RU2162707C2 - Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина - Google Patents
Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2162707C2 RU2162707C2 RU99106110/14A RU99106110A RU2162707C2 RU 2162707 C2 RU2162707 C2 RU 2162707C2 RU 99106110/14 A RU99106110/14 A RU 99106110/14A RU 99106110 A RU99106110 A RU 99106110A RU 2162707 C2 RU2162707 C2 RU 2162707C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemoglobin
- modified hemoglobin
- blood substitute
- blood
- polymer modified
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к производству кровезамещающих препаратов. Изобретением является кровезаменитель - переносчик кислорода, представляющий водный раствор, содержащий, мас.%: полимерный модифицированный гемоглобин 0,9 - 1,1, хлористый натрий 1,0 - 1,2, глюкозу 0,68 - 0,83, аскорбиновую кислоту 0,023 - 0,027 и воду до 100. Изобретением является также состав для получения кровезаменителя - переносчика кислорода, содержащий в граммах на 1 терапевтическую дозу (400 мл раствора): полимерный модифицированный гемоглобин 3,6 - 4,4 хлористый натрий 0,7 - 0,9, глюкозу 2,7 - 3,3, аскорбиновую кислоту 0,9 - 0,11. Полимерный модифицированный гемоглобин получают взаимодействием дезоксигемоглобина с глутаровым альдегидом, модифицированным при pH 6,4 - 6,6 и при температуре 4 - 6°С с веществом из ряда, содержащего дикарбоновую аминокислоту и бисульфит натрия. Технический результат: получение кровезаменителя, сопоставимого по эффективности газового транспорта с кровью человека. 3 с.п. ф-лы, 3 табл.
Description
Предлагаемое изобретение относится к лекарственным средствам, в частности к кровезаменителям, а именно - к кровезаменителям на основе полимерного модифицированного гемоглобина, полученным из гемоглобина донорской крови. Изобретение относится к группе технических решений, одно из которых предназначено для получения другого.
Группа включает, во-первых, кровезаменитель - переносчик кислорода, во-вторых, состав для получения кровезаменителя, в-третьих, способ получения полимерного модифицированного гемоглобина, представляющего существенную часть кровезаменителя - переносчика кислорода и состава для получения кровезаменителя.
Изобретение может найти самое широкое использование в медицинской практике для производства кровезамещающего препарата, сопоставимого по эффективности газового транспорта с кровью человека.
По сравнению с донорской кровью полимерные кровезаменители обладают следующими преимуществами:
1. они способны к длительному хранению без изменения своих характеристик в лиофилизованной форме;
2. переливание их не требует предварительного определения группы крови и дополнительных экспериментов на совместимость с кровью пациента;
3. способы получения полимерного кровезаменителя на основе модифицированного гемоглобина практически устраняет опасность заражения пациентов вирусными инфекциями при его введении.
1. они способны к длительному хранению без изменения своих характеристик в лиофилизованной форме;
2. переливание их не требует предварительного определения группы крови и дополнительных экспериментов на совместимость с кровью пациента;
3. способы получения полимерного кровезаменителя на основе модифицированного гемоглобина практически устраняет опасность заражения пациентов вирусными инфекциями при его введении.
Известно /T.M.S. Chang / Blood Substitutes: Principles, Methods, Products and Clinical Trials, 1997. - v. 1. - P. 11-12/, что отделенный от стромальной оболочки эритроцита гемоглобин не может использоваться как кровезаменитель, поскольку вне эритроцита тетрамерная молекула гемоглобина в сосудистом русле распадается на две субъединицы, которые при удалении почками вызывают их повреждение.
Известен кровезаменитель - переносчик кислорода с товарным знаком "Hemolink" фирмы Hemosol LTD /J.C.Hsia / Biomaterials Artificial Cells and Immobilization Biotechnology, 1991. - v. 19. - P. 42/, представляющий собой раствор сшитого o-раффинозой гемоглобина, выделенного из донорской крови, в лактатном растворе Рингера. Концентрация такого раствора 10 г/дл. O-раффиноза - полиальдегид, полученный окислением D-раффинозы. Раствор Рингера - солевой раствор, близкий по составу и концентрации ионов морской воде, один из физиологических растворов. Кровезаменитель Hemolink содержит 63 ± 12% полигемоглобина, менее 10% метгемоглобина, имеет парциальное давление кислорода, при котором полигемоглобин насыщен на 50% (P50), равное 34 торр. На 1 фазе клинических исследований известный кровезаменитель при введении его в организм в дозах до 150 мл приводил к желудочно-кишечному дискомфорту: тошноте, рвоте, диарее.
Известен также /R. Przybelski et al. / Artificial Cells, Blood Substitutes and Immobilization Biotechnology, Internat. J., 1996. - v. - 24. - P. - 407./ кровезаменитель - переносчик кислорода Hemassist фирмы Baxter Healthcare Corp., представляющий собой раствор внутримолекулярно сшитого диаспирином гемоглобина, выделенного из эритроцитов просроченной донорской крови, в лактатном растворе Рингера с концентрацией полигемоглобина 10 г/дл. В ходе клинических исследований при дозах до 150 мл этот кровезаменитель также вызывал желудочно-кишечный дискомфорт.
Описан кровезаменитель - переносчик кислорода PolyHeme фирмы Northfield Laboratory /L.R.Sehgal et al. / Biomaterials Artificial Cells and Artificial Organ, 1988. - v. 16 - N 1-3. P. 173/. PolyHeme представляет собой раствор придоксилированного полигемоглобина на основе гемоглобина донорской крови с концентрацией 10 г/дл активного начала. Раствор содержит менее 1% мономерного гемоглобина и не более 3% метгемоглобина. P50 равно 28-30 торр. Клинические исследования PolyHeme /S.A.Gould, G.S.Moss / World J. Surg., 1996. - v. 20. - P. 1200/ показали, что при инфузии известного кровезаменителя снижается концентрация эритроцитов в активном кровеносном русле, что нежелательно в условиях шока и больших кровопотерь. Было также найдено, что при одновременном введении более 150 мл препарата также проявлялся желудочно-кишечный дискомфорт.
Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому решению является кровезаменитель - переносчик кислорода, содержащий полимерный гемоглобин, модифицированный пиридоксаль-5-фосфатом, и хлористый натрий, растворенные в воде [патент США N 4053590, МКИ A 61 K 37/14, опубликован 11.10.1977]. Раствор содержит около 1% мономерного гемоглобина и не более 3% метгемоглобина, P50 порядка 25 торр.
Для модификации гемоглобина в прототипе использован биологически активный пиридоксаль-5-фосфат, который вводят в реакционную смесь в избытке, а затем непрореагировавший пиридоксаль-5-фосфат следует удалять из целевого продукта, поскольку он вызывает нежелательные побочные явления, попав в кровеносное русло. Кроме того, как было показано в статье L.R.Sehgal и др. / Biomaterials Artificial Cells and Artificial Organ, 1988. - v. 16 - N 13. P. 173/ и по нашим данным, полигемоглобин, модифицированный пиридоксал-5-фосфатом, снижает концентрацию эритроцитов в активном кровеносном русле и не стимулирует выделение эритроцитов из депо.
Задачей предлагаемого изобретения является улучшение переносимости кровезаменителя - переносчика кислорода и стимулирование выделения эритроцитов из депо.
Поставленная задача решается кровезаменителем - переносчиком кислорода, представляющим водный раствор полимерного модифицированного гемоглобина, в качестве которого берут продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом, хлористый натрий, дополнительно кровезаменитель содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту, при этом все перечисленные компоненты взяты в следующем соотношении, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9 - 1,1
Хлористый натрий - 1,0 - 1,2
Глюкоза - 0,68 - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,023 - 0,027
Вода - До 100
Поставленная задача решается также безводным составом для получения кровезаменителя - переносчика кислорода, содержащим полимерный модифицированный гемоглобин, в качестве которого берут продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом; состав дополнительно содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении компонентов в г на 1 терапевтическую дозу:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6 - 4,4
Хлористый натрий - 0,7 - 0,9
Глюкоза - 2,7 - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,09 - 0,11
Указанную терапевтическую дозу для получения кровезаменителя - переносчика кислорода растворяют в 400 мл изотонического раствора хлористого натрия (Гос. фармакопея XI, выпуск 1. - С. 175).
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9 - 1,1
Хлористый натрий - 1,0 - 1,2
Глюкоза - 0,68 - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,023 - 0,027
Вода - До 100
Поставленная задача решается также безводным составом для получения кровезаменителя - переносчика кислорода, содержащим полимерный модифицированный гемоглобин, в качестве которого берут продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом; состав дополнительно содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту при следующем соотношении компонентов в г на 1 терапевтическую дозу:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6 - 4,4
Хлористый натрий - 0,7 - 0,9
Глюкоза - 2,7 - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,09 - 0,11
Указанную терапевтическую дозу для получения кровезаменителя - переносчика кислорода растворяют в 400 мл изотонического раствора хлористого натрия (Гос. фармакопея XI, выпуск 1. - С. 175).
Поставленная задача решается также заявленным способом получения полимерного модифицированного гемоглобина. Полимерный модифицированный гемоглобин получают взаимодействием дезоксигемоглобина в водном растворе с бифункциональным сшивающим агентом, в качестве которого берут глутаровый альдегид, модифицированный дикарбоновой аминокислотой, например аспарагиновой, глутаминовой или бисульфитом натрия.
По способу получения наиболее близким по совокупности существенных признаков решением является способ получения полимерного модифицированного гемоглобина с повышенной кислород-транспортной эффективностью /Заявка на патент РФ N 96108679/14, МПК: 5 A 61 K 35/14, Официальный Бюллетень Роспатента "Изобретения", 10.07.1998. - ч. 1. - N 19/. В соответствии с известным способом полимерный модифицированный гемоглобин получают взаимодействием 1 - 10 мас.% водного раствора дезоксигемоглобина со сшивающим агентом - модифицированным глутаровым альдегидом при мольном соотношении гемоглобин:сшивающий агент 1: 4-24. Сшивающий агент - модифицированный глутаровый альдегид (ГА) получают взаимодействием ГА и модификатора в водном буферном растворе при pH 6,8 - 7,4, при концентрациях ГА и модификатора 0,1 - 5,0 мас.% и при мольном отношении ГА: модификатор 1: 0,2-1,2. Реакцию ведут при 12 - 15oC. Реакцию завершают добавлением водного раствора боргидрида натрия. В качестве модификатора берут вещество из ряда, включающего дикарбоновую аминокислоту (например, аспарагиновую, глутаминовую) и бисульфит натрия. Основным недостатком известного способа является сложность регулирования реакции модификации ГА, которая в заявленных условиях протекает очень быстро (10 - 15 минут), несмотря на пониженную температуру реакции. В результате получают модифицированный ГА с трудно воспроизводимыми характеристиками. Дальнейшее взаимодействие такого модифицированного ГА с дезоксигемоглобином приводит к получению полимерного модифицированного гемоглобина с различающимися характеристиками.
Задачей предлагаемого способа является получение полимерного модифицированного гемоглобина, хорошо воспроизводимого по своим характеристикам.
Эта задача решалась способом получения полимерного модифицированного гемоглобина, включающим взаимодействие 1 - 10% водного раствора дезоксигемоглобина с модифицированным ГА, который отличается от известного тем, что модификацию ГА ведут в водном буферном растворе при pH 6,4 - 6,6 и при температуре 4 - 6oC в течение 1,5 - 2 часов. Взаимодействие модифицированного ГА с дезоксигемоглобином проводят также при pH 6,4 - 6,6 и при температуре 4 - 6oC.
Гемоглобин получают осмотическим гемолизом отмытых эритроцитов донорской крови /S. E. Rabiner / J. Exp. Med., 1967. - v. 126. - N 6. - P. 1127/. Для этого эритроцитарную массу, выделенную из донорской крови со сроками хранения 5 - 36 дней, шестикратно отмывают от плазменных белков и антигенов раствором хлористого натрия. Отмытую массу подвергают гемолизу апирогенной водой. Строму (эритроцитарную оболочку) отделяют центрифугированием. Раствор гемоглобина фильтруют через фильтр Кюно для удаления остатков стромы. Фильтрат обрабатывают сухим хлористым натрием для высаживания негемоглобиновых белков. Раствор вторично фильтруют через фильтр Кюно и стерилизуют фильтрацией через фильтры Миллипор. Концентрацию нативного Гб и продуктов его химической модификации определяют спектрофотометрически по цианметгемоглобиновому производному при длине волны λ = 540 нм /М.С.Кушаковский / Клинические формы повреждения гемоглобина, Л-д: Медицина, 1968. - С. 23/. Используют хлористый натрий марки ХЧ ("Химически чистый", ГОСТ 42-2572-88), глюкозу (ФС 42-2419-86), аскорбиновую кислоту (ГФ X, С. - 6), изотонический раствор (ГФ XI, вып. 1, стр. 175). Используют также 25% водный раствор глутарового альдегида фирмы Реанал (Венгрия). Концентрацию ГА определяют методом дифференциальной pH-метрии с гидроксиламином /10. H.R.Roe, G. Mitchel / Analyt. Chem., 1951. - v. 23. - N 12. - P. 1758-1760/.
Бисульфит натрия (NaHSO3) получают непосредственно перед использованием /Ю. В.Карякин, И.И. Ангелов / Чистые химические реактивы, Москва. ГНТИ. Хим. л-ра, 1955. - С. 397 - 398/. Его концентрацию определяют йодометрически.
Концентрацию аминокислот определяют по реакции с 2,4,6-тринитробензолсульфокислотой /R.Fields / Biochern. J., 1971. - v. 124. - P. 581/.
Молекулярную массу (ММ) целевого полимерного модифицированного гемоглобина определяют на основе молекулярно-массового распределения (ММР) методом гельпроникающей хроматографии на сефарозе 6Б в фосфатном буфере при нейтральных pH. Расчеты ведут по предложенному авторами способу /Н.П. Кузнецова, Г. В. Самсонов / Высокомолекул. соед. , сер. А, 1985. - т. 27. - N 12. - С. 2611/
Кривые диссоциации оксигемоглобина получают на регистрирующем приборе "Гем-О-Скан" (фирма Aminco, USA) в стандартных условиях (pH 7,4; 37oC, pCO2 40 торр) в диапазоне парциальных давлений кислорода от 0 до 150 торр, достигаемых продуванием азота или смеси азот - кислород (75:25 v/v). На основании кривых диссоциации оксигемоглобина определяют величину полунасыщения гемоглобина кислородом (P50). Погрешность в определении P50 составляет 10 - 15%.
Кривые диссоциации оксигемоглобина получают на регистрирующем приборе "Гем-О-Скан" (фирма Aminco, USA) в стандартных условиях (pH 7,4; 37oC, pCO2 40 торр) в диапазоне парциальных давлений кислорода от 0 до 150 торр, достигаемых продуванием азота или смеси азот - кислород (75:25 v/v). На основании кривых диссоциации оксигемоглобина определяют величину полунасыщения гемоглобина кислородом (P50). Погрешность в определении P50 составляет 10 - 15%.
Отличительными от решения-прототипа признаками кровезаменителя - переносчика кислорода и состава для его получения являются: составы в целом, а также характеристика полимерного модифицированного гемоглобина.
Анализ известного уровня техники не позволил обнаружить решений, полностью совпадающих по совокупности существенных признаков с заявленными составами. Это подтверждает соответствие заявленных решений по п.п. 1 и 2 патентной формулы условию "новизна".
Анализ показал также, что в прототипе использовали полимерный модифицированный гемоглобин, полученный путем сшивки предварительно модифицированного гемоглобина. В заявленном решении эффект достигнут за счет предварительной модификации сшивающего агента - глутарового альдегида.
Отличительными от решения-прототипа (по способу получения полимерного модифицированного гемоглобина - п.3 патентной формулы) признаками являются:
1. pH водного буферного раствора, в котором проводят реакцию модификации ГА и взаимодействие с дезоксигемоглобином, равный 6,4 - 6,6;
2. температура реакции модификации и взаимодействия модифицированного ГА с дезоксигемоглобином, равная 4 - 6oC.
1. pH водного буферного раствора, в котором проводят реакцию модификации ГА и взаимодействие с дезоксигемоглобином, равный 6,4 - 6,6;
2. температура реакции модификации и взаимодействия модифицированного ГА с дезоксигемоглобином, равная 4 - 6oC.
Анализ уровня техники показал отсутствие открыто опубликованной информации о способе, полностью совпадающем по совокупности признаков с заявленным решением. Это подтверждает соответствие предлагаемого изобретения условию охраноспособности "новизна". Эксперимент показал, что отличительные признаки заявляемого способа по п.3 патентной формулы обеспечили решение указанной выше задачи - получение воспроизводимого по своим характеристикам кровезаменителя.
Новой неожиданной функцией заявляемого кровезаменителя - переносчика кислорода оказалась повышенная устойчивость его при длительном хранении к автоокислению с сохранением функциональных свойств, а также способность к инициированию выделения эритроцитов из депо организма при внутривенном введении. Такая способность была обнаружена при проведении клинических исследований и отмечена в итоговых протоколах этих исследований.
Отличия в величинах pH 6,4 - 6,6 (для заявленного способа) и 6,8 - 7,4 (для способа - прототипа) существенны, поскольку всегда считалось, что гемоглобин устойчив только в области значений pH, близких к нейтральным. Заявителями экспериментально было найдено, что в заявляемых условиях способа гемоглобин остается достаточно стабильным к образованию мет-формы, а продукты реакции более устойчивы при хранении.
Таким образом, заявляемое комплексное решение обеспечивает достижение неочевидных и неожиданных функций целевого кровезаменителя - повышенную устойчивость его к автоокислению при длительном хранении в лиофилизованной форме и способность к инициированию выделения эритроцитов из депо при внутривенном введении.
Наличие новых и неожиданных функций придает заявленному комплексному решению в целом соответствие такому важному условию патентоспособности, как "изобретательский уровень".
Для подтверждения соответствия заявленного решения условию "промышленная применимость" и для лучшего понимания сущности предложения приводим примеры конкретной реализации изобретения, которые не исчерпывают сущности предложения.
Пример 1. Получение полимерного модифицированного гемоглобина сшивкой его продуктом взаимодействия глутарового альдегида с дикарбоновой аминокислотой.
40 мл водного раствора гемоглобина (Гб), полученного из донорской крови, с концентрацией 5,0 мас.% (pH 6,6) помещают в колбу емкостью 200 мл и проводят дезоксигенацию в токе азота при перемешивании при 4oC. К раствору дезоксигенированного Гб прикапывают 3,1 мл водного раствора с концентрацией 2 мас. % по глутаровому альдегиду (ГА) и 1,47 мас.% по глутаминовой кислоте в 0,1 М фосфатном буферном растворе с pH 6,6. Реакцию ведут при перемешивании в течение 2 часов, затем добавляют 2,4 мл 1 мас.% водного раствора натрий боргидрида с pH 9,0. Перемешивание продолжают еще 30 минут. Отбирают 1 мл реакционной смеси и проводят в течение суток диализ против 0,05 М раствора трис-буфера с pH 7,4, содержащего 0,15 М NaCl. В подготовленной таким образом пробе измеряют кривую диссоциации оксигемоглобина.
Для сравнения измеряют кривую диссоциации оксигемоглобина в исходном растворе Гб, отдиализованного в тех же условиях. Для полученного полимерного модифицированного гемоглобина P50 составляет 30 торр, для исходного Гб 22 торр; ММ (Mw) полученного полимерного модифицированного гемоглобина 230 тыс. Д.
Основную часть полученного раствора полимерного модифицированного гемоглобина диализуют против 2 л 1 мас.% раствора хлористого натрия в течение суток и добавляют аскорбиновую кислоту и глюкозу. Полученный раствор высушивают путем лиофилизации.
Конечный продукт содержит следующие компоненты, г на 1 дозу:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 4,4
Хлористый натрий - 0,9
Глюкоза - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,11
Для получения лекарственной формы лиофилизованный продукт (1 доза) растворяют в 400 мл изотонического раствора хлористого натрия с получением препарата, содержащего, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 1,1
Хлористый натрий - 1,2
Глюкоза - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,027
Вода - До 100
Полимерный модифицированный гемоглобин по примеру 1 обладает высокой устойчивостью к автоокислению, которая обусловлена как способом получения, так и заявляемым составом лекарственной формы. Препарат длительно хранится в лиофилизованной форме без потери функциональной активности. Через два года хранения величина P50 изменилась от 30 мм до 27 мм, при этом содержание мет-формы увеличилось с 4% до 12%.
Полимерный модифицированный гемоглобин - 4,4
Хлористый натрий - 0,9
Глюкоза - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,11
Для получения лекарственной формы лиофилизованный продукт (1 доза) растворяют в 400 мл изотонического раствора хлористого натрия с получением препарата, содержащего, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 1,1
Хлористый натрий - 1,2
Глюкоза - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,027
Вода - До 100
Полимерный модифицированный гемоглобин по примеру 1 обладает высокой устойчивостью к автоокислению, которая обусловлена как способом получения, так и заявляемым составом лекарственной формы. Препарат длительно хранится в лиофилизованной форме без потери функциональной активности. Через два года хранения величина P50 изменилась от 30 мм до 27 мм, при этом содержание мет-формы увеличилось с 4% до 12%.
Кровезаменитель на основе полимерного модифицированного гемоглобина, полученного в соответствии со способом-прототипом в аналогичных условиях, за два года хранения в лиофилизованной форме изменил величину P50 с 22 мм до 17 мм, содержание мет-формы увеличилось с 5% до 19%.
Пример 2. Получение полимерного модифицированного гемоглобина сшивкой его продуктом взаимодействия глутарового альдегида с бисульфитом натрия.
В колбу на 50 мл помещают 10 мл водного раствора Гб с концентрацией 4,7 мас. % (pH 6,4) и проводят дезоксигенацию продуванием азота при 6oC. К раствору дезоксигенированного Гб при той же температуре и при перемешивании добавляют 0,84 мл физиологического раствора с концентрацией по ГА 1,74 мас.% и по бисульфиту натрия 0,73 мас.%. Смесь перемешивают 1,5 часа. Реакцию останавливают добавлением 0,5 мл 1 мас.% водного раствора боргидрида натрия с pH 8,5 с последующим перемешиванием в течение 30 минут. В условиях примера 1 выделяют целевой продукт и определяют его характеристики.
Для полученного полимерного модифицированного гемоглобина P50 составляет 23 торр, для исходного Гб 17 торр; ММ (Mw) полученного полимерного модифицированного гемоглобина 180 тыс.Д.
Основную часть полученного раствора полимерного модифицированного гемоглобина диализуют против 2 л 1 мас.% раствора хлористого натрия в течение суток и добавляют аскорбиновую кислоты и глюкозу. Полученный раствор высушивают путем лиофилизации.
Конечный продукт содержит следующие компоненты, г на 1 дозу:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6
Хлористый натрий - 0,7
Глюкоза - 2,7
Аскорбиновая кислота - 0,09
Для получения лекарственной формы лиофилизованный продукт (1 дозу) растворяют в 400 мл изотонического раствора хлорида натрия с получением препарата, содержащего, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9
Хлористый натрий - 1,0
Глюкоза - 0,68
Аскорбиновая кислота - 0,023
Вода - До 100
Кровезаменитель на основе полимерного модифицированного гемоглобина, входящего в состав лекарственной формы по примеру 2, также обладает высокой устойчивостью к автоокислению. При хранении кровезаменителя в лиофилизованной форме в течение двух лет величина его P50 изменилась от 23 мм до 20 мм, при этом содержание мет-формы возросло с 3,5% до 12,2%.
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6
Хлористый натрий - 0,7
Глюкоза - 2,7
Аскорбиновая кислота - 0,09
Для получения лекарственной формы лиофилизованный продукт (1 дозу) растворяют в 400 мл изотонического раствора хлорида натрия с получением препарата, содержащего, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9
Хлористый натрий - 1,0
Глюкоза - 0,68
Аскорбиновая кислота - 0,023
Вода - До 100
Кровезаменитель на основе полимерного модифицированного гемоглобина, входящего в состав лекарственной формы по примеру 2, также обладает высокой устойчивостью к автоокислению. При хранении кровезаменителя в лиофилизованной форме в течение двух лет величина его P50 изменилась от 23 мм до 20 мм, при этом содержание мет-формы возросло с 3,5% до 12,2%.
Кровезаменитель на основе полимерного модифицированного гемоглобина, полученного по способу-прототипу в аналогичных условиях, за два года хранения в лиофилизованной форме снизил величину P50 с 22 мм до 18 мм, при этом содержание мет-формы возросло с 4,5% до 18%.
В ходе клинических исследований заявляемый кровезаменитель был применен при хирургических операциях по поводу различных заболеваний желудочно-кишечного тракта более чем 50 больных различного возраста для коррекции интраоперационных кровопотерь, а также у больных с постгеморрагической анемией. Заболевания, при которых производились внутривенные инфузии заявляемого кровезаменителя в процессе оперативного вмешательства, различны. Это хроническая язва желудка - 17 случаев, рак желудка - 9 случаев, острая язва желудка, осложненная кровотечением - 2 случая, хроническая язва двенадцатиперстной кишки - 3 случая, рак ободочной кишки - 4 случая, рак прямой кишки - 7 случаев, состояние после операции Гартмана - 6 случаев. Инфузия кровезаменителя составляла от 4 до 6 доз, то есть от 1600 до 2400 мл. У 14 больных с опухолевыми поражениями желудка или толстой кишки инфузии заявляемого кровезаменителя проводили для коррекции анемии как в дооперационном периоде, так и во время хирургического вмешательства. Заявляемый кровезаменитель был также применен для оказания помощи больным с геморрагическим и травматическим шоком. В 9 случаях имела место тяжелая кровопотеря (от 1300 до 2000 мл), сопровождавшаяся геморрагическим шоком. В 6 случаях имела место кровопотеря и травматический шок II и III степени. Инфузия заявляемого кровезаменителя производилась с целью восполнения кровопотери кровезаменителем, обладающим газотранспортной функцией (переноса кислорода) и составляла 400 - 1600 мл.
В таблицах 1 - 3 представлены данные, характеризующие показатели крови после инфузии заявляемого кровезаменителя.
Представленные данные показывают, что инфузия заявляемого кровезаменителя - переносчика кислорода обеспечивает быстрый и достаточно продолжительный гемодинамический эффект, который проявляется, во-первых, в стабилизации как систолического, так и диастолического артериального давления, во-вторых, в стойком повышении показателей крови, в-третьих, в возрастании парциального давления кислорода в артериальной крови.
Клинические испытания подтвердили хорошую переносимость препарата и высокую лечебную эффективность заявляемого кровезаменителя - переносчика кислорода, особенно при лечении больных с острой и хронической анемией, при кровотечениях тяжелой и крайне тяжелой степени.
Обнаружено стимулирующее воздействие заявленного кровезаменителя - переносчика кислорода на гемопоэз, что подтверждается данными таблицы 2. Побочных действий заявленного кровезаменителя - переносчика кислорода не было выявлено ни в одном случае, даже при струйном введении его при гемморрагическом шоке. Было также отмечено, что экскреторная функция почек в период введения и действия заявленного кровезаменителя - переносчика кислорода не нарушалась.
Claims (1)
1. Кровезаменитель - переносчик кислорода, представляющий водный раствор, содержащий полимерный модифицированный гемоглобин и хлористый натрий, отличающийся тем, что он дополнительно содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту, а в качестве полимерного модифицированного гемоглобина содержит продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9 - 1,1
Хлористый натрий - 1,0 - 1,2
Глюкоза - 0,68 - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,023 - 0,027
Вода - До 100
2. Состав для получения кровезаменителя - переносчика кислорода, включающий полимерный модифицированный гемоглобин и хлористый натрий, отличающийся тем, что он дополнительно содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту, а в качестве полимерного модифицированного гемоглобина содержит продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом при следующем соотношении компонентов в г на 1 дозу (400 мл раствора):
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6 - 4,4
Хлористый натрий - 0,7 - 0,9
Глюкоза - 2,7 - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,09 - 0,11
3. Способ получения полимерного модифицированного гемоглобина путем последовательных операций дезоксигенации гемоглобина донорской крови в водном растворе, модификации глутарового альдегида веществом из ряда, содержащего дикарбоновую аминокислоту и бисульфит натрия, взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом и с завершением реакции добавлением вещества, закрывающего функциональные группы сшивающего агента, отличающийся тем, что глутаровый альдегид модифицируют при pH 6,4 - 6,6 и при температуре 4 - 6oC, взаимодействие дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом ведут при тех же pH и температурах.
Полимерный модифицированный гемоглобин - 0,9 - 1,1
Хлористый натрий - 1,0 - 1,2
Глюкоза - 0,68 - 0,83
Аскорбиновая кислота - 0,023 - 0,027
Вода - До 100
2. Состав для получения кровезаменителя - переносчика кислорода, включающий полимерный модифицированный гемоглобин и хлористый натрий, отличающийся тем, что он дополнительно содержит глюкозу и аскорбиновую кислоту, а в качестве полимерного модифицированного гемоглобина содержит продукт взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом при следующем соотношении компонентов в г на 1 дозу (400 мл раствора):
Полимерный модифицированный гемоглобин - 3,6 - 4,4
Хлористый натрий - 0,7 - 0,9
Глюкоза - 2,7 - 3,3
Аскорбиновая кислота - 0,09 - 0,11
3. Способ получения полимерного модифицированного гемоглобина путем последовательных операций дезоксигенации гемоглобина донорской крови в водном растворе, модификации глутарового альдегида веществом из ряда, содержащего дикарбоновую аминокислоту и бисульфит натрия, взаимодействия дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом и с завершением реакции добавлением вещества, закрывающего функциональные группы сшивающего агента, отличающийся тем, что глутаровый альдегид модифицируют при pH 6,4 - 6,6 и при температуре 4 - 6oC, взаимодействие дезоксигемоглобина с модифицированным глутаровым альдегидом ведут при тех же pH и температурах.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99106110/14A RU2162707C2 (ru) | 1999-03-24 | 1999-03-24 | Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99106110/14A RU2162707C2 (ru) | 1999-03-24 | 1999-03-24 | Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU99106110A RU99106110A (ru) | 2001-01-10 |
| RU2162707C2 true RU2162707C2 (ru) | 2001-02-10 |
Family
ID=20217667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99106110/14A RU2162707C2 (ru) | 1999-03-24 | 1999-03-24 | Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2162707C2 (ru) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008150196A1 (ru) * | 2007-06-05 | 2008-12-11 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostju 'gelenpol' | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода |
| WO2009116894A3 (ru) * | 2008-03-18 | 2009-12-23 | Общество С Огранниченной Ответственностью "Haучho- Производственная Компания "Meдбиoфapm" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
| RU2504387C2 (ru) * | 2012-04-12 | 2014-01-20 | Учреждение Российской академии наук Институт высокомолекулярных соединений РАН | Способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
| RU2526185C1 (ru) * | 2013-07-30 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НЦЭСМП" Минздрава России) | Способ повышения напряжения кислорода в крови пациентов с хронической сердечной недостаточностью |
| WO2023022625A1 (ru) * | 2021-08-19 | 2023-02-23 | Рахимджан Ахметджанович РОЗИЕВ | Применение гемоглобина полимеризованного для мобилизации крови из депо при кровопотерях |
| RU2811253C2 (ru) * | 2021-08-19 | 2024-01-11 | Публичное акционерное общество Завод экологической техники и экопитания "ДИОД" | Применение гемоглобина полимеризованного для мобилизации крови из депо при кровопотерях |
-
1999
- 1999-03-24 RU RU99106110/14A patent/RU2162707C2/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008150196A1 (ru) * | 2007-06-05 | 2008-12-11 | Obschestvo S Ogranichennoy Otvetstvennostju 'gelenpol' | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода |
| WO2009116894A3 (ru) * | 2008-03-18 | 2009-12-23 | Общество С Огранниченной Ответственностью "Haучho- Производственная Компания "Meдбиoфapm" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
| EA017871B1 (ru) * | 2008-03-18 | 2013-03-29 | Ооо "Научно-Исследовательская Компания "Медбиофарм" | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) |
| RU2504387C2 (ru) * | 2012-04-12 | 2014-01-20 | Учреждение Российской академии наук Институт высокомолекулярных соединений РАН | Способ получения полимерного модифицированного гемоглобина |
| RU2526185C1 (ru) * | 2013-07-30 | 2014-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НЦЭСМП" Минздрава России) | Способ повышения напряжения кислорода в крови пациентов с хронической сердечной недостаточностью |
| WO2023022625A1 (ru) * | 2021-08-19 | 2023-02-23 | Рахимджан Ахметджанович РОЗИЕВ | Применение гемоглобина полимеризованного для мобилизации крови из депо при кровопотерях |
| RU2811253C2 (ru) * | 2021-08-19 | 2024-01-11 | Публичное акционерное общество Завод экологической техники и экопитания "ДИОД" | Применение гемоглобина полимеризованного для мобилизации крови из депо при кровопотерях |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100964604B1 (ko) | 산소 친화도가 높은 개질된 헤모글로빈을 포함하는 산소 전달용 조성물 및 방법 | |
| US5439882A (en) | Blood substitute | |
| KR910009343B1 (ko) | 헤모글로빈 주성분의 혈액 대체제 | |
| TWI626057B (zh) | 血紅素組成物 | |
| US9498537B2 (en) | Method of enhancing efficacy of blood transfusions | |
| EP1863503B1 (en) | Composition for delivering carbon monoxide (co) and nitric ozide (no) co to tissue using heme proteins as carriers | |
| US20050164915A1 (en) | Compositions for oxygen transport comprising a high oxygen affinity modified hemoglobin | |
| JP6657070B2 (ja) | ポリアルキレンオキシド吉草酸ヘモグロビン接合体 | |
| RU2361608C1 (ru) | Кровезаменитель с функцией переноса кислорода, фармацевтическая композиция (варианты) | |
| JPH02115200A (ja) | ヘモグロビン系血液代用物質およびその調製方法 | |
| JP2012207048A (ja) | 酸素運搬成分を使用して血流力学的安定性を増強する方法 | |
| RU2162707C2 (ru) | Кровезаменитель - переносчик кислорода, состав для его получения и способ получения полимерного модифицированного гемоглобина | |
| WO2001095930A1 (en) | Method of photoreduction of hemoglobin vesicles | |
| CA2072081C (en) | Polyhemoglobin stabilized by purine derivatives and glutathione | |
| EP4358997A1 (en) | Hemoglobin-based oxygen carriers and methods of making and using thereof | |
| WO1999018979A1 (en) | Storage-stable hemoglobin composition | |
| Shum et al. | The physiological and histopathological response of dogs to exchange transfusion with polyethylene glycol-modified bovine hemoglobin (PEG-Hb) | |
| CA2103680C (en) | Improved blood substitute | |
| Olsen et al. | Crosslinked and Polymerized Hemoglobins as Potential Blood Substitutes | |
| Beauchesne | The Design of Blood Substitutes: Oxygen Carriers |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 20040517 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20070130 |
|
| QB4A | Licence on use of patent |
Effective date: 20100802 |
|
| QC41 | Official registration of the termination of the licence agreement or other agreements on the disposal of an exclusive right |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20070130 Effective date: 20091124 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180325 |