RU2017104900A - Микрофлюидные способы и картриджи для разделения клеток - Google Patents

Микрофлюидные способы и картриджи для разделения клеток Download PDF

Info

Publication number
RU2017104900A
RU2017104900A RU2017104900A RU2017104900A RU2017104900A RU 2017104900 A RU2017104900 A RU 2017104900A RU 2017104900 A RU2017104900 A RU 2017104900A RU 2017104900 A RU2017104900 A RU 2017104900A RU 2017104900 A RU2017104900 A RU 2017104900A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
reaction chamber
granules
cells
protein
paragraphs
Prior art date
Application number
RU2017104900A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017104900A3 (ru
RU2732235C2 (ru
Inventor
Николя МЕРМО
Ниам ХАРРАГИ
Сюань ДРОЗ
Амар РИДА
Пьер-Ален ЖИРО
Александр РЕГАМИ
Тьерри КОЛОМБЕТ
Этьен ЛАНКОН
Original Assignee
Селексис С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Селексис С.А. filed Critical Селексис С.А.
Publication of RU2017104900A publication Critical patent/RU2017104900A/ru
Publication of RU2017104900A3 publication Critical patent/RU2017104900A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2732235C2 publication Critical patent/RU2732235C2/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N15/1023—Microstructural devices for non-optical measurement
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502715—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by interfacing components, e.g. fluidic, electrical, optical or mechanical interfaces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502723—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by venting arrangements
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
    • C12M47/04—Cell isolation or sorting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G01N33/54333—Modification of conditions of immunological binding reaction, e.g. use of more than one type of particle, use of chemical agents to improve binding, choice of incubation time or application of magnetic field during binding reaction
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56966—Animal cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
    • B01L2200/0652—Sorting or classification of particles or molecules
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
    • B01L2200/06—Fluid handling related problems
    • B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
    • B01L2200/0668—Trapping microscopic beads
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/02—Identification, exchange or storage of information
    • B01L2300/023—Sending and receiving of information, e.g. using bluetooth
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
    • B01L2300/0681—Filter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
    • B01L2300/0816—Cards, e.g. flat sample carriers usually with flow in two horizontal directions
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L2300/00—Additional constructional details
    • B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
    • B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
    • B01L2300/0867—Multiple inlets and one sample wells, e.g. mixing, dilution
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10—Investigating individual particles
    • G01N2015/1028—Sorting particles

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Fluid Mechanics (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Claims (62)

1. Способ идентификации и предпочтительного выбора клеток, на поверхности которых экспонирован представляющий интерес белок, включающий:
(a) получение образца, содержащего указанные клетки;
(b) получение функционализированных магнитных гранул, содержащих одну или большее количество аффинных групп, и необязательно гранул-носителей, причем указанная(ые) аффинная(ые) группа(ы) адаптирована(ы) для связывания клеток, на поверхности которых экспонирован указанный белок;
(c) смешивание указанных клеток с указанными функционализированными магнитными гранулами и необязательно с указанными гранулами-носителями,
при этом указанная аффинная группа гранул связывает клетки, на поверхности которых экспонирован указанный белок, для получения магнитно-меченых клеток (ММК), содержащих магнитную метку,
(d) разделение, например, в ходе по меньшей мере одного этапа промывания, не меченых магнитными частицами клеток от указанных ММК, и
(e) идентификацию и предпочтительный выбор клеток, на поверхности которых экспонирован указанный белок.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанный представляющий интерес белок представляет собой маркерный белок или продукт трансгенной экспрессии (ТЕР).
3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой рекомбинантные клетки, и указанный образец содержит указанные рекомбинантные клетки, которые были трансфицированы трансгеном, при этом указанный представляющий интерес белок представляет собой продукт трансгенной экспрессии (ТЕР); тем, что указанные ММК утрачивают магнитную метку через некоторый интервал времени после связывания с аффинной(ыми) группой(ами), и тем, что указанные ММК идентифицируют и предпочтительно отбирают на основании указанного интервала времени.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что на основании указанного интервала времени рекомбинантные клетки, секретирующие ТЕР, отделяют от рекомбинантных клеток, экспонирующих, однако не секретирующих, указанный ТЕР.
5. Способ по любому из пп. 2-4, отличающийся тем, что выбирают ММК, утрачивающие магнитную метку менее чем через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 часа после связывания, менее чем через 24, менее чем через 36, менее чем через 48, менее чем через 60, менее чем через 72, менее чем через 84 или менее чем через 96 часов после связывания.
6. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что указанный представляющий интерес белок представляет собой маркерный белок для идентификации стволовой клетки, в частности, раковой стволовой клетки или циркулирующей опухолевой клеткой.
7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что указанная(ые) аффинная(ые) группа(ы) указанных магнитных гранул непосредственно связывает(ют) указанный белок.
8. Способ по любому из пп. 1-7, дополнительно включающий обеспечение по меньшей мере одной соединяющей молекулы, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна соединяющая молекула связывает аффинную группу и белок, соединяя магнитные гранулы с указанным белком.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что указанная соединяющая молекула представляет собой антитело или его фрагмент, необязательно биотинилированный.
10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанные клетки смешивают при температуре, превышающей 20, 24, 26, 28, 30, 32, 34 или 36 градусов.
11. Способ по любому из пп. 1-10, предусматривающий смесь указанных функционализированных магнитных гранул (гранул для захвата) и гранул-носителей, отличающийся тем, что указанная смесь находится в реакционной камере.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что указанный способ дополнительно включает:
воздействие внешним магнитным полем с некоторой амплитудой и полярностью на указанную реакционную камеру, при этом в указанном внешнем магнитном поле смешиванию гранул для захвата и клеток, экспонирующих указанный белок, способствуют указанные гранулы-носители.
13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что указанные гранулы для захвата представляют собой суперпарамагнитные гранулы, а указанные гранулы-носители представляют собой ферромагнитные гранулы.
14. Способ по п. 12 или 13, отличающийся тем, что соотношение гранул для захвата к гранулам-носителям составляет от 2:1 до 50:1, от 5:1 до 25:1, предпочтительно от 8:1 до 12:1 или приблизительно 10:1.
15. Способ по п. 12, дополнительно включающий изменение амплитуды и/или полярности для задания последовательных режимов функционирования, отличающийся тем, что указанное смешивание на этапе (с) осуществляют в режиме смешивания и указанное разделение на этапе (d) осуществляют в режиме разделения гранул.
16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой рекомбинантные клетки, и тем, что экспрессируемый на поверхности белок представляет собой ТЕР; при этом идентификацию согласно (е) осуществляют путем извлечения из реакционной камеры клеток, утрачивающих магнитные гранулы менее чем через 48 ч, предпочтительно менее чем через 36 или 24 ч после связывания.
17. Способ по п. 15 или 16, отличающийся тем, что в режиме смешивания и в режиме разделения гранул магнитное поле используют в режиме кругового или переменного поля с частотой 1-100 Гц и амплитудой 0,1-10000 мА, предпочтительно - 40-500 Гц и 200-500 мА.
18. Способ по пп. 15, 16 или 17, отличающийся тем, что продолжительность использования и режима смешивания, и/или режима разделения гранул составляет менее чем 60 секунд.
19. Способ по любому из пп. 1-18, отличающийся тем, что интервал времени между смешиванием указанных клеток с указанными функционализированными магнитными гранулами и, необязательно, с указанными гранулами-носителями, и идентификацией и предпочтительным выборов клеток, на поверхности которых экспонирован указанный белок, составляет менее чем 1 час, менее чем 30 минут, менее чем 20 минут, менее чем 15 минут или менее чем 10 минут.
20. Картридж для отбора клеток на основании уровня экспонирования и необязательно секреции ими белка из популяции клеток, содержащей указанные клетки, экспонирующие и необязательно секретирующие указанный белок, содержащий:
a. микрофлюидные каналы,
b. реакционную камеру для смешивания магнитных гранул в суспензии, отличающуюся тем, что указанная реакционная камера содержит по меньшей мере один входной и по меньшей мере один выходной канал для введения текучей среды в указанную реакционную камеру и ее выведения из указанной реакционной камеры,
c. контейнер для образцов клеток, сообщающийся через текучую среду по входному каналу с реакционной камерой,
d. по меньшей мере один контейнер для промывочного реагента, сообщающийся через текучую среду по входному каналу с реакционной камерой,
e. контейнер для отходов, сообщающийся через текучую среду по выходному каналу с реакционной камерой,
при этом каждый контейнер, соответствующий пп. c.-d., также сообщается посредством одного из микрофлюидных каналов с вентиляционным отверстием, содержащим элемент для фильтрации воздуха.
21. Картридж по п. 20, отличающийся тем, что указанный картридж дополнительно содержит контейнер для выделения, куда поступают магнитно-меченые клетки, предпочтительно магнитно-меченые рекомбинантные клетки из реакционной камеры.
22. Картридж по любому из пп. 20-21, дополнительно включающий по меньшей мере один второй входной и по меньшей мере один второй выходной канал, сообщающийся через текучую среду с указанной реакционной камерой, отличающийся тем, что указанный второй входной канал отходит от указанного по меньшей мере одного первого выходного канала, а указанный второй выходной канал отходит от указанного по меньшей мере одного первого входного канала, при этом указанный контейнер для выделения сообщается через текучую среду с реакционной камерой через второй входной канал, и указанный второй выходной канал соединен с дополнительным вентиляционным отверстием, содержащим элемент для фильтрации воздуха.
23. Картридж по любому из пп. 20-22, отличающийся тем, что объем реакционной камеры составляет от 10 до 500 мл.
24. Картридж по любому из пп. 20-23, отличающийся тем, что указанный картридж является автономным и одноразовым.
25. Интегральная система для отбора клеток, на основании уровня экспонирования и необязательно секреции ими белка, из популяции клеток, содержащей указанные клетки, экспонирующие и необязательно секретирующие указанный белок, содержащая:
a. микрофлюидные каналы,
b. реакционную камеру для смешивания магнитных гранул в суспензии; при этом указанная реакционная камера содержит по меньшей мере первый входной и по меньшей мере второй выходной канал для введения текучей среды в указанную реакционную камеру и ее выведения из указанной реакционной камеры,
c. контейнер для образцов клеток, сообщающийся через текучую среду по входному каналу с реакционной камерой,
d. по меньшей мере один контейнер для промывочного реагента, сообщающийся через текучую среду по входному каналу с реакционной камерой,
e. контейнер для отходов, сообщающийся через текучую среду по выходному каналу с реакционной камерой, причем каждый контейнер, соответствующий пп. c.-d., также сообщается посредством одного из микрофлюидных каналов с вентиляционным отверстием, содержащим элемент для фильтрации воздуха;
f. одно или большее количество устройств, создающих контролируемое магнитное поле (устройства для создания магнитного поля = УМП), в частности, один или большее количество электромагнитов, расположенных вокруг реакционной камеры или у реакционной камеры;
g. оборудование для обработки данных, выполненное с возможностью корректировки магнитного поля, создаваемого указанными УМП в реакционной камере, путем коррекции частоты и/или амплитуды, причем каждая корректировка частоты и/или амплитуды задает режим функционирования в реакционной камере.
26. Система по п. 25, отличающаяся тем, что указанное оборудование для обработки данных выполнено с возможностью задания последовательности указанных режимов функционирования, включающей режим смешивания, режим захвата, режим иммобилизации, режим разделения гранул и режим выделения.
27. Система по п. 26, отличающаяся тем, что указанное оборудование для обработки данных адаптировано для установки следующих режимов функционирования УМП:
- в режиме кругового или переменного поля с частотой 1-1000 Гц, предпочтительно 40-500 Гц, и с амплитудой 0,1-10000 мА, предпочтительно 200-500 мА, во время использования режима смешивания и режима разделения гранул;
- в режиме кругового или переменного поля с показателями частоты и амплитуды ниже показателей для режима смешивания, например, с частотой 0,5-40 Гц и с амплитудой 300-600 мА, во время использования режима захвата;
- с частотой 0 Гц и амплитудой, например, 300-600 мА, во время использования режима иммобилизации; и
- с повышенной относительно режима иммобилизации частотой, например, 40-500 Гц, и пониженной амплитудой, например, 30-300 мА, во время использования режима выделения.
28. Система по любому из пп. 25-27, отличающаяся тем, что реакционная камера содержит смесь гранул-носителей и гранул для захвата.
29. Система по любому из пп. 25-28, отличающаяся тем, что указанная система дополнительно содержит контейнер для выделения, куда поступают магнитно-меченые клетки, предпочтительно магнитно-меченые рекомбинантные клетки из реакционной камеры.
30. Система по любому из пп. 25-29, дополнительно включающая по меньшей мере один второй входной и по меньшей мере один второй выходной канал, сообщающийся через текучую среду с указанной реакционной камерой, отличающийся тем, что указанный второй входной канал отходит от указанного по меньшей мере одного первого выходного канала, а указанный второй выходной канал отходит от указанного по меньшей мере одного первого входного канала, при этом указанный контейнер для выделения сообщается через текучую среду с реакционной камерой через второй входной канал, и указанный второй выходной канал соединен с дополнительным вентиляционным отверстием, содержащим элемент для фильтрации воздуха.
31. Система по п. 30, отличающаяся тем, что указанное воздуховодное отверстие контейнера для выделения соединено с насосом для выделения указанных магнитно-меченых клеток в реакционной камере путем прокачивания воздуха через вентиляционное отверстие контейнера для выделения, таким образом, что содержимое реакционной камеры перекачивают в контейнер для выделения через входной канал.
32. Система по любому из пп. 25-31, отличающаяся тем, что объем реакционной камеры составляет от 10 до 500 мл.
33. Система по любому из пп. 25-32, отличающаяся тем, что указанная система является автономной и одноразовой.
34. Набор, содержащий в одном контейнере картридж по пп. 20-24, отличающийся тем, что гранулы для захвата и гранулы-носители находятся в реакционной камере или помещены в дополнительный контейнер, и в отдельном контейнере - инструкции по применению гранул для захвата и гранул-носителей в картридже.
35. Набор по п. 34, отличающийся тем, что указанные гранулы для захвата представляют собой суперпарамагнитные гранулы, а указанные гранулы-носители представляют собой ферромагнитные гранулы, при этом соотношение суперпарамагнитных гранул и ферромагнитных гранул составляет от 2:1 до 50:1.
36. Клетки, идентифицированные и предпочтительно отбираемые в соответствии со способом по любому из пп. 1-19.
37. Выделенная популяция клеток, содержащая предпочтительно рекомбинантные клетки, секретирующие продукт трансгенной экспрессии на уровне, составляющем более чем 20, 40, 60, 80 pcd, отличающаяся тем, что указанная выделенная популяция клеток содержит не более чем 40% исходной популяции клеток, из которой указанные клетки были выделены.
38. Выделенная популяция рекомбинантных клеток, отличающаяся тем, что указанный секретируемый трансген представляет собой терапевтический белок.
RU2017104900A 2014-09-07 2015-09-01 Микрофлюидные способы и картриджи для разделения клеток RU2732235C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462046979P 2014-09-07 2014-09-07
US62/046,979 2014-09-07
PCT/EP2015/069907 WO2016034564A1 (en) 2014-09-07 2015-09-01 Microfluidic methods and cartridges for cell separation

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017104900A true RU2017104900A (ru) 2018-10-08
RU2017104900A3 RU2017104900A3 (ru) 2019-04-11
RU2732235C2 RU2732235C2 (ru) 2020-09-14

Family

ID=54251475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017104900A RU2732235C2 (ru) 2014-09-07 2015-09-01 Микрофлюидные способы и картриджи для разделения клеток

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20170284922A1 (ru)
EP (1) EP3188840A1 (ru)
JP (1) JP6662854B2 (ru)
KR (1) KR20170054431A (ru)
CN (1) CN107278270B (ru)
AU (1) AU2015310976B2 (ru)
CA (1) CA2959464A1 (ru)
IL (1) IL250969B (ru)
RU (1) RU2732235C2 (ru)
SG (1) SG11201701807RA (ru)
WO (1) WO2016034564A1 (ru)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9657290B2 (en) 2012-07-03 2017-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Scalable bio-element analysis
CN115254210A (zh) 2016-11-14 2022-11-01 浩康生物系统公司 用于分选目标颗粒的方法和装置
CN107723208B (zh) * 2017-11-07 2019-08-16 浙江大学 功能化微球结合过滤芯片捕获循环肿瘤细胞的装置及其应用
KR102073300B1 (ko) 2017-12-11 2020-02-04 충남대학교산학협력단 자성나노입자를 이용한 생체분자 추출을 위한 연속 순환형 미세유체소자
KR20210143767A (ko) * 2019-03-27 2021-11-29 씨티바 스웨덴 에이비 생체분자의 분리 방법
CN111999158A (zh) * 2019-05-11 2020-11-27 南京岚煜生物科技有限公司 一种磁珠混匀的方法
US11604195B2 (en) 2019-08-22 2023-03-14 Michael IANNOTTI High throughput analysis and sorting, and sampling interface and assembly for high throughput analysis and sorting
EP4100521A4 (en) 2020-02-04 2023-08-02 Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. MAGNETIC HANDLING USING A SOLID-STATE METHOD AND APPARATUS
US20220214277A1 (en) * 2020-03-11 2022-07-07 Newton Howard Cartridge-based automated rapid test analyzer
US20220178920A1 (en) * 2020-03-11 2022-06-09 Newton Howard Cartridge-based automated rapid test analyzer
US20210285943A1 (en) * 2020-03-11 2021-09-16 Newton Howard Virumeter for rapid detection of covid19 and other pathogens
WO2023209175A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Bio-Recell Ltd. Method for separating target cells

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5972721A (en) * 1996-03-14 1999-10-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force Immunomagnetic assay system for clinical diagnosis and other purposes
CN1181337C (zh) * 2000-08-08 2004-12-22 清华大学 微流体系统中实体分子的操纵方法及相关试剂盒
US20040018611A1 (en) * 2002-07-23 2004-01-29 Ward Michael Dennis Microfluidic devices for high gradient magnetic separation
GB0304832D0 (en) * 2003-03-04 2003-04-09 Secr Defence Assay method
US8329437B1 (en) * 2004-07-29 2012-12-11 E.I. Spectra, Llc Disposable particle counter cartridge
EP1662256A1 (en) 2004-11-25 2006-05-31 Spinomix S.A. Tailored magnetic particles and method to produce same
US8870446B2 (en) 2006-06-21 2014-10-28 Spinomix S.A. Device and method for manipulating and mixing magnetic particles in a liquid medium
CN101522294B (zh) * 2006-06-21 2012-05-16 斯彼诺米克斯公司 一种用于处理和混合液体介质中的磁性颗粒的设备和方法
US8999732B2 (en) * 2006-06-21 2015-04-07 Spinomix, S.A. Method for manipulating magnetic particles in a liquid medium
US20080118518A1 (en) 2006-09-07 2008-05-22 Cirrito Thomas P Cancer stem cell-targeted cancer therapy
EP2350652A2 (en) * 2008-10-10 2011-08-03 Cnrs-Dae Cell sorting device
US20120231449A1 (en) 2009-09-18 2012-09-13 Selexis S.A. Products and methods for enhanced transgene expression and processing
EP3193170B1 (en) * 2011-04-05 2020-09-16 Purdue Research Foundation Micro-fluidic system using micro-apertures for high throughput detection of entities
CN102426245A (zh) * 2011-08-31 2012-04-25 内蒙古科慧生物科技有限责任公司 细胞角质蛋白19片段(cyfra21-1)定量测定试剂盒及其检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3188840A1 (en) 2017-07-12
CN107278270A (zh) 2017-10-20
CN107278270B (zh) 2021-06-01
US20170284922A1 (en) 2017-10-05
WO2016034564A1 (en) 2016-03-10
AU2015310976A1 (en) 2017-02-16
CA2959464A1 (en) 2016-03-10
SG11201701807RA (en) 2017-04-27
RU2017104900A3 (ru) 2019-04-11
JP6662854B2 (ja) 2020-03-11
KR20170054431A (ko) 2017-05-17
RU2732235C2 (ru) 2020-09-14
IL250969A0 (en) 2017-04-30
JP2017529530A (ja) 2017-10-05
IL250969B (en) 2021-06-30
AU2015310976B2 (en) 2020-09-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017104900A (ru) Микрофлюидные способы и картриджи для разделения клеток
CN107075556B (zh) 使用基于磁性和尺寸的分离进行细胞分离的方法和系统
KR102323205B1 (ko) 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법
EP2201361B1 (en) Detection of tumor stem cells and tumor cells in epithelial-mesenchymal transition in body fluids of cancer patients
Hyun et al. Two-stage microfluidic chip for selective isolation of circulating tumor cells (CTCs)
CN105518464A (zh) 微流体分析的方法、组合物和系统
US20140106388A1 (en) Automated ctc detection
JP2008529541A (ja) 腫瘍細胞の分離用容器
CN104334725A (zh) 生物分子分离
CN107402303B (zh) 循环肿瘤细胞分离富集微流控芯片及其富集方法
JPS58165784A (ja) 多孔スクリ−ニング・アセンブリ
EP2956541A1 (en) Devices and methods for purification of biological cells
EP3261773A1 (en) Apparatus and method for the analysis; isolation and/or enrichment of target structures in a fluid sample
US20100062474A1 (en) Method for the purification of at least one target substance that is to be identified
CN116116385B (zh) 一种血液中外泌体的提取及其蛋白质组学分析方法
KR20150112519A (ko) 식중독균 신속 검출을 위한 초고효율 자성 나노입자 포집 장치
Gopinathan et al. Aptamer probed isolation of circulating tumor cells in cholangiocarcinoma patients
CN107430146A (zh) 流体桥装置及样本处理方法
JP2007147539A (ja) 免疫分析法、タンパク質分析装置及び免疫分析用マイクロフローセル
CN103278643B (zh) 一种用于微量蛋白检测的微芯片的制备方法
WO2018190382A1 (ja) Ｐｄ－ｌ１陽性癌細胞の検出方法
WO2016207911A4 (en) System for cytoreduction of circulating cancer cells from blood and a method thereof
CN210620670U (zh) 抗体提取装置
RU2756306C1 (ru) Система и способ для анализа фенотипа и полинуклеотидного секвенирования биологических частиц с использованием детерминированного штрихкодирования
US20210324373A1 (en) Separation and collection device for cells and biomolecules, and testing system