RU2020123383A

RU2020123383A - Мезенхимальные стромальные клетки и способы получения мезенхимальных стромальных клеток из пуповины

Info

Publication number: RU2020123383A
Application number: RU2020123383A
Authority: RU
Inventors: Диего АРДИГО`; Джованни МИЛАЦЦО; Массимо ДОМИНИЧИ; Альба МУРДЖА
Original assignee: КЬЕЗИ ФАРМАЧЕУТИЧИ С.п.А.
Priority date: 2017-12-22
Filing date: 2018-12-21
Publication date: 2022-01-24
Also published as: CN111492051B; MX2020006321A; AU2018393063A1; JP2021507711A; EP3728566A1; BR112020012436A2; CN111492051A; KR20200104300A; JP7286651B2; WO2019123407A1; RU2020123383A3; US20200339947A1; CA3081647A1

Claims

1. Способ получения мезенхимальной стромальной клетки, включающий

(a) выделение стромального вартонова студня, или его части, из пуповины

(b) ферментативную обработку стромального вартонова студня, или его части, с высвобождением за счет этого по меньшей мере одной клетки из стромального вартонова студня, или его части.

2. Способ по п. 1, где за этапом (b) следует этап (c):

(c) размножения указанной по меньшей мере одной клетки.

3. Способ по любому из предшествующих пунктов, где (a) выделение стромального вартонова студня, или его части, включает этап физического удаления сосудов и околососудистой области из пуповины.

4. Способ по п. 3, где физическое удаление сосудов и околососудистой области заключается в отделении сосудов и околососудистой области от пуповины.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где (a) выделение стромального вартонова студня, или его части, также включает этап физического отделения субамниотической стромы от выстилающей оболочки пуповины, например, путем отделения вартонова студня от выстилающей оболочки пуповины, в частности, по меньшей мере от эпителиального слоя выстилающей оболочки пуповины.

6. Способ по п. 5, где физическое отделение вартонова студня от выстилающей оболочки пуповины заключается в соскабливании вартонова студня, предпочтительно, без механического разрезания выстилающей оболочки пуповины.

7. Способ по любому из пп. 3-6, где пуповину сегментируют перед указанным этапом физического удаления сосудов и околососудистой области.

8. Способ по п. 7, где сегментирование производят перпендикулярно к пуповине, и где каждый перпендикулярно отрезанный сегмент предпочтительно имеет длину от примерно 1 до примерно 4 см, предпочтительно от примерно 2 до примерно 3 см, и более предпочтительно примерно 2,5 см.

9. Способ по п. 7 или 8, где сегмент(ы) сосудов удаляют из сегмента(ов) пуповины перед этапом (b).

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где ферментативная обработка на этапе (b) представляет собой обработку ферментом коллагеназой.

11. Способ по п. 10, где ферментативную обработку проводят путем смешивания стромального вартонова студня, или его части, с расщепляющим буфером, содержащим коллагеназу, предпочтительно, с удельной активностью не более 0,5 Ед Вунша/мл, более предпочтительно не более 0,25 Ед Вунша/мл и, в частности, 0,18 Ед Вунша/мл.

12. Способ по любому из предшествующих пунктов, где этапы (a) и (b) совместно проводят в общей сложности в течение менее 3 ч.

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, где на этапе (b) стромальный вартонов студень, или его часть, подвергают ферментативной обработке в присутствии тромбоцитарного лизата (ТЛ), или его производных, предпочтительно человеческого тромбоцитарного лизата (чТЛ), или его производных.

14. Способ по любому из пп. 3-13, где на этапе (c) по меньшей мере одна клетка размножается в ростовой среде, содержащей тромбоцитарный лизат (ТЛ), или его производные, предпочтительно человеческий тромбоцитарный лизат (чТЛ), или его производные.

15. Способ по любому из пп. 3-14, где по меньшей мере одна клетка размножается в ростовой среде, не содержащей какую-либо добавленную сыворотку, в частности, не содержащей эмбриональную бычью сыворотку (ЭБС).

16. Способ по любому из пп. 3-14, где по меньшей мере одна клетка размножается в ростовой среде, содержащей минимальную среду MSCBM CD.

17. Мезенхимальная стромальная клетка (МСК), имеющая следующие характеристики:

(a) клетка экспрессирует APCDD1,

(b) клетка не экспрессирует 3G5.

18. Клетка по п. 17, представляющая собой выделенную клетку.

19. Клетка по п. 17 или 18, происходящая из стромального вартонова студня пуповины.

20. Клетка по любому из пп. 17-19, дополнительно экспрессирующая по меньшей мере один из PPARG и FLVCR2.

21. Клетка по любому из пп. 17-20, представляющая собой человеческую клетку.

22. Клетка по п. 21, где человеческая клетка экспонирует по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере любое сочетание из двух, и наиболее предпочтительно все из человеческих лейкоцитарных антигенов HLA-A, HLA-B и HLA-C.

23. Клетка по п. 21 или 22, не экспонирующая ни один из человеческих лейкоцитарных антигенов HLA-DP, HLA-DR и HLA-DQ.

24. Клетка по любому из пп. 17-23, которая характеризуется значением прямого светорассеяния (FSC), определяемым методом проточной цитометрии при длине волны возбуждения 488 нм, составляющим 55 или менее.

25. Клетка по любому из пп. 17-24, имеющая среднюю площадь поверхности не более 3000 мкм².

26. Клетка по любому из пп. 17-25, которая является мультипотентной.

27. Клетка по любому из пп. 17-26, имеющая низкую теломеразную активность, предпочтительно 10% или менее теломеразной активности относительно теломеразной активности положительного контроля из набора TeloTAGGG Telomerase PCR ELISA PLUS kit (принимаемой за 100%).

28. Клетка, характеризующаяся отсутствием поддающейся обнаружению экспрессии теломеразы и/или отсутствием поддающейся обнаружению активности теломеразы.

29. Клетка по любому из пп. 17-27, способная дифференцироваться в клетки различных типов, предпочтительно имеющая по меньшей мере все из следующих потенциалов дифференциации:

(a) адипогенный;

(b) хондрогенный;

(c) остеогенный.

30. Клетка по любому из пп. 17-28, представляющая собой мезенхимальную стволовую клетку.

31. Клетка по любому из пп. 17-29, получаемая способом по любому из пп. 1-16.

32. Популяция клеток, содержащая по меньшей мере одну клетку по любому из пп. 17-30.

33. Популяция по п. 32, представляющая собой выделенную популяцию клеток.

34. Популяция по п. 32 или 33, где все клетки, содержащиеся в клеточной популяции, являются аутологичными по отношению друг к другу.

35. Популяция по любому из пп. 32-34, в которой по меньшей мере 70% от общего количества клеток представляют собой клетки по любому из пп. 17-30.

36. Популяция по любому из пп. 32-35, характеризующаяся средним значением FSC, составляющим 55 или менее.

37. Популяция по любому из пп. 32-36, экспрессирующая APCDD1.

38. Популяция по любому из пп. 32-37, где средняя площадь поверхности клеток составляет 1400-2000 мкм², предпочтительно 1500-1900 мкм², более предпочтительно 1600-1800 мкм² и наиболее предпочтительно примерно 1700 мкм².

39. Популяция по любому из пп. 32-38, в которой по меньшей мере 70% клеток (от общего количества клеток) являются жизнеспособными.

40. Популяция по любому из пп. 32-39, не содержащая никакие околососудистые клетки и/или не содержащая никакие эпителиальные клетки.

41. Популяция по любому из пп. 32-40, получаемая способом по любому из пп. 3-16.

42. Популяция по любому из пп. 32-41, содержащая только человеческие клетки.

43. Способ по любому одному или более из пп. 1-16, где клетка, получаемая данным способом, представляет собой клетку по любому одному или более из пп. 17-29.

44. Клетка, получаемая способом по любому из пп. 1-16.

45. Клеточная популяция, получаемая способом по любому из пп. 3-16.

46. Клеточная популяция по любому из пп. 32-42 или 45, представляющая собой замороженную клеточную популяцию.

47. Клеточная популяция по п. 45, представляющая собой клеточный банк, такой как первичный клеточный банк (ПКБ) или вторичный клеточный банк (ВКБ).

48. Клеточная популяция по п. 46, содержащаяся во множестве аликвот в отдельных контейнерах, например, флаконах.