RU2021138227A - Новые антитела против вируса гепатита b и их применение - Google Patents

Claims (75)

1. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, способные специфически связываться с HBsAg, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывается с HBsAg с более высокой аффинностью при нейтральном pH, чем при кислотном pH, и где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит:

(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), включающую следующие 3 CDR:

(i) HCDR1 с последовательностью GGSIX₁X₂NFW (SEQ ID NO: 50), где X₁ выбран из T или H, а X₂ выбран из S или H;

(ii) HCDR2 с последовательностью X₃GX₄X₅X₆X₇T (SEQ ID NO: 51), где X₃ выбран из S или H, X₄ выбран из P, S или Y, X₅ выбран из G или D, X₆ выбран из T или H, а X₇ выбран из Y или H; и

(iii) HCDR3 с последовательностью ARSHX₈YGX₉X₁₀DYAFDF (SEQ ID NO: 52), где X₈ выбран из D или H, X₉ выбран из S или H, а X₁₀ выбран из H или N;

и/или

(b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую следующие 3 CDR:

(iv) LCDR1 с последовательностью QDIX₁₁X₁₂S (SEQ ID NO: 53), где X₁₁ выбран из S или H, а X₁₂ выбран из S, Y или H;

(v) LCDR2 с последовательностью YAN (SEQ ID NO: 12); и

(vi) LCDR3 с последовательностью QQYHX₁₃LPLT (SEQ ID NO: 54), где X₁₃ выбран из S или Y.

2. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает:

(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую следующие 3 CDR:

(i) HCDR1, которая состоит из последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 8, 14, 17, 20;

(ii) HCDR2, которая состоит из последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 9, 15, 21, 18; и

(iii) HCDR3, которая состоит из последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 10, 16, 22;

и/или,

(b) вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую следующие 3 CDR:

(iv) LCDR1, которая состоит из последовательности, выбранной из: SEQ ID NO: 11, 19, 23;

(v) LCDR2, которая состоит из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 12; и

(vi) LCDR3, которая состоит из последовательности, представленной в SEQ ID NO: 13.

3. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает:

(1) VH, содержащую следующие 3 CDR: HCDR1, представленную в SEQ ID NO: 8, HCDR2, представленную в SEQ ID NO: 9, HCDR3, представленную в SEQ ID NO: 10; и VL, содержащую следующие 3 CDR: LCDR1, представленную в SEQ ID NO: 11, LCDR2, представленную в SEQ ID NO: 12, LCDR3, представленную в SEQ ID NO: 13;

(2) VH, содержащую следующие 3 CDR: HCDR1, представленную в SEQ ID NO: 14, HCDR2, представленную в SEQ ID NO: 15, HCDR3, представленную в SEQ ID NO: 16; и VL, содержащую следующие 3 CDR: LCDR1, представленную в SEQ ID NO: 11, LCDR2, представленную в SEQ ID NO: 12, LCDR3, представленную в SEQ ID NO: 13;

(3) VH, содержащую следующие 3 CDR: HCDR1, представленную в SEQ ID NO: 20, HCDR2, представленную в SEQ ID NO: 21, HCDR3, представленную в SEQ ID NO: 22; и VL, содержащую следующие 3 CDR: LCDR1, представленную в SEQ ID NO: 23, LCDR2, представленную в SEQ ID NO: 12, LCDR3, представленную в SEQ ID NO: 13; или,

(4) VH, содержащую следующие 3 CDR: HCDR1, представленную в SEQ ID NO: 17, HCDR2, представленную в SEQ ID NO: 18, HCDR3, представленную в SEQ ID NO: 10; и VL, содержащую следующие 3 CDR: LCDR1, представленную в SEQ ID NO: 19, LCDR2, представленную в SEQ ID NO: 12, LCDR3, представленную в SEQ ID NO: 13.

4. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит каркасную область человеческого иммуноглобулина (например, каркасную область, содержащуюся в аминокислотной последовательности, кодируемой геном антитела человеческой зародышевой линии), и эта каркасная область необязательно содержит одну или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) обратных мутаций, а именно, замен человеческих остатков на мышиные остатки;

предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит каркасную область тяжелой цепи, содержащуюся в аминокислотной последовательности, кодируемой геном тяжелой цепи человеческой зародышевой линии и/или каркасную область легкой цепи, содержащуюся в аминокислотной последовательности, кодируемой геном легкой цепи человеческой зародышевой линии;

предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: каркасную область тяжелой цепи, содержащуюся в аминокислотной последовательности, кодируемой IGHV4-4*08, и каркасную область легкой цепи, содержащуюся в аминокислотной последовательности, кодируемой IGKV1-39*01, и указанная каркасная область тяжелой цепи и/или каркасная область легкой цепи необязательно содержат одну или более (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) обратных мутаций, а именно, замен человеческих остатков на мышиные остатки;

предпочтительно VH антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает: VH FR1, представленную в SEQ ID NO: 24; VH FR2, представленную в SEQ ID NO: 25; VH FR3, представленную в SEQ ID NO: 26; и VH FR4, представленную в SEQ ID NO: 27;

предпочтительно VL антитела или его антигенсвязывающего фрагмента содержит: VL FR1, представленную в SEQ ID NO: 28; VL FR2, представленную в SEQ ID NO: 29; VL FR3, представленную в SEQ ID NO: 30; и VL FR4, представленную в SEQ ID NO: 31.

5. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает:

(а) вариабельную область тяжелой цепи (VH), которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

(i) последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 1, 3, 4 и 6;

(ii) последовательности с заменой, делецией или добавлением одной или нескольких аминокислот (например, заменой, делецией или добавлением 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот) по сравнению с последовательностью, представленной в любой из SEQ ID NO: 1, 3, 4, 6; или

(iii) последовательности, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 1, 3, 4, 6;

и

(b) вариабельную область легкой цепи (VL), которая содержит аминокислотную последовательность, выбранную из:

(iv) последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 2, 5 и 7;

(v) последовательности с заменой, делецией или добавлением одной или нескольких аминокислот (например, заменой, делецией или добавлением 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот) по сравнению с последовательностью, представленной в любой из SEQ ID NO: 2, 5, 7; или

(vi) последовательности, которая по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, представленной в любой из SEQ ID NO: 2, 5, 7;

предпочтительно замена, описанная в (ii) или (v), представляет собой консервативную замену.

6. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает:

(1) VH с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1, и VL с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2;

(2) VH с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 3, и VL с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 2;

(3) VH с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 4, и VL с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 5; или

(4) VH с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 6, и VL с последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 7.

7. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент дополнительно содержит константную область, происходящую от человеческого иммуноглобулина;

предпочтительно, тяжелая цепь антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включает константную область тяжелой цепи, происходящую от человеческого иммуноглобулина (например, IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), а легкая цепь антитела или антигенсвязывающего фрагмента содержит константную область легкой цепи, происходящую от человеческого иммуноглобулина (например, κ или λ);

предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область легкой цепи (CL), представленную в SEQ ID NO: 58.

8. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит вариант константной области тяжелой цепи человеческого IgG1, где указанный вариант имеет следующие замены по сравнению с последовательностью дикого типа, от которой она происходит: (i) M252Y, N286E, N434Y; или (ii) K326D, L328Y; где вышеупомянутые положения аминокислот являются положениями согласно системе нумерации по Кэбату;

предпочтительно антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область тяжелой цепи (СН), представленную в SEQ ID NO: 47 или 48.

9. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-7, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит константную область тяжелой цепи (СН), представленную в SEQ ID NO: 57.

10. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-9, где указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент включает:

(1) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 1, и CH, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(2) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 1, и CH, представленную в SEQ ID NO: 47, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(3) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 1, и CH, представленную в SEQ ID NO: 48, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(4) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 3, и CH, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(5) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 3, и CH, представленную в SEQ ID NO: 47, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(6) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 3, и CH, представленную в SEQ ID NO: 48, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 2, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(7) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 4, и CH, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 5, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(8) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 4, и CH, представленную в SEQ ID NO: 47, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 5, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(9) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 4, и CH, представленную в SEQ ID NO: 48, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 5, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(10) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 6, и CH, представленную в SEQ ID NO: 57, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 7, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58;

(11) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 6, и CH, представленную в SEQ ID NO: 47, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 7, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58; или

(12) тяжелую цепь, содержащую VH, представленную в SEQ ID NO: 6, и CH, представленную в SEQ ID NO: 48, и легкую цепь, содержащую VL, представленную в SEQ ID NO: 7, и CL, представленную в SEQ ID NO: 58.

11. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-10, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из фрагмента scFv, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, диантитела, биспецифического антитела, мультиспецифического антитела, проантитела, химерного антитела или гуманизованного антитела; а предпочтительно, антитело представляет собой химерное антитело или гуманизованное антитело.

12. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-11, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент способны специфически связываться с HBsAg, нейтрализовать вирулентность HBV и/или снижать уровень ДНК HBV и/или HBsAg в сыворотке индивидуума.

13. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-12, или его вариабельную область тяжелой цепи и/или вариабельную область легкой цепи.

14. Вектор, который содержит молекулу нуклеиновой кислоты по п.13; а предпочтительно вектор представляет собой вектор для клонирования или вектор для экспрессии.

15. Клетка-хозяин, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты по п.13 или вектор по п.14.

16. Способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-12, где указанный способ включает культивирование клетки-хозяина по п.15 в условиях, которые обеспечивают экспрессию антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и выделение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента из культивируемой культуры клеток-хозяев.

17. Фармацевтическая композиция, которая содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-12 и фармацевтически приемлемый носитель и/или наполнитель.

18. Применение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-12 или фармацевтической композиции по п.17 в целях приготовления лекарственного средства для профилактики и/или лечения HBV-инфекции или заболевания, ассоциированного с HBV-инфекцией (например, гепатита B) у индивидуума (например, у человека), для нейтрализации вирулентности HBV in vitro или у индивидуума (например, у человека), для снижения уровня ДНК HBV и/или HBsAg в сыворотке индивидуума (например, человека), и/или для активации гуморального иммунного ответа против HBV у индивидуума (например, у человека с хронической HBV-инфекцией или у пациента с хроническим гепатитом B).

19. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-12 или фармацевтическая композиция по п.17 для их применения в целях профилактики и/или лечения HBV-инфекции или заболевания, ассоциированного с HBV-инфекцией (например, гепатита B) у индивидуума (например, у человека); для их применения в целях нейтрализации вирулентности HBV in vitro или у индивидуума (например, у человека); для их применения в целях снижения уровня ДНК HBV и/или HBsAg в сыворотке индивидуума (например, человека), и/или для их применения в целях активации гуморального иммунного ответа против HBV у индивидуума (например, у человека с хронической HBV-инфекцией или у пациента с хроническим гепатитом B).

20. Способ, который применяют для профилактики и/или лечения HBV-инфекции или заболевания, ассоциированного с HBV-инфекцией (например, гепатита B) у индивидуума, для нейтрализации вирулентности HBV у индивидуума (например, человека), для снижения уровня ДНК HBV и/или HBsAg в сыворотке у индивидуума (например, у человека) и/или для активации гуморального иммунного ответа против HBV у индивидуума (например, у человека с хронической HBV-инфекцией или у пациента с хроническим гепатитом B), где указанный способ включает введение эффективного количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-12 или фармацевтической композиции по п.17 индивидууму, нуждающемуся в этом.