RU2131438C1 - Линейные или циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиатным рецепторам, фармацевтическая композиция - Google Patents
Линейные или циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиатным рецепторам, фармацевтическая композиция Download PDFInfo
- Publication number
- RU2131438C1 RU2131438C1 RU95113498A RU95113498A RU2131438C1 RU 2131438 C1 RU2131438 C1 RU 2131438C1 RU 95113498 A RU95113498 A RU 95113498A RU 95113498 A RU95113498 A RU 95113498A RU 2131438 C1 RU2131438 C1 RU 2131438C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oligopeptides
- glu
- linear
- tyr
- cyclic
- Prior art date
Links
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 45
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 title claims abstract description 20
- 102000003840 Opioid Receptors Human genes 0.000 title claims description 28
- 108090000137 Opioid Receptors Proteins 0.000 title claims description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 18
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N L-2,4-diaminobutyric acid group Chemical group NC(C(=O)O)CCN OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 claims 4
- HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N Tyr-Ser-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N 0.000 claims 2
- RCMWNNJFKNDKQR-UFYCRDLUSA-N Tyr-Pro-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 RCMWNNJFKNDKQR-UFYCRDLUSA-N 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 17
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 abstract 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 15
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 15
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 15
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 14
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 12
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 9
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 7
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 7
- 102000051367 mu Opioid Receptors Human genes 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 108020001612 μ-opioid receptors Proteins 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 6
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 5
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 5
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 5
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 5
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 5
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 4
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940063135 genotropin Drugs 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 3
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 108010065875 beta-casomorphins Proteins 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000011141 high resolution liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 3
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YFGBQHOOROIVKG-BHDDXSALSA-N (2R)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CCSC)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 YFGBQHOOROIVKG-BHDDXSALSA-N 0.000 description 2
- -1 2,6-dichlorobenzyl Chemical group 0.000 description 2
- MXRPNYMMDLFYDL-YFKPBYRVSA-N AMCC Chemical compound CNC(=O)SC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O MXRPNYMMDLFYDL-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 2
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-VKHMYHEASA-N L-2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCC[C@H](N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 102400000988 Met-enkephalin Human genes 0.000 description 2
- 108010042237 Methionine Enkephalin Proteins 0.000 description 2
- ONBWJWYUHXVEJS-ZTYRTETDSA-N Normorphine Chemical compound C([C@@H](NCC1)[C@@H]2C=C[C@@H]3O)C4=CC=C(O)C5=C4[C@@]21[C@H]3O5 ONBWJWYUHXVEJS-ZTYRTETDSA-N 0.000 description 2
- 208000026251 Opioid-Related disease Diseases 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 101100244562 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) oprD gene Proteins 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 108700023159 delta Opioid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000048124 delta Opioid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 2
- 229950006134 normorphine Drugs 0.000 description 2
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- HPZJMUBDEAMBFI-WTNAPCKOSA-N (D-Ala(2)-mephe(4)-gly-ol(5))enkephalin Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@H](C)C(=O)NCC(=O)N(C)[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCCO)C1=CC=C(O)C=C1 HPZJMUBDEAMBFI-WTNAPCKOSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- IJVCSMSMFSCRME-KBQPJGBKSA-N Dihydromorphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](CC[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O IJVCSMSMFSCRME-KBQPJGBKSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010093625 Opioid Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001490 Opioid Peptides Human genes 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000027549 TRPC Human genes 0.000 description 1
- 108060008648 TRPC Proteins 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 150000001923 cyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- OCDXZFSOHJRGIL-UHFFFAOYSA-N cyclohexyloxycyclohexane Chemical compound C1CCCCC1OC1CCCCC1 OCDXZFSOHJRGIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000841 delta opiate receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 238000009585 enzyme analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000010265 fast atom bombardment Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000005519 fluorenylmethyloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 201000005040 opiate dependence Diseases 0.000 description 1
- 239000003399 opiate peptide Substances 0.000 description 1
- 229940005483 opioid analgesics Drugs 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000006201 parenteral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002182 synaptic membrane Anatomy 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006211 transdermal dosage form Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021249 α-casein Nutrition 0.000 description 1
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormones [GH] (Somatotropin)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Addiction (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Линейные или циклические олигопептиды, имеющие первичную аминокислотную последовательность формулы I
Tyr-Х-Phe-Ley-Z,
где X и Z - аминокислоты или их производные, или их аналоги, в которых Х и Z могут быть ковалентно связаны, образуя гетероциклическую структуру.
Tyr-Х-Phe-Ley-Z,
где X и Z - аминокислоты или их производные, или их аналоги, в которых Х и Z могут быть ковалентно связаны, образуя гетероциклическую структуру.
Когда олигопептид линейный, Х-Ser, Gly, Pro, D-Ala, Z = Glu или его аминопроизводное, когда олигопептид циклический, Х - 2,4-диаминомасляная кислота, Lys, Cys, Orn, a Z = Glu или его аминопроизводное. Олигопептиды формулы I потенциально полезны в качестве анальгетиков для облегчения боли и повышения комфорта индивидуума. 2 c. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 табл.
Description
Изобретение относится к новым олигопептидам, обладающим сродством к опиатным рецепторам, которые могут быть линейными или циклическими пентапептидами с первичной последовательностью аминокислот в скелете Тир-Х-Фен-Лей-Z, где X и Z обозначают аминокислоты или производные аминокислот и/или аналоги и где X и Z могут быть ковалентно связаны, образуя гетероциклическую структуру, в которой Z выбирают из Цис, Глу, Глн или производных Глу и Глн; X выбирают из аминокислот или аминокислотных аналогов, таких как Сер, Глу, D-Ала, D- или Z-2,4-диаминомасляная кислота, АМЦК, Цис или их производные.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим препаратам, содержащим новые олигопептиды, которые являются потенциально полезными в качестве анальгетиков для облегчения боли и повышения комфорта индивидуумов, страдающих от экстраординарного стресса или шока, а также для уменьшения депрессий и для возможного лечения лиц, страдающих опийной наркоманией.
Врачи, занимающиеся лечением пациентов с нехваткой гормона роста с помощью гормона роста человека, часто сообщают о том, что их пациенты обладают заметным улучшением состояния по сравнению с контрольной группой, не проходящей лечение. Была обнаружена статистически достоверная разница между этими группами, в том что касается социальной изоляции, физической активности, сна и эмоционального статуса /смотри Acta Paed. Scand. (приложение), т. 356, стр. 55-59, S. Bjork и др., и Acta Paed. Scand (приложение), т. 356, стр. 70-72, 1989, GA Mc Cauley/.
В клинике наблюдали также некоторые вторичные эффекты, касающиеся центральной нервной системы /ЦНС/, при лечении гормоном роста человека. Было высказано предположение, что опиоидно активные пептидные фрагменты, высвобождающиеся из гормона роста, могут достигать ЦНС, если плазма крови человека обладает протеолитической активностью, способной их высвободить. Если такие фрагменты проходят через гематоэнцефалический барьер, они могут воздействовать на ЦНС. Эти исследования свидетельствуют, что гормон роста человека воздействует на ЦНС и что ферментативно высвобожденные фрагменты могут взаимодействовать с опиоидными рецепторами.
Ряд исследований показал, что ферментативно обработанные препараты белков могут включать пептиды с опиодной активностью, такие как β-казоморфин, цитохрофины и гемоморфины. β-Казоморфин происходит из пептона, полученного при распаде бета-казеина, и был раскрыт ранее в Physiol. Chem., т.360, стр. 1211-16, 1979, V.Brantl и др., Pharmacol. Sci., т.4, стр. 193, 1979, V.Brantl и др., Eur. J. Pharmacol., т.106, стр. 213-214, 1884, V. Brantl и др., и J. Chin. Endocrinol. Metab., т.68, стр. 289-9, 1989, F. Nyberg и др.
Было показано также, что полученные ферментативной обработкой фрагменты митохондриального цитохрома B содержат цитохрофины, другие опиоидные пептиды /смотри Eur. J. Pharmacol., т. 111 стр. 293, 1985, V. Brantl и др./. Ссылку на гемоморфины смотри в Eur. J. Pharmacol., 125, стр. 309-10, 1986, V. Brantl и др. Опиоидная активность этих пептидов была подтверждена путем испытания их способности ингибировать электрически индуцированные сокращения препарата продольной мускулатуры и нервного сплетения мышечной оболочки подвздошной кишки морской свинки, а также при исследованиях с рецепторами.
Некоторые циклические олигопептиды, обладающие активностью в отношении опиатных рецепторов, ранее были раскрыты J. De Maio и др., в Proc. Natl. Acad. Sci. , том 77(12), 1980, стр. 7162-6; в этой статье обсуждался и приготавливался ряд циклических аналогов энкефалинов. Циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиоидным рецепторам, раскрываются также в J. Med. Chem., т. 35, 1992, стр. 3956-3961, P. Schiller и др. Патент США 4254024 (J. Stewart и др.) раскрывает класс тетрапептидов, обладающих опиоидной активностью, что было доказано на препарате подвздошной кишки морской свинки общей формулы H-Тир-X-Y-Z. Еще одна ссылка на линейные тетрапептиды, связывающие опиатные рецепторы, находится в Европейской патентной публикации EP 350221.
В предыдущем исследовании изучались две различные пептидазы на предмет их способности высвобождать фрагменты гормона роста человека, которые могут взаимодействовать с опиоидными рецепторами. Этими ферментами были коммерчески доступный трипсин и эндопептидаза, выделенная из плазмы крови человека. Фрагменты разделяли посредством жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой и затем изучали анализом с опиоидными рецепторами, выполненными с синаптическими плазматическими мембранами из мозга крысы /без мозжечка/. Результаты показали, что активные в отношении рецепторов фрагменты высвобождались как трипсином, так и эндопептидазой. Однако при исследовании на препарате продольной мускулатуры и нервного сплетения подвздошной кишки морской свинки было обнаружено, что эти фрагменты менее активны по сравнению с бета-казоморфинами /фрагментами казеинового пептона/. Эти открытия были обнародованы на 4-м конгрессе Европейской нейроэндокринологической ассоциации (Santiago de Compostela, 28-30 июня 1989 г.).
Когда изучалась аминокислотная последовательность пептидов, полученных триптическим расщеплением гормона роста человека, было отмечено, что некоторые последовательности напоминали таковые бета-казоморфина. Эти новые олигопептиды с предполагаемой опиоидной активностью представляли собой тетра- или пентапептиды с последовательностью Тир-Глу-Лей-Лей и Тир-Сер-Фен-Лей-Глн. Эти олигопептиды были синтезированы и несколько модифицированы в пентапептиде, глутамин был заменен на глутаминовую кислоту. Эти пептиды затем испытывали на сродство к опиатным рецепторам сравнительно с β-казоморфином /смотри табл. 1/. Испытания неожиданно показали, что новый олигопептид Тир-Сер-Фен-Лей-Глу обладал почти таким же сродством к опиатным рецепторам, как у β-казоморфина.
Как следствие, этот результат привел нас к более многочисленному ряду новых олигопептидов, которые являлись линейными или циклическими аналогами Тир-Сер-Фен-Лей-Глу. Эти новые пептиды показали высокое сродство к опиатным рецепторам при сравнении со структурно родственными тетрапептидами, раскрытыми в вышеупомянутом патенте США 4254024 /см. табл. 2/.
Настоящее изобретение относится к новым олигопептидам, обладающим сродством к опиоидным рецепторам, которые получены из последовательностей, существующих в природном гормоне роста человека. Эти новые олигопептиды описываются общей формулой Тир-X-Фен-Лей-Z, где X и Z обозначают аминокислоты, их производные или аналоги, в которых X и Z могут быть ковалентно связаны, образуя циклические соединения
Если олигопептид является линейным, X представляет Сер, Глу, Про, АМЦК /транс-(4-аминометил)-циклогексан карбоновая кислота) или D-Ала, а Z представляет Глу или Глн или их аминопроизводные.
Если олигопептид является линейным, X представляет Сер, Глу, Про, АМЦК /транс-(4-аминометил)-циклогексан карбоновая кислота) или D-Ала, а Z представляет Глу или Глн или их аминопроизводные.
Некоторыми предпочтительными линейными олигопептидами согласно настоящему изобретению являются Тир-Сер-Фен-Лей-Глу, Тир-Сер-Фен-Лей-Глу-NH2, Тир-D-Ала-Фен-Лей-Глу, Тир-Про-Фен-Лей-Глу. Эти линейные олигопептиды можно легко приготовить, следуя нижеприведенным примерам.
Циклические олигопептиды настоящего изобретения можно циклизировать с помощью боковой цепи аминокислоты или окислением двух цистеиновых групп.
Для получения аналогов Тир-Сер-Фен-Лей-Глу с циклической структурой аминокислоту номер два, серин, необходимо заменить на D- или L-2,4-диаминомасляную кислоту (D- или L-Дам), D- или L-лизин или D- или L-цистеин. Аминокислота номер пять может быть заменена на глутамин, глутаминовую кислоту или их аминопроизводные или цистеин.
В общей циклической формуле
согласно настоящему изобретению могут быть использованы следующие аминокислоты: X = D- или L-2,4-диаминомасляная кислота (D- или L-Дам), D-Орн, D- или L-Лиз или D- или L-Цис, а Z = Глу или его аминопроизводные или Цис, с тем условием, что если X = D- или L-Цис, то Z=Цис.
согласно настоящему изобретению могут быть использованы следующие аминокислоты: X = D- или L-2,4-диаминомасляная кислота (D- или L-Дам), D-Орн, D- или L-Лиз или D- или L-Цис, а Z = Глу или его аминопроизводные или Цис, с тем условием, что если X = D- или L-Цис, то Z=Цис.
Предпочтительными циклическими олигопептидами согласно настоящему изобретению являются Тир-цикло (D-Лиз-Фен-Лей-Гли) с пептидной связью между альфа-карбоксильной группой глутаминовой кислоты и эпсилон-аминогруппой лизина, Тир-цикло (D-диаминомасляная кислота-Фен-Лей-Глу) и циклические пептиды
которые циклизируются окислением двух цистеиновых групп.
которые циклизируются окислением двух цистеиновых групп.
Эти циклические олигопептиды имеют гетероциклическую структуру, родственную энкефалинам, и описаны J. De Maio и др. в вышеупомянутой статье.
В исследованиях, описанных в примере 3 и табл. 1 и 2, ясно показано, что олигопептиды настоящего изобретения обладают высоким сродством к опиоидным рецепторам и особенно к μ- и δ-рецепторам. Было также показано, что циклические олигопептиды являются функциональными агонистами и обладают высокой биологической активностью как опиоиды, что измерено на стимулированных срезах подвздошной кишки морской свинки в сравнении с норморфином /табл. 2/.
Линейные пептиды показали по сравнению с циклическими пептидами значительно более низкую биологическую активность, что может наделять их свойствами действовать как частичные агонисты опиатных рецепторов или, при определенных обстоятельствах, как антагонисты.
Следует отметить, что биологическая активность линейных пептидов значительно снижена, даже у тех из них, которые обладают высоким связывающим сродством к μ-рецепторам. Предполагаемые частичные агонисты ингибировали агонистические реакции норморфина и названных циклических пептидов в равной степени с функциональными антагонистами.
Линейные и циклические олигопептиды настоящего изобретения предоставляют новую возможность приготовления лекарственных средств для облегчения боли, для повышения комфорта пациентов, страдающих от шока или стресса, или для лечения депрессий, для введения лицам, страдающим нарушением уровней, эндогенного морфина и опиатных аналогов или, потенциально, для лечения опиоманий. Специалист легко найдет дополнительные фармакологические способы использования отдельных олигопептидов настоящего изобретения, которые обусловливаются их свойствами агонистов, частичных агонистов или антагонистов опиоидных рецепторов.
Приемлемыми являются несколько лекарственных форм новых олигопептидов. Можно изготавливать пероральные, чрескожные и/или парентеральные лекарственные формы с подходящими носителями и/или растворителями и стандартными стабилизаторами и активаторами.
Новые олигопептиды легко могут быть приготовлены в форме лекарственных средств для разных способов введения, таких как пероральный, назальный, парентеральный, энтеральный или трансбуккальный.
Различные модификации и эквиваленты настоящего изобретения, такие как соли и производные олигопептидов настоящего изобретения, очевидны для специалистов и находятся в пределах рамок настоящего изобретения. Настоящее изобретение также не ограничивается специфическими примерами и вариантами осуществления, приведенными в настоящем документе.
Фиг. 1 показывает типичную диаграмму жидкостной хроматографии высокого разрешения продуктов триптического расщепления гормона роста человека (Crescormon®). Распределение активности в отношении опиатных рецепторов представлено темными столбиками.
Фиг. 2 показывает образец жидкостной хроматографии высокого разрешения рецепторной активности при использовании Genotropin® в качестве субстрата триптического расщепления. Распределение активности в отношении опиатных рецепторов представлено темными столбиками.
Фиг. 3 и 4 показывают изучение связывания изобретенных олигопептидов. Рисунки показывают кривые распределения связывания Тир-Сер-Фен-Лей-Глу и Тир-Гли-Лей-Лей с мембранами крысы, с использованием в качестве меток (3H)D-АГО /фиг. 3/ и (3H)D-AD-Л /фиг. 4/.
Табл. 1 представляет начальные данные связывания для олигопептидов настоящего изобретения по сравнению с β-казоморфином; табл. 2 представляет результаты изучения сродства к опиоидным рецепторам и активности олигопептидов настоящего изобретения по сравнению с имевшимися данными для тетрапептидов.
Пример 1. Ферментативное расщепление гормона роста.
Препараты гормона роста человека (Crescormon® и Genotropin®, м22000 ед.) поставила фирма Kabi Pharmacia AB /Стокгольм, Швеция/. Crescormon® был выделен из свежезамороженных гипофизов человека, в то время как Genotropin® был приготовлен с помощью генной технологии. Трипсин, обработанный ТРСК, из поджелудочной железы крупного рогатого скота был получен от фирмы Sigma /Сент-Луис, Миссури, США/. Хроматографические материалы Сефадекс G-100 и Сефадекс G-25 /PD-10/ поставила фирма Pharmacia /Уппсала, Швеция/. Все остальные химические реактивы и растворители были стандартными коммерческими препаратами.
Приготовление эндопептидазы плазмы.
20 мл плазмы, взятой у небеременной и не находящейся в послеродовом периоде женщины детородного возраста, фракционировали на колонке с Сефадексом G-100 /5 • 90 см/. Колонку элюировали 20 мМ Трис-HCl, pH 7,4, и собирали 20 мл фракции при скорости элюирования 80 мл/ч. Аликвоты /1 мл/ фракций обессоливали на колонках с Сефадексом G-25 /PD-10/ и лиофилизировали перед анализом на ферменты. Активные фракции собирали, объединяли и сохраняли в замороженном виде до начала дальнейших исследований. Дальнейшая очистка производилась посредством хроматографии с ДЭАЭ-Сефарозой CZ-6B. Колонку /2 • 12 см/ уравновешивали 20 мМ Трис-HCl, pH 7,4, и после наложения образца элюировали линейным градиентом NaCl /0 - 0,5 М/, содержащим тот же Трис-HCl буфер. Фракции по 10 мл собирали при скорости элюирования 100 мл/ч и обрабатывали как описано выше перед исследованием на ферменты.
Жидкостная хроматография высокого разрешения.
Жидкостная хроматография высокого разрешения с обращенной фазой осуществлялась с использованием инструмента Pharmacia /LKB (см. F. Nyberg и др., J. Chromatogr. т. 359, 1986, стр. 541-551), снабженного колонкой Spherisorb TSK-ODS-120 DT /4,6 • 250 мм, размер частиц 5 мкм/. Колонку элюировали линейным градиентом ацетонитрила /15 - 60%/, содержащим 0,04% трифторуксусной кислоты /ТФУ/. Образец растворяли в 200 мкл исходного буфера. Фракции по 0,5 мл собирали при скорости элюирования 0,5 мл/мин и выпаривали перед исследованием с рецепторами.
Ферментативное расщепление.
Лиофилизированный трипсин или ферментативные фракции плазмы растворяли в 100 - 200 мкл 0,4 М раствора бикарбоната аммония /pH 7,8/ и инкубировали с 0,2 - 1,5 мг гормона роста человека при 37oC в течение 5 - 8 ч в конечном объеме 250 мкл. Реакцию прекращали добавлением 1 мл ледяного метанола. Образец выпаривали в концентраторе Savant Vac /Хиксвилл, Нью-Йорк, США/ перед дальнейшим исследованием с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой.
Результаты.
Фиг. 1 показывает типичную ЖХВР-хроматограмму триптического расщепления гормона человека (Crescormon®). Как можно видеть, отмечено два пика с рецепторной активностью. Когда в качестве субстрата использовали Genotropin®, образец распределения рецепторной активности демонстрировал некоторые отличия /фиг. 2/. Большой пик, элюированный в 31 фракции, продолжал доминировать. Однако пик, наблюдавшийся в 18 фракции расщепления препарата Crescormon® /фиг. 1/, почти выпал, как показано на фиг. 2. Единственным объяснением может служить тот факт, что препарат Crescormon® содержит больше дезамидированных форм гормона и такие формы могут быть более чувствительными в отношении ферментативного расщепления, что обсуждалось в других источниках (Biochem. Biophys. Acta., т. 625, 1980, стр. 255-260, F. Nyberg и др./. Фермент плазмы дал несколько рецепторно-активных фрагментов, отмеченных с помощью радиорецепторного исследования ЖВХР.
После разделения на колонке с Сефадексом G-100 было обнаружено, что этот фермент элюировался в позиции, соответствующей белку с молекулярной массой 100-110 кед. Дальнейшая очистка фермента плазмы достигалась посредством ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефарозе, при которой фермент элюировался при концентрации NaCl около 0,1 М. Рецепторно-активные ферменты, высвобожденные ферментом плазмы, отличались от активных фрагментов, полученных триптическим расщеплением, в отношении их поведения при ЖВХР хроматографии.
Было отмечено, что некоторые части фрагментов гормона роста, полученных триптическим расщеплением, были сходны с аминокислотной последовательностью β-казоморфина. Частичное аминокислотное секвенирование фрагментов гормона роста, полученных триптическим расщеплением, обнаружило, что один пептид содержал последовательность Тир-Сер-Фен-Лей-Глн.
Пример 2. Приготовление олигопептида настоящего изобретения.
Олигопептиды настоящего изобретения первоначально происходили от последовательности Тир-Сер-Фен-Лей-Глн, как отмечалось в примере 1. Было получено некоторое количество линейных и циклических пентапептидов общей структуры Тир-Х-Фен-Лей-Z с помощью методик, описанных в примерах 2.1-2.3.
Пример 2.1. Синтез Тир-Х-Фен-Лей-Глу (Х=Сер I, D - Ала II, Про III).
Для синтеза пептидов был использован стандартный твердофазный метод с применением синтезатора Beckman 990. Аминокислоты были приобретены у фирмы Bachem. Inc. , Калифорния. Фенольную группу тирозина защищали 2,6-дихлорбензилом, гидроксильную группу серина защищали бензилом и гамма-карбоксильную группу глутаминовой кислоты этерифицировали до циклогексилового эфира.
По завершении последнего цикла пептид извлекали из смолы и полностью удаляли защиту обработкой безводным жидким HF при 0oC в течение 60 мин в присутствии анизола /30 мл HF и 3 мл анизола на 1 г смолы/. После удаления HF и тщательного высушивания в вакууме смолу отмывали эфиром и экстрагировали уксусной кислотой /10%/ и экстракты высушивали замораживанием. Сырой пептид очищали гель-фильтрацией на колонке с Fractogel TSKHW-40 или PGM 2000 с уксусной кислотой или трифторуксусной кислотой в качестве элюента. Конечный продукт получали в лиофилизированной форме. Гомогенность пептидов испытывалась посредством ТСХ /силикагель 60F-254 Merck; I н-бутиловый спирт/уксусная кислота/EtOAc/вода: 1/1/1/1; II пиридин /EtOAc/уксусная кислота/вода: 5/5/1/3; Х = Сер RfI 0,74; RfII 0,73/ и посредством аналитической жидкостной хроматографии быстрого разрешения /колонка: пеп.-хроматография с обращенной фазой, градиент A 0,1% ТФУ/вода; B 0,1% ТФУ/ацетонитрил/. Идентичность устанавливали аминокислотным анализом /6M HCl, 110o, 24 ч/ и масс-спектрометрией, положит. FAB, выполненный на масс-спектрометре с двойной фокусировкой (Jeol. Япония/.
Пример 2.2. Синтез Тир-Сер-Фен-Лей-Глу-NH2.
Этот пептид синтезировали на 4-метилбензилгидриламиновой смоле точно таким способом, который описан в примере 2.1. МБГА-смола /0,46 ммоль/ г, 1,74 г, Nova Biochem., Швейцария/ реагировала с Вос-Глу гаммациклогексиловым эфиром. Сырой продукт очищали посредством гель-фильтрации на колонке с Fractogel TSK HW-40 с 0,1% ТФУ в качестве элюента. ТСХ: Rf (I) 0,76, Rf (II) 0,79; аминокислотный анализ: Тир 0,99; Сер 0,99; Фен 1,01; Лей 1,00; Глу 0,99; FAB-MCM/Z 657,2 [M + H]+.
Пример 2.3. Синтез Тир-цикло(-Лиз-Фен-Лей-Глу-).
Cинтез выполняли твердофазным способом на смоле из 4-алкоксибензолового спирта с применением стандартного протокола Fmoc. α-Аминофункциональные группы защищали фторенилметилоксикарбонильной группой, за исключением α-аминофункциональной группы Тир, которую защищали бензилоксикарбонильной группой. γ-Карбоксил Глу, ε-аминогруппу Лиз и фенольную группу Тир защищали бензилом, трет-бутилоксикарбонилом и бензилом соответственно. Пептид извлекали из смолы 50% трифторуксусной кислотой в дихлорметане, оставляли все группы защищенными, кроме ε-аминогруппы Лиз и α-карбоксильной группы Глу. Циклизацию проводили в ДМФ при концентрации пептида 0,1 мМ бензотриазол тетраметилурония гексафторфосфатом /ГБТУ/ и N-этилдиизопропиламином. Циклический пептид лишали защитных групп каталитической гидрогенизацией при атмосферном давлении в метаноле с 10% Pd на древесном угле в качестве катализатора. Пептид охарактеризовали с помощью аминокислотного анализа, жидостной хроматографии высокого разрешения и FAB мас-спектрометрией.
Пример 3. Изучение новых олигопептидов.
В первом исследовании с помощью описанных методик были синтезированы пептид Тир-Сер-Фен-Лей-Глн с заменой Глн на Глу, а также более короткий фрагмент Тир-Сер-Фен-Лей и использованы для изучения их связывания с μ- и δ-опиатными рецепторами.
Рецепторное исследование проводили согласно Zife Sci., т.16, 1975, стр. 1979, Z. Terenius и др., и Brain Res., т.259, 1983, стр.267-274, F.Nyberg и др. , с использованием синаптических мембран крысы, взятых из цельного мозга крысы без мозжечка, и 3H-меченного дигидроморфина в качестве конкурирующего радиолиганда. Каждое измерение включало калибровочную кривую с Met-энкефалином и связывающую активность испытуемых фракций выражали в эквивалентах Met-энкефалина.
В экспериментах, приведенных на фиг. 3 и 4 и в табл.1, в качестве радиолигандов при изучении связывания по Red.Peptides, т.34, 1991, стр.169-179, E-L. Glamsta и др. , использовали (3H)-(D-Ала2, МеФен4,Гли-ол5)-энкефалин (D-АГО или D-АМГО) и (3H)-(D-Ала2, D-Лей5)-энкефалин (D-АD-Л), приобретенные у Amersham (Букингемшир, Англия). D-АГО- или D-АМГО является лигандом μ-рецепторов, в то время как D-AD-Л является типичным агонистом δ-рецепторов.
Подсчитанные константы ингибирования перечислены в табл.1. Данные показывают, что пентапептидный фрагмент обладает большим сродством как к μ-, так и к δ-рецепторам по сравнению с более коротким фрагментом гормона роста. Активность Тир-Сер-Фен-Лей-Глу в отношении μ-рецепторов была такой же, как у β-казоморфина-5 /см.табл.1/.
Константы ингибирования (Ku), в табл. 1 определены как концентрация пептида, которая ведет к 50% блокированию меченого лиганда. В публикации " β-казоморфины и родственные пептиды", изд. F. Nyberg и др., стр.65-75, "Селективные пептиды -δ-антагонисты, аналоги экзорфина α-казеина, как пробные вещества для изучения опиатных рецепторов", S.Loukas и др. раскрываются различные ингибирующие пептиды и их активность в отношении опиатных рецепторов. В "Регуляторных пептидах", т.34, 1991, стр.169-179 (E-L, Glamsta и др.) раскрываются константы ингибирования для β-казоморфинов.
Таким образом, показано, что обработка трипсином гормона роста человека приводит к образованию фрагментов, способных взаимодействовать в опиатными рецепторами. Очевидно также, что плазма крови человека обладает протеолитической активностью, способной высвобождать из этого гормона пептиды, активные в отношении опиатных рецепторов, которые, если они проходят через гематоэнцефалический барьер, могут воздействовать на центральную нервную систему /ЦНС/. На практике, при клинической терапии гормонов роста наблюдали некоторые вторичные эффекты на ЦНС /не опубликовано/. Таким образом, можно предположить, что пептидные фрагменты, активные в отношении опиатных рецепторов, высвобождающиеся из гормона роста, могут достигать ЦНС и являться причиной этих эффектов.
Для тестов, приведенных в табл.2, приготавливали ряд новых пентапептидов и пептидов согласно примеру 2. Эти пептиды использовали как для тестов с рецепторами, так и для биологических исследований на электрически стимулированных срезах подвздошной кишки морской свинки. Исследования с рецепторами выполняли так же, как описано выше, с D-АМГО в качестве радиолиганда μ-рецепторов. В исследованиях с (3H)-D-АМГО специфическое связывание вытеснялось различными испытуемыми веществами (10-5M-10-10M/. Вычислялись концентрация меченого лиганда при 50% вытеснении, ИК50/ингибирующая концентрация/, Kи и связывающая активность Cмакс. с помощью компьютерной программы /Ligand, Biosoft, Кембридж, Соединенное Королевство/. В исследованиях с препаратами подвздошной кишки морской свинки использовали методики и материалы, раскрытие в Regul. Pept., т.34, 1991, стр. 169-179 /E-L, Glamsta и др./ и в The Hemorphins, Compr. Summaries of Uppsala Dissertations факультета фармакологии 108, Acta Unisers. Ups. Uppsala, 1993, E-L.Glamsta. Сравнительная величина активности в отношении стандартного соединения, норморфина, определялась в упомянутом исследовании.
Табл. 2 показывает, что олигопептиды настоящего изобретения обладают высоким связующим сродством в отношении μ- рецепторов. Следует отметить, что циклические олигопептиды обладают высоким сродством к этим рецепторам, а также высокой опиоидной активностью, предполагающей мощную агонистическую активность.
Линейные пентапептиды настоящего изобретения также обладают высоким сродством к рецепторам, но уменьшенной биологической активностью, о чем свидетельствуют результаты теста с препаратами подвздошной кишки морской свинки. Можно высказать в связи с этим предположение о том, что эти соединения являются частичными агонистами или функциональными антагонистами.
Различия величин константы ингибирования Kи пептида Тир-Сер-Фен-Лей-Гли в табл.1 и 2 можно отнести на счет различных аналитических материалов и методик. Однако относительные величины активности различных соединений в каждом измерении являются наиболее интересными и информативными.
Исследования показали поколение новых олигопептидов, первоначально полученных из триптических фрагментов гормона роста человека, которые обладают сродством к опиатным рецепторам и опиоидной активностью высокой мощности.
Эти новые соединения, следовательно, обладают высоким фармацевтическим потенциалом и дают возможность создавать новые тканево-избирательные лекарственные средства, обладающие активностью в отношении опиатных рецепторов, потенциально с сокращенными побочными эффектами.
Данные по связыванию были получены в результате экспериментов с ингибированием /двойное определение/ для определения параметра связывания посредством компьютерной программы EBDA/Ligand. Была выбрана одна модель для сайта /Тир-Про-Фен-Вал-Гли =β-казоморфин-5-человека/.
Claims (3)
1. Линейные или циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиатным рецепторам, имеющие первичную аминокислотную последовательность формулы I
Tyr - X - Phe - Leu - Z,
где X и Z - аминокислоты или их производные, или их аналоги, в которых X и Z могут быть ковалентно связаны, образуя гетероциклическую структуру в соответствии со следующими условиями:
а) когда олигопептид является линейным, X выбирают из аминокислот Ser, Gly, Pro, D-Ala, а Z = Glu или его аминопроизводные;
б) когда олигопептид является циклическим, X выбирают из 2,4-диаминомасляной кислоты, Lys, Cys, Orn, в D- или L-форме, а Z = Glu или его аминопроизводные, или Cys, с тем условием, что если X = Cys, то и Z = Cys.
Tyr - X - Phe - Leu - Z,
где X и Z - аминокислоты или их производные, или их аналоги, в которых X и Z могут быть ковалентно связаны, образуя гетероциклическую структуру в соответствии со следующими условиями:
а) когда олигопептид является линейным, X выбирают из аминокислот Ser, Gly, Pro, D-Ala, а Z = Glu или его аминопроизводные;
б) когда олигопептид является циклическим, X выбирают из 2,4-диаминомасляной кислоты, Lys, Cys, Orn, в D- или L-форме, а Z = Glu или его аминопроизводные, или Cys, с тем условием, что если X = Cys, то и Z = Cys.
2. Линейные олигопептиды формулы I по п. 1, обладающие сродством к μ- и δ-опиатным рецепторам.
3 Линейные олигопептиды формулы I по п.1, представляющие собой Tyr - Ser - Phe - Leu - Glu; Tyr - Ser - Phe - Leu - Glu NH2; Tyr - DAla - Phe - Leu - Glu; Tyr - Pro - Phe - Leu - Glu.
4. Циклические олигопептиды формулы I по п.1, представляющие собой
5. Фармацевтическая композиция, обладающая сродством к опиатным рецепторам и включающая активный ингредиент и подходящие носители и/или растворители, отличающаяся тем, что содержит в качестве активного ингредиента по крайней мере один из олигопептидов по пп.1 - 4 в эффективном количестве.
5. Фармацевтическая композиция, обладающая сродством к опиатным рецепторам и включающая активный ингредиент и подходящие носители и/или растворители, отличающаяся тем, что содержит в качестве активного ингредиента по крайней мере один из олигопептидов по пп.1 - 4 в эффективном количестве.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9203496-6 | 1992-11-20 | ||
| SE9203496A SE9203496D0 (sv) | 1992-11-20 | 1992-11-20 | New oligopeptides |
| PCT/SE1993/000986 WO1994012532A1 (en) | 1992-11-20 | 1993-11-18 | New oligopeptides with affinity to opioid receptors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95113498A RU95113498A (ru) | 1997-03-20 |
| RU2131438C1 true RU2131438C1 (ru) | 1999-06-10 |
Family
ID=20387887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95113498A RU2131438C1 (ru) | 1992-11-20 | 1993-11-18 | Линейные или циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиатным рецепторам, фармацевтическая композиция |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5872097A (ru) |
| EP (1) | EP0745093B1 (ru) |
| JP (1) | JP3470136B2 (ru) |
| AT (1) | ATE212357T1 (ru) |
| AU (1) | AU684481B2 (ru) |
| CA (1) | CA2149899A1 (ru) |
| DE (1) | DE69331499T2 (ru) |
| DK (1) | DK0745093T3 (ru) |
| ES (1) | ES2171445T3 (ru) |
| FI (1) | FI952455A (ru) |
| NO (1) | NO313098B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ258260A (ru) |
| PT (1) | PT745093E (ru) |
| RU (1) | RU2131438C1 (ru) |
| SE (1) | SE9203496D0 (ru) |
| WO (1) | WO1994012532A1 (ru) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU1623801A (en) * | 1999-11-19 | 2001-05-30 | Palatin Technologies, Inc. | Opioid metallopeptide compositions and methods |
| CA2580694A1 (en) * | 2004-09-23 | 2006-03-30 | Alexander Michalow | Methods for regulating neurotransmitter systems by inducing counteradaptations |
| US20080045610A1 (en) * | 2004-09-23 | 2008-02-21 | Alexander Michalow | Methods for regulating neurotransmitter systems by inducing counteradaptations |
| US7454406B2 (en) * | 2005-04-29 | 2008-11-18 | Adaptec, Inc. | System and method of handling file metadata |
| HUE033875T2 (en) * | 2010-07-09 | 2018-01-29 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Anal opioid receptor agonist analogues of endomorphins |
| US20160176930A1 (en) | 2010-07-09 | 2016-06-23 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Mu opioid receptor agonist analogs of the endomorphins |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8005121A (nl) * | 1979-09-20 | 1981-03-24 | Erba Farmitalia | Biologisch actieve peptiden. |
| US4254024A (en) * | 1979-10-16 | 1981-03-03 | Pennwalt Corporation | Tetrapeptides and derivatives having opiate activity |
| US4699897A (en) * | 1983-06-04 | 1987-10-13 | Amgen | Biologically active peptides structurally related to regions within growth hormones |
-
1992
- 1992-11-20 SE SE9203496A patent/SE9203496D0/xx unknown
-
1993
- 1993-11-08 US US08/433,401 patent/US5872097A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-18 DK DK94901120T patent/DK0745093T3/da active
- 1993-11-18 AT AT94901120T patent/ATE212357T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-11-18 RU RU95113498A patent/RU2131438C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-11-18 DE DE69331499T patent/DE69331499T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-18 EP EP94901120A patent/EP0745093B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-18 NZ NZ258260A patent/NZ258260A/en unknown
- 1993-11-18 PT PT94901120T patent/PT745093E/pt unknown
- 1993-11-18 WO PCT/SE1993/000986 patent/WO1994012532A1/en active IP Right Grant
- 1993-11-18 AU AU55816/94A patent/AU684481B2/en not_active Ceased
- 1993-11-18 ES ES94901120T patent/ES2171445T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-18 JP JP51303594A patent/JP3470136B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-18 CA CA002149899A patent/CA2149899A1/en not_active Abandoned
-
1995
- 1995-05-19 NO NO19951990A patent/NO313098B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-05-19 FI FI952455A patent/FI952455A/fi not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| J. Med. Chemistry. - 1992, t. 35, с. 3956-3961. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, ч. 1, 1993, с. 190-195. * |
| Kalman Kovacs et al. Jnt. J. Protein Research III. - 1971, p. 93-98. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI952455A0 (fi) | 1995-05-19 |
| RU95113498A (ru) | 1997-03-20 |
| PT745093E (pt) | 2002-07-31 |
| US5872097A (en) | 1999-02-16 |
| EP0745093B1 (en) | 2002-01-23 |
| EP0745093A1 (en) | 1996-12-04 |
| FI952455A (fi) | 1995-05-19 |
| CA2149899A1 (en) | 1994-06-09 |
| ES2171445T3 (es) | 2002-09-16 |
| NO313098B1 (no) | 2002-08-12 |
| NZ258260A (en) | 1996-06-25 |
| DE69331499D1 (de) | 2002-03-14 |
| NO951990D0 (no) | 1995-05-19 |
| JP3470136B2 (ja) | 2003-11-25 |
| AU684481B2 (en) | 1997-12-18 |
| DE69331499T2 (de) | 2002-08-08 |
| NO951990L (no) | 1995-05-19 |
| WO1994012532A1 (en) | 1994-06-09 |
| SE9203496D0 (sv) | 1992-11-20 |
| JPH08507748A (ja) | 1996-08-20 |
| ATE212357T1 (de) | 2002-02-15 |
| AU5581694A (en) | 1994-06-22 |
| DK0745093T3 (da) | 2002-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| MONTECUCCHI et al. | Amino acid composition and sequence of dermorphin, a novel opiate‐like peptide from the skin of Phyllomedusa sauvagei | |
| US4968669A (en) | Parathyroid hormone antagonists | |
| WO1999021571A1 (en) | Melanocortin receptor ligands and methods of using same | |
| US5093233A (en) | Antagonists with position 13 modification | |
| SK15352000A3 (sk) | Spôsob výroby cyklických peptidov viazaných k polymérnemu nosiču | |
| JP2001500845A (ja) | 骨粗鬆症の治寮のための副甲状腺ホルモン類似体 | |
| AU737057B2 (en) | Cyclic CRF antagonist peptides | |
| EP0672054A1 (en) | A novel molecule which inhibits neuropeptide tyrosine biological function | |
| RU2131438C1 (ru) | Линейные или циклические олигопептиды, обладающие сродством к опиатным рецепторам, фармацевтическая композиция | |
| CA1321281C (en) | Humoral hypercalcemic factor antagonists | |
| US20040122013A1 (en) | Analogs of nocicettin | |
| US5624902A (en) | Peptide inhibitors of calmodulin | |
| CA1321282C (en) | Parathyroid hormone antagonists | |
| Ganu et al. | Factor C3f is a spasmogenic fragment released from C3b by factors I and H: the heptadeca-peptide C3f was synthesized and characterized | |
| WO2006130718A2 (en) | Synthetic peptide inhibitors of thrombin | |
| US5114843A (en) | Humoral hypercalcemic factor antagonists | |
| Siemion et al. | Tuftsin analogs and their biological activity | |
| Or et al. | Improvements in the minimum binding sequence of C5a: examination of His-67 | |
| JP4401170B2 (ja) | 新規ペプチドであるヒト成長ホルモン放出ホルモンの類似体 | |
| US5087562A (en) | Humoral hypercalcemic factor antagonists with modification at position 13 . . . | |
| Weeden et al. | A retro‐inverso α‐melanocyte stimulating hormone analog with MC1R‐binding selectivity | |
| WO1993025580A1 (en) | Cyclic peptides that modulate endothelin activity | |
| Liebisch et al. | Isolation and structure of a C-terminally amidated nonopioid peptide, amidorphin-(8-26), from bovine striatum: a major product of proenkephalin in brain but not in adrenal medulla. | |
| Zieleniak et al. | Deltorphin analogs restricted via a urea bridge: structure and opioid activity | |
| Wormser et al. | Proteolytic resistance and biological activity of N-methylated analogs of [pGlu6] substance P6–11 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20051119 |