RU2021125671A

RU2021125671A - Рекомбинантные белки с доменами ccn и слитые белки

Info

Publication number: RU2021125671A
Application number: RU2021125671A
Authority: RU
Inventors: Ховард АТТРАМАДАЛ; Оле Йорген КААСБЁЛЛЬ
Original assignee: Осло Университетссюкехус Хф
Priority date: 2019-03-20
Filing date: 2020-03-20
Publication date: 2023-04-20

Claims

1. Мономерный слитый белок, содержащий:

(i) полипептид, соответствующий по меньшей мере части домена гомологии к повторам тромбоспондина типа 1 (TSP-1) белка семейства CCN;

(ii) мономерный партнер для слияния слитый на N- или С-конце с последовательностью аминокислот по (i); и

(iii) необязательно, пептидный линкер между полипептидом по (i) и мономерным партнером для слияния по (ii),

при этом полипептид по (i) имеет длину от 40 до 60 аминокислот и содержит последовательность аминокислот, выбранную из SEQ ID NOs: 37 или 2-6, или последовательность, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 37 или 2-6, причем все остатки цистеина в указанной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 37 или 2-6, сохранены,

и при этом мономерный партнер для слияния по (ii) и пептидный линкер по (iii) не представляют собой или не содержат домен гомологии со связывающим IGF белком, домен гомологии с повторами фактора фон Виллебранда типа С или домен цистинового узла белка семейства CCN.

2. Слитый белок по п. 1, отличающийся тем, что полипептид по (i) имеет длину от 44 до 57 аминокислот.

3. Слитый белок по п. 1 или 2, отличающийся тем, что полипептид по (i) содержит или состоит из:

(a) последовательности аминокислот, выбранной из SEQ ID NOs: 1 или 8-12; или

(b) последовательности аминокислот, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности с последовательностью, выбранной из SEQ ID NOs: 1 или 8-12; или

(c) части последовательности аминокислот по (а) или (b), при том что указанная часть содержит по меньшей мере последовательность из 44 аминокислот из SEQ ID NO: 37, 6, 2, 3, 4 или 5, соответственно, или последовательность, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 37, 6, 2, 3, 4 или 5, соответственно.

4. Слитый белок по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный полипептид состоит из последовательности аминокислот, выбранной из SEQ ID NO: 37 или 2-6, или последовательности, которая имеет по меньшей мере н80% идентичности с последовательностью, выбранной из SEQ ID NO: 37 или 2-6.

5. Слитый белок по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что пептидный линкер по (iii) содержит не более 50 аминокислот.

6. Слитый белок по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что полипептид по (i) содержит остаток аланина в положении, соответствующем положению 2 указанной последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 37 или 2-6, или SEQ ID NO: 1 или 8-12.

7. Слитый белок по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что последовательность аминокислот по (i) содержит последовательность аминокислот, выбранную из SEQ ID NO: 7, 38, 42-46 или 47-51, или последовательность, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности с указанной последовательностью, причем указанный белок содержит остаток аланина в положении, соответствующем положению 2 указанной последовательности SEQ ID NO: 7, 38, 42-46 или 47-51.

8. Слитый белок по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанный мономерный партнер для слияния выбран из группы, состоящей из сывороточного альбумина, трансферрина и мономерного Fc-фрагмента IgG человека.

9. Слитый белок по п. 8, отличающийся тем, что указанный мономерный Fc-фрагмент IgG человека представляет собой мономерный Fc-фрагмент IgG1, IgG2 или IgG4.

10. Слитый белок по п. 8 или 9, отличающийся тем, что указанный мономерный Fc-фрагмент агликозилирован.

11. Слитый белок по любому из пп. 8-10, отличающийся тем, что указанный мономерный Fc-фрагмент содержит стабилизирующий дисульфидный мостик и/или мутацию, стабилизирующую против действия протеазы.

12. Слитый белок по любому из пп. 8-11, отличающийся тем, что указанный мономерный Fc-фрагмент не обладает иммунной эффекторной функцией.

13. Слитый белок по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что указанный пептидный линкер между последовательностью аминокислот по (i) и указанным мономерным партнером для слияния имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 20-25, 39, 57, 63, 65 или 67, или последовательность аминокислот, которая имеет 80% идентичности с указанной последовательности.

14. Слитый белок по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанный слитый белок имеет последовательность аминокислот, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 84, 85, 88, 89, 97, 98, 102, 103, 106, 107, 110 и 111, или последовательность аминокислот, которая имеет 80% идентичности с указанной последовательностью.

15. Молекула ДНК, кодирующая мономерный слитый белок, как определено в любом из пп. 1-14.

16. Молекула ДНК по п. 15, отличающаяся тем, что указанная молекула дополнительно содержит последовательность нуклеотидов, кодирующую сигнальную последовательность.

17. Молекула ДНК по п. 15 или 16, отличающаяся тем, что указанная молекула содержит последовательность нуклеотидов согласно SEQ ID NO: 34, 35, 36, 86, 87, 90, 91, 99, 100, 104, 105, 108, 109, 112 или 113, или последовательность нуклеотидов, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности с любой вышеуказанной последовательностью.

18. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу ДНК, как определено в любом из пп. 15-17.

19. Клетка-хозяин, содержащая вектор, как определено в п. 18.

20. Слитый белок по любому из пп. 1-14 для применения в терапии.

21. Слитый белок по любому из пп. 1-14 для применения при лечении или предотвращении расстройства путем ингибирования или противодействия клеточной сигнализации и физиологическим функциям клетки, приписываемым белкам семейства CCN с 4 доменами.

22. Слитый белок по любому из пп. 1-14, 20 или 21 для применения при лечении или предотвращении фиброза, или любого состояния, при котором проявляется фиброз.

23. Слитый белок по любому из пп. 1-14 или 20-22 для применения при лечении рака.

24. Белок, имеющий длину 40-60 аминокислот, который содержит или состоит из последовательности аминокислот согласно SEQ ID NO: 7, 38, 42-46, 47-51, или последовательности, которая имеет по меньшей мере 80% идентичности указанным последовательностям, при этом указанный белок содержит остаток аланина в положении, соответствующем положению 2 указанной последовательности SEQ ID NO: 7, 38, 42-46, 47-51, причем все остатки цистеина в указанной последовательности сохранены.