RU2018126211A

RU2018126211A - Мыши с гуманизированной универсальной легкой цепью

Info

Publication number: RU2018126211A
Application number: RU2018126211A
Authority: RU
Inventors: Джон МАКВИРТЕР; Лин МАКДОНАЛД; Шон СТИВЕНС; Сэмюэл ДЭВИС; Дэвид Р. БАКЛЕР; Каролина А. ХОСИАВА; Эндрю Джей. МЕРФИ
Original assignee: Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2012-08-03
Filing date: 2012-08-03
Publication date: 2019-03-12
Also published as: RU2018126211A3

Claims

1. Способ создания последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи антитела человека, которое специфически связывает представляющий интерес антиген, включающий следующие стадии:

(а) иммунизацию генетически модифицированной мыши представляющим интерес антигеном, при этом мышь:

(i) содержит в геноме своей зародышевой линии:

(A) вставку по меньшей мере одного нереаранжированного генного сегмента V_H человека, по меньшей мере одного нереаранжированного генного сегмента D_H человека и по меньшей мере одного нереаранжированного генного сегмента J_H человека, причем по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент V_H человека, по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент D_H человека и по меньшей мере один нереаранжированный генный сегмент J_H человека функционально связанны с геном константной области тяжелой цепи, причем вставка приводит к разрушению функции эндогенного ADAM6 белка, и при этом разрушение функции эндогенного ADAM6 связано со снижением фертильности самцов мышей;

(B) не более чем одну или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека, причем не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека функционально связанны с геном константной области легкой цепи; и

(C) нуклеотидную последовательность, которая кодирует функциональный белок ADAM6, нуклеотидную последовательность которого интегрируют в геном зародышевой линии мыши, причем функциональный белок ADAM6 экспрессируется в генетически модифицированной мыши;

(ii) создает антитела при иммунизации представляющим интерес антигеном, причем каждое антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи человека функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи человека функционально связанный с константным доменом легкой цепи, причем вариабельный домен легкой цепи экспрессируется из реаранжированной последовательности V/J легкой цепи человека в геноме зародышевой линии мыши или из ее соматически гипермутированного варианта; и

(iii) является фертильной; и

(b) определение последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи человека, которая кодирует вариабельный домен тяжелой или легкой цепи человека, соответственно, антитела, которое специфически связывает представляющий интерес антиген и которое было создано генетически модифицированной мышью.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что по меньшей мере генный сегмент V_H человека представляет собой V_H1-2, V_H1-8, V_H1-24, V_H1-69, V_H2-5, V_H3-7, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-20, V_H3-23, V_H3-30, V_H3-33, V_H3-43, V_H3-48, V_H4-31, V_H4-39, V_H4-59, V_H5-51, V_H6-1 или их комбинацию.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека функционально связанны с эндогенным геном константной области легкой цепи мыши в эндогенном локусе легкой цепи мыши.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека представляют собой реаранжированные последовательности Vκ/Jκ человека.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека представляют собой:

(a) реаранжированную последовательность VκI-39/Jκ человека и/или

(b) реаранжированную последовательность Vκ3-20/Jκ человека.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что реаранжированная последовательность Vκ1-39/Jκ человека представляет собой реаранжированную последовательность Vκ1-39/Jκ5 человека.

7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что реаранжированная последовательность Vκ3-20/Jκ человека представляет собой реаранжированную последовательность Vκ3-20/Jκ1 человека.

8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует функциональный белок ADAM6 мыши:

(a) представлена на той же хромосоме, что и эндогенный локус тяжелой цепи иммуноглобулина мыши и/или

(b) представлена в эктопическом положении.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что функциональный белок ADAM6 мыши представляет собой белок ADAM6a мыши или белок ADAM6b мыши.

10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует функциональный белок ADAM6 мыши является соседней или смежной с по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом V_H человека, по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом D_H человека и/или по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом J_H человека.

11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что у генетически модифицированной мыши отсутствует эндогенный локус вариабельной области легкой цепи λ мыши, который способен к реаранжировке и формированию гена, который кодирует вариабельную область легкой цепи λ мыши.

12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что у генетически модифицированной мыши отсутствует эндогенный локус вариабельной области легкой цепи к мыши, который способен к реаранжировке и формированию гена, который кодирует вариабельную область легкой цепи к мыши.

13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что генетически модифицированная мышь включает не более чем одну реаранжированную последовательность V/J легкой цепи человека в геноме своей зародышевой линии.

14. Способ создания последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи антитела человека, которое специфически связывает представляющий интерес антиген, включающий следующие стадии:

(a) иммунизацию генетически модифицированной мыши антигеном, при этом мышь:

(ii) создает антитела при иммунизации представляющим интерес антигеном, причем каждое антитело содержит вариабельный домен тяжелой цепи человека функционально связанный с константным доменом тяжелой цепи и вариабельный домен легкой цепи человека функционально связанный с константным доменом легкой цепи, причем вариабельный домен легкой цепи человека экспрессируется из реаранжированной последовательности V/J легкой цепи человека в геноме зародышевой линии мыши или из ее соматически гипермутированного варианта; и

(iii) является фертильной; и

(b) определение последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи антитела, которое специфически связывает представляющий интерес антиген и которое было создано генетически модифицированной мышью.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что определение последовательности вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека включает определение нуклеотидной последовательности, которая кодирует последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи человека.

16. Способ по п. 14, отличающийся тем, что по меньшей мере один генный сегмент V_H человека выбирают из группы, состоящей из V_H1-2, V_H1-8, V_H1-24, V_H1-69, V_H2-5, V_H3-7, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-20, V_H3-23, V_H3-30, V_H3-33, V_H3-43, V_H3-48, V_H4-31, V_H4-39, V_H4-59, V_H5-51 и V_H6-1 или их комбинации.

17. Способ по п. 14, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека функционально связанны с эндогенным геном константной области легкой цепи мыши в эндогенном локусе легкой цепи мыши.

18. Способ по п. 14, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека представляют собой реаранжированные последовательности Vκ/Jκ человека.

19. Способ по п. 14, отличающийся тем, что не более чем одна или не более чем две реаранжированные последовательности V/J легкой цепи человека представляют собой:

(a) реаранжированную последовательность Vκ1-39/Jκ человека и/или

20. Способ по п. 19, отличающийся тем, что реаранжированная последовательность Vκ1-39/Jκ человека представляет собой реаранжированную последовательность Vκ1-39/Jκ5 человека.

21. Способ по п. 19, отличающийся тем, что реаранжированная последовательность Vκ3-20/Jκ человека представляет собой реаранжированную последовательность Vκ3-20/Jκ1 человека.

22. Способ по п. 14, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует функциональный белок ADAM6 мыши:

(b) представлена в эктопическом положении.

23. Способ по п. 14, отличающийся тем, что функциональный белок ADAM6 мыши представляет собой белок ADAM6a мыши или белок ADAM6b мыши.

24. Способ по п. 14, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность, которая кодирует функциональный белок ADAM6 мыши является соседней или смежной с по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом V_H человека, по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом D_H человека и/или по меньшей мере одним нереаранжированным генным сегментом J_H человека.

25. Способ по п. 14, отличающийся тем, что у генетически модифицированной мыши отсутствует эндогенный локус вариабельной области легкой цепи λ мыши, который способен к реаранжировке и формированию гена, который кодирует вариабельную область легкой цепи λ мыши.

26. Способ по п. 14, отличающийся тем, что у генетически модифицированной мыши отсутствует эндогенный локус вариабельной области легкой цепи к мыши, который способен к реаранжировке и формированию гена, который кодирует вариабельную область легкой цепи к мыши.

27. Способ по п. 14, отличающийся тем, что генетически модифицированная мышь включает не более чем одну реаранжированную последовательность V/J легкой цепи человека в геноме своей зародышевой линии.