RU2051054C1 - Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека - Google Patents
Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2051054C1 RU2051054C1 SU5045574A RU2051054C1 RU 2051054 C1 RU2051054 C1 RU 2051054C1 SU 5045574 A SU5045574 A SU 5045574A RU 2051054 C1 RU2051054 C1 RU 2051054C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- precipitate
- antiherpetic
- human
- igg
- immunoglobulin
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса. Целью настоящего изобретения является удешевление способа производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и утилизация отходов промышленного фракционирования плазмы крови человека. Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного сырья для производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека используется осадок Б, образующийся при спиртовом фракционировании плазмы крови нативных невакционированных доноров, имеющей исходно высокое содержание антител к вирусу простого герпеса. Способ предусматривает обработку водного экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом, после чего проводится последовательное фракционирование полиэтиленгликолем с молекулярной массой 4000 из расчета 2 -4% и 5 -7% по объему. Для осаждения фракции JgG добавляют полиэтиленгликоль до насыщения 12 14% по объему. Способ позволяет удешевить производство препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и использовать отходы промышленного фракционирования человеческой плазмы, так как он позволяет получить из балластной фракции (осадок Б) препарат противогерпетического иммуноглобулина человека, состоящий на 97% из JgG. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для иммунотерапии и иммунопрофилактики инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса (ВПГ).
Актуальность изобретения обуславливается резким увеличением в настоящее время числа заболеваний, вызываемых ВПГ, что связано в значительной степени с ухудшающейся экологической обстановкой, а также с все более широким применением иммуносупрессивной терапии.
Одним из перспективных подходов при профилактике и лечении герпесвирусных инфекций является применение препаратов иммуноглобулинов человека.
К настоящему моменту установлено, что вирусспецифические антитела играют существенную роль в патогенезе герпетических инфекций. Защитное действие герпесспецифических антител связывают как с их непосредственным участием в нейтрализации вирусных частиц, так и с активацией или комплемент-опосредованного лизиса и антитело-зависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности в отношении инфицированных ВПГ-клеток.
В настоящее время выпуск препарата противогерпетического иммуноглобулина человека, как в отечественной медицинской промышленности, так и за рубежом не налажен.
Известен способ получения препарата цитомегаловирусного иммуноглобулина (U.S.Pat. No. 4.617, 379). Он предусматривает отбор плазмы нативных невакцинированных доноров с высокими титрами антител к цитомегаловирусу и ее последующее фракционирование по методу Cohn и Оncley с целью получения фракции II, представляющей собой гипериммунный цитомегаловирусный иммуноглобулин.
Однако данный способ получения препарата иммуноглобулина предусматривает использование дорогостоящего сырья плазмы крови доноров. Кроме того, образующийся при фракционировании плазмы осадок Б (фракция III Кона), является балластной фракцией и не утилизируется.
Целью настоящего изобретения является удешевление способа производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и утилизация отходов промышленного фракционирования плазмы крови человека.
Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного сырья для производства препарата противогерпетического иммуноглобулина человека используется осадок Б (фракция III Кона), образующийся при спиртовом фракционировании плазмы крови нативных невакцинированных доноров, имеющей исходно высокое содержание антител к ВПГ.
Проведенные нами исследования показали, что осадок Б содержит герпесспецифические антитела, причем их титры имеют практически те же значения, что и в плазме крови, что позволяет рассматривать осадок Б как доступное дешевое сырье для получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека. Преимущество использования данного источника сырья заключается также в том, что осадок Б обогащен 3 и 4 подклассами IgG. Это особенно важно, так как известно, что при рецидивирующей герпетической инфекции герпесспецифические антитела представлены в основном 1, 3 и 4 подклассами IgG.
Способ предусматривает обработку водного экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом, после чего проводится последовательное фракционирование раствором полиэтиленгликоля с молекулярной массой 4000 из рассчета 2-4% по объему и 5-7% по объему. Для осаждения фракции IgG добавляют полиэтиленгликоль до насыщения 12-14% по объему.
Способ поясняют следующим примером.
Приготовление экстракта из осадка Б.
1 кг осадка Б суспендируют в 30 л охлажденной апирогенной дистиллированной воды при постоянном перемешивании. рН смеси устанавливают 5,2-0,5. После отстаивания в течение 18 ч при t + 5oC смесь центрифугируют в течение 1 ч при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок удаляют, в полученном экстракте определяют содержание белка, которое равно 1% Объем полученного экстракта составляет 15900 мл.
Удаление балластных фракций путем обработки экстракта осадка Б хлороформом и декстрансульфатом.
К экстракту осадка Б добавляют 160 мл охлажденного до +5оС хлороформа (1% по объему). Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч при температуре +5оС. К смеси экстракта с хлороформом добавляют 328 мл 5%-ного раствора декстрансульфата (конечная концентрация 0,1%). Смесь энергично встряхивают в течение 5-10 мин и центрифугируют при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением до получения прозрачного центрифугата. Осадок удаляют. Объем центрифугата составляет 12 л, содержание белка 0,2%
Осаждение IgG полиэтиленгликолем (ПЭГ).
Осаждение IgG полиэтиленгликолем (ПЭГ).
К 12 л экстракта добавляют ПЭГ (М.В.4000) из рассчета 2 г на 100 мл раствора при постоянном перемешивании. Через 2 ч осадок отделяют фильтрацией через миллипоровые фильтры μ= 0,45, а к супернатанту добавляют ПЭГ из расчета 6% по объему. Смесь медленно перемешивают в течение 2 ч. Образовавшийся осадок удаляют путем фильтрации через миллипоровые фильтры μ= 0,45. рН супернатанта доводят до 8,0 6% тригидроксиэтиламинометаном.
Для осаждения IgG к супернатанту добавляют 50%-ный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 13% при постоянном перемешивании.
Осадок IgG отделяют путем декантации и центрифугирования в течение 15-30 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением. Осадок промывают 300-400 мл апирогенной дистиллированной воды, подкисленной до рН 5±0,2 при температуре от 0 до +2.
Растворение осадка IgG.
Осадок IgG растворяют в охлажденном 0,9%-ном растворе хлорида натрия до содержания белка 10% рН 6,3. После растворения осадка препарат центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин на центрифуге с охлаждением для удаления нерастворимых примесей.
К раствору после центрифугирования добавляют глюкозу до конечной концентрации 2% в качестве стабилизатора. После стерилизующей фильтрации через миллипоровые фильтры μ= 0,2 препарат разливают по ампулам и лиофилизируют. Хранят в сухом темном месте при температуре (6±4)оС. Срок хранения 3 года.
После растворения осадка IgG в готовом препарате определяют количественное содержание подклассов IgG и специфическую активность.
Распределение подклассов IgG определенное методом радиальной иммунодиффузии с использованием стандартов фирмы Nordic Immunological Laboratories", представлено в таблице.
Титр антител в препарате, определенный методом твердофазного иммуноферментного анализа, составляет 1: 256000, что позволяет использовать данный препарат в профилактических и лечебных целях при инфекциях, вызываемых ВПГ.
Количество иммунологически неактивных примесей составляет не более 2-3% что регламентировано НТД на иммуноглобулин.
Предлагаемый способ имеет преимущество, так как позволяет получить из балластной фракции III (осадок Б) препарат противогерпетического иммуноглобулина человека, состоящий на 97% из IgG.
Технико-экономическая эффективность.
Предлагаемый способ позволяет удешевить производство препарата противогерпетического иммуноглобулина человека и использовать отходы промышленного фракционирования плазмы крови человека, так как он предполагает использование в качестве исходного сырья при производстве препарата осадка Б, являющегося балластной фракцией, образующейся при спиртовом фракционировании плазмы крови.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА путем спиртовой обработки плазмы невацинированных доноров с высоким содержанием антител к вирусу простого герпеса последовательно 8-, 25- и 17%-ным раствором этилового спирта с последующим центрифугированием и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что после обработки раствором 17%-ного этилового спирта собирают осадок, разводят водой, инкубируют при перемешивании, центрифугируют, обрабатывают хлороформом и декстрансульфатом, снова центрифугируют и проводят поэтапное осаждение целевого продукта полиэтиленгликолем из расчета 2 4, 5 7, 12 14 об.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5045574 RU2051054C1 (ru) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5045574 RU2051054C1 (ru) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2051054C1 true RU2051054C1 (ru) | 1995-12-27 |
Family
ID=21605917
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5045574 RU2051054C1 (ru) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2051054C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005023303A1 (en) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | Bayer Healthcare Ag | Methods and compositions for treating herpes infections |
-
1992
- 1992-04-14 RU SU5045574 patent/RU2051054C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент США N 4617379, кл. A 61K 39/00, 1986. * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005023303A1 (en) * | 2003-09-05 | 2005-03-17 | Bayer Healthcare Ag | Methods and compositions for treating herpes infections |
| WO2005025617A2 (en) * | 2003-09-05 | 2005-03-24 | Talecris Biotherapeutics, Inc. | Methods and compositions for treating herpes infections |
| WO2005025617A3 (en) * | 2003-09-05 | 2005-05-26 | Bayer Healthcare Llc | Methods and compositions for treating herpes infections |
| US6984492B2 (en) | 2003-09-05 | 2006-01-10 | Talecris Biotherapeutics, Inc. | Methods and compositions for treating herpes infections |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0247071B1 (en) | Immunotherapeutic treatment | |
| Hoyle et al. | Antigenic structure of influenza viruses; the preparation of elementary body suspensions and the nature of the complement-fixing antigen | |
| Rahi et al. | Immunopathology of the lens. I. Humoral and cellular immune responses to heterologous lens antigens and their roles in ocular inflammation. | |
| RU2051054C1 (ru) | Способ получения препарата противогерпетического иммуноглобулина человека | |
| JPS5855432A (ja) | 静脈注射用免疫グロブリンの製法 | |
| US4001080A (en) | Production of immunological materials | |
| SU1003738A3 (ru) | Способ получени вакцины таежного весенне-летнего энцефалитного вируса | |
| RU2084229C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных заболеваний | |
| RU2089204C1 (ru) | Способ получения пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
| JP2005515266A (ja) | 免疫刺激剤として活性である植物抽出物 | |
| RU2195308C1 (ru) | Способ получения вещества, обладающего иммуностимулирующей, противовирусной и антибактериальной активностью, вещество, полученое этим способом, и фармацевтическая композиция на его основе | |
| CA1203169A (en) | Method of preparation of pure antigene hbs from human plasma | |
| RU2089217C1 (ru) | Способ получения гетерологических иммуноглобулинов против вирусных инфекций марбург и эбола | |
| RU2661028C2 (ru) | Фармацевтическая композиция для пассивной иммунизации против бешенства, фармацевтический набор, способ применения фармацевтического набора | |
| CN100349918C (zh) | 呼吸道合胞病毒和腺病毒特异性免疫球蛋白制备方法 | |
| GB2037165A (en) | Vaccines | |
| US3630840A (en) | Process for purifying solutions of the foot-and-mouth disease virus | |
| Spickett et al. | Sweating sickness: relative curative effect of hyperimmune serum and a precipitated immunoglobulin suspension and immunoblot identifiation of proposed immunodominant tick salivary gland proteins | |
| RU2060034C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата | |
| Charney et al. | Development of a purified poliomyelitis virus vaccine | |
| SU833257A1 (ru) | Способ получени антител | |
| GB2062463A (en) | Babesiosis vaccine | |
| Rondle et al. | Studies on the LS antigen of vaccinia virus | |
| RU2144379C1 (ru) | Противовирусный препарат и способ получения иммуноглобулина для профилактики и лечения вирусных заболеваний | |
| SU448864A1 (ru) | Способ получени антил к австралийскому антигену |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QZ4A | Changes in the licence of a patent |
Effective date: 19990728 |