RU2143921C1 - Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing - Google Patents
Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2143921C1 RU2143921C1 RU99108555/13A RU99108555A RU2143921C1 RU 2143921 C1 RU2143921 C1 RU 2143921C1 RU 99108555/13 A RU99108555/13 A RU 99108555/13A RU 99108555 A RU99108555 A RU 99108555A RU 2143921 C1 RU2143921 C1 RU 2143921C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- vaccine
- foot
- strain
- armenia
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретения относятся к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и могут быть использованы при изготовлении вакцины против ящура типа А. The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology and can be used in the manufacture of a vaccine against foot and mouth disease type A.
Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в Российской Федерации реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса вируса ящура на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика. В настоящее время в Российской Федерации и странах СНГ для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота против ящура применяют, как правило, инактивированные сорбированные, а для иммунизации свиней - инактивированные эмульсионные вакцины (1). Foot and mouth disease is an acute contagious viral disease of artiodactyl animals. It is characterized by a tendency to widespread and epizootic course. The disease is accompanied by large losses of milk, meat and other types of livestock products, complicates commercial operations and economic activity. To ensure sustainable well-being of the country by foot and mouth disease in the Russian Federation, a system of measures is being implemented, the priority of which is the prevention of the introduction of foot-and-mouth disease virus into the territory, and vaccination prevention in areas of high risk. Currently in the Russian Federation and the CIS countries for the immunization of cattle and small cattle against foot and mouth disease, inactivated adsorbed vaccines are used, as a rule, and inactivated emulsion vaccines are used for immunization of pigs (1).
Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще - в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины. Кроме того, производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки и концентрирования от тканевых компонентов, а также сохранения компонентов вируса при инактивации и длительном его хранении (2). The manufacturing technology of FMD vaccine from an inactivated virus begins with the selection of production strains based on an epizootological analysis of the dynamics of foot and mouth disease in the country and neighboring countries. When creating drugs for specific prophylaxis, appropriate types of foot-and-mouth disease virus are used and strains with a wide antigenic spectrum within a type with pronounced cross-immunogenicity are selected. A strain with a wide range of immunogenicity and satisfying the requirements of the region is selected by testing it in a cross-protection reaction or more often in a cross-neutralization reaction. As a rule, a virus population is used as a production strain, which, together with the system and conditions of industrial cultivation, ensures a guaranteed and high accumulation of 146S and 75S virus components and the production of an immunogenic vaccine. In addition, the production strain is subject to the stability requirements of the virus during cleaning and concentration of tissue components, as well as the preservation of virus components during inactivation and long-term storage (2).
Хорошо известной особенностью возбудителя ящура является антигенная изменчивость штаммов в пределах одного серотипа, происходящая в различные временные промежутки, на разных территориях, зависящая от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других факторов. Считается, что основной причиной антигенной изменчивости является изменение аминокислотной последовательности в полипептидах вирусных белков, составляющих капсид вириона. Практически такие антигенные изменения могут выражаться от незначительных отличий между штаммами, улавливаемых только с помощью тонких методов молекулярного анализа, до появления совершенно отличающихся штаммов, требующих использования новых средств специфической профилактики болезни, вызываемой этими штаммами. A well-known feature of the causative agent of foot and mouth disease is the antigenic variability of strains within the same serotype, occurring at different time intervals, in different territories, depending on the species composition of the susceptible population, its immune status and many other factors. It is believed that the main cause of antigenic variation is a change in the amino acid sequence in the polypeptides of the viral proteins that make up the virion capsid. In practice, such antigenic changes can be expressed from insignificant differences between the strains, captured only using subtle molecular analysis methods, to the appearance of completely different strains requiring the use of new means of specific prophylaxis of the disease caused by these strains.
Известны штаммы вируса ящура типа A, выделенные на территории СССР в течение последних 35 лет. К ним относятся: штамм A7 N 103, выделенный в 1962 г. в Куйбышевской области; штамм Aт N 2, выделенный в 1965 г. в Таджикской СССР; штамм A N 717/13, выделенный в 1973 г. в Ставропольском крае. Указанные штаммы использовались в качестве производственных при изготовлении противоящурных инактивированных вакцин, применявшихся в различных регионах страны. Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в музее штаммов ВНИИ защиты животных (1-5).Type A foot and mouth disease virus strains isolated in the USSR over the past 35 years are known. These include: strain A 7 N 103, isolated in 1962 in the Kuibyshev region; strain A t N 2, isolated in 1965 in the Tajik USSR; strain AN 717/13, isolated in 1973 in the Stavropol Territory. These strains were used as production strains in the manufacture of FMD inactivated vaccines used in various regions of the country. However, after the elimination of foot-and-mouth disease caused by antigenically similar strains of the virus, they were discontinued and are currently only supported in the Museum of Strains of the All-Russian Research Institute of Animal Protection (1-5).
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина против ящура типа A, содержащая авирулентный и очищенный антигенный материал из иммуногенных компонентов вируса ящура типа A штамма A22 N 550, репродуцированного в чувствительной системе культивирования, адъювант и поддерживающую среду.The closest to the invention according to the set of essential features is a type A vaccine against foot and mouth disease containing avirulent and purified antigenic material from the immunogenic components of foot and mouth disease virus type A strain A 22 N 550, reproduced in a sensitive cultivation system, adjuvant and support medium.
Штамм A22 N 550 выделен в 1964 году в Азербайджане и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ.Strain A 22 N 550 was isolated in 1964 in Azerbaijan and is used in the Russian Federation as an industrial strain in the manufacture of specific prophylactic and diagnostic agents used throughout Russia and the CIS countries.
Штамм N 550 вируса ящура A22 имеет следующие характеристики, представленные в таблице 1 (табл. 1-9 см. в конце описания).Strain N 550 of the disease of foot and mouth disease A 22 has the following characteristics, are presented in table 1 (tab. 1-9, see the end of the description).
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют хлороформ в 2% концентрации и последующее центрифугирование. To clean the virus-containing suspension from ballast impurities, chloroform in 2% concentration and subsequent centrifugation are used.
В качестве инактиванта используют формальдегид, аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ) или бинарный этиленимин (БЭИ). В качестве адъюванта - гидроокись алюминия (ГОА) с сапонином или масляный адъювант (6). As an inactant, formaldehyde, aminoethylethyleneimine (AEEI) or binary ethyleneimine (BEI) are used. As an adjuvant, aluminum hydroxide (GOA) with saponin or an oil adjuvant (6).
Недостаток вакцины-прототипа состоит в том, что она не обеспечивает удовлетворительной защиты против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция). The disadvantage of the prototype vaccine is that it does not provide satisfactory protection against FMD virus type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Известны способы изготовления противоящурной ГОА-формолвакцины из афтозного, культурального и лапинизированного вируса типа A (2, 5). Known methods for the manufacture of FMD-GOA-formol vaccine from aphthous, cultured and lapinized type A virus (2, 5).
Известен способ изготовления противоящурной вакцины из афтозного вируса типа A КРС, включающий приготовление вируссодержащей суспензии, очистку, концентрирование, инактивацию и сорбцию вируса на ГОА (7). A known method of manufacturing a FMD vaccine from aphthous virus type A cattle, including the preparation of a virus-containing suspension, purification, concentration, inactivation and sorption of the virus on GOA (7).
Известен способ изготовления противоящурной вакцины из лапинизированного вируса типа A, включающий заражение новорожденных крольчат и репродукцию в них вируса, приготовление вируссодержащей суспензии, сорбцию вируса на ГОА, инактивацию вируса формалином и теплом, добавление сапонина (8). A known method of manufacturing a FMD vaccine from lapinized virus of type A, including infection of newborn rabbits and reproduction of the virus in them, preparation of a virus-containing suspension, sorption of the virus on GOA, inactivation of the virus with formalin and heat, the addition of saponin (8).
Известен способ изготовления противоящурной вакцины из лапинизированного вируса типа A, включающий заражение новорожденных крольчат, репродукцию в них вируса, получение вируссодержащей суспензии, ее очистку, сорбцию вируса на ГОА и инактивацию вируса формалином (9). A known method of manufacturing a FMD vaccine from lapinized virus of type A, including infection of newborn rabbits, reproduction of the virus in them, obtaining a virus-containing suspension, its purification, sorption of the virus on GOA and inactivation of the virus with formalin (9).
Известен способ приготовления вакцины против ящура типа A, включающий культивирование вируса ящура на переживающей ткани эпителия языка крупного рогатого скота со сменой питательной среды при непрерывной аэрации и перемешивании (10). A known method of preparing a vaccine against foot and mouth disease type A, including the cultivation of foot and mouth disease virus on surviving tissue of the epithelium of the cattle tongue with a change in the nutrient medium with continuous aeration and stirring (10).
Известен способ изготовления противоящурной вакцины из лапинизированного вируса типа A, включающий культивирование вируса, его очистку, инактивацию и последующее эмульгирование полученного антигена с масляным адъювантом (11). A known method of manufacturing a FMD vaccine from a lapinized virus of type A, including cultivating the virus, purifying it, inactivating and subsequent emulsification of the resulting antigen with an oil adjuvant (11).
Известен способ получения противоящурной ГОА-формолвакцины из лапинизированного вируса типа A, включающий заражение новорожденных крольчат и репродукцию в них вируса, приготовление вируссодержащей суспензии на солевом изотоническом растворе Хенкса, Эрла, Тироде или Дульбекко с добавлением 0,5% гидролизата лактальбумина или казеина, очистку вируссодержащей суспензии 5-10% хлороформа, сорбцию вируса на ГОА, инактивацию вируса формальдегида и последующее добавление сапонина (12). A known method for producing FMD-GOA-formol vaccine from lapinized type A virus, including infection of newborn rabbits and reproduction of the virus in them, preparation of a virus-containing suspension in Hanks, Earl, Tyrode or Dulbecco saline with the addition of 0.5% lactalbacus clear hydrolyzate or cas suspensions of 5-10% chloroform, sorption of the virus on GOA, inactivation of formaldehyde virus, and the subsequent addition of saponin (12).
Известен способ изготовления противоящурной вакцины из культурального вируса типа A, включающий заражение перевиваемой линии клеток свиных почек IB-RS-2 клон 3 и репродукцию в ней вируса, очистку вируссодержащей суспензии центрифугированием или хлороформом или 3-хлорэтиленом, инактивацию вируса формалином и последующее эмульгирование полученного антигена с масляным адъювантом (13). A known method of manufacturing a FMD vaccine from a culture virus of type A, including infection of the transplanted pig cell line of IB-RS-2
Основным недостатком известных способов изготовления противоящурных вакцин из вируса типа A является то, что полученные в соответствии с ними вакцины обладают низкой иммуногенной активностью и не обеспечивают удовлетворительной защиты против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция). The main disadvantage of the known methods for the manufacture of FMD vaccines from type A virus is that the vaccines obtained in accordance with them have low immunogenic activity and do not provide satisfactory protection against FMD virus type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является способ изготовления вакцины против вируса ящура типа A, включающий репродукцию вирусного антигена в чувствительной системе культивирования, очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей, инактивацию вируса, концентрирование полученного антигена и последующее соединение концентрата антигена с адъювантом (6). The closest to the invention according to the set of essential features is a method of manufacturing a vaccine against FMD virus type A, comprising reproducing a virus antigen in a sensitive cultivation system, purifying the virus-containing suspension from ballast impurities, inactivating the virus, concentrating the resulting antigen and then combining the antigen concentrate with an adjuvant (6) .
Недостатком способа-прототипа является то, что полученная в соответствии с ним вакцина обладает также низкой иммуногенной активностью и не обеспечивает удовлетворительной защиты против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция). The disadvantage of the prototype method is that the vaccine obtained in accordance with it also has low immunogenic activity and does not provide satisfactory protection against FMD virus type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Об этом свидетельствует тот факт, что в 1998 году в республике Армения были отмечены очаги заболевания ящуром типа A крупного рогатого скота, иммунизированного бивалентной вакциной АО, в состав которой входит антиген из производственного штамма A22 N 550. Однако вакцина не обеспечила удовлетворительной защиты иммунизированных животных. Лабораторными исследованиями во ВНИИЗЖ афтозного материала, выделенного от больных животных, был установлен вирус ящура типа A, имеющий антигенные отличия от штамма A22 N 550 в реакции связывания комплемента и реакции серонейтрализации вируса. Это свидетельствует о несоответствии используемых средств специфической профилактики ящура типа A, используемых Россией и странами СНГ, эпизоотическому вирусу, циркулирующему в странах Закавказья и Ближнего Востока (Турция, Иран).This is evidenced by the fact that in 1998 in the Republic of Armenia foci of FMD type A were detected in cattle immunized with a bivalent AO vaccine, which includes the antigen from production strain A 22 N 550. However, the vaccine did not provide satisfactory protection for the immunized animals . Laboratory studies in ARRIAH of aphthous material isolated from sick animals revealed a type A foot and mouth disease virus with antigenic differences from strain A 22 N 550 in the complement binding reaction and the virus neutralization reaction. This indicates the inconsistency of the means used for specific prophylaxis of foot and mouth disease type A, used by Russia and the CIS countries, to the epizootic virus circulating in the countries of Transcaucasia and the Middle East (Turkey, Iran).
В задачу создания настоящих изобретений входила разработка высокоиммуногенной вакцины против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция) и способа ее изготовления. The task of creating the present inventions was to develop a highly immunogenic vaccine against FMD virus type A circulating in the countries of Transcaucasia and the Middle East (Iran, Turkey) and a method for its manufacture.
Технический результат от использования предлагаемых изобретений заключается в повышении иммуногенной активности вакцины против ящура типа A, обеспечивающей защиту против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция). The technical result from the use of the proposed invention is to increase the immunogenic activity of the vaccine against foot and mouth disease type A, which provides protection against the virus of foot and mouth disease type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Указанный технический результат достигнут созданием группы изобретений, образующих единый изобретательский замысел. В группу включены изобретения, одно из которых предназначено для получения другого. The specified technical result is achieved by creating a group of inventions that form a single inventive concept. The group includes inventions, one of which is intended to obtain the other.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура типа A, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1) вакцина против ящура типа A;
2) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов (146S + 75S) вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП";
3) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов (146S + 75S) вируса ящура типа A штамма N 11707 "Армения-98-ДЕП" взят в эффективном количестве;
4) АЭЭИ в качестве инактиванта;
5) полигексаметиленгуанидин (ПГМГ) в качестве средства для очистки суспензии от балластных примесей;
6) адсорбент гель ГОА в качестве адъюванта;
7) сапонин в качестве дополнительного адъюванта;
8) масляный адъювант в качестве адъюванта;
9) поддерживающая среда;
10) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", адъюванты гель ГОА и сапонин, поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥ 6,0
гель ГОА - 1132,0 - 2108,0
сапонин - 750,0
поддерживающая среда - остальное
11) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", масляный адъювант и поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥ 2,0
масляный адъювант - 500000 - 700000
поддерживающая среда - остальное.The specified technical result was achieved by creating a vaccine against foot and mouth disease type A, characterized by the following set of features:
1) vaccine against foot and mouth disease type A;
2) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic components (146S + 75S) of FMD virus of type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT";
3) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic components (146S + 75S) of FMD virus type A strain N 11707 "Armenia-98-DEPT" taken in an effective amount;
4) AEEI as an inactivant;
5) polyhexamethylene guanidine (PHMG) as a means for cleaning the suspension from ballast impurities;
6) GOA gel adsorbent as adjuvant;
7) saponin as an additional adjuvant;
8) an oil adjuvant as an adjuvant;
9) supportive environment;
10) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", adjuvants GOA gel and saponin, support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥ 6.0
GOA gel - 1132.0 - 2108.0
saponin - 750.0
supporting environment - the rest
11) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", oil adjuvant and support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥ 2.0
oil adjuvant - 500,000 - 700,000
supporting environment - the rest.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1) вакцина против ящура типа A;
2) авирулентный и очищенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП";
3) авирулентный и очищенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП" взят в эффективном количестве;
4) адъювант;
5) поддерживающая среда.The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1) vaccine against foot and mouth disease type A;
2) avirulent and purified material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT";
3) avirulent and purified material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" taken in an effective amount;
4) adjuvant;
5) supportive environment.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) из адъювантов вакцина содержит адсорбент гель ГОА;
2) из адъювантов вакцина содержит дополнительно сапонин;
3) из адъювантов вакцина содержит масляный адъювант;
4) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", адъюванты гель ГОА и сапонин, поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥ 6,0
гель ГОА - 1132,0 - 2108,0
сапонин - 750,0
поддерживающая среда - остальное
5) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", масляный адъювант и поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥ 2,0
масляный адъювант - 500000 - 700000
поддерживающая среда - остальное
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) вакцина против ящура типа A;
2) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура гомологичного штамма;
3) адъювант;
4) поддерживающая среда.The present invention is also characterized by other features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) of the adjuvants, the vaccine contains an adsorbent gel GOA;
2) of the adjuvants, the vaccine additionally contains saponin;
3) of the adjuvants, the vaccine contains an oil adjuvant;
4) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", adjuvants GOA gel and saponin, support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥ 6.0
GOA gel - 1132.0 - 2108.0
saponin - 750.0
supporting environment - the rest
5) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", oil adjuvant and support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥ 2.0
oil adjuvant - 500,000 - 700,000
supporting environment - the rest
The signs of the invention, characterizing the proposed vaccine and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1) vaccine against foot and mouth disease type A;
2) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of the FMD virus of a homologous strain;
3) adjuvant;
4) supportive environment.
По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком изобретения является то, что из штаммов вакцина содержит штамм N 1707 "Армения-98-ДЕП" вируса ящура типа A, взятого в эффективном количестве. Compared with the prototype vaccine, an essential distinguishing feature of the invention is that of the strains, the vaccine contains strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" of type A foot and mouth disease virus taken in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) из адъювантов вакцина содержит адсорбент гель ГОА;
2) из адъювантов вакцина содержит дополнительно сапонин;
3) из адъювантов вакцина содержит масляный адъювант;
4) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", адъюванты гель ГОА и сапонин, поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥ 6,0
гель ГОА - 1132,0 - 2108,0
сапонин - 750,0
поддерживающая среда - остальное
5) авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", масляный адъювант и поддерживающая среда взяты в соотношении, мкг/мл:
антигенный материал - ≥2,0
масляный адъювант - 500000 - 700000
поддерживающая среда - остальное
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает защиту против ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция).The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) of the adjuvants, the vaccine contains an adsorbent gel GOA;
2) of the adjuvants, the vaccine additionally contains saponin;
3) of the adjuvants, the vaccine contains an oil adjuvant;
4) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", adjuvants GOA gel and saponin, support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥ 6.0
GOA gel - 1132.0 - 2108.0
saponin - 750.0
supporting environment - the rest
5) avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", oil adjuvant and support medium are taken in the ratio, μg / ml:
antigenic material - ≥2.0
oil adjuvant - 500,000 - 700,000
supporting environment - the rest
The proposed vaccine has a high immunogenic activity and provides protection against foot and mouth disease type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Штамм A N 1707 "Армения-98-ДЕП" является новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A. Strain A N 1707 "Armenia-98-DEPT" is a new, previously unknown variant of the FMD virus type A.
Указанный технический результат достигнут также созданием способа изготовления вакцины против ящура типа A, охарактеризованного следующей совокупностью признаков:
1) способ изготовления вакцины против ящура типа A;
2) вирусный антиген репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21;
3) в качестве вирусного антигена используют вирус ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП";
4) вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-17 часов при 36-37oC;
5) для изготовления вакцины используют суспензию вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" с титром не менее 7,5 lg ТЦД50/мл и содержанием 146S + 75S компонентов не менее 0,5 мкг/мл;
6) сразу после окончания цикла репродукции вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" подвергают инактивации;
7) вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют АЭЭИ в концентрации 0,025-0,05%;
8) вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют АЭЭИ в течение 12-24 часов при 36-37,5oC и pH 7,2-7,6;
9) суспензию антигена очищают от балластных примесей и возможных контаминантов добавлением в нее флокулянта-антисептика ПГМГ в концентрации 0,005-0,007;
10) балластные примеси отделяют из суспензии антигена седиментацией с последующей декантацией;
11) для изготовления вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал в виде эффективного количества иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП";
12) для изготовления адсорбат-вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 6,0 мкг/мл;
13) для изготовления адсорбат-вакцины авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" концентрируют сорбцией на гель ГОА, который добавляют в суспензию антигена в концентрации 2-5%;
14) для изготовления адсорбат-вакцины к концентрату антигена добавляют дополнительно адъювант сапонин в концентрации по меньшей мере 0,075%;
15) для изготовления эмульсионной вакцины антиген концентрируют проточной ультрафильтрацией или полиэтиленгликолем;
16) для изготовления эмульсионной вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 2,0 мкг/мл;
17) для изготовления эмульсионной вакцины концентрат антигена соединяют с масляным адъювантом в соотношении 3:7-1:1.The specified technical result was also achieved by creating a method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease type A, characterized by the following set of features:
1) a method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease type A;
2) the viral antigen is reproduced in a suspension culture of BHK-21 cells;
3) FMD virus of type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" is used as a viral antigen;
4) foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is cultured in a suspension culture of BHK-21 cells for 10-17 hours at 36-37 o C;
5) for the manufacture of the vaccine, a suspension of foot and mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" with a titer of at least 7.5 lg TCD 50 / ml and a content of 146S + 75S components of at least 0.5 μg / ml is used;
6) immediately after the end of the reproduction cycle, the foot and mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is inactivated;
7) foot and mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" inactivate AEEI at a concentration of 0.025-0.05%;
8) foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEP" inactivate AEEI for 12-24 hours at 36-37.5 o C and pH 7.2-7.6;
9) the antigen suspension is cleaned of ballast impurities and possible contaminants by the addition of the PHMG antiseptic flocculant in it at a concentration of 0.005-0.007;
10) ballast impurities are separated from the antigen suspension by sedimentation followed by decantation;
11) for the manufacture of the vaccine using avirulent and purified antigenic material in the form of an effective amount of immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT";
12) for the manufacture of the adsorbate vaccine, avirulent and purified antigenic material is used with the content of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 6.0 μg / ml;
13) for the manufacture of the adsorbate vaccine, the avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEP" is concentrated by sorption on GOA gel, which is added to the antigen suspension at a concentration of 2-5% ;
14) for the manufacture of the adsorbate vaccine, an adjuvant saponin is added to the antigen concentrate at a concentration of at least 0.075%;
15) for the manufacture of an emulsion vaccine, the antigen is concentrated by flow ultrafiltration or polyethylene glycol;
16) for the manufacture of emulsion vaccines using avirulent and purified antigenic material containing immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 2.0 μg / ml;
17) for the manufacture of an emulsion vaccine, an antigen concentrate is combined with an oil adjuvant in a ratio of 3: 7-1: 1.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1) способ изготовления вакцины против ящура типа A;
2) вирусный антиген репродуцируют в чувствительной системе культивирования;
3) в качестве вирусного антигена используют вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" в эффективном количестве;
4) инактивация вируса;
5) очистка антигена от балластных примесей;
6) концентрирование антигена;
7) соединение концентрата антигена с адъювантом.The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1) a method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease type A;
2) the viral antigen is reproduced in a sensitive cultivation system;
3) an effective quantity of foot and mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is used as a viral antigen;
4) inactivation of the virus;
5) purification of antigen from ballast impurities;
6) concentration of antigen;
7) the connection of the antigen concentrate with adjuvant.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) в качестве чувствительной системы культивирования используют суспензионную культуру клеток ВНК-21;
2) вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-17 часов при 36-37oC;
3) сразу после окончания цикла репродукции вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" подвергают инактивации;
4) вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют АЭЭИ в концентрации 0,025-0,05%;
5) вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют в течение 12-24 часов при 36-37oC и pH 7,2-7,6;
6) суспензию антигена очищают от балластных примесей добавлением ПГМГ в концентрации 0,005-0,007%;
7) балластные примеси отделяют из суспензии антигена седиментацией с последующей декантацией;
8) для изготовления адсорбат-вакцины авирулентный и очищенный антигенный материал концентрируют сорбцией на гель ГОА, который добавляют в суспензию в концентрации 2-5%;
9) для изготовления адсорбат-вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 6,0 мкг/мл;
10) для изготовления адсорбат-вакцины к концентрату антигена добавляют дополнительно адъювант сапонин в концентрации по меньшей мере 0,075%;
11) для изготовления эмульсионной вакцины авирулентный и очищенный антигенный материал концентрируют проточной ультрафильтрацией или полиэтиленгликолем;
12) для изготовления эмульсионной вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 2,0 мкг/мл;
13) для изготовления эмульсионной вакцины концентрат антигена соединяют с масляным адъювантом в соотношении 3:7-1:1.The present invention is also characterized by other features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) as a sensitive cultivation system using a suspension cell culture of BHK-21;
2) foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is cultured in a suspension culture of BHK-21 cells for 10-17 hours at 36-37 o C;
3) immediately after the end of the reproduction cycle, the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is inactivated;
4) the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEP" inactivate AEEI at a concentration of 0.025-0.05%;
5) the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is inactivated for 12-24 hours at 36-37 o C and a pH of 7.2-7.6;
6) the antigen suspension is cleaned of ballast impurities by adding PHMG at a concentration of 0.005-0.007%;
7) ballast impurities are separated from the antigen suspension by sedimentation followed by decantation;
8) for the manufacture of the adsorbate vaccine, the avirulent and purified antigenic material is concentrated by sorption on GOA gel, which is added to the suspension at a concentration of 2-5%;
9) for the manufacture of the adsorbate vaccine, avirulent and purified antigenic material is used with the content of immunogenic (146S + 75S) components of foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 6.0 μg / ml;
10) for the manufacture of an adsorbate vaccine, an adjuvant saponin is added to the antigen concentrate at a concentration of at least 0.075%;
11) for the manufacture of an emulsion vaccine, the avirulent and purified antigenic material is concentrated by flow ultrafiltration or polyethylene glycol;
12) for the manufacture of emulsion vaccines using avirulent and purified antigenic material containing immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 2.0 μg / ml;
13) for the manufacture of an emulsion vaccine, an antigen concentrate is combined with an oil adjuvant in a ratio of 3: 7-1: 1.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемый способ и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1) способ изготовления вакцины против ящура типа A;
2) вирусный антиген репродуцируют в чувствительной системе культивирования;
3) очистка вируссодержащей суспензии от балластных примесей;
4) инактивация вируса;
5) концентрирование полученного антигена;
6) соединение концентрата антигена с адъювантом.The signs of the invention, characterizing the proposed method and coinciding with the signs of the prototype, including the generic concept, reflecting the purpose, are:
1) a method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease type A;
2) the viral antigen is reproduced in a sensitive cultivation system;
3) purification of virus-containing suspension from ballast impurities;
4) inactivation of the virus;
5) concentration of the resulting antigen;
6) the connection of the antigen concentrate with adjuvant.
По сравнению со способом-прототипом существенными отличительными признаками изобретения являются:
1) в качестве вирусного антигена используют штамм N 1707 "Армения-98-ДЕП" вируса ящура типа A;
2) вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" используют в эффективном количестве.Compared with the prototype method, the salient features of the invention are:
1) strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" of type A foot and mouth disease virus is used as a viral antigen;
2) the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is used in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы его выполнения или особые условия использования:
1) в качестве чувствительной системы культивирования используют суспензионную культуру клеток ВНК-21;
2) вирус ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" культивируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в течение 10-17 часов при 36-37oC;
3) сразу после окончания цикла репродукции вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" подвергают инактивации;
4) вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют АЭЭИ в концентрации 0,025-0,05%;
5) вирус штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" инактивируют в течение 12-24 часов при 36-37oC и pH 7,2-7,6;
6) суспензию антигена очищают от балластных примесей добавлением ПГМГ в концентрации 0,005-0,007%;
7) балластные примеси отделяют из суспензии антигена седиментацией с последующей декантацией;
8) для изготовления адсорбат-вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 6,0 мкг/мл;
9) для изготовления адсорбат-вакцины авирулентный и очищенный антигенный материал концентрируют сорбцией на гель ГОА, который добавляют в суспензию в концентрации 2-5%;
10) для изготовления адсорбат-вакцины к концентрату антигена добавляют дополнительно адъювант сапонин в концентрации по меньшей мере 0,075%;
11) для изготовления эмульсионной вакцины авирулентный и очищенный антигенный материал концентрируют проточной ультрафильтрацией или полиэтиленгликолем;
12) для изготовления эмульсионной вакцины используют авирулентный и очищенный антигенный материал с содержанием иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98-ДЕП" по меньшей мере 2,0 мкг/мл;
13) для изготовления эмульсионной вакцины концентрат антигена соединяют с масляным адъювантом в соотношении 3:7-1:1.The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of its implementation or special conditions of use:
1) as a sensitive cultivation system using a suspension cell culture of BHK-21;
2) foot-and-mouth disease virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is cultured in a suspension culture of BHK-21 cells for 10-17 hours at 36-37 o C;
3) immediately after the end of the reproduction cycle, the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is inactivated;
4) the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEP" inactivate AEEI at a concentration of 0.025-0.05%;
5) the virus of strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" is inactivated for 12-24 hours at 36-37 o C and a pH of 7.2-7.6;
6) the antigen suspension is cleaned of ballast impurities by adding PHMG at a concentration of 0.005-0.007%;
7) ballast impurities are separated from the antigen suspension by sedimentation followed by decantation;
8) for the manufacture of the adsorbate vaccine using avirulent and purified antigenic material with the content of immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 6.0 μg / ml;
9) for the manufacture of the adsorbate vaccine, the avirulent and purified antigenic material is concentrated by sorption on GOA gel, which is added to the suspension at a concentration of 2-5%;
10) for the manufacture of an adsorbate vaccine, an adjuvant saponin is added to the antigen concentrate at a concentration of at least 0.075%;
11) for the manufacture of an emulsion vaccine, the avirulent and purified antigenic material is concentrated by flow ultrafiltration or polyethylene glycol;
12) for the manufacture of emulsion vaccines using avirulent and purified antigenic material containing immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus strain AN 1707 "Armenia-98-DEPT" of at least 2.0 μg / ml;
13) for the manufacture of an emulsion vaccine, an antigen concentrate is combined with an oil adjuvant in a ratio of 3: 7-1: 1.
Вакцина, полученная предлагаемым способом, обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает защиту животных против вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция). The vaccine obtained by the proposed method has high immunogenic activity and provides protection of animals against FMD virus type A circulating in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Достижение технического результата от использования предлагаемого способа объясняется тем, что при изготовлении вакцины используют новый штамм N 1707 "Армения-98-ДЕП" вируса ящура типа A. The achievement of the technical result from the use of the proposed method is due to the fact that in the manufacture of the vaccine using a new strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" of FMD virus type A.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого способа достигается за счет того, что инактивацию вируса АЭЭИ осуществляют сразу по окончании цикла его репродукции, что позволяет значительно снизить трудо- и энергозатраты на изготовление вакцины без снижения качества инактивации вируса. An additional technical result from the use of the proposed method is achieved due to the fact that inactivation of the AEEI virus is carried out immediately after the end of its reproduction cycle, which can significantly reduce the labor and energy costs of producing a vaccine without reducing the quality of the virus inactivation.
Дополнительный технический результат от использования предлагаемого способа достигается также за счет использования флокулянта-антисептика ПГМГ для очистки суспензии антигена от балластных примесей и одновременной инактивации возможных контаминантов (14). An additional technical result from the use of the proposed method is also achieved through the use of PHMG antiseptic flocculant for purification of antigen suspension from ballast impurities and simultaneous inactivation of possible contaminants (14).
Исходный вирус для получения штамма N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A выделен от больных коров в хозяйстве Охчик Амассийского района Республики Армения. Производственный штамм A N 1707 "Армения-98" получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм A N 1707 по данным РСК, РН и результатам секвенирования участков генома значительно отличается от производственного штамма А22N 550 (R составило 8-45% соответственно, а степень нуклеотидных раличий - 18%), а также от других штаммов вируса ящура типа A, имеющихся в коллекции ВНИИЗЖ. Полученный штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации (ВГНКИ) 12.11.98 под регистрационным номером 1707 "Армения-98-ДЕП". Штамм A N 1707 "Армения-98" обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивает получение противоящурной инактивированной вакцины, создающей защиту восприимчивых животных против вируса ящура типа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья и Ближнего Востока (Иран, Турция).The original virus for obtaining strain N 1707 "Armenia-98" of type A foot and mouth disease virus was isolated from sick cows on the farm of Ohchik, Amassi region of the Republic of Armenia. The production strain AN 1707 "Armenia-98" was obtained by repeated consecutive passages on sensitive hetero- and homologous cell cultures. Strain AN 1707 according to CSC, PH and the results of sequencing of genome sections is significantly different from the production strain A 22 N 550 (R was 8-45%, respectively, and the degree of nucleotide raliches - 18%), as well as from other strains of FMD virus type A, available in the collection ARRIAH. The resulting strain was deposited in the Microorganism Collection of the All-Russian Scientific Research Institute for Control, Standardization and Certification of Veterinary Medicines of the Ministry of Agriculture and Food of the Russian Federation (VGNKI) 12.11.98 under registration number 1707 "Armenia-98-DEP". The strain AN 1707 "Armenia-98" has a high biological, antigenic and immunogenic activity in the native state and after inactivation and provides a FMD inactivated vaccine that protects susceptible animals against FMD virus type A, causing outbreaks in recent years in the countries of the Caucasus and the Middle East (Iran, Turkey).
Сущность изобретения пояснена на графических материалах, где на:
фиг. 1 представлена аминокислотная последовательность белка VP1 штамма N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A (* - аминокислота не определена);
фиг. 2 изображена дендрограмма, отражающая структурное сходство участка гена VP1 штамма N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A с аналогичными фрагментами геномов других штаммов вируса ящура типа A.The invention is illustrated in the graphic materials, where:
FIG. 1 shows the amino acid sequence of VP1 protein of strain N 1707 "Armenia-98" of type A foot and mouth disease virus ( * - amino acid not determined);
FIG. 2 shows a dendrogram reflecting the structural similarity of the VP1 gene region of strain N 1707 "Armenia-98" of type A FMD virus with similar fragments of genomes of other types of FMD virus A.
Штамм N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A характеризуется следующими признаками и свойствами. Strain N 1707 "Armenia-98" of the FMD virus type A is characterized by the following features and properties.
Морфологические свойства
Штамм A N 1707 "Армения-98" относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.Morphological properties
Strain AN 1707 "Armenia-98" belongs to the family Picornaviridae, genus Aphtovirus, serotype A and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of foot and mouth disease: the form of the virion is icosahedral, size 23-25 nm. Virion consists of an RNA molecule enclosed in a protein coat. The protein shell consists of 32 capsomeres arranged in cubic symmetry.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм A N 1707 "Армения-98" относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. У переболевших животных в сыворотках крови образуются антитела, выявляемые в РДП, ИФА, РН. При вакцинации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП, РН. При гипериммунизации морских свинок концентрированным инактивированным вирусом индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:256 и в ИФА в разведении 1:6000.Antigenic properties
According to its antigenic properties, strain AN 1707 "Armenia-98" belongs to serotype A. The virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus does not exhibit hemagglutinating activity. In sick animals, antibodies are formed in the blood serum that are detected in RDP, ELISA, and pH. When vaccinating cattle with a vaccine from an inactivated virus, it induces the formation of specific antibodies detected in ELISA, RDP, and pH. During hyperimmunization of guinea pigs with a concentrated inactivated virus, it induces the formation of virus-specific antibodies detected in CSC at a dilution of 1: 256 and in ELISA at a dilution of 1: 6000.
При определении антигенного соответствия штамма A N 1707 "Армения-98" с производственными штаммами и полевыми изолятами вируса ящура типа A, выделенными на протяжении 1962-1998 гг. на территории стран СНГ и ряда других государств мира, было проведено сравнительное исследование первичной структуры гена и белка VP1. Сравнительный анализ установленных структур штамма A N 1707 "Армения-98" и эпизоотических изолятов, выделенных в последние годы в Турции и Иране (A-Иран-96, A-Турция-97, A-Турция-98), показал, что оба изолята A-Армения-98 идентичны между собой и отличаются от изолятов A-Турция-97, A-Турция-98 и A-Иран-96 по трем, четырем и семи нуклеотидным основаниям соответственно. Замена в 156 кодоне является значимой и приводит к изменению треонина на аланин (фиг. 1). When determining the antigenic compliance of strain A N 1707 "Armenia-98" with production strains and field isolates of FMD virus type A, isolated during 1962-1998. in the territory of the CIS countries and several other countries of the world, a comparative study of the primary structure of the VP1 gene and protein was carried out. A comparative analysis of the established structures of the strain AN 1707 "Armenia-98" and epizootic isolates isolated in recent years in Turkey and Iran (A-Iran-96, A-Turkey-97, A-Turkey-98) showed that both isolates A -Armenia-98 are identical to each other and differ from isolates A-Turkey-97, A-Turkey-98 and A-Iran-96 in three, four and seven nucleotide bases, respectively. The substitution in the 156 codon is significant and leads to a change in threonine to alanine (Fig. 1).
Филогенетические взаимоотношения исследованных изолятов с ранее изученными штаммами, выделенными в разных странах мира за три последние десятилетия, указаны на дендрограмме (фиг. 2). Установлено, что исследованные изоляты существенно отличаются от всех выделенных ранее изолятов, в том числе и от вируса подтипа A22, куда относится используемый в настоящее время для изготовления средств диагностики и специфической профилактики производственный штамм A22 N 550. Антигенное родство вируса ящура A N 1707 "Армения-98" с соответствующими производственными и ранее выделенными штаммами на территории Турции и Ирана изучено в РСК. Полученные результаты представлены в таблице 2.Phylogenetic relationships of the studied isolates with previously studied strains isolated in different countries of the world over the past three decades are indicated on the dendrogram (Fig. 2). It was established that the studied isolates significantly differ from all previously isolated isolates, including the A 22 subtype virus, which includes the production strain A 22 N 550 currently used for the manufacture of diagnostics and specific prophylaxis. Antigenic kinship of foot and mouth disease virus AN 1707 " Armenia-98 "with the corresponding production and previously isolated strains on the territory of Turkey and Iran was studied in the RSK. The results are presented in table 2.
Как свидетельствуют данные, представленные в таблице 2, вирус A N 1707 "Армения-98" отличается как от производственных, так и от ранее выделенных эпизоотических штаммов. As shown by the data presented in table 2, the virus A N 1707 "Armenia-98" differs from both production and previously isolated epizootic strains.
Аналогичное изучение антигенного родства выделенного штамма было проведено в РН, где в качестве иммунных использовались сыворотки реконвалесцентов КРС на вирусы штаммов A N 1707 "Армения-98", A-Иран-87 и A22 N 550. Результаты этих исследований представлены в таблице 3.A similar study of the antigenic affinity of the isolated strain was carried out in PH, where cattle of convalescents of cattle for viruses of strains AN 1707 "Armenia-98", A-Iran-87 and A 22 N 550 were used as immune. The results of these studies are presented in table 3.
Приведенные в таблице 3 данные подтверждают антигенное отличие выделенного штамма от производственного штамма A22 N 550 и эпизоотического штамма, выделенного в Иране в 1987 году.The data in table 3 confirm the antigenic difference of the isolated strain from the production strain A 22 N 550 and the epizootic strain isolated in Iran in 1987.
Биотехнологические характеристики
Штамм A N 1707 "Армения-98" проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации. Штамм предназначен для использования в качестве сырья для получения диагностических сывороток и антигенных препаратов, а также изготовления инактивированной противоящурной вакцины. Вирус штамма A N 1707 репродуцируется в монослойных культурах первично-трипсинизированной культуры клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), JB-RS-2, ВНК-21 и в течение 20-24 часов инкубирования накапливается до 7,0-8,0 lg ТЦД50/мл. При массированном заражении вызывает ЦПД через 4 часа. После 3-4 пассажей инкубирования накапливается до 6,0-8,0 lg ТЦД50/мл. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.Biotechnological characteristics
Strain AN 1707 "Armenia-98" exhibits high biological, antigenic and immunogenic activity both in its native form and after inactivation. The strain is intended for use as a raw material for the production of diagnostic sera and antigenic preparations, as well as the manufacture of inactivated FMD vaccine. The virus of strain AN 1707 is reproduced in monolayer cultures of primary trypsinized culture of pig kidney cells (SP), transplanted cultures of kidney cells of the Siberian mountain ibex (PSGK-30), JB-RS-2, BHK-21 and accumulates over 20-24 hours of incubation up to 7.0-8.0 lg TCD 50 / ml. With massive infection, it causes a CPD after 4 hours. After 3-4 incubation passages, up to 6.0-8.0 lg TCD 50 / ml is accumulated. It retains its original characteristics when passaged in sensitive biological systems for 10 passages.
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм A N 1707 "Армения-98" является РНК-содержащим вирусом с мол.массой 7•106 Да. Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой мол.массой 2,8•108 МДа. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.Chemo- and genotaxonomic characterization
Strain AN 1707 "Armenia-98" is an RNA-containing virus with a molar mass of 7 • 10 6 Yes. Nucleic acid is represented by a single-chain linear molecule with a molar mass of 2.8 • 10 8 MDa. The virion has a protein shell consisting of four main proteins VP1, VP2, VP3 and VP4. The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники в свою очередь расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 6 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VPб6а) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.The main antigenic protein is VP1. The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Virionic RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, cleave to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. Of the 6 non-structural polypeptides that accumulate in infected cells, one (VP b6a ) is an RNA-dependent RNA polymerase involved in RNA replication of new virions.
Проведено определение первичной структуры участка генома вируса с помощью ПЦР и сиквенса (фиг. 1). Сравнительный анализ показал, что штамм отличается от штамма A-Турция-98, A-Турция-97 и A-Иран-96 по трем, четырем и семи нуклеотидным основаниям соответственно. Установлено, что армянский изолят вируса ящура имеет наибольшую степень гомологии первичной структуры гена и белка VP1 с изолятами A-Турция-98. Две замены (в 67 и 174 кодонах) из трех, отличающих вирус ящура A-Aрмения-98 и A-Турция-98, являются молчащими, тогда как замена в 156 кодоне является значимой и приводит к изменению треонина на аланин. Исследуемый изолят существенно (18% различий) отличается от производственного штамма A22 N 550 и других вариантов и штаммов вируса ящура A5, A10, A12, A24, A32, A N 1640 Узбекистан-91 и др.The primary structure of the viral genome region was determined using PCR and sequence (Fig. 1). A comparative analysis showed that the strain differs from the strain A-Turkey-98, A-Turkey-97 and A-Iran-96 in three, four and seven nucleotide bases, respectively. It was established that the Armenian FMD virus isolate has the highest degree of homology of the primary structure of the VP1 gene and protein with A-Turkey-98 isolates. Two substitutions (in 67 and 174 codons) of the three that distinguish FMD virus A-Armenia-98 and A-Turkey-98 are silent, while the substitution at 156 codon is significant and leads to a change in threonine to alanine. The studied isolate significantly (18% differences) differs from the production strain A 22 N 550 and other variants and strains of foot and mouth disease virus A 5 , A 10 , A 12 , A 24 , A 32 , AN 1640 Uzbekistan-91, etc.
Физические свойства
Масса вириона - 8,4•10-18 г. Коэффициент седиментации - 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность - 1,45 г/мл.Physical properties
The mass of the virion is 8.4 • 10 -18 g. The sedimentation coefficient is 146S in the sucrose gradient. The floating density is 1.45 g / ml.
Устойчивость к внешним факторам
Вирус штамма A N 1707 "Армения-98" устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и др. органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,0-7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.Resistance to external factors
The virus of strain AN 1707 "Armenia-98" is resistant to ether, chloroform, freon, acetone and other organic solvents and detergents. Most stable at pH 7.0-7.6. PH shifts to both the acidic and alkaline sides lead to inactivation of the virus. It is sensitive to formaldehyde, UV radiation, γ-radiation, high temperatures.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.Additional features and properties
Immunogenic activity - immunogen in the composition of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает. Reactogenicity - does not have reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок. Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals, newborn mice, guinea pigs.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении. Virulence - virulence for naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей. Stability - preserves the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 10 passages.
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A N 1707 "Армения-98" по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A. Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная вакцинопрофилактика вновь возникающих очагов болезни, для чего необходима высокоактивная вакцина. Based on the data obtained, it can be argued that the strain AN 1707 "Armenia-98" in terms of antigenic and immunological spectra is an original, taxonomically new, previously unknown variant of FMD virus type A. To reduce its epizootic risk, timely vaccination prophylaxis of newly occurring foci of the disease is necessary why a highly active vaccine is needed.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемых изобретений, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемых изобретений. Определение из перечня выявленных аналогов прототипов, как наиболее близких по совокупности признаков аналогов, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины и способа ее изготовления, изложенных в независимых пунктах формулы. The analysis of the prior art by the applicant, including a search by patent and scientific and technical sources of information, and the identification of sources containing information about analogues of the proposed inventions, made it possible to establish that the applicant did not find sources characterized by features that are identical (identical) to all the essential features of the proposed inventions. The determination from the list of identified analogues of prototypes as the closest in the totality of the characteristics of analogues made it possible to establish the set of essential distinguishing features of the proposed vaccine and the method of its manufacture, as compared to the claimed technical result, as set forth in the independent claims.
Следовательно, заявляемые изобретения соответствуют условию патентоспособности "новизна". Therefore, the claimed invention meets the condition of patentability "novelty."
Для проверки соответствия предлагаемых решений условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительные части независимых пунктов формулы. Результаты поиска показали, что предлагаемые решения не вытекают для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемых изобретений), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемых изобретений преобразований для достижения технического результата. To check the compliance of the proposed solutions with the patentability condition "inventive step", an additional search for known solutions was carried out to identify features included in the distinctive parts of the independent claims. The search results showed that the proposed solutions do not follow explicitly for the specialist from the prior art set forth in the corresponding section of the description (no solutions having features matching the distinguishing features of the proposed inventions have been identified), and the effect of the transformations provided for by the essential features of the proposed inventions has not been identified to achieve a technical result.
Следовательно, предлагаемые вакцина и способ ее изготовления соответствуют условию патентоспособности "изобретательский уровень". Therefore, the proposed vaccine and the method of its manufacture meet the condition of patentability "inventive step".
Сущность предлагаемых изобретений пояснена примерами их исполнения. The essence of the proposed invention is illustrated by examples of their implementation.
Пример 1. Example 1
Для изготовления адсорбат-вакцины вирус ящура A N 1707 "Армения-98" репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4-7,6. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,2-1,5 ТЦД50 на клетку. Культивирование вируса ведут при температуре 36-37oC. Через 10-12 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то инкубирование продолжают еще 2-3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90-95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S + 75S компонентов. Количество 146S + 75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/мл. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при 36-37oC и pH 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. По окончании инактивации в суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. После этого суспензию антигена охлаждают до 4-8oC. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией. Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка и 146S + 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S + 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена гелем ГОА.For the manufacture of an adsorbate vaccine, foot and mouth disease virus AN 1707 "Armenia-98" is reproduced in a suspension culture of BHK-21 cells. As a supporting medium, an Earle solution without serum is used with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6. The cell culture is infected with a virus at a rate of 0.2-1.5 TCD 50 per cell. The cultivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 o C. After 10-12 hours of incubation, counting of living and dead cells when stained with trypan blue. If the number of living cells is 15-20%, then incubation continues for another 2-3 hours. When the number of dead cells reaches 90-95%, the cultivation is stopped and the virus-containing suspension is monitored for sterility and the content of 146S + 75S components. The amount of 146S + 75S components in the suspension should be at least 0.5 μg / ml. Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping thermostating, a 15–20% AEEI solution, acidified with glacial acetic acid to pH 8.0–8.5, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.025-0.05%. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12-24 hours at 36-37 o C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. At the end of inactivation, a 10% PHMG solution is added to the suspension to a concentration of 0.005-0.007% for flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants. After that, the antigen suspension is cooled to 4-8 o C. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation. The resulting antigen is monitored for avirulence, virus-specific protein content and 146S + 75S virus components and sterility. The required concentration of 146S + 75S components in a vaccine dose of an adsorbed vaccine is obtained by concentration of antigen with GOA gel.
Расчетный объем геля ГОА 3% концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации геля ГОА сливают расчетный объем надосадочной жидкости или измеряют объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 P < 0,01 мг/мл n = 10, а концентрация 146S + 75S компонентов вируса ящура по меньшей мере 6,0 мкг/мл. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации по меньшей мере 0,075%. Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль стерильности по ГОСТ 28085-89. The calculated volume of the GOA gel of 3% concentration is added to the cooled suspension of antigen with the stirrer working. Stirring is carried out for 30 minutes. After sedimentation of the GOA gel, the calculated volume of the supernatant is drained or the volume of the remaining suspension is measured. The final concentration of GOA should be in the range of 1.62 ± 0.488 P <0.01 mg / ml n = 10, and the concentration of 146S + 75S components of FMD virus is at least 6.0 μg / ml. An additional 10% saponin solution is then added to the suspension to a final concentration of at least 0.075%. The resulting vaccine is packaged in glass bottles and sterility control is performed according to GOST 28085-89.
Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 мл, затем подкожно в дозе 10 мл. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или морских свинках. The virulence and harmlessness of the vaccine is checked on 5 heads of cattle, introducing the vaccine first under the mucous membrane of the tongue at a dose of 2.0 ml, then subcutaneously at a dose of 10 ml. Monitoring the clinical condition of animals is 10 days. An avirulent, harmless and sterile vaccine is tested for immunogenic activity in cattle or guinea pigs.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании. The resulting vaccine is a light yellow liquid with a loose white precipitate of sorbent, which is formed at the bottom of the vial during storage and is easily broken into a homogeneous suspension with shaking.
Полученная адсорбат-вакцина против ящура типа A имеет оптимальный компонентный состав, мкг/мл (таблица 4). The obtained adsorbate vaccine against foot and mouth disease type A has the optimal component composition, μg / ml (table 4).
Результаты культивирования вируса ящура типа A N 1707 "Армения-98" в культиваторах КМ-2000 и вируса ящура A22 N 550 приведены в таблицах 5 и 6, из которых следует, что культуральные свойства обоих штаммов вируса ящура типа A не имеют существенных различий, т.е. репродуктивная способность нового штамма A N 1707 "Армения-98" аналогична производственному A22 N 550.The results of the cultivation of foot and mouth disease virus type AN 1707 "Armenia-98" in cultivators KM-2000 and foot and mouth disease virus A 22 N 550 are shown in tables 5 and 6, from which it follows that the cultural properties of both strains of foot and mouth disease virus type A do not have significant differences, t .e. the reproductive ability of the new strain AN 1707 "Armenia-98" is similar to production A 22 N 550.
Результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные компоненты вируса ящура A N 1707 "Армения-98" и вируса ящура A22 N 550 вируса ящура приведены в таблице 7.The results of studies on the effect of inactivation and purification of antigenic material using AEI and PHMG on the immunogenic components of foot-and-mouth disease virus AN 1707 "Armenia-98" and foot-and-mouth disease virus A 22 N 550 of foot-and-mouth disease virus are shown in table 7.
Приведенные в таблице 7 данные свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты нового штамма вируса ящура A N 1707 "Армения-98" не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства вирусу ящура A22 N 550.The data in table 7 indicate that the immunogenic components of the new strain of foot and mouth disease virus AN 1707 "Armenia-98" are not inferior in resistance to inactivation and purification in conditions of production of foot and mouth disease virus A 22 N 550.
Особенно важен тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса A N 1707 "Армения-98" не произошло изменений в количестве 146S + 75S компонентов, полученных при репродукции вируса (смотри таблицу N 7). Especially important is the fact that during the inactivation and purification of the virus A N 1707 "Armenia-98" there were no changes in the number of 146S + 75S components obtained during the reproduction of the virus (see table No. 7).
Пример 2. Example 2
Для изготовления эмульсионной вакцины вирус ящура типа A, штамм N 1707 "Армения-98", репродуцируют в суспензионной культуре клеток ВНК-21, инактивируют и очищают от балластных примесей и контролируют полученный антиген на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S + 75S компонентов вируса и стерильность так, как описано в примере 1. For the manufacture of an emulsion vaccine, FMD virus type A, strain N 1707 "Armenia-98" is reproduced in a suspension culture of BHK-21 cells, inactivated and purified from ballast impurities and the resulting antigen is checked for avirulence, virus-specific protein content, 146S + 75S virus components and sterility as described in example 1.
Необходимую концентрацию 146S + 75S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией. Для этого используют ультрафильтры БТУ 0,5-2. Фильтрование ведут под давлением 1,5 атм. The required concentration of 146S + 75S components in the vaccine dose of the emulsion vaccine is obtained by concentration of the antigen by flow ultrafiltration. For this, BTU 0.5-2 ultrafilters are used. Filtering is carried out under a pressure of 1.5 atm.
Полученный концентрат антигена хранят при 4-6oC до момента использования в вакцине. Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7-1:1 соответственно.The resulting antigen concentrate is stored at 4-6 o C until used in the vaccine. An emulsion vaccine is obtained by dispersing antigen concentrate and oil adjuvant in a ratio of 3: 7-1: 1, respectively, in colloid mills.
В результате получают инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типа A, которая представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде. Вакцина имеет жидкую консистенцию, легко рассасывается с места введения, не вызывает образования абсцессов, не вызывает общей реакции в виде подъема температуры и обладает выраженной иммуногенностью для свиней в дозе 1 мл через 1-21 день после вакцинации, для КРС - в дозе 5 мл через 3-21 день после вакцинации и для овец - в дозе 1 мл через 3-21 день после введения. Вакцину вводят свиньям внутримышечно, а КРС и овцам - подкожно. В прививном объеме должно содержаться не менее 2 мкг 146S + 75S компонентов. The result is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type A, which is a milk-like liquid insoluble in water. The vaccine has a liquid consistency, easily resolves from the injection site, does not cause abscesses, does not cause a general reaction in the form of a temperature increase and has pronounced immunogenicity for pigs at a dose of 1 ml 1-21 days after vaccination, for cattle at a dose of 5 ml after 3-21 days after vaccination and for sheep - in a dose of 1 ml 3-21 days after administration. The vaccine is administered intramuscularly to pigs, and cattle and sheep subcutaneously. Inoculated volume should contain at least 2 μg of 146S + 75S components.
Полученная эмульсионная вакцина против ящура типа А имеет оптимальный компонентный состав, мкг/мл (таблица 8). The resulting emulsion vaccine against foot and mouth disease type A has the optimal component composition, μg / ml (table 8).
Пример 3. Example 3
Эмульсионную вакцину против вируса ящура A N 1707 "Армения-98" готовят так, как описано в примерах 1 и 2. Отличие состоит в том, что необходимую концентрацию 146S + 75S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины получают путем концентрирования антигена осаждением ПЭГ-115. An emulsion vaccine against foot-and-mouth disease virus A N 1707 “Armenia-98” is prepared as described in examples 1 and 2. The difference is that the required concentration of 146S + 75S components in the vaccine dose of the emulsion vaccine is obtained by concentrating the antigen by precipitation of PEG-115.
Пример 4. Example 4
Проведены испытания адсорбат-вакцины против ящура типа A, содержащей, мкг/мл:
авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП" - 6,0
гель ГОА - 1740
сапонин - 750
поддерживающая среда - остальное
Иммуногенная активность данной вакцины проверена на КРС. Ее ИмД50 равна 0,15 мл, т.е. вакцина содержит 6,67 ИмД50 в одном мл.Tests of type A adsorbate vaccine against foot and mouth disease containing μg / ml were tested:
avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" - 6.0
gel GOA - 1740
saponin - 750
supporting environment - the rest
The immunogenic activity of this vaccine was tested for cattle. Its IMD 50 is 0.15 ml, i.e. the vaccine contains 6.67 imd 50 per ml.
Для сравнения производственная серия адсорбат-вакцины из вируса ящура A22 N 550 имела ИмД50 КРС, равную 0,22±0,012 мл P < 0,001, т.е. в одном мл вакцина содержала 4,55 ИмД50. Объем прививной дозы вакцины должен содержать не менее 7 ИмД50.For comparison, the production series of the adsorbate vaccine from foot and mouth disease virus A 22 N 550 had an IMD of 50 cattle equal to 0.22 ± 0.012 ml P <0.001, i.e. in one ml the vaccine contained 4.55 ImD 50 . The volume of the vaccine dose should contain at least 7 ImD 50 .
Следовательно, задача создания вакцины на основе нового штамма вируса ящура типа A N 1707 "Армения-98" решена. Therefore, the task of creating a vaccine based on a new strain of foot and mouth disease virus type A N 1707 "Armenia-98" is solved.
Пример 5. Example 5
Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа A, содержащей, мкг/мл:
авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура типа A штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП" - 2,0
масляный адъювант - 500000
поддерживающая среда - остальное
Иммуногенная активность данной вакцины проверена на свиньях массой 35-50 кг. Результаты исследований представлены в таблице 9.Tests of emulsion vaccine against foot and mouth disease type A containing, μg / ml:
avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic (146S + 75S) components of foot and mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT" - 2.0
oil adjuvant - 500,000
supporting environment - the rest
The immunogenic activity of this vaccine was tested on pigs weighing 35-50 kg. The research results are presented in table 9.
В прививном объеме 1 мл содержится 7,1 ИМД50 для свиней.In the graft volume of 1 ml contains 7.1 IPD 50 for pigs.
Таким образом, приведенная информация свидетельствует о выполнении при использовании группы предлагаемых изобретений следующей совокупности условий:
- вакцина против ящура типа A и способ ее изготовления, воплощающие предлагаемые изобретения, предназначены для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для группы предлагаемых изобретений в том виде, что они охарактеризованы в независимых пунктах формулы изобретения, подтверждена возможность их осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- при использовании предлагаемых вакцины против ящура типа A и способа ее изготовления достигается технический результат, предусмотренный задачей создания изобретений.Thus, the above information indicates the fulfillment of the following set of conditions when using the group of proposed inventions:
- vaccine against foot and mouth disease type A and a method for its manufacture embodying the proposed invention, are intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology;
- for the group of proposed inventions in the form that they are characterized in the independent claims, the possibility of their implementation using the means and methods described in the application or known prior to the priority date is confirmed;
- when using the proposed vaccines against foot and mouth disease type A and the method of its manufacture, a technical result is achieved, provided for by the task of inventions.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания на группу изобретений к заявке на выдачу патента РФ на "Вакцину против ящура типа A и способ ее изготовления"
1. Сюрин В.Н. и др. Вирусные болезни животных. - М: ВНИТИБП, 1998. - С. 544-547.Sources of information taken into account when compiling a description of a group of inventions to the application for the grant of a patent of the Russian Federation on "Type A vaccine against foot and mouth disease and its production method"
1. Syurin V.N. and other viral diseases of animals. - M: VNITIBP, 1998 .-- S. 544-547.
2. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур / Под ред. А.Н. Бурдова. - М: Агропромиздат, 1990. - С. 231-250. 2. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and other foot and mouth disease / Ed. A.N. Burdova. - M: Agropromizdat, 1990 .-- S. 231-250.
3. Дарда П.И. и др. Антигенные свойства вируса ящура штамма A2 (Aи). - Ветеринария, 1966, 1. - С. 20-22.3. Darda P.I. et al. Antigenic properties of foot and mouth disease virus strain A 2 (A and ). - Veterinary medicine, 1966, 1. - S. 20-22.
4. Bojko A.A. Declaration sur l'apparition en URSS d'un type A de virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE. - 1965. - N 64, Т. 2. - С. 1075-1077. 4. Bojko A.A. Declaration sur l'apparition en URSS d'un type A de virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE. - 1965. - N 64, T. 2. - S. 1075-1077.
5. Pepep X. Ящур /Пер. с нем. Г.А.Сурковой. Под ред. и с предисл. канд. вет.наук П.В.Малярца. - М: Колос, 1971, - 432 с. 5. Pepep X. Foot and mouth disease / Per. with him. G.A. Surkova. Ed. and with the foreword. Cand. Vet.science P.V. Malaria. - M: Kolos, 1971, - 432 s.
6. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины моновалентной эмульсионной против ящура типа A, типа О, типа C, типа Азия-1 (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21). Утверждена ГУВ Госкомиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам 24.01.91 (прототип). 6. Instructions for the manufacture and control of a monovalent emulsion vaccine against foot and mouth disease type A, type O, type C, type Asia-1 (from a virus grown in BHK-21 cells). Approved by the GUV of the State Commission of the Council of Ministers of the USSR for Food and Purchases 01.24.91 (prototype).
7. Пат. ФРГ N 1138509; 30 h, 6; 16.05.63. 7. Pat. Germany No. 1138509; 30 h, 6; 05.16.63.
8. Пат. ФРГ N 1161387; 30 h, 6; 08.05.69. 8. Pat. Germany N 1161387; 30 h, 6; 05/08/69.
9. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокисьалюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса A22. Утверждена ГУВ СССР 25.03.71.9. Temporary instructions for the manufacture and control of FMD concentrated aluminum hydroxide formol vaccine from lapinized virus A 22 . Approved by the GUV of the USSR on March 25, 71.
10. Пат. СССР N 352441, A 61 K 23/00, 21.09.72. 10. Pat. USSR N 352441, A 61 K 23/00, 09.21.72.
11. Авт. свид. СССР N 411131, C 12 K 5/00, 15.01.74. 11. Auth. testimonial. USSR N 411131, C 12
12. Авт. свид. СССР N 561732, C 12 К 5/00, A 61 K 39/26; 15.06.77. 12. Auth. testimonial. USSR N 561732, C 12
13. Пат. Франции N 2088038; A 61 К 27/00, C 12 К 5/00; 07.01.72. 13. Pat. France N 2088038; A 61 K 27/00; C 12
14. Пат. России N 2054039; C 12 N 7/02, A 61 K 39/135; 10.02.96. 14. Pat. Russia N 2054039; C 12
Claims (18)
Антигенный материал - ≥ 6,0
Гель гидроокиси алюминия - 1132,0 - 2108,0
Сапонин - 750,0
Поддерживающая среда - 997142,0 - 998112,0
6. Вакцина по пп.1 и 4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных компонентов вируса ящура типа А штамма N 1707 "Армения-98-ДЕП", масляный адъювант и поддерживающую среду в соотношении, мкг/мл:
Антигенный материал - ≥ 2,0
Масляный адъювант - 500000-700000
Поддерживающая среда - 299998 - 499998
7. Способ изготовления вакцины против ящура типа А, включающий репродукцию вирусного антигена в чувствительной системе культивирования, очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей, инактивацию вируса, концентрирование полученного антигена и последующее соединение концентрата антигена с адъювантом, отличающийся тем, что в качестве вирусного антигена используют штамм вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, род Aphtovirus, типа А, коллекция ВГНКИ N 1707 "Армения-98-ДЕП" в эффективном количестве.5. The vaccine according to claims 1 to 3, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", aluminum hydroxide gel, saponin and a support medium in the ratio μg / ml:
Antigenic material - ≥ 6.0
Gel of aluminum hydroxide - 1132.0 - 2108.0
Saponin - 750.0
Supporting Environment - 997,142.0 - 998,112.0
6. The vaccine according to claims 1 and 4, characterized in that it contains avirulent and purified antigenic material in the form of immunogenic components of foot-and-mouth disease virus type A strain N 1707 "Armenia-98-DEPT", oil adjuvant and maintenance medium in the ratio, μg / ml:
Antigenic material - ≥ 2.0
Oil adjuvant - 500000-700000
Supporting environment - 299998 - 499998
7. A method of manufacturing a vaccine against foot and mouth disease type A, including reproduction of a viral antigen in a sensitive cultivation system, purification of the virus-containing suspension from ballast impurities, inactivation of the virus, concentration of the obtained antigen and subsequent connection of the antigen concentrate with adjuvant, characterized in that the strain is used as a viral antigen Aphtae epizooticae virus, fam. Picornaviridae, genus Aphtovirus, type A, collection VGNKI N 1707 "Armenia-98-DEPT" in an effective amount.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99108555/13A RU2143921C1 (en) | 1999-04-21 | 1999-04-21 | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99108555/13A RU2143921C1 (en) | 1999-04-21 | 1999-04-21 | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99105412/13A Division RU2140452C1 (en) | 1999-03-15 | 1999-03-15 | Foot and mouth virus disease type a strain n 1707 "armenia-98" used for preparing diagnostic and vaccine preparations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2143921C1 true RU2143921C1 (en) | 2000-01-10 |
Family
ID=20218978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99108555/13A RU2143921C1 (en) | 1999-04-21 | 1999-04-21 | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2143921C1 (en) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2453557C1 (en) * | 2010-11-03 | 2012-06-20 | Алексей Сергеевич Фолимонов | Polyepitope protein composition for inducing immune response against foot-and-mouth disease virus |
| RU2526570C2 (en) * | 2012-08-09 | 2014-08-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine |
| RU2563345C1 (en) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a |
| RU2565537C2 (en) * | 2009-10-20 | 2015-10-20 | Дзе Пирбрайт Инститьют, | Structure |
| RU2617043C1 (en) * | 2016-03-24 | 2017-04-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Vaccination against foot and mouth disease and method for its production and use |
| RU2631129C1 (en) * | 2007-05-21 | 2017-09-19 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Method for production of foot-and-mouth disease vaccine, and foot-and-mouth disease vaccine |
| CN109134622A (en) * | 2018-08-16 | 2019-01-04 | 金宇保灵生物药品有限公司 | The multistep continuous Integration purification process of foot-and-mouth disease virus antigen |
| RU2809219C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-12-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГТУ "ВНИИЗЖ") | Culturally inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease of sat-1/nwz genotype |
-
1999
- 1999-04-21 RU RU99108555/13A patent/RU2143921C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2631129C1 (en) * | 2007-05-21 | 2017-09-19 | Федеральное Казенное Предприятие "Щелковский Биокомбинат" | Method for production of foot-and-mouth disease vaccine, and foot-and-mouth disease vaccine |
| RU2565537C2 (en) * | 2009-10-20 | 2015-10-20 | Дзе Пирбрайт Инститьют, | Structure |
| US9243230B2 (en) | 2009-10-20 | 2016-01-26 | The Pirbright Institute | Construct for producing empty virus capsids |
| RU2453557C1 (en) * | 2010-11-03 | 2012-06-20 | Алексей Сергеевич Фолимонов | Polyepitope protein composition for inducing immune response against foot-and-mouth disease virus |
| RU2526570C2 (en) * | 2012-08-09 | 2014-08-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine |
| RU2563345C1 (en) * | 2014-04-16 | 2015-09-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a |
| RU2617043C1 (en) * | 2016-03-24 | 2017-04-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" (ФГБНУ ВНИТИБП) | Vaccination against foot and mouth disease and method for its production and use |
| CN109134622A (en) * | 2018-08-16 | 2019-01-04 | 金宇保灵生物药品有限公司 | The multistep continuous Integration purification process of foot-and-mouth disease virus antigen |
| CN109134622B (en) * | 2018-08-16 | 2021-07-02 | 金宇保灵生物药品有限公司 | Multistep continuous integrated purification method for foot-and-mouth disease virus antigen |
| RU2815534C1 (en) * | 2023-03-21 | 2024-03-18 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Culture inactivated adsorbed vaccine against fmd of sat-1/i genotype from sat-1/tanzania/2012 strain |
| RU2809219C1 (en) * | 2023-05-11 | 2023-12-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГТУ "ВНИИЗЖ") | Culturally inactivated sorbed vaccine against foot and mouth disease of sat-1/nwz genotype |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2447898C2 (en) | Ipv-dpt vaccine | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| RU2699671C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| RU2242513C1 (en) | Foot and mouth disease virus strain a(georgia)1999/ 1721 type a for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2563522C1 (en) | STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O | |
| RU2140452C1 (en) | Foot and mouth virus disease type a strain n 1707 "armenia-98" used for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2294759C2 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2297452C2 (en) | Asia-1-type foot-and-mouth disease virus strain for producing of diagnostic and/or vaccine preparations | |
| RU2204599C1 (en) | Foot-and-mouth virus strain "primorsky-2000" 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing | |
| RU2348690C2 (en) | Amur strain no 1987 of asia-1 type murrain virus for antigenic and immunogenic performance control of vaccines and for production of medicines for diagnostics and specific prevention of asia-1 type murrain | |
| RU2526570C2 (en) | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine | |
| RU2603255C9 (en) | Strain a №2155/baikal/2013 of murrain virus aphtae epizooticae type a for control of antigenic and immunogenic activity and to produce biopreparations for diagnostics and specific prevention of murrain type a | |
| RU2563345C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a | |
| RU2218397C1 (en) | Foot-and-mouth virus strain = 1737/georgia/2000 of type asia-1 for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2665850C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a | |
| RU2681815C1 (en) | Inactivated sorptive foot-and-mouth disease type a vaccine | |
| RU2801950C1 (en) | Strain o n 2356/pakistan/2018 foot-and-mouth disease virus aphtae epizooticae genotype o/me-sa/panasia2ant-10 for the manufacture of biopreparations for the diagnosis of foot-and-mouth disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040422 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120422 |