RU2018143655A - Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк - Google Patents

Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк Download PDF

Info

Publication number
RU2018143655A
RU2018143655A RU2018143655A RU2018143655A RU2018143655A RU 2018143655 A RU2018143655 A RU 2018143655A RU 2018143655 A RU2018143655 A RU 2018143655A RU 2018143655 A RU2018143655 A RU 2018143655A RU 2018143655 A RU2018143655 A RU 2018143655A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
human
mouse
human animal
locus
paragraphs
Prior art date
Application number
RU2018143655A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2745563C2 (ru
RU2018143655A3 (ru
Inventor
Вера ВОРОНИНА
Линн МАКДОНАЛД
Марин ПРИССЕТТ
Ка-Ман Венус ЛАЙ
Ашок БАДИТ
Эндрю Дж. МЕРФИ
Густаво ДРОГЕТТ
Дэвид ФРЭНДЭВЕЙ
Брайан Замбрович
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалс, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалс, Инк.
Publication of RU2018143655A publication Critical patent/RU2018143655A/ru
Publication of RU2018143655A3 publication Critical patent/RU2018143655A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2745563C2 publication Critical patent/RU2745563C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6489—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0276—Knock-out vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • C12Y304/24046—Adamalysin (3.4.24.46)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/05—Animals modified by non-integrating nucleic acids, e.g. antisense, RNAi, morpholino, episomal vector, for non-therapeutic purpose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/12—Animals modified by administration of exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/15—Humanized animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/15—Animals comprising multiple alterations of the genome, by transgenesis or homologous recombination, e.g. obtained by cross-breeding
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/20—Animal model comprising regulated expression system
    • A01K2217/206—Animal model comprising tissue-specific expression system, e.g. tissue specific expression of transgene, of Cre recombinase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/01—Animal expressing industrially exogenous proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/02—Animal zootechnically ameliorated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C12N2015/8518—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic expressing industrially exogenous proteins, e.g. for pharmaceutical use, human insulin, blood factors, immunoglobulins, pseudoparticles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPRs]

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Information Retrieval, Db Structures And Fs Structures Therefor (AREA)

Claims (135)

1. Способ получения антигенсвязывающих белков против представляющего интерес чужеродного антигена, включающий:
(а) создание генетически модифицированного отличного от человека животного с пониженной толерантностью к представляющему интерес чужеродному антигену, включающее:
(i) введение в эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии или плюрипотентную клетку отличного от человека животного, которая не является эмбрионом на одноклеточной стадии:
(I) белка Cas9;
(II) первой направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой первой направляющей РНК в геномном локусе-мишени, причем геномный локус-мишень содержит весь или часть гена, кодирующего аутоантиген, гомологичный или обладающий общим представляющим интерес эпитопом с представляющим интерес чужеродным антигеном; и
(III) второй направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК в геномном локусе-мишени;
причем геномный локус-мишень модифицируется в паре соответствующих первой и второй хромосом для получения модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии или модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного с биаллельной модификацией, причем экспрессия аутоантигена устраняется; и
(ii) получение генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного из модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии или модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного, причем геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом у генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного таким образом, что экспрессия аутоантигена устранена;
(b) иммунизацию генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного, полученного на стадии (а) представляющим интерес чужеродным антигеном; и
(с) поддержание генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного в условиях, достаточных для инициирования иммунного ответа на представляющий интерес чужеродный антиген, причем генетически модифицированное F0-поколение отличного от человека животного продуцирует антигенсвязывающие белки против представляющего интерес чужеродного антигена.
2. Способ по п. 1, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного, и продуцирование генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного на стадии (а)(ii) включает:
(I) введение модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного в эмбрион-хозяин; и
(II) имплантацию эмбриона-хозяина суррогатной матери для получения генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного, у которого геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом так, что экспрессия аутоантигена устранена.
3. Способ по п. 2, в котором плюрипотентная клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ЭС) клетку.
4. Способ по п. 1, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии, и продуцирование генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного на стадии (а)(ii) включает имплантацию модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии суррогатной матери для получения генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного, у которого геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом так, что экспрессия аутоантигена устранена.
5. Способ по любому из пп. 1-4, дополнительно включающий получение гибридомы из В-клеток, выделенных из иммунизированного генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного.
6. Способ по любому из пп. 1-5, дополнительно включающий получение от иммунизированного генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного первой последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина одного из антигенсвязывающих белков против представляющего интерес чужеродного антигена и/или второй последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина одного из антигенсвязывающих белков против представляющего интерес чужеродного антигена.
7. Способ по п. 6, в котором последовательность первой нуклеиновой кислоты и/или последовательность второй нуклеиновой кислоты получают из лимфоцита генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного или из гибридомы, полученной из лимфоцитов.
8. Способ по п. 6 или 7, в котором генетически модифицированное F0-поколение отличного от человека животного, содержит гуманизированный локус иммуноглобулина, и причем первая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, а вторая последовательность нуклеиновой кислоты кодирует вариабельный домен легкой цепи иммуноглобулина человека.
9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором антигенсвязывающие белки, продуцируемые генетически модифицированным F0-поколением отличного от человека животного, против представляющего интерес чужеродного антигена имеют более высокий титр, чем антигенсвязывающие белки, продуцируемые контрольным отличным от человека животным, которое является диким типом в геномном локусе-мишени, после иммунизации контрольного отличного от человека животного представляющего интерес чужеродным антигеном.
10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором более разнообразный генетический репертуар антигенсвязывающих белков против представляющего интерес чужеродного антигена продуцируется генетически модифицированным F0-поколением отличного от человека животного после иммунизации генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного представляющим интерес чужеродным антигеном по сравнению с антигенсвязывающими белками, продуцируемыми контрольным отличным от человека животным, которое является диким типом в указанном геномном локусе-мишени, после иммунизации контрольного отличного от человека животного представляющим интерес чужеродным антигеном.
11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором антигенсвязывающие белки, продуцируемые генетически модифицированным F0-поколением отличного от человека животного, против представляющего интерес чужеродного антигена используют большее разнообразие сегментов тяжелой цепи V гена и/или сегментов легкой цепи V гена по сравнению с антигенсвязывающими белками, продуцируемыми контрольным отличным от человеком животным, которое является диким типом в геномном локусе-мишени, после иммунизации контрольного отличного от человека животного представляющим интерес чужеродным антигеном.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором некоторые из антигенсвязывающих белков, продуцируемых генетически модифицированным F0-поколением отличного от человека животного, против представляющего интерес чужеродного антигена, перекрестно реагируют с аутоантигеном.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, расположена в 5' положении относительно последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК в геномном локусе-мишени, и
в котором стадия (a)(i) дополнительно включает в себя проведение анализа удерживания для определения того, что число копий равно 2 для участка в 5' положении и в пределах около 1 т.п.о. последовательности, распознаваемой первой направляющей РНК, и/или для участка в 3' положении и в пределах около 1 т.п.о. последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК.
14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором представляющий интерес чужеродный антиген представляет собой ортолог аутоантигена.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором представляющий интерес чужеродный антиген содержит весь или часть белка человека.
16. Способ по любому из пп. 1-15, в котором геномный локус-мишень модифицируется так, чтобы содержать вставку одного или более нуклеотидов, делецию одного или более нуклеотидов, или замену одного или более нуклеотидов.
17. Способ по п. 16, в котором геномный локус-мишень модифицируется так, чтобы содержать делецию одного или более нуклеотидов.
18. Способ по п. 17, в котором делеция является точной делецией без случайных вставок и делеций (инделей).
19. Способ по любому из пп. 1-18, в котором последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеотидов от старт-кодона, и последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500, или 1000 нуклеотидов от стоп-кодона.
20. Способ по любому из пп. 1-18, в котором последовательности, распознаваемые первой и второй направляющими РНК, различны, и каждая из последовательностей, распознаваемых первой и второй направляющими РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеотидов от старт-кодона.
21. Способ по любому из пп. 1-20, в котором геномный локус-мишень модифицируют так, чтобы он содержал биаллельную делецию размером между от около 0,1 т.п.о. до около 200 т.п.о.
22. Способ по любому из пп. 1-21, в котором модификация содержит биаллельную делецию всего или части гена, кодирующего аутоантиген.
23. Способ по любому из пп. 1-22, в котором модификация содержит биаллельное разрушение старт-кодона гена, кодирующего аутоантиген.
24. Способ по любому из пп. 1-23, в котором стадия введения (a)(i) дополнительно включает введение в плюрипотентную клетку отличного от человека животного или эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии:
(iv) третьей направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой третьей направляющей РНК в геномном локусе-мишени; и/или
(v) четвертой направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой четвертой направляющей РНК в геномном локусе-мишени;
25. Способ по любому из пп. 1-24, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного, и все из белка Cas9, первой направляющей РНК, и второй направляющей РНК вводят в плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного в форме ДНК.
26. Способ по любому из пп. 1-25, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного, и все из белка Cas9, первой направляющей РНК, и второй направляющей РНК вводят в плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного путем электропорации или нуклеофекции.
27. Способ по любому из пп. 1-24, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии, и все из белка Cas9, первой направляющей РНК, и второй направляющей РНК вводят в эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии в форме РНК.
28. Способ по любому из пп. 1-24 и п. 27, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии, и все из белка Cas9, первой направляющей РНК, и второй направляющей РНК вводят в эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии путем пронуклеарной инъекции или цитоплазматической инъекции.
29. Способ по любому из пп. 1-28, в котором на стадии (a)(i) не вводится экзогенная матрица для репарации.
30. Способ по любому из пп. 1-28, в котором стадия введения (a)(i) дополнительно включает введение в плюрипотентную клетку отличного от человека животного или эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии экзогенной матрицы для репарации, содержащий 5'-плечо гомологии, которое гибридизуется с 5' последовательностью-мишенью в геномном локусе-мишени, и 3'-плечо гомологии, которое гибридизуется с 3' последовательностью-мишенью в геномном локусе-мишени, при условии, что если клетка на стадии (a)(i) представляет собой эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии, экзогенная матрица для репарации составляет не более чем около 5 т.п.о. в длину.
31. Способ по п. 30, в котором экзогенная матрица для репарации дополнительно содержит вставку нуклеиновой кислоты, фланкированную 5'-плечом гомологии и 3'-плечом гомологии.
32. Способ по п. 31, в котором вставка нуклеиновой кислоты гомологична или ортологична геномному локусу-мишени.
33. Способ по любому из пп. 30-32, в котором длина экзогенной матрицы для репарации находится в промежутке от около 50 нуклеотидов до около 1 т.п.о.
34. Способ по п. 33, в котором длина экзогенной матрицы для репарации находится в промежутке от около 80 нуклеотидов до около 200 нуклеотидов.
35. Способ по любому из пп. 30-34, в котором экзогенная матрица для репарации представляет собой одноцепочечный олигодезоксинуклеотид.
36. Способ по любому из пп. 30-32, в котором клетка на стадии (a)(i) представляет собой плюрипотентную клетку отличного от человека животного, и в котором:
(a) экзогенная матрица для репараци представляет собой большой нацеливающий вектор (LTVEC), который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.о.; или
(b) экзогенная матрица для репараци представляет собой LTVEC, причем общая сумма 5'- и 3'-плечей гомологии LTVEC имеет длину по меньшей мере 10 т.п.о.
37. Способ по любому из пп. 30-36, в котором геномный локус-мишень модифицируется так, чтобы содержать делецию одного или более нуклеотидов, и
в котором последовательность удаленной нуклеиновой кислоты состоит из последовательности нуклеиновой кислоты между 5' и 3' последовательностями-мишенями.
38. Способ по любому из пп. 30-37, в котором экзогенная матрица для репарации содержит вставку нуклеиновой кислоты, фланкированную 5'-плечом гомологии и 3'-плечом гомологии,
в котором вставка нуклеиновой кислоты гомологична или ортологична удаленной последовательности нуклеиновой кислоты,
в котором геномный локус-мишень модифицируется так, чтобы содержать делецию одного или более нуклеотидов, и
в котором вставка нуклеиновой кислоты заменяет удаленную последовательность нуклеиновой кислоты.
39. Способ по любому из пп. 1-38, в котором отличное от человека животное содержит гуманизированный локус иммуноглобулина.
40. Способ по любому из пп. 1-39, в котором отличное от человека животное представляет собой грызуна.
41. Способ по п. 40, в котором грызун представляет собой мышь.
42. Способ по п. 41, в котором линия мыши содержит линию BALB/c.
43. Способ по п. 42, в котором линия мышей содержит линии BALB/c, C57BL/6 и 129.
44. Способ по п. 43, в котором линия мышей представляет собой 50% BALB/c, 25% C57BL/6 и 25% 129.
45. Способ по любому из пп. 41-44, в котором гаплотип МНС мыши представляет собой MHCb/d.
46. Способ по любому из пп. 41-45, в котором мышь содержит в своей зародышевой линии неперестроенные генные сегменты вариабельного участка человека, вставленные в эндогенный локус иммуноглобулина мыши.
47. Способ по п. 46, в котором неперестроенные генные сегменты вариабельного участка человека являются генными сегментами тяжелой цепи, а локус иммуноглобулина мыши является локусом тяжелой цепи, и/или в котором неперестроенные генные сегменты вариабельного участка человека являются сегментами легкой цепи каппа или лямбда, и локус иммуноглобулина мыши является локусом легкой цепи.
48. Способ по п. 46 или 47, в котором мышь содержит в своих зародышевых линиях неперестроенные генные сегменты вариабельного участка человека, функционально связанные с геном константного участка мыши, причем мышь не имеет гена константного участка человека, и причем ген константного участка мыши находится в эндогенном локусе иммуноглобулина мыши.
49. Способ по любому из пп. 46-48, в котором мышь содержит:
(a) гибридный локус тяжелой цепи, содержащий вставку генных сегментов V, D и J тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты V, D и J тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связаны с геном тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, причем ген тяжелой цепи иммуноглобулина мыши находится в эндогенном локусе иммуноглобулина мыши; и
(b) гибридный локус легкой цепи, содержащий вставку генных сегментов V и J легкой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты V и J человека функционально связаны с последовательностью гена константного участка легкой цепи иммуноглобулина мыши;
причем (а) перестраивается с образованием гибридной последовательности тяжелой цепи, содержащей вариабельный участок человека, функционально связанный с константным участком мыши, и (b) перестраивается с образованием гибридной последовательности легкой цепи, содержащей вариабельный участок человека, функционально связанный с константным участком мыши, и причем мышь неспособна образовывать антитело, которое содержит вариабельный участок человека и константный участок человека.
50. Способ по любому из пп. 41-48, в котором мышь содержит в своей зародышевой линии гуманизированный вариабельный локус легкой цепи иммуноглобулина, содержащий не более одной или не более двух перестроенных последовательностей V/J легкой цепи человека, функционально связанных с константным участком легкой цепи мыши, и при этом мышь дополнительно содержит гуманизированный вариабельный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере один неперестроенный V человека, по меньшей мере один неперестроенный D человека, и по меньшей мере один неперестроенный J сегмент человека, функционально связанный с геном константного участка тяжелой цепи мыши.
51. Способ по п. 50, в котором мышь содержит гуманизированный вариабельный локус тяжелой цепи иммуноглобулина и гуманизированный вариабельный локус легкой цепи иммуноглобулина, причем мышь экспрессирует одну легкую цепь.
52. Способ по п. 51, в котором мышь содержит:
(a) один перестроенный вариабельный участок легкой цепи иммуноглобулина человека (VL/JL), который кодирует VL домен легкой цепи иммуноглобулина человека, причем один перестроенный участок VL/JL человека выбирается из генного сегмента VK1-39/JK5 человека или генного сегмента VK3-20/JK1 человека; и
(b) замещение вариабельных генных сегментов эндогенной тяжелой цепи (VH) одним или более генными сегментами VH человека, причем генные сегменты VH человека функционально связаны с геном константного участка эндогенной тяжелой цепи (CH), и генные сегменты VH человека способны перестраиваться и формировать ген химерной тяжелой цепи человека/мыши.
53. Способ по п. 51, в котором мышь экспрессирует популяцию антител, и зародышевая линия мыши содержит только один ген вариабельного участка легкой цепи каппа иммуноглобулина, который представляет собой перестроенный ген вариабельного участка легкой цепи каппа зародышевой линии человека,
причем мышь является либо гетерозиготной по указанному одному гену вариабельного участка легкой цепи каппа иммуноглобулина в том, что она содержит только одну копию, либо гомозиготна по одному гену вариабельного участка легкой цепи каппа иммуноглобулина в том, что она содержит две копии, причем мышь характеризуется активным созреванием аффинности так, что:
(i) каждая легкая цепь каппа иммуноглобулина популяции содержит вариабельный домен легкой цепи, который кодируется перестроенным геном вариабельного участка легкой цепи каппа зародышевой линии человека или его соматически мутированным вариантом;
(ii) популяция содержит антитела, содержащие легкие цепи каппа иммуноглобулина, вариабельный домен легкой цепи которых кодируется перестроенным геном вариабельного участка легкой цепи каппа зародышевой линии человека, и антитела, содержащие легкие цепи каппа иммуноглобулина, вариабельный домен легкой цепи которых кодируется его соматически мутированными вариантами; и
(iii) мышь генерирует разнообразную коллекцию соматически мутированных тяжелых цепей с высокой аффинностью, которые успешно спариваются с легкими цепями каппа иммуноглобулина с образованием антител популяции.
54. Способ по п. 51, в котором мышь является гетерозиготной или гомозиготной по своей зародышевой линии для:
(a) вставки в эндогенный локус вариабельного участка легкой цепи иммуноглобулина к мыши перестроенной VK/JK последовательности, содержащей:
(i) одну последовательность VK зародышевой линии человека, причем указанная одна последовательность VK зародышевой линии человека присутствует в SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149; и
(ii) одну последовательность JK зародышевой линии человека, причем перестроенная последовательность VK/JK функционально связана с эндогенным константным участком к мыши; и
(b) вставки в эндогенный локус вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина мыши множества генных сегментов вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связаны с константным участком эндогенной тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, и генные сегменты вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека способны перестраиваться и формировать перестроенный ген тяжелой цепи химерного иммуноглобулина человека/мыши.
55. Способ по любому из пп. 46-54, в котором мышь содержит модификацию локуса тяжелой цепи иммуноглобулина, причем модификация уменьшает или устраняет эндогенную функцию ADAM6,
причем мышь содержит эктопическую последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ADAM6 мыши, его ортолог, его гомолог, или его фрагмент, причем белок ADAM6, его ортолог, его гомолог или его фрагмент, функционируют у самца мыши, и
причем эктопическая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая белок ADAM6 мыши, его ортолог, его гомолог или его фрагмент, присутствует в локусе вариабельного участка тяжелой цепи человека.
56. Способ по любому из пп. 1-55, в котором отличное от человека животное представляет собой мышь, которая, по меньшей мере, частично получена из линии BALB/c, и мышь содержит гуманизированный локус иммуноглобулина,
причем представляющий интерес чужеродный антиген представляет собой весь или часть человеческого белка, который ортологичен аутоантигену,
причем последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеотидов от старт-кодона, и последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500, или 1000 нуклеотидов от стоп-кодона, и
причем модификация включает биаллельную делецию всего или части гена, кодирующего аутоантиген, в результате чего экспрессия аутоантигена устранена.
57. Способ по любому из пп. 1-55, в котором отличное от человека животное представляет собой мышь, которая, по меньшей мере, частично получена из линии BALB/c, и мышь содержит гуманизированный локус иммуноглобулина,
причем представляющий интерес чужеродный антиген представляет собой весь или часть человеческого белка, который ортологичен аутоантигену,
причем последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, и последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500, или 1000 нуклеотидов от стоп-кодона, и
причем модификация содержит биаллельное разрушение старт кодона для гена, кодирующего аутоантиген, в результате чего экспрессия аутоантигена устранена.
58. Способ по п. 56 или 57, в котором мышь содержит:
(a) последовательность эктопической нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ADAM6 мыши, его ортолог, его гомолог, или его фрагмент, причем белок ADAM6, его ортолог, его гомолог или его фрагмент, функционируют у самца мыши;
(b) гибридный локус тяжелой цепи, содержащий вставку генных сегментов V, D и J тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты V, D и J тяжелой цепи иммуноглобулина человека, функционально связаны с геном тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, причем ген тяжелой цепи иммуноглобулина мыши находится в эндогенном локусе иммуноглобулина мыши; и
(c) гибридный локус легкой цепи, содержащий вставку генных сегментов V и J легкой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты V и J человека, функционально связаны с последовательностью гена константного участка легкой цепи иммуноглобулина мыши;
причем (b) перестраивается с образованием гибридной последовательности тяжелой цепи, содержащей вариабельный участок человека, функционально связанный с константным участком мыши, и (с) перестраивается с образованием гибридной последовательности легкой цепи, содержащей вариабельный участок человека, функционально связанный с константным участком мыши, и причем мышь неспособна образовывать антитело, которое содержит вариабельный участок человека и константный участок человека.
59. Способ по п. 56 или 57, в котором мышь является гетерозиготной или гомозиготной в своей зародышевой линии по:
(a) последовательности эктопической нуклеиновой кислоты, кодирующей белок ADAM6 мыши, его ортолог, его гомолог, или его фрагмент, причем белок ADAM6, его ортолог, его гомолог или его фрагмент, функционируют у самца мыши;
(b) вставке в эндогенный локус вариабельного участка легкой цепи иммуноглобулина к мыши перестроенной VK/JK последовательности, содержащей:
(i) одну последовательность VK зародышевой линии человека, причем указанная одна последовательность VK зародышевой линии человека присутствует в SEQ ID NO: 148 или SEQ ID NO: 149; и
(ii) одну последовательность JK зародышевой линии человека, причем перестроенная последовательность VK/JK функционально связана с эндогенным константным участком к мыши; и
(с) вставку в эндогенный локус вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина мыши множества генных сегментов вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека, причем генные сегменты вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека функционально связаны с константным участком эндогенной тяжелой цепи иммуноглобулина мыши, и генные сегменты вариабельного участка тяжелой цепи иммуноглобулина человека способны перестраиваться и формировать перестроенный ген тяжелой цепи химерного иммуноглобулина человека/мыши.
60. Способ по любому из пп. 1-59, в котором плюрипотентная клетка отличного от человека животного представляет собой гибридную клетку, или эмбрион отличного от человека млекопитающего на одноклеточной стадии представляет собой гибридный эмбрион на одноклеточной стадии, и причем способ дополнительно включает:
(а') сравнение последовательности пары соответствующих первой и второй хромосом в геномном локусе-мишени, и выбор участка-мишени в пределах геномного локуса-мишени перед стадией приведения в контакт (а) на основе участка-мишени, имеющего более высокий процент идентичности между парой соответствующих первой и второй хромосом относительно всего или части остатка геномного локуса-мишени, причем участок-мишень содержит:
последовательность, распознаваемую первой направляющей РНК, и по меньшей мере 10 п.о., 20 п.о., 30 п.о., 40 п.о., 50 п.о., 100 п.о., 200 п.о., 300 п.о., 400 п.о., 500 п.о., 600 п.о., 700 п.о., 800 п.о., 900 п.о., 1 т.п.о., 2 т.п.о., 3 т.п.о., 4 т.п.о., 5 т.п.о., 6, т.п.о., 7 т.п.о., 8 т.п.о., 9 т.п.о. или 10 т.п.о. фланкирующей последовательности на 5 'стороне, 3' стороне или на каждой стороне последовательности, распознаваемой первой направляющей РНК, и/или
последовательность, распознаваемую второй направляющей РНК, и по меньшей мере 10 п.о., 20 п.о., 30 п.о., 40 п.о., 50 п.о., 100 п.о., 200 п.о., 300 п.о., 400 п.о., 500 п.о., 600 п.о., 700 п.о., 800 п.о., 900 п.о., 1 т.п.о., 2 т.п.о., 3 т.п.о., 4 т.п.о., 5 т.п.о., 6, т.п.о., 7 т.п.о., 8 т.п.о., 9 т.п.о. или 10 т.п.о. фланкирующей последовательности на 5 'стороне, 3' стороне или на каждой стороне последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК.
61. Способ по п. 60, в котором участок-мишень имеет более высокий процент идентичности последовательности между парой соответствующих первой и второй относительно остальной части геномного локуса-мишени.
62. Способ по п. 61, в котором участок-мишень имеет по меньшей мере 99,9% идентичности последовательности между парой соответствующих первой и второй хромосом, а остальная часть целевого геномного локуса-мишени имеет не более чем 99,8% идентичности последовательности между парой соответствующих первой и второй хромосом.
63. Способ создания генетически модифицированного отличного от человека животного с пониженной толерантностью к представляющему интерес чужеродному антигену, включающий:
(а) введение в эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии или плюрипотентную клетку отличного от человека животного, которая не является эмбрионом на одноклеточной стадии:
(i) белка Cas9;
(ii) первой направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой первой направляющей РНК в геномном локусе-мишени, причем геномный локус-мишень содержит весь или часть гена, кодирующего аутоантиген, гомологичный или обладающий общим представляющим интерес эпитопом с представляющим интерес чужеродным антигеном; и
(iii) второй направляющей РНК, которая гибридизуется с последовательностью, распознаваемой второй направляющей РНК в геномном локусе-мишени;
причем геномный локус-мишень модифицируется в паре соответствующих первой и второй хромосом для получения модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии или модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного с биаллельной модификацией, причем экспрессия аутоантигена устраняется; и
(b) получение генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного из модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии или модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного, причем геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом у генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного так, что экспрессия аутоантигена устранена.
64. Способ по п. 63, в котором клетка на стадии (а) представляет собой плюрипотентную стволовую клетку отличного от человека животного, и продуцирование генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного на стадии (b) включает:
(I) введение модифицированной плюрипотентной клетки отличного от человека животного в эмбрион-хозяин; и
(II) имплантацию эмбриона-хозяина суррогатной матери для получения генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного, у которого геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом так, что экспрессия аутоантигена устранена.
65. Способ по п. 64, в котором плюрипотентная клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ЭС) клетку.
66. Способ по п. 63, в котором клетка на стадии (а) представляет собой эмбрион отличного от человека животного на одноклеточной стадии, и продуцирование генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного на стадии (b) включает имплантацию модифицированного эмбриона отличного от человека животного на одноклеточной стадии суррогатной матери для получения генетически модифицированного F0-поколения отличного от человека животного, у которого геномный локус-мишень модифицирован в паре соответствующих первой и второй хромосом, так что экспрессия аутоантигена устранена.
67. Способ по любому из пп. 63-66, в котором представляющий интерес чужеродный антиген представляет собой ортолог аутоантигена.
68. Способ по любому из пп. 63-67, в котором последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеотидов от старт-кодона, и последовательность, распознаваемая второй направляющей РНК, содержит стоп-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500, или 1000 нуклеотидов от стоп-кодона.
69. Способ по любому из пп. 63-67, в котором последовательности, распознаваемые первой и второй направляющими РНК, различны, и каждая из последовательностей, распознаваемых первой и второй направляющими РНК, содержит старт-кодон для гена, кодирующего аутоантиген, или находится в пределах около 10, 20, 30, 40, 50, 100, 200, 300, 400, 500 или 1000 нуклеотидов от старт-кодона.
70. Способ по любому из пп. 63-69, в котором последовательность, распознаваемая первой направляющей РНК, расположена в 5' положении относительно последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК в геномном локусе-мишени,
и в котором стадия (a)(i) дополнительно включает в себя проведение анализа удерживания для определения того, что число копий равно 2 для участка в 5' положении и в пределах около 1 т.п.о. последовательности, распознаваемой первой направляющей РНК, и/или для участка в 3' положении и в пределах около 1 т.п.о. последовательности, распознаваемой второй направляющей РНК.
71. Способ по любому из пп. 63-70, в котором модификация содержит биаллельную делецию всего или части гена, кодирующего аутоантиген.
72. Способ по любому из пп. 63-71, в котором модификация содержит биаллельное разрушение всего или части гена, кодирующего аутоантиген.
73. Способ по любому из пп. 63-72, в котором отличное от человека животное представляет собой мышь.
RU2018143655A 2016-05-20 2017-05-19 Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк RU2745563C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662339472P 2016-05-20 2016-05-20
US62/339,472 2016-05-20
US201662368604P 2016-07-29 2016-07-29
US62/368,604 2016-07-29
PCT/US2017/033648 WO2017201476A1 (en) 2016-05-20 2017-05-19 Methods for breaking immunological tolerance using multiple guide rnas

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021106817A Division RU2021106817A (ru) 2016-05-20 2017-05-19 Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018143655A true RU2018143655A (ru) 2020-06-22
RU2018143655A3 RU2018143655A3 (ru) 2020-10-07
RU2745563C2 RU2745563C2 (ru) 2021-03-29

Family

ID=59055266

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021106817A RU2021106817A (ru) 2016-05-20 2017-05-19 Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк
RU2018143655A RU2745563C2 (ru) 2016-05-20 2017-05-19 Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021106817A RU2021106817A (ru) 2016-05-20 2017-05-19 Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20170332610A1 (ru)
EP (2) EP4368637A2 (ru)
JP (2) JP7324583B2 (ru)
KR (3) KR102661748B1 (ru)
CN (2) CN113831407B (ru)
AU (2) AU2017268458B2 (ru)
BR (1) BR112018073750A2 (ru)
CA (1) CA3022997C (ru)
IL (1) IL262888A (ru)
MX (1) MX2018014172A (ru)
NZ (1) NZ747857A (ru)
RU (2) RU2021106817A (ru)
SG (2) SG11201809552SA (ru)
WO (1) WO2017201476A1 (ru)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013066438A2 (en) 2011-07-22 2013-05-10 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9388430B2 (en) 2013-09-06 2016-07-12 President And Fellows Of Harvard College Cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
US9340800B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College Extended DNA-sensing GRNAS
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting caspase-9 point mutations
CA2956224A1 (en) 2014-07-30 2016-02-11 President And Fellows Of Harvard College Cas9 proteins including ligand-dependent inteins
NZ731962A (en) 2014-11-21 2022-07-01 Regeneron Pharma Methods and compositions for targeted genetic modification using paired guide rnas
EP4269577A3 (en) 2015-10-23 2024-01-17 President and Fellows of Harvard College Nucleobase editors and uses thereof
IL264565B1 (en) 2016-08-03 2024-03-01 Harvard College Adenosine nuclear base editors and their uses
EP3497214B1 (en) 2016-08-09 2023-06-28 President and Fellows of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
WO2018030208A1 (ja) * 2016-08-10 2018-02-15 国立大学法人東京医科歯科大学 遺伝子ノックイン細胞の作製方法
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
SG11201903089RA (en) 2016-10-14 2019-05-30 Harvard College Aav delivery of nucleobase editors
US10745677B2 (en) 2016-12-23 2020-08-18 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection
WO2018165504A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11542496B2 (en) 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
EP3601562A1 (en) 2017-03-23 2020-02-05 President and Fellows of Harvard College Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins
US11560566B2 (en) 2017-05-12 2023-01-24 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation
EP3658573A1 (en) 2017-07-28 2020-06-03 President and Fellows of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (pace)
WO2019139645A2 (en) 2017-08-30 2019-07-18 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising gam
WO2019079347A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 The Broad Institute, Inc. USES OF BASIC EDITORS ADENOSINE
WO2019173615A1 (en) * 2018-03-07 2019-09-12 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Sphingolipid-metabolizing proteins enhance the efficiency of gene editing in cells
MX2020009989A (es) 2018-03-24 2020-10-14 Regeneron Pharma Animales no humanos geneticamente modificados para generar anticuerpos terapeuticos contra complejos peptidos-mhc, metodos de elaboracion y usos de estos.
EP3772926A1 (en) 2018-03-26 2021-02-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Humanized rodents for testing therapeutic agents
WO2019204531A1 (en) * 2018-04-18 2019-10-24 Ligandal, Inc. Methods and compositions for genome editing
EP3794130A4 (en) 2018-05-16 2022-07-27 Synthego Corporation METHODS AND SYSTEMS FOR DESIGN AND USE OF GUIDE RNA
BR112020026246A2 (pt) * 2018-06-26 2021-04-20 The Broad Institute Inc. composições, sistemas e métodos de amplificação com base em nickase dupla crispr
EP3813871A4 (en) 2018-06-29 2022-10-12 Icahn School of Medicine at Mount Sinai SPHINGOLIPID METABOLIZING PROTEINS ENCODING FOR ANC80
JP2022521358A (ja) 2019-02-18 2022-04-06 バイオサイトジェン ファーマシューティカルズ （ベイジン） カンパニー リミテッド ヒト化免疫グロブリン遺伝子座を有する遺伝子改変非ヒト動物
WO2020191246A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
US20220403356A1 (en) * 2019-07-12 2022-12-22 Duke University 3' utr crispr-dcas 13 engineering system and methods of using same
DK3785536T3 (da) * 2019-08-28 2022-03-28 Trianni Inc Adam6-knockin-mus
AU2020395122A1 (en) 2019-12-02 2022-06-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Peptide-MHC II protein constructs and uses thereof
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
GB2614813A (en) 2020-05-08 2023-07-19 Harvard College Methods and compositions for simultaneous editing of both strands of a target double-stranded nucleotide sequence
KR20230018439A (ko) 2020-06-02 2023-02-07 바이오사이토젠 파마슈티컬스 (베이징) 컴퍼니 리미티드 공동 경쇄 면역글로불린 좌위를 갖는 유전자 변형 비인간 동물
JP7419168B2 (ja) * 2020-06-10 2024-01-22 株式会社東芝 改変型ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゼースのポリペプチド、それをコードするポリヌクレオチド、導入キャリア、キット、細胞のゲノムに目的配列を組込む方法及び細胞製造方法
WO2023077053A2 (en) * 2021-10-28 2023-05-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5523226A (en) * 1993-05-14 1996-06-04 Biotechnology Research And Development Corp. Transgenic swine compositions and methods
US7119248B1 (en) * 1994-04-12 2006-10-10 Miltenyi Biotec Gmbh Antibodies against epitopes with homology to self antigens, methods of preparation and applications thereof
WO1999005266A2 (en) 1997-07-26 1999-02-04 Wisconsin Alumni Research Foundation Trans-species nuclear transfer
PT1292289E (pt) 2000-05-31 2008-04-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Composições e métodos para tratar doença neoplásica utilizando sensibilizadores de quimioterapia e radiação
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AUPR451401A0 (en) 2001-04-20 2001-05-24 Monash University A method of nuclear transfer
US7612250B2 (en) 2002-07-29 2009-11-03 Trustees Of Tufts College Nuclear transfer embryo formation method
KR20060123403A (ko) 2003-12-01 2006-12-01 쿠도스 파마슈티칼스 리미티드 암 치료를 위한 ｄｎａ 손상 수복 억제제
CA2583750C (en) 2004-10-19 2015-11-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for generating a rodent having a genetic modification
JP2006187215A (ja) 2004-12-28 2006-07-20 Univ Of Tsukuba ベクターによる遺伝子改変型樹状細胞を用いた抗体作製方法
BRPI0712224B8 (pt) 2006-06-02 2021-05-25 Regeneron Pharma anticorpos de alta afinidade para o receptor de il-6 humano e composições farmacêuticas
CN101117633B (zh) 2006-08-03 2011-07-20 上海交通大学附属儿童医院 一种细胞核移植方法
US7732195B2 (en) * 2006-11-01 2010-06-08 Facet Biotech Corporation Tethered vectors for cell surface immunoglobulin display
EP2277218A4 (en) 2008-04-11 2011-10-19 Utc Power Corp FUEL CELL AND BIPOLAR PLATE HAVING A COLLECTOR PUMP
CN103833855A (zh) 2009-06-26 2014-06-04 瑞泽恩制药公司 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体
RU2425880C2 (ru) * 2009-07-30 2011-08-10 Учреждение Российской академии наук Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН Способ получения трансгенных мышей
US8518392B2 (en) 2009-08-14 2013-08-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Promoter-regulated differentiation-dependent self-deleting cassette
ES2613662T3 (es) 2009-10-29 2017-05-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Alelos multifuncionales
SI2954779T1 (sl) 2009-12-10 2019-06-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Miši, ki proizvajajo težkoverižna protitelesa
US20130045492A1 (en) 2010-02-08 2013-02-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods For Making Fully Human Bispecific Antibodies Using A Common Light Chain
US20120021409A1 (en) 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
KR102432611B1 (ko) 2010-02-08 2022-08-16 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 일반적인 경쇄 마우스
US9796788B2 (en) 2010-02-08 2017-10-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing a limited immunoglobulin light chain repertoire
US20130185821A1 (en) 2010-02-08 2013-07-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
JP6009441B2 (ja) 2010-06-22 2016-10-19 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ハイブリッド軽鎖マウス
ES2612459T3 (es) 2010-08-02 2017-05-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ratones que producen proteínas de unión que comprenden dominios VL
DK2550363T3 (en) 2011-02-25 2015-03-23 Regeneron Pharma ADAM6 mice
PT2739740T (pt) 2011-08-05 2020-01-09 Regeneron Pharma Cadeia leve universal humanizada de murganhos
US10246509B2 (en) 2011-10-17 2019-04-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Restricted immunoglobulin heavy chain mice
SG10201605675WA (en) 2011-12-20 2016-09-29 Regeneron Pharma Humanized light chain mice
SG10201913428QA (en) 2012-02-01 2020-03-30 Regeneron Pharma Humanized rodents that express heavy chains containing vl domains
PT2825037T (pt) 2012-03-16 2019-08-07 Regeneron Pharma Animais não humanos que expressam sequências de imunoglobulinas sensíveis ao ph
US9301510B2 (en) 2012-03-16 2016-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice that produce antigen-binding proteins with pH-dependent binding characteristics
LT3348140T (lt) 2012-03-16 2021-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidinu pakeisti lengvosios grandinės antikūnai ir genetiškai modifikuoti graužikai, išvesti jų gamybai
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
US10251377B2 (en) * 2012-03-28 2019-04-09 Kymab Limited Transgenic non-human vertebrate for the expression of class-switched, fully human, antibodies
PE20190843A1 (es) 2012-05-25 2019-06-17 Emmanuelle Charpentier Arn de direccion a adn generico
SG10201913429WA (en) 2012-06-12 2020-03-30 Regeneron Pharma Humanized non-human animals with restricted immunoglobulin heavy chain loci
WO2014033644A2 (en) 2012-08-28 2014-03-06 Novartis Ag Methods of nuclease-based genetic engineering
CN110066775B (zh) 2012-10-23 2024-03-19 基因工具股份有限公司 用于切割靶dna的组合物及其用途
EP3363902B1 (en) 2012-12-06 2019-11-27 Sigma Aldrich Co. LLC Crispr-based genome modification and regulation
ES2883590T3 (es) * 2012-12-12 2021-12-09 Broad Inst Inc Suministro, modificación y optimización de sistemas, métodos y composiciones para la manipulación de secuencias y aplicaciones terapéuticas
PL2784162T3 (pl) 2012-12-12 2016-01-29 Broad Inst Inc Opracowanie systemów, metod oraz zoptymalizowanych kompozycji przewodnikowych do manipulacji sekwencyjnej
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
WO2014099750A2 (en) 2012-12-17 2014-06-26 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided human genome engineering
ES2904803T3 (es) 2013-02-20 2022-04-06 Regeneron Pharma Modificación genética de ratas
RU2017114166A (ru) 2013-02-20 2019-01-29 Регенерон Фармасьютикалс, Инк. Не являющиеся человеком животные с модифицированными последовательностями тяжелых цепей иммуноглобулинов
EP2922393B2 (en) 2013-02-27 2022-12-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Gene editing in the oocyte by cas9 nucleases
EP3741868B1 (en) 2013-03-15 2024-05-22 The General Hospital Corporation Rna-guided targeting of genetic and epigenomic regulatory proteins to specific genomic loci
CN115261411A (zh) 2013-04-04 2022-11-01 哈佛学院校长同事会 利用CRISPR/Cas系统的基因组编辑的治疗性用途
KR20200136508A (ko) * 2013-04-16 2020-12-07 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 랫트 게놈의 표적화된 변형
WO2014182700A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Sangamo Biosciences, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
RU2725542C2 (ru) * 2013-05-13 2020-07-02 Селлектис Способы конструирования высокоактивных т-клеток для иммунотерапии
EP3441468B1 (en) 2013-10-17 2021-05-19 Sangamo Therapeutics, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
MX2016007654A (es) * 2013-12-11 2017-08-15 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma.
EP3110454B1 (en) 2014-02-24 2020-11-18 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration
CA2942697A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Lynn Macdonald Non-human animals that make single domain binding proteins
DK3152312T3 (da) * 2014-06-06 2020-04-06 Regeneron Pharma Fremgangsmåder og sammensætninger til modifikation af et mållocus
EP3674408A1 (en) 2014-06-16 2020-07-01 The Johns Hopkins University Compositions and methods for the expression of crispr guide rnas
US20150376587A1 (en) 2014-06-25 2015-12-31 Caribou Biosciences, Inc. RNA Modification to Engineer Cas9 Activity
EP3188763B1 (en) 2014-09-02 2020-05-13 The Regents of The University of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification
NZ731962A (en) * 2014-11-21 2022-07-01 Regeneron Pharma Methods and compositions for targeted genetic modification using paired guide rnas
WO2016094872A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Dead guides for crispr transcription factors
WO2016106236A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 The Broad Institute Inc. Rna-targeting system
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems

Also Published As

Publication number Publication date
NZ747857A (en) 2023-01-27
KR102356542B1 (ko) 2022-01-28
CN113831407B (zh) 2024-06-11
AU2017268458A1 (en) 2018-11-22
JP2019518454A (ja) 2019-07-04
SG10202102885UA (en) 2021-05-28
EP3457840A1 (en) 2019-03-27
IL262888A (en) 2018-12-31
KR102661748B1 (ko) 2024-05-31
US20220167600A1 (en) 2022-06-02
EP3457840B1 (en) 2024-04-10
AU2017268458B2 (en) 2022-07-21
CN113831407A (zh) 2021-12-24
SG11201809552SA (en) 2018-11-29
US20170332610A1 (en) 2017-11-23
KR102628909B1 (ko) 2024-01-25
JP7324583B2 (ja) 2023-08-10
RU2745563C2 (ru) 2021-03-29
CA3022997A1 (en) 2017-11-23
CN109475109B (zh) 2021-10-29
WO2017201476A1 (en) 2017-11-23
KR20220018613A (ko) 2022-02-15
RU2018143655A3 (ru) 2020-10-07
MX2018014172A (es) 2019-08-22
EP3457840C0 (en) 2024-04-10
EP4368637A2 (en) 2024-05-15
CA3022997C (en) 2023-07-18
KR20240016444A (ko) 2024-02-06
JP2023078479A (ja) 2023-06-06
BR112018073750A2 (pt) 2019-02-26
CN109475109A (zh) 2019-03-15
KR20190019931A (ko) 2019-02-27
RU2021106817A (ru) 2021-04-06
AU2022246414A1 (en) 2022-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2018143655A (ru) Способы преодоления иммунологической толерантности с использованием множества направляющих рнк
JP2019518454A5 (ru)
AU2016244326B2 (en) Animal models and therapeutic molecules
JP2015502149A5 (ru)
EP2831245A1 (en) Transgenic non-human vertebrate for the expression of class - switched, fully human, antibodies
US20210000087A1 (en) Transgenic mammals and methods of use thereof
AU2016311334B2 (en) Transgenic animal for production of antibodies having a common light chain
EP4346396A1 (en) Animal models and therapeutic molecules
WO2023247779A1 (en) Animal models and therapeutic molecules
KR20210021024A (ko) 유전자 변환에 의한 자율 중쇄 가변 도메인의 수정에 의한 항체 생산