правило, импортного производства и являются дорогостоящими. Кроме того, краситель толуидиновый синий может подавлять рост некоторых штаммов стафилококков. Для точной идентификации рекомендуется проведение дополнительных тестов. При этом эти среды достаточно дорогостоящие. Например, цена среды для определения ДНКазной активности от производителя ЗАО «Dasnovamed» составляет 63 доллара (электронный ресурс www.dasnovamed.ru/content/view/30/1/).The disadvantage of the above nutrient media is that they are usually imported and are expensive. In addition, the dye toluidine blue can inhibit the growth of some strains of staphylococci. Additional tests are recommended for accurate identification. However, these environments are quite expensive. For example, the price of the medium for the determination of DNase activity from the manufacturer of JSC “Dasnovamed” is $ 63 (electronic resource www.dasnovamed.ru/content/view/30/1/).
Наиболее близким аналогом заявляемого изобретения по совокупности признаков является среда для определения ДНКазной активности бактерий, состоящая из:The closest analogue of the claimed invention on the totality of signs is the environment for determining DNAse activity of bacteria, consisting of:
- 1,8% мясопептонного агара (рН 8,6) - 100 мл,- 1.8% meat-peptone agar (pH 8.6) - 100 ml,
- сухая высокополимерная ДНК - 0,5 - 2,0 мг/мл,- dry high polymer DNA - 0.5-2.0 mg / ml,
- 2 моль/л раствор едкого натра (NaOH) - 0,8 мл,- 2 mol / l solution of caustic soda (NaOH) - 0.8 ml,
- стерильный 10%-ный раствор хлористого кальция (CaCl2) - 0,5 мл,- sterile 10% calcium chloride solution (CaCl 2 ) - 0.5 ml,
- дистиллированная вода 3-5 мл,- distilled water 3-5 ml,
(Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985 №535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений").(Order of the Ministry of Health of the USSR of April 22, 1985 No. 535 "On the unification of microbiological (bacteriological) research methods used in the clinical diagnostic laboratories of medical institutions".
Недостатком данной питательной среды является то, что при ее приготовлении используют дорогостоящие компоненты, а именно: мясо-пептонный агар и ДНКа, которую получают из вилочковой железы телят. При этом, время определения ДНКазной активности на этой среде, значительно дольше, чем на заявляемой среде.The disadvantage of this nutrient medium is that in its preparation using expensive components, namely, meat-peptone agar and DNA, which is obtained from the thymus gland of calves. At the same time, the time to determine the DNase activity on this medium is much longer than on the claimed medium.
В этой связи техническая проблема заключается в расширении арсенала технических средств, таких как разработка простых, недорогих питательных сред отечественного производства с целью импортозамещения, для изучения ДНКазной активности грамположительных бактерий, а также сред с высокой разрешающей способностью в отношении листерий и им подобным.In this regard, the technical problem lies in expanding the arsenal of technical means, such as the development of simple, inexpensive domestic growth media for the purpose of import substitution, to study the DNase activity of gram-positive bacteria, as well as high-resolution media with respect to Listeria and the like.
Задача, решаемая данным изобретением, - удешевление среды с высокой разрешающей способностью.The problem solved by this invention is to reduce the cost of high-resolution environments.
Техническим результатом при реализации предлагаемого технического решения является: ускорение сроков выявления ДНКазной активности у патогенных грамположительных бактерий до 16 ч за счет наличия в ней постоянного аминокислотного состава и ДНК, входящего непосредственно в белковую основу, простота приготовления.The technical result in the implementation of the proposed technical solution is: acceleration of the timing of detection of DNase activity in pathogenic gram-positive bacteria up to 16 h due to the presence in it of a constant amino acid composition and DNA, which is directly included in the protein basis, ease of preparation.
Технический результат достигается путем приготовления среды для определения ДНКазной активности у патогенных грамположительных бактерий, содержащей белковую основу, микробиологический агар, глюкозу, хлорид натрия, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что среда дополнительно содержит хлористый кальций, хлористый магний, а в качестве белковой основы и ДНК используют сухой отвар молок лососевых рыб, при следующем соотношении компонентов, г/л:The technical result is achieved by preparing a medium for determining DNase activity in pathogenic gram-positive bacteria containing protein basis, microbiological agar, glucose, sodium chloride, distilled water, wherein the medium additionally contains calcium chloride, magnesium chloride, and as a protein basis and DNA use dry broth salmon milt fishes, with the following ratio of components, g / l:
при этом после стерилизации среды добавляют 5 мл стерильного 10% раствор хлористого кальция (CaCl2) и 2 мл стерильного раствора 0,1M хлористого магния (MgCl2).After sterilization of the medium, 5 ml of a sterile 10% solution of calcium chloride (CaCl 2 ) and 2 ml of a sterile solution of 0.1 M magnesium chloride (MgCl 2 ) are added.
Данная среда проста в применении, не содержит дорогостоящих, нестандартных ингредиентов, таких как мясо и сыворотка крупного рогатого скота.This medium is easy to use, does not contain expensive, non-standard ingredients, such as meat and cattle serum.
Известно, что в молоках лососевых рыб (соленых, замороженных, лиофилизированных) любой стадии зрелости, а тем более в не пищевых (т.е. текучих - 5-6-я стадия зрелости), в исходном сырье обнаружено очень большое количество ДНК: 1) в соленых - 5,6 - 8,5%, 2) в мороженых - 4,6 - 6,0% (Ю.И. Касьяненко, Т.Н. Пивненко «Сравнительные физико-химические характеристики низко-молекулярной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) из морских гидробионтов» //«Известия Тихоокеанского научно-исследовательского рыбохозяйственного центра», 1999, т. 125, с. 152-158).It is known that in the milks of salmon (salted, frozen, lyophilized) of any stage of maturity, and even more so in non-food (i.e., 5-6th stage of maturity), a very large amount of DNA was found in the raw material: 1 ) in salted - 5.6 - 8.5%, 2) in frozen - 4.6 - 6.0% (Yu.I. Kasyanenko, T.N. Pivnenko "Comparative physico-chemical characteristics of low-molecular deoxyribonucleic acid ( DNA from marine aquatic organisms ”// Proceedings of the Pacific Fisheries Research Center, 1999, vol. 125, p. 152-158).
Предлагаемая питательная среда имеет постоянный аминокислотный состав, обуславливающий быстрый и стабильный рост микроорганизмов. Кроме того, отвар из молок лососевых рыб имеет не только высокое содержание дезоксирибонуклеиновой кислоты, но и богатое органическое и минеральное питание: ДНК - 26,7%, белка - 1,5%, углеводов - 4,0%, микроэлементов (мкг/г) - Cu - 0,5, Zn - 2,5, Fe - 3,5, Mn<1,25, As - 0,68.The proposed nutrient medium has a constant amino acid composition, causing rapid and stable growth of microorganisms. In addition, the decoction of salmon milt has not only a high content of deoxyribonucleic acid, but also a rich organic and mineral nutrition: DNA - 26.7%, protein - 1.5%, carbohydrates - 4.0%, trace elements (µg / g ) - Cu - 0.5, Zn - 2.5, Fe - 3.5, Mn <1.25, As - 0.68.
При этом существенными признаками предлагаемого изобретения следует считать качественный и количественный состав питательной среды, т.к. величины содержания компонентов в заявляемой питательной среде являются оптимальными и обусловливают относительную сбалансированность стоимости среды с ее ростовыми характеристиками при выявлении ДНКазной активности бактерий. Например, ДНКазная активность Listeria monocytogenes NCTC 10527 и Staphylococcus aureus АТСС 6538p/291p на данной среде проявляется уже через 16 часов инкубации исследуемых культур при 37°С (рис. 1а).In this case, the essential features of the present invention should be considered the qualitative and quantitative composition of the nutrient medium, because the values of the content of the components in the inventive nutrient medium are optimal and determine the relative balance of the cost of the medium with its growth characteristics in detecting the DNAse activity of bacteria. For example, the DNase activity of Listeria monocytogenes NCTC 10527 and Staphylococcus aureus ATCC 6538p / 291p on this medium manifests itself already after 16 hours of incubation of the studied cultures at 37 ° C (Fig. 1a).
Питательную среду готовят следующим образом.The nutrient medium is prepared as follows.
Сначала готовят отвар из молок лососевых рыб (горбуши или кеты). К 500,0 г предварительно измельченным молокам рыб добавляют водопроводную воду в соотношении 1:2 и кипятят 1 ч на медленном огне. Полученный отвар фильтруют, стерилизуют давлением 1 атм в течение 30 мин. Сушат. Сухой отвар из молок рыб хранят в бытовом холодильнике (4-8°С) или при комнатной температуре. Сухой отвар молок используют в качестве белковой основы и ДНК для приготовления питательной среды с целью определения ДНКазной активности у бактерий.First prepare a decoction of milt salmon (pink or chum). Tap water in a 1: 2 ratio is added to 500.0 g of pre-crushed fish milt and simmer for 1 h. The resulting broth is filtered, sterilized with a pressure of 1 atm for 30 minutes. Dried. Dry broth from the milk of fish is stored in a household refrigerator (4-8 ° C) or at room temperature. Milk decoction is used as a protein base and DNA for the preparation of a nutrient medium to determine DNAse activity in bacteria.
К 6,0 г сухого отвара молок лососевых рыб добавляют 1 г глюкозы, 10,0±2,0 г микробиологического агара, 5,0 г хлорида натрия, и доводят питательную среду до 1 л дистиллированной водой. Смесь перемешивают, общеизвестным способом доводят рН среды до 7,2 - 7,4 при помощи 20% NaOH. Полученную питательную среду разливают по емкостям, а затем стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин. Охлаждают до 50-55°С. Затем в емкость со средой добавляют 5 мл стерильного 10% раствор хлористого кальция (CaCl2) и 2 мл стерильного раствора ОДМ хлористого магния (MgCl2) и разливают по чашкам Петри.To 6.0 g of dry broth salmon milt add 1 g of glucose, 10.0 ± 2.0 g of microbial agar, 5.0 g of sodium chloride, and bring the nutrient medium to 1 l with distilled water. The mixture is stirred, the pH of the medium is adjusted to 7.2-7.4 with a well-known method using 20% NaOH. The obtained nutrient medium is poured into containers, and then sterilized at 0.5 atm for 20 minutes. Cooled to 50-55 ° C. Then, 5 ml of a sterile 10% solution of calcium chloride (CaCl 2 ) and 2 ml of a sterile solution of ODM magnesium chloride (MgCl 2 ) are added to a container with medium and poured into Petri dishes.
Полученная питательная среда представляет собой полупрозрачный гель молочного цвета, без запаха.The obtained nutrient medium is a translucent gel of a milky color, odorless.
Заявляемая питательная среда соответствует критериям патентоспособности изобретения: «новизна» (в качестве белковой основы и ДНК в питательной среде для определения ДНКазной активности патогенных грамположительных бактерий используют сухой концентрат отвара молок лососевых рыб); «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».The claimed nutrient medium meets the patentability criteria of the invention: "novelty" (as a protein basis and DNA in a nutrient medium to determine the DNase activity of pathogenic gram-positive bacteria, use a dry broth concentrate of salmon milt fish); "Inventive step" and "industrial applicability".
Для сравнения свойств заявляемой среды со средой, взятой за прототип (среда для определения ДНКазной активности (Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985 №535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений"), исследовали ДНКазную активность следующих тест-штаммов бактерий - Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); Listeria monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); Listeria ivanovii NCTC 11846; Listeria innocua SLCC 3379; Listeria seeligeri SLCC 5921; Listeria grayi 17; Listeria welchimeri SLCC 5334 и Staphylococcus aureus ATCC 6538p/291p.To compare the properties of the inventive medium with the medium taken as a prototype (medium for the determination of DNase activity (Order of the USSR Ministry of Health dated 04.04.1985 No. 535 "On the unification of microbiological (bacteriological) research methods used in clinical and diagnostic laboratories of medical institutions") investigated the DNAse activity of the following bacterial test strains — Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant;) Listeria monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant; C; Listeria ivanovii NCTC 11846; Listeria innocua SLCC 3379; Listeria seeligeri SCCCCCC 11846; Listeria innocua SLCC 3379 3379; Listeria sevani SLCCCCC 11846, Listeria innocua SLCC 3379, Listeria invanocuii CLC 11879; Listeria monoctogenes; SLCC 5334 and Staphylococcus aureus AT CC 6538p / 291p.
На чашки Петри с заявляемой средой и средой прототипом штрихом засевали исследуемые культуры и культивировали их при температуре 37°С. Учет результатов проводили путем визуального осмотра первоначально через 16 ч, затем через 18, 24 - 48 ч культивирования бактерий в заявляемой питательной среде и в среде прототипе. На заявляемой среде через 16 ч вокруг исследуемых культур наблюдается гидролиз ДНК, проявляющийся в виде появления прозрачного ореола шириной 0,2 - 1,5 см (рис. 1а).Petri dishes with the claimed medium and medium were prototyped with the stroke, the cultures studied were seeded and cultivated at 37 ° C. Recording of results was carried out by visual inspection initially after 16 h, then after 18, 24 - 48 h of cultivation of bacteria in the claimed nutrient medium and in the medium of the prototype. On the inventive medium, after 16 hours, DNA hydrolysis is observed around the studied cultures, which manifests itself as the appearance of a transparent halo with a width of 0.2–1.5 cm (Fig. 1a).
На среде прототипе через 16 ч ореола вокруг культур Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); Listeria monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); Listeria ivanovii NCTC 11846, Listeria innocua SLCC 3379; Listeria seeligeri SLCC 5921; Listeria grayi 17; Listeria welchimeri SLCC 5334, а также Staphylococcus aureus ATCC 6538p/291p дезоксирибонуклеазной активности не отмечалось (рис. 1б).On the prototype medium after 16 h of halo around cultures of Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant); Listeria monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant); Listeria ivanovii NCTC 11846, Listeria innocua SLCC 3379; Listeria seeligeri SLCC 5921; Listeria grayi 17; Listeria welchimeri SLCC 5334 and Staphylococcus aureus ATCC 6538p / 291p deoxyribonuclease activity was not observed (Fig. 1b).
Это подтверждает более высокую разрешающую способность заявляемой среды.This confirms the higher resolution of the claimed medium.
Пример конкретного выполнения.An example of a specific implementation.
К 6,0 г сухого отвара молок лососевых рыб добавляют 10,0 г микробиологического агара, 5,0 г хлорида натрия, 1,0 г глюкозы и доводят среду до 1 л дистиллированной воды. Смесь перемешивают, общеизвестным способом доводят рН среды до 7,2 - 7,4 при помощи 20% NaOH. Полученную среду разливают по емкостям, а затем стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин. Полученную среду охлаждают до 50 - 55°С.Далее в емкость со средой добавляют 5 мл стерильного 10% раствор хлористого кальция (CaCl2)и 2 мл стерильного раствора 0,1M хлористого магния (MgCl2), после чего среду разливают по чашкам Петри.10.0 g of microbiological agar, 5.0 g of sodium chloride, 1.0 g of glucose are added to 6.0 g of dried broth of salmon milt, and the medium is adjusted to 1 liter of distilled water. The mixture is stirred, the pH of the medium is adjusted to 7.2-7.4 with a well-known method using 20% NaOH. The resulting medium is poured into containers, and then sterilized at 0.5 atm for 20 minutes. The resulting medium is cooled to 50 - 55 ° C. Next, 5 ml of sterile 10% solution of calcium chloride (CaCl 2 ) and 2 ml of sterile solution of 0.1 M magnesium chloride (MgCl 2 ) are added to the container with the medium, then the medium is poured into Petri dishes .
Полученная среда представляет собой полупрозрачный гель молочного цвета, без запаха.The resulting medium is a translucent gel of a milky color, odorless.
Готовую питательную среду разливали в чашки Петри, штрихом засевали исследуемые культуры и культивировали их при температуре 37°С.Учет результатов проводили путем визуального осмотра первоначально через 16 ч, затем через 18, 24 - 48 ч культивирования бактерий. На заявляемой среде через 16 ч вокруг исследуемых культур Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); L. monocytogenes CLIP 75936 (l/2a серовариант); L. ivanovii NCTC 11846; L. innocua SLCC 3379; L. seeligeri SLCC 5921; L. grayi 17; L. welchimeri SLCC 5334, а также Staphylococcus aureus АТСС 6538p/291p, наблюдается гидролиз ДНК, проявляющийся в виде появления прозрачного ореола шириной 0,2 - 1,5 см (табл., рис. 1а).The prepared nutrient medium was poured into Petri dishes, the cultures studied were seeded with a stroke, and cultivated at 37 ° C. The results were recorded by visual inspection initially after 16 h, then after 18, 24 - 48 h of bacteria cultivation. On the inventive medium after 16 h around the studied cultures Listeria monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant); L. monocytogenes CLIP 75936 (l / 2a serovariant); L. ivanovii NCTC 11846; L. innocua SLCC 3379; L. seeligeri SLCC 5921; L. grayi 17; L. welchimeri SLCC 5334, as well as Staphylococcus aureus ATCC 6538p / 291p, is observed DNA hydrolysis, manifested in the form of the appearance of a transparent halo of 0.2 - 1.5 cm wide (Table., Fig. 1a).
На среде прототипе через 16-18 ч ореола вокруг культур L.monocytogenes NCTC 10527 (4b серовариант); L. monocytogenes CLIP 75936 (1/2a серовариант); L. ivanovii NCTC 11846, L. innocua SLCC 3379; L. seeligeri SLCC 5921; L. grayi 17; L. welchimeri SLCC 5334, а также Staphylococcus aureus АТСС 6538p/291p дезоксирибонуклеазной активности не отмечалось (рис. 1б, табл.).On the medium of the prototype after 16-18 h of the aureole around cultures L.monocytogenes NCTC 10527 (4b serovariant); L. monocytogenes CLIP 75936 (1 / 2a serovariant); L. ivanovii NCTC 11846, L. innocua SLCC 3379; L. seeligeri SLCC 5921; L. grayi 17; L. welchimeri SLCC 5334, as well as Staphylococcus aureus ATCC 6538p / 291p, did not show deoxyribonuclease activity (Fig. 1b, Table).
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018115358A RU2684721C1 (en) | 2018-04-24 | 2018-04-24 | Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018115358A RU2684721C1 (en) | 2018-04-24 | 2018-04-24 | Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2684721C1 true RU2684721C1 (en) | 2019-04-11 |
Family
ID=66168226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018115358A RU2684721C1 (en) | 2018-04-24 | 2018-04-24 | Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2684721C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2399660C2 (en) * | 2008-08-04 | 2010-09-20 | ГУ Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт Эпидемиологии и микробиологии (ГУ НИИ ЭМ СО РАМН) | Nutrient medium for bacteria cultivation |
| RU2511436C2 (en) * | 2012-04-12 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИЭМ" СО РАМН) | Differential diagnostic nutrient medium for identification of yersinia bacterium |
-
2018
- 2018-04-24 RU RU2018115358A patent/RU2684721C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2399660C2 (en) * | 2008-08-04 | 2010-09-20 | ГУ Сибирского отделения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт Эпидемиологии и микробиологии (ГУ НИИ ЭМ СО РАМН) | Nutrient medium for bacteria cultivation |
| RU2511436C2 (en) * | 2012-04-12 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИЭМ" СО РАМН) | Differential diagnostic nutrient medium for identification of yersinia bacterium |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ГОСТ Р 52832-2007. Молоко и продукты на основе молока. Обнаружение термонуклеазы, образуемой коагулазоположительными стафилококками, 2010, М., Стандартинформ, с. 1-5. * |
| КАЛИНИЧЕНКО Н.Ф., ОВЧАРЕНКО О.И. и др. Об определении ДНК-азы у микроорганизмов, Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1968, N 12, с.11-14. * |
| ЛАБИНСКОЙ А.С. и др. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований, М., Медицина, 2005, с. 503-504. * |
| Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985, N 535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений". Приложение N1. Под ред. * |
| Приказ Минздрава СССР от 22.04.1985, N 535 "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений". Приложение N1. Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. и др. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований, М., Медицина, 2005, с. 503-504. КАЛИНИЧЕНКО Н.Ф., ОВЧАРЕНКО О.И. и др. Об определении ДНК-азы у микроорганизмов, Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1968, N 12, с.11-14. ГОСТ Р 52832-2007. Молоко и продукты на основе молока. Обнаружение термонуклеазы, образуемой коагулазоположительными стафилококками, 2010, М., Стандартинформ, с. 1-5. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Benmouna et al. | Ability of three lactic acid bacteria to grow in sessile mode and to inhibit biofilm formation of pathogenic bacteria | |
| Tahmasebi et al. | Isolated of Bacillus cereus in chicken meat and investigation β-lactamase antibiotic-resistant in Bacillus cereus from chicken meat | |
| RU2684721C1 (en) | Nutrient environment for determination of different activity in pathogenic gram positive bacteria | |
| CN105104712B (en) | A kind of additive for microbe feedstuff and preparation method thereof | |
| SETYATI et al. | Enzyme-producing symbiotic bacteria in gastropods and bivalves molluscs: Candidates for bioindustry materials | |
| RU2518282C1 (en) | Nutrient medium for submerged cultivation of tularemia microbe | |
| KR20140092533A (en) | Water quality improve material consisting of specific microbe for ornamental fish | |
| RU2415918C2 (en) | Nutrient medium for brucella l-forms recovery and cultivation | |
| RU2444567C1 (en) | NUTRITIVE MEDIUM FOR DETERMINATION OF Listeria GENUS BACTERIA LECITHINASE ACTIVITY | |
| RU2733431C2 (en) | Method for control of inhibitory properties in relation to bacterial flora of nutrient medium for extraction of brucella | |
| RU2704854C1 (en) | Differential electrically nutrient medium for releasing klebsiella | |
| RU2738858C1 (en) | Method of extracting uncultivated forms of staphylococci | |
| RU2580227C1 (en) | Medium for isolation of legionella pneumophila | |
| RU2399660C2 (en) | Nutrient medium for bacteria cultivation | |
| RU2196827C1 (en) | Method of differentiation of listeria monocytogenes culture | |
| RU2541454C1 (en) | Nutrient culture medium for swine erysipelas strain erysipelothrix rhuisipathie | |
| RU2571852C2 (en) | BACTERIA Enterococcus faecium STRAIN HAVING ANTAGONIST ACTIVITY IN RELATION TO BACTERIA OF Listeria GENUS AND Enterococcus faecalis SPECIES | |
| Sagadevan et al. | Molecular characterisation of pathogens isolated from egg samples | |
| RU2722071C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| RU2729389C1 (en) | Method of producing a nutrient base of media for extracting and cultivating legionella | |
| RU2758857C1 (en) | Method for cryopreservation of vegetative inoculating material micromonospora purpurea var_ violacea of strain 7r of gentamycin producer | |
| RU2266956C2 (en) | Broth for brucelle isolation | |
| RU2620965C2 (en) | Nutrient medium for selective detection of pathogenic mannitol positive staphylococci | |
| Dhuha et al. | In-vitro and in-vivo study on Bacillus cereus isolated from different foods samples | |
| Nogina et al. | Prospects for photostimulation of nisin biosynthesis |