RU2145975C1 - Способ культивирования helicobacter pylori - Google Patents
Способ культивирования helicobacter pylori Download PDFInfo
- Publication number
- RU2145975C1 RU2145975C1 RU99115430A RU99115430A RU2145975C1 RU 2145975 C1 RU2145975 C1 RU 2145975C1 RU 99115430 A RU99115430 A RU 99115430A RU 99115430 A RU99115430 A RU 99115430A RU 2145975 C1 RU2145975 C1 RU 2145975C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- medium
- agar
- blood
- hemolyzed
- helicobacter pilori
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины. Способ культивирования Helicobacter pylori (HP) характеризуется тем, что культивирование идет на основе среды Колумбиа агар с добавлением 2,5% донорской крови и приготовлением шоколадного агара, затем к охлажденной до 50°С среде добавляется 2,5% гемолизированной донорской крови. В результате приготовления шоколадного агара из эритроцитов экстрагируются гемин, НАД, а добавление гемолизированной крови дополнительно обогащает питательную среду необходимыми факторами роста для НР. В результате посева биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки на модифицированной питательной среде выделялись колонии HP уже на 2-е сутки культивирования, максимальный рост на 3-е сутки в микроаэрофильных условиях при температуре 37°С. Разработанный способ предлагается использовать в бактериологическом методе выделения чистой культуры HP из биоптатов слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Способ обеспечивает более быстрое культивирование на более дешевой среде.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии.
В настоящее время в связи с открытием В. Marshall Helicobacter pylori (HP) как основной причины хронического гастрита актуальной стала проблема выделения чистой культуры галикобактера, его идентификации и изучения чувствительности к антибактериальным средствам.
В настоящее время в микробиологии для культивирования HP предлагается использовать селективные среды (Вилкинс-Челдрен агар с 10% овечей крови, Колумбиа агар с 10% лошадиной крови, Среда пилори с лошадиной сывороткой и экстрактом дрожжей), в которых используется селективный набор антибиотиков, подавляющих рост сопутствующей микрофлоры и неселективные среды (шоколадный агар, Колумбиа агар, агаризованный сердечно-мозговой бульон, хеликобактер агар) с добавлением различных факторов роста и не содержащих ингибиторов роста для других бактерий.
В качестве аналога авторы предлагают хеликобактер агар для выделения чистой культуры HP из биоптатов слизистой оболочки (CO) желудка и двенадцатиперстной кишки.
Питательную основу этой среды составляет Колумбиа агар с добавлением:
бараньи эритроциты - 10%
раствор гемина - 1%
раствор никотин-амидодинуклеотида (НАД) - 1%
раствор викасола - 0,1%
Однако хеликобактер агар обладает определенным недостатком, так как ее компоненты дорогостоящие, дефицитные, а такие как гемин сняты с производства не только в России, но и за рубежом, к тому же сроки культивирования составляют от 3 до 5 суток.
бараньи эритроциты - 10%
раствор гемина - 1%
раствор никотин-амидодинуклеотида (НАД) - 1%
раствор викасола - 0,1%
Однако хеликобактер агар обладает определенным недостатком, так как ее компоненты дорогостоящие, дефицитные, а такие как гемин сняты с производства не только в России, но и за рубежом, к тому же сроки культивирования составляют от 3 до 5 суток.
Прототипом авторы предлагают неселективную среду шоколадный агар, который применяется для выделения кокковой флоры.
К расплавленному горячему 2% питательному агару с 0,5% глюкозы pH 7,4 прибавляют очень небольшими порциями при постоянном покачивании колбы с агаром 8% дефибринорованной крови (можно пользоваться кровью любого животного). Агар слегка подогревают на слабом огне, не доводя до кипения. Перед разливкой в чашки агару для подавления роста посторонней микрофлоры прибавляют водный раствор генцианового фиолетового в концентрации 1:50000. Шоколадный агар без добавления красителя используется для культивирования гемофильных бактерий. При приготовлении шоколадного агара следует обратить особое внимание на правильный прогрев его: при слишком слабом прогреве агар будет иметь кирпично-красный цвет, при слишком сильном - темно-коричневый. Шоколадный агар должен иметь светло-коричневую окраску.
Недостатками прототипа на взгляд авторов является то, что в качестве питательной основы для приготовления шоколадного агара используется обычный питательный агар, на котором HP не культивируется.
Авторы предлагают следующий состав питательной среды для культивирования HP. В качестве питательной основы используется Колумбиа агар, коммерческая стоимость которого не выше, чем отечественных питательных сред. Состав Колумбиа агар (Becton Diekinson) на 1 л деминерализованной воды следующий:
Панкреатический гидролизат казеина - 12,0 г
Пептический гидролизат животных тканей - 5,0
Дрожжевой экстракт - 3,0
Бычий экстракт - 3,0
Крахмал - 1,0
Хлористый натрий - 5,0
Агар - 13,5
pH среды 7,3 ± 0,2. На 1 л воды берется 42,5 г порошка этой среды.
Панкреатический гидролизат казеина - 12,0 г
Пептический гидролизат животных тканей - 5,0
Дрожжевой экстракт - 3,0
Бычий экстракт - 3,0
Крахмал - 1,0
Хлористый натрий - 5,0
Агар - 13,5
pH среды 7,3 ± 0,2. На 1 л воды берется 42,5 г порошка этой среды.
К питательной основе Колумбиа агар авторы предлагают добавлять 2,5% донорской человеческой крови и готовить шоколадный агар, после чего охладить до температуры примерно 50oC и добавить 2,5% гемолизированной донорской крови (группа крови значения не имеет). Среда перемешивается и разливается по чашкам Петри.
Во время приготовления шоколадного агара из эритроцитов экстрагируется гемин, НАД и другие факторы роста, необходимые для культивирования не только гемофильных бактерий, но и для НР.
Таким образом, приготовленная питательная среда содержит все необходимые ростовые факторы для культивирования HP. Модификация среды, выраженная в приготовлении шоколадного агара Колумбиа и в добавлении гемолизированной донорской крови, упрощает и удешевляет технологию ее приготовления.
Модифицированная питательная среда использовалась для выделения HP из биоптатов CO желудка и двенадцатиперстной кишки больных хроническим гастритом и язвенной болезнью. Посев биоптата на поверхность питательной среды производился ватным тампоном по методике F.Megraud. Культивирование производилось в течение 2-3 суток в микроаэрофильных условиях с использованием анаэростата Gas Pak (BBL) и газовых пакетов Campy Pak (BBL) при температуре 37oC.
В результате культивирования на модифицированной питательной среде минимально в течение 2-х суток появлялись мелкие колонии размером менее 0,5 мм, гладкие, блестящие, выпуклые, прозрачные. На третьи сутки рост был максимальным, колонии имели размер 1 мм. Колонии легко пересеваются на новые питательные среды. Идентификация Helicobacter pylori производилась с помощью французской идентификационной системы API Campy (bio Merieux).
Преимущество модифицированной питательной среды заключается в удешевлении технологии приготовления и в укорочении времени культивирования с 3-5 суток до 2-х суток (минимально).
Claims (1)
- Способ культивирования Helicobacter pylori, включающий изготовление шоколадного агара, отличающийся тем, что его изготовляют на основе Колумбиа агар с добавлением 2,5% гемолизированной донорской крови без учета ее группы, с максимальным ростом Helicobacter pylori на третьи сутки.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU99115430A RU2145975C1 (ru) | 1999-07-19 | 1999-07-19 | Способ культивирования helicobacter pylori |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU99115430A RU2145975C1 (ru) | 1999-07-19 | 1999-07-19 | Способ культивирования helicobacter pylori |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2145975C1 true RU2145975C1 (ru) | 2000-02-27 |
Family
ID=20222730
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU99115430A RU2145975C1 (ru) | 1999-07-19 | 1999-07-19 | Способ культивирования helicobacter pylori |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2145975C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2518304C2 (ru) * | 2012-06-20 | 2014-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ |
CN106978363A (zh) * | 2016-06-21 | 2017-07-25 | 山东鑫科生物科技股份有限公司 | 一种巧克力琼脂培养基及其制备方法 |
-
1999
- 1999-07-19 RU RU99115430A patent/RU2145975C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. - М.: Медгиз, 1982, с.75 - 76. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2518304C2 (ru) * | 2012-06-20 | 2014-06-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ |
CN106978363A (zh) * | 2016-06-21 | 2017-07-25 | 山东鑫科生物科技股份有限公司 | 一种巧克力琼脂培养基及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Onodera et al. | Growth factors of bacterial origin for the culture of the rumen oligotrich protozoon, Entodinium caudatum | |
TW200300449A (en) | Organism-culture apparatus and organism-culture method | |
WO2012081851A9 (ko) | 신균주 표고버섯 gna01 | |
Sternberg | A manual of bacteriology | |
Dukes et al. | Identification of Haemophilus vaginalis | |
JPS63501924A (ja) | 新規微生物 | |
RU2145975C1 (ru) | Способ культивирования helicobacter pylori | |
CN117568235A (zh) | 一种产亚硝酸盐氧化还原酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN100540659C (zh) | 一种培养小鼠胚胎干细胞的方法及其专用培养基 | |
CN117187133A (zh) | 一种用于幽门螺杆菌分离培养的培养基 | |
RU2518304C2 (ru) | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | |
Nakamura | Nutrition and physiology of Endamoeba histolytica | |
Ramadhan et al. | Isolation and selection of proteolytic lactic acid bacteria from colostrum of dairy cattle | |
Hiscox | 141. A Pigment-producing Organism (Pseudomonas sp.) Isolated From Discoloured Butter | |
Lochhead | Growth factor requirements of Bacillus larvae, White | |
KR20020050048A (ko) | Lactobacillus sp.DW-1 동정 시스템 | |
US2792331A (en) | Culture medium for bacteria | |
CN109706214A (zh) | 一种耐喹诺酮类抗生素沙门氏菌菌株的识别及分离方法 | |
CN101798591B (zh) | 一种牛乳嗜冷菌假单胞菌的pcr快速检测方法 | |
RU2233885C2 (ru) | Питательная среда для выделения шигелл и сальмонелл | |
RU2087532C1 (ru) | Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий | |
IE59968B1 (en) | Improvements in or relating to acidifying green fodder | |
RU2193061C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза (мбт-бульон) | |
Elberg et al. | The Nutritional Requirements of Clostridium parabotulinum, A | |
RU2351655C1 (ru) | Способ определения антагонистической активности пробиотиков на основе лиофилизированной биомассы аэробных бактерий по отношению к патогенным микобактериям |