KR102323205B1 - 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 - Google Patents
표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102323205B1 KR102323205B1 KR1020140109966A KR20140109966A KR102323205B1 KR 102323205 B1 KR102323205 B1 KR 102323205B1 KR 1020140109966 A KR1020140109966 A KR 1020140109966A KR 20140109966 A KR20140109966 A KR 20140109966A KR 102323205 B1 KR102323205 B1 KR 102323205B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- target material
- chamber
- density
- mixture
- density gradient
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 239000013077 target material Substances 0.000 claims abstract description 104
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims abstract description 84
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 65
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 51
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims abstract description 41
- 239000000696 magnetic material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 47
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 29
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 25
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 19
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 12
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 claims description 8
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 claims description 8
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 claims description 7
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 7
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 7
- 102000009193 Caveolin Human genes 0.000 claims description 5
- 108050000084 Caveolin Proteins 0.000 claims description 5
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 claims description 5
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 claims description 5
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 claims description 5
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 claims description 5
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000151 deposition Methods 0.000 claims description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000013076 target substance Substances 0.000 claims description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims 2
- 210000005266 circulating tumour cell Anatomy 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 239000002907 paramagnetic material Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000016683 Adult T-cell leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000018142 Leiomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000006644 Malignant Fibrous Histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000015778 Undifferentiated pleomorphic sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 201000006966 adult T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011554 ferrofluid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052741 iridium Inorganic materials 0.000 description 1
- GKOZUEZYRPOHIO-UHFFFAOYSA-N iridium atom Chemical compound [Ir] GKOZUEZYRPOHIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012421 spiking Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000001174 sulfone group Chemical group 0.000 description 1
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052718 tin Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/04—Cell isolation or sorting
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C1/00—Magnetic separation
- B03C1/005—Pretreatment specially adapted for magnetic separation
- B03C1/01—Pretreatment specially adapted for magnetic separation by addition of magnetic adjuvants
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C1/00—Magnetic separation
- B03C1/02—Magnetic separation acting directly on the substance being separated
- B03C1/28—Magnetic plugs and dipsticks
- B03C1/288—Magnetic plugs and dipsticks disposed at the outer circumference of a recipient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/5375—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by changing the physical or chemical properties of the medium or immunochemicals, e.g. temperature, density, pH, partitioning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C2201/00—Details of magnetic or electrostatic separation
- B03C2201/18—Magnetic separation whereby the particles are suspended in a liquid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C2201/00—Details of magnetic or electrostatic separation
- B03C2201/26—Details of magnetic or electrostatic separation for use in medical or biological applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법이 개시된다. 개시된 표적물질 분리장치는 표적물질을 포함하는 혼합물과, 상기 혼합물의 아래에 위치하며 상기 혼합물의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층과, 자성 물질을 포함하고 상기 표적물질과 결합하여 결합체를 형성하는 자성비드와, 상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 밀도구배물질층 아래로 침전시키는 자기장 발생장치를 포함한다.
Description
표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법에 관한 것으로, 상세하게는 혼합물에서 표적물질을 분리할 수 있는 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법에 관한 것이다.
최근 혼합물에서 특정 물질을 분리하여 분석하는 기술이 널리 사용되고 있다. 특히 이러한 기술은 의학 분야에서 바이러스나 암세포 등을 분리해 연구하는데 사용되어 오고 있다. 암환자의 경우 환자의 생존확률과 암의 재발여부 진단 및 치료방법의 효과 검사 등을 위해 혈중 종양세포(circulating tumor cells, CTCs)를 혈액에서 검출하여 관찰하는 것이 요구된다.
전술한 혈중 종양세포는 암환자의 사망원인에 대부분을 차지하는 요소이다. 암환자의 대부분은 최초 종양이 발생한 지점으로부터 떨`어진 조직 및 기관에서의 전이(metastasis)에 의해 사망한다. 따라서 이러한 전이를 조기에 발견하고 모니터링 하는 것은 암환자 생존 확률에 중요한 결정요소이다. 그리고 이러한 전이를 발견하기 위해 혈중 종양세포를 검출해야 한다. 암은 대체로 혈액을 통해 전이된다는 점에서 혈중 종양 세포는 암의 전이 여부를 진단할 수 있는 표지가 될 수 있기 때문이다. 그런데 혈중 종양세포가 혈액에 존재한다 하더라도 그것의 존재여부를 정확히 확인하는 것은 매우 힘든 일이며 존재여부를 확인한다 하더라도 검출된 혈중 종양세포의 양이나 특성을 분석하는데는 한계가 있다. 이는 혈액에 존재하는 적혈구 및 백혈구 등으로부터 혈중 종양세포를 선택적으로 분리하는 기술에 한계가 있기 때문이다.
혈중 종양세포를 분리하는 관련 기술로는 밀도 구배 내에서 적혈구, 백혈구, 혈중 암세포 및 혈청을 분리하여 수동으로 원하는 층을 분리하여 사용하는 방법을 개시하고 있다. 그러나, 이 기술은 백혈구와 혈중 암세포를 따로 분리되지 않고 혼합물 상태로 존재하게 되어, 백혈구와 혈중 암세포의 분리 효율이 원리적으로 제한된다는 단점이 있다.
다른 관련 기술은 유체 역학 원리를 기초로 하는 세포 변연화(cell margination) 및 멀티 오리피스 분리(multi orifice separation)를 개시하고 있다. 전자의 경우에는 실제 혈관 속에서 발생하는 현상으로 작은 입자들은 현관의 안쪽으로 모이고, 큰 입자들은 밖으로 이동하는 현상으로 적혈구와 같이 작은 세포를 상대적으로 줄여, 그 밖의 세포를 풍부하게 하는 기술이며, 후자는 유체가 흘러가는 채널의 모양이 확관 영역을 갖음으로써 레이놀즈 넘버에 따라서 큰 입자는 바깥으로 작은 입자는 가운데로 모이면서 흐르는 원리를 이용하는 원리이다. 그러나, 이들은 원리적으로 실제 혈액 중에서 원하는 표적 세포를 선택적으로 분리하기가 어려우며, 유체 흐름 속도가 느려서 수 ml 양을 처리하는데 한계가 있거나, 레이놀즈 넘버를 맞추기 위해서는 수백 배로 희석시키는 단계가 필수적으로 필요하기 때문에 현실적으로 수백 ml의 샘플을 처리해야 하는 문제점을 갖는다. 따라서 혈액과 같은 혼합물에서 혈중 종양세포와 같은 표적물질을 효율적으로 분리하는 장치 및 방법이 요구되고 있다.
선행 문헌으로는 미국공개특허 2009-0220979호가 있다.
선행 문헌으로는 미국공개특허 2009-0220979호가 있다.
적어도 일 실시예는 혼합물에서 표적물질을 효율적으로 분리할 수 있는 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법을 제공한다.
일 측면에 있어서,
표적물질을 포함하는 혼합물;
상기 혼합물의 아래에 위치하며 상기 혼합물의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층;
자성 물질을 포함하고 상기 표적물질과 결합하여 결합체를 형성하는 자성비드(magnetic beads); 및
상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 밀도구배물질층 아래로 침전시키는 자기장 발생장치;를 포함하는 표적물질 분리장치가 제공된다.
상기 혼합물은 혈액, 골수액, 타액, 누액, 뇨, 정액 및 점막액 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 상기 표적물질은 혈중 종양세포(circulating tumor cells, CTCs)를 포함할 수 있다. 상기 혼합물은 혈액이며, 상기 밀도구배물질층의 밀도는 상기 혈액 내 백혈구의 밀도보다 클 수 있다. 상기 자성비드의 밀도는 상기 밀도구배물질층의 밀도보다 클 수 있다.
상기 밀도구배물질층의 밀도는 1.077g/mL 내지 1.2g/mL일 수 있다. 상기 자성비드는 상자성체(paramagnetic)를 포함할 수 있다. 상기 자성비드는, 상기 표적물질 내에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드(ligand)를 포함할 수 있다. 상기 표적물질은 혈중 종양세포이며, 상기 표면마커는 상기 혈중 종양세포의 표면에 존재하는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45, Her2, Caveolin, EGFR, IGFR 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 리간드는 상기 표면마커와 결합할 수 있는 항체를 포함할 수 있다.
상기 혼합물 및 상기 밀도구배물질층을 수용하는 것으로, 상기 밀도구배물질층이 수용되는 하단부에는 개구부가 형성된 제 1 챔버를 포함할 수 있다.
상기 표적물질 분리장치는 상기 개구부를 통해 제 1 챔버와 연통하는 제 2 챔버를 더 포함할 수 있다.
상기 개구부의 개폐를 조절하기 위한 밸브를 더 포함할 수 있다.
상기 제 1 챔버의 하면은 상기 제 2 챔버가 있는 쪽으로 갈수록 낮아지게 형성되어 있을 수 있다.
상기 자기장 발생장치는 상기 제 1 챔버의 하부에 침전된 상기 결합체를 상기 제 2 챔버 안으로 이동시킬 수 있다.
다른 측면에 있어서,
혼합물 내에 포함된 표적물질을 선택적으로 분리하는 방법으로,
자성 물질을 포함하는 자성비드를 상기 표적물질과 결합시켜 결합체를 형성하는 단계;
제 1 챔버 안에 상기 혼합물의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층을 넣는 단계;
상기 제 1 챔버 안에 상기 혼합물을 넣는 단계; 및
상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 밀도구배물질층 아래로 침전시키는 단계;를 포함하는 표적물질 분리방법이 제공될 수 있다.
상기 자성비드의 밀도는 상기 밀도구배물질층의 밀도보다 클 수 있다.
상기 자성비드는 상기 표적물질에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함할 수 있다.
상기 표적물질은 혈중 종양세포이며, 상기 표면마커는 상기 혈중 종양세포의 표면에 존재하는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45, Her2, Caveolin, EGFR, IGFR 중 적어도 하나를 을 포함하고, 상기 리간드는 상기 표면마커에 결합할 수 있는 항체를 포함할 수 있다.
상기 밀도구배물질층의 아래로 침전된 상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 제 1 챔버와 연결된 제 2 챔버로 이동시키는 단계를 더 포함할 수 있다.
실시예들에 따르면, 표면물질 분리장치(100) 및 표면물질 분리방법(1000)이제공된다. 실시예들에 의하면 혼합물로부터 표적물질을 높은 회수율 및 높은 순도로 용이하게 분리해낼 수 있다.
도 1 은 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리장치를 나타낸 도면이다.
도 2는 도 1에서 나타낸 혼합물에서 자성비드가 표적물질과 결합하는 예를 나타낸 도면이다.
도 3은 자기장 발생장치에 의해 결합체가 밀도구배물질층 아래로 퇴적되는 것을 나타낸 도면이다.
도 4는 피펫을 이용한 일반적인 추출과정에서의 문제점을 나타낸 도면이다.
도 5는 표적물질의 회수를 위해 사용될 수 있는 제 1 챔버 및 제 2 챔버를 나타낸 도면이다.
도 6은 제 1 챔버 및 제 2 챔버를 이용하여 표적물질을 회수하는 것을 나타낸 도면이다.
도 7은 도 5 및 도 6에서 나타낸 제 1 챔버 및 제 2 챔버로 구성된 셋트(set)가 복수로 배열되어 어레이(array)를 형성한 것을 나타낸 도면이다.
도 8은 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면이다.
도 9는 실제 혈액내 암세포를 대상으로 하여, 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면
도 10은 다른 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리방법의 흐름도를 나타낸 도면이다.
도 2는 도 1에서 나타낸 혼합물에서 자성비드가 표적물질과 결합하는 예를 나타낸 도면이다.
도 3은 자기장 발생장치에 의해 결합체가 밀도구배물질층 아래로 퇴적되는 것을 나타낸 도면이다.
도 4는 피펫을 이용한 일반적인 추출과정에서의 문제점을 나타낸 도면이다.
도 5는 표적물질의 회수를 위해 사용될 수 있는 제 1 챔버 및 제 2 챔버를 나타낸 도면이다.
도 6은 제 1 챔버 및 제 2 챔버를 이용하여 표적물질을 회수하는 것을 나타낸 도면이다.
도 7은 도 5 및 도 6에서 나타낸 제 1 챔버 및 제 2 챔버로 구성된 셋트(set)가 복수로 배열되어 어레이(array)를 형성한 것을 나타낸 도면이다.
도 8은 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면이다.
도 9는 실제 혈액내 암세포를 대상으로 하여, 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면
도 10은 다른 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리방법의 흐름도를 나타낸 도면이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세히 설명한다. 아래에 예시되는 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명을 이 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 도면에서 동일한 참조부호는 동일한 구성요소를 지칭하며, 각 구성요소의 크기나 두께는 설명의 명료성을 위하여 과장되어 있을 수 있다.
도 1 은 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리장치(100)를 나타낸 도면이다. 도 1을 참조하면, 표적물질 분리장치(100)는 표적물질(126)을 포함하는 혼합물(120)과, 혼합물(120)의 아래에 위치하며 혼합물(120)의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층(130)과, 자성 물질을 포함하고 표적물질(126)과 결합하여 결합체를 형성하는 자성비드(140) 및 상기 결합체에 자기장을 가하여 결합체를 밀도구배물질층(130) 아래로 침전시키는 자기장 발생장치(150)를 포함할 수 있다.
도 1에 도시된 표적물질 분리장치(100)는 혼합물(120)에서 표적물질(126)을 선택적으로 분리하기 위한 장치일 수 있다. 혼합물(120)은 다양한 물질이 혼합된 기체, 액체 또는 점성을 가지는 유체 등일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 혼합물이 생물학적 시료인 경우, 혼합물은 생체의 혈액, 골수액, 타액, 누액, 뇨, 정액, 점막액 또는 이들의 조합으로 이루어질 수 있다. 이 외에도 생검시료, 조직시료, 분리된 세포를 액체 매질에 현탁시킨 세포 현탁물, 세포 배양물 등이 혼합물(120)에 포함될 수도 있다. 그리고 이러한 혼합물(120)에는 선택적으로 분리하여 관찰하고자 하는 표적물질(126)이 포함되어 있을 수 있다.
혼합물(120)이 생물학적 시료인 경우라면 표적물질(120)은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 담관암종, 대장암, 자궁내막암, 식도암, 위암, 두경부암, 신장암, 간암, 폐암, 비인두암, 난소암, 췌장암, 담낭암, 전립선암, 갑상선암, 골육종, 횡문근육종, 활막육종, 카포시육종, 평활근육종, 악성 섬유성 조직구종, 섬유육종, 성인 T세포 백혈병, 림프종, 다발 골수종, 신경교아세포종/성상세포종, 흑색종, 중피종 및 윌름스 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 암 또는 종양세포일 수 있다. 다만, 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 이에 제한되지는 않는다.
도 1에서는 혼합물(120)이 혈액인 경우를 예시적으로 도시하였다. 도 1에서 나타낸 바와 같이 혼합물(120)에는 적혈구(122), 백혈구(124) 및 표적물질로서 혈중 종양세포(126) 등이 포함되어 있을 수 있다. 혈중 종양세포(126)는 전술한 바와 같이 혈액(120)에서 분리되어 암환자의 암전이 진단 및 암세포 연구 등에 활용될 수 있다. 혼합물(120)에 있는 표적물질(126)은 제 1 챔버(110) 안에 들어가기 전에 미리 자성비드(140)과 결합한 상태일 수 있다. 또는 혼합물(120)이 제 1 챔버(110) 안에 투여된 후 자성비드(140)가 혼합물(120) 안에 투여될 수도 있다. 즉 제 1 챔버(110)에서 표적물질(126)과 자성비드(140)가 결합하여 결합체(146)를 형성할 수도 있다.
밀도구배물질층(130)은 혼합물(120)보다 높은 밀도를 가지는 물질로 이루어질 수 있다. 밀도구배물질층(130)의 밀도는 혼합물(120)의 밀도보다 높으면 족하며, 밀도구배물질층(130)의 밀도는 일정할 수도 혹은 점진적으로 변할 수도 있다. 밀도구배물질층의 일 예로 Pharmacia회사의 피콜(Ficoll) 제품이 사용될 수 있다. 피콜은 설탕과 에피클로로히드린을 중합시킨 화합물로 1.077g/mL 정도의 밀도를 가진다. 또한 밀도구배물질층(130)의 다른 예로는 Pharmacia회사의 퍼콜(Percoll) 제품이 사용될 수 있다. 퍼콜은 폴리비닐 필리돈의 피막이 있는 콜로이드상 실리카제품으로 1.1 ~ 1.2 g/mL의 밀도를 가진다. 전술한 피콜과 퍼콜 제품은 모두 백혈구의 밀도(1.07g/mL)보다 높은 밀도를 가지고 있다. 따라서 후술하는 바와 같이 표적물질인 혈중 종양세포를 침전시킬 때 백혈구가 밀도구배물질층(130) 아래로 침전되지 않게 할 수 있다.
밀도구배물질층(130)은 혼합물(120)과 제 1 챔버(110)에 담기게 된다. 제 1 챔버(110)의 구체적인 구조에 대해서는 나중에 상세히 설명하기로 한다. 밀도구배물질층(130)이 먼저 제 1 챔버(110)에 담기고 다음으로 혼합물(120)이 밀도구배물질층(130)위에 담길 수 있다. 혼합물(120) 보다 밀도구배물질층(130)의 밀도가 높기 때문에 혼합물(120)은 계속 밀도구배물질층(130) 위에 있을 수 있다.
도 2는 도 1에서 나타낸 혼합물(120)에서 자성비드(140)가 표적물질(126)과 결합하는 예를 나타낸 도면이다. 도 2를 참조하면, 자성비드(140)가 표적물질(126)과 결합하여 결합체(146)를 형성할 수 있다. 결합체(146)가 형성되는 시점은 전술한 바와 같이 혼합물(120)이 제 1 챔버(110)에 들어가기 전 또는 들어간 후 일 수 있다. 자성비드(140)는 혼합물(120)에 투여되면서 혼합과정에서 표적물질(126)을 만나 결합체(146)를 형성하며 결합체(146)에 포함된 자성비드(140)의 개수는 다양하게 변할 수 있다. 자성비드(140)는 자성 물질을 포함할 수 있다. 자성 물질이란 실험실 등에서 만들 수 있는 통상의 자기장 세기에 의해 자화가 일어날 수 있는 물질을 의미한다. 이러한 자성 물질에는 알루미늄, 주석, 백금,또는 이리듐 등과 같은 상자성체가 포함될 수 있다. 이는 일 예에 불과할 뿐 외부 자기장에 의해 힘을 받을 수 있는 임의의 물질이 자성 물질로서 자성 비드에 포함될 수 있다. 또한 자성비드(140)의 표면에는 예를 들면, 폴리스타이렌(polystyrene)과 같은 물질이 코팅되어 있을 수도 있다.
자성비드(140)의 밀도는 다양한 값을 가질 수 있다. 일 예에 의하면 백혈구로부터 보다 효과적으로 분리되기 위해 자성비드(140)는 백혈구보다 높은 밀도를 가질 수 있다. 구체적으로 자성비드(140)의 밀도는 1.3 g/cm³ 내지 2.0 g/cm³ 일 수 있다. 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 이에 제한되지 않는다.
자성비드(140)는 표적물질(126)에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드(ligand)를 포함할 수 있다. 표면마커란 표적물질(126) 표면에 존재하는 단백질, 당, 지질, 핵산 또는 이들의 조합 등일 수 있다. 표면마커는 표적물질(126)의 종류에 따라 달라질 수 있다. 도 1에서 나타낸 바와 같이 표적물질(126)이 혈중 종양세포인 경우, 표면마커는 종양 세포에서 특이적으로 발현되어 세포막에 전시되는 단백질, 즉 항원일 수 있다. 구체적인 예로 표면마커는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45 및 Her2 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.
자성비드(140)의 리간드는 전술한 표면마커와 결합할 수 있다. 전술한 바와 같이 표면마커가 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45 및 Her2 중 적어도 하나를 포함하는 경우, 리간드는 이들 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체일 수 있다. 이러한 항체는 전술한 표면마커에만 특이적으로 결합하여 자성비드(140)가 표적물질(126)하고만 선택적으로 결합하게 할 수 있다.
리간드는 자성비드(140)의 표면에 결합되어 존재할 수 있다. 예를 들어, 리간드가 항체인 경우에는 항원 결합 부위가 외부로 드러날 수 있도록 항체의 불변 영역이 자성비드(140) 표면에 결합될 수 있다. 자성비드(140)에는 전술한 리간드를 표면마커에 결합시키기 용이하게 하기 위해 표면에 전하를 나타내는 화합물이 코팅되어 있을 수 있다. 전술한 전하를 나타내는 화합물은 카르복실기, 술폰기, 인산기, 아민기, 이민기 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 작용기를 갖는 것인 화합물일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
전술한 바와 같이 자성비드(140)가 표면에 리간드를 포함하고 이러한 리간드가 표적물질(126)의 표면마커에 특이적으로 결합하므로, 분리되어야할 표적물질(126)에만 자성비드(140)가 결합할 수 있다. 그리고 자성비드(140)가 표적물질(126)에 결합하게 되면 결합체(146)가 형성될 수 있다.
도 3은 자기장 발생장치(150)에 의해 결합체(146)가 밀도구배물질층(130) 아래로 퇴적되는 것을 나타낸 도면이다.
도 3을 참조하면, 결합체(146)는 제 1 챔버(110) 밑에서 자기장을 가하는 자기장 발생장치(150)에 의해 밀도구배물질층(130) 아래로 퇴적될 수 있다. 자기장 발생장치(150)는 자기장을 발생시킬 수 있는 영구자석, 반영구자석 또는 전류코일 등이 있을 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 자기장 발생장치(150)는 도면에 도시한 바와 같이 제 1 챔버(110)와 떨어져 위치할 수도 있으나 제 1 챔버(110)의 하면에 장착되어 있을 수도 있다. 자기장 발생장치(150)가 발생시키는 자기장에 의해 자성비드(140)를 포함하는 결합체(146)는 밀도구배층(130) 아래로 힘을 받게 된다. 반면 적혈구(122)나 백혈구(124) 등은 자성비드(140)가 결합되지 않기 때문에 자기장에 의해 힘을 받지 않는다. 따라서 결합체(146) 만이 자기력에 의해 선택적으로 밀도구배층(130) 아래로 퇴적될 수 있으며 이를 통해 표적물질(126)을 혼합물(120)로부터 분리할 수 있다.
도 3에서 나타낸 바와 같이 결합체(146)를 밀도구배물질층(130) 아래 퇴적시키고 나면 퇴적된 결합체(146)를 추출해내는 것이 문제 된다. 도 4는 피펫(10)을 이용한 일반적인 추출과정에서의 문제점을 나타낸 도면이다.
도 4를 참조하면, 피펫(10)을 이용하여 결합체(146)를 피펫팅 하는 경우 상부에 존재하는 혼합물(120) 층을 통과해야 하는 문제점이 생긴다. 이렇게 피펫(10)이 혼합물(120) 층을 통과하다 보면 혼합물(120)에 존재하는 적혈구(122)나 백혈구(124) 같은 다른 물질등이 피펫(10) 안으로 유입될 우려가 있다. 그리고 피펫(10) 안으로 유입된 혼합물(120)은 분리되는 표적물질(126)의 순도에 악영향을 줄 수 있다. 따라서 피펫(10)을 이용하지 않는 다른 회수방법이 필요하다.
도 5는 표적물질(126)의 회수를 위해 사용될 수 있는 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160)를 나타낸 도면이다. 도 5를 참조하면, 제 1 챔버(110)에는 밀도구배층(130)이 수용되는 하단부(112)에 개구부(112)가 형성되어 있을 수 있다. 도면에서는 제 1 챔버(110)와 제 2 챔버(160)를 함께 도시했지만 제 1 챔버(110) 만이 따로 존재할 수도 있다. 이 경우 제 1 챔버(110)의 개구부(112)를 통해 결합체(146)와 외부로 밀도구배물질층(130)의 밀도구배물질 일부가 제 1 챔버(110) 밖으로 배출될 수 있다. 이렇게 결합체(146)를 제 1 챔버(110) 외부로 배출함으로써 결합체(146)를 회수할 수 있다. 도면에 도시하지는 않았지만, 개구부(112)에는 배출을 조절하기 위한 밸브가 포함되어 있을 수 있다.
전술한 바와는 다르게 도 5에 도시된 바와 같이 제 1 챔버(110) 옆에는 개구부(112)를 통해 제 1 챔버(110)와 연통하는 제 2 챔버(120)가 있을 수도 있다. 도 6은 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(120)를 이용하여 표적물질(126)을 회수하는 것을 나타낸 도면이다.
도 6을 참조하면, 제 2 챔버(160)를 이용해 결합체(146)를 보다 안정적으로 회수할 수 있음을 확인할 수 있다. 제 2 챔버(160)는 제 1 챔버(110)와 격벽을 통해 나뉘어져 있지만 제 1 챔버(110)의 하단에 형성된 개구부(112)를 통해 제 1 챔버(110)와 연통할 수 있다. 이러한 개구부(112)는 전술한 바와 같이 밸브에 의해 개폐가 조절될 수 있다. 개구부(112)를 통해서는 제 1 챔버(110) 안에 있는 밀도구배물질층(130)의 일부가 제 2 챔버(160)로 유입될 수 있다. 제 1 챔버(110)에서 밀도구배물질층(130) 아래로 퇴적된 결합체(146)는 밀도구배물질과 함께 개구부(112)를 통해 제 2 챔버(160)로 유입될 수 있다. 이 때 유입이 용이하게 이루어지게 하기 위해 제 1 챔버(110)의 하면은 제 2 챔버(160)가 있는 쪽으로 갈수록 낮아지게 형성되어 있을 수 있다.
자기장 발생장치(150)는 제 1 챔버(110)의 내부에 마련될 수 있다. 구체적으로, 상기 자기장 발생장치(150)는 제 1 챔버(110)의 하면 상에 위치할 수 있다. 그리고 이러한 자기장 발생장치(150)는 제 1 챔버(110)의 하면에서 제 2 챔버(160)의 하면으로 이동함으로써 자기장의 방향을 바꾸어 결합체(146)를 제 2 챔버(160)안으로 끌어올 수 있다. 도 6에서는 자기장 발생장치(150)가 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160)의 내부에서 움직이는 것을 도시하였으나 이는 예시적인 것에 불과할 뿐 이에 한정되지 않는다. 즉, 상기 자기장 발생장치(150)는 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160) 밖에 위치하여 움직일 수도 있다.
도 7은 도 5 및 도 6에서 나타낸 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160)로 구성된 셋트(set)가 복수로 배열되어 어레이(array)를 형성한 것을 나타낸 도면이다.
도 7에서 나타낸 바와 같이 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160)의 셋트는 복수개가 모여 어레이를 형성할 수 있다. 이러한 어레이는 복수의 샘플(sample)에 대해 동시에 실험을 가능하게 해주어 실험 시간을 단축시켜줄 수 있다. 그리고 어레이에 포함된 제 1 챔버(110) 및 제 2 챔버(160) 셋트 각각의 하면에는 전술한 바와 같은 자기장 발생장치(150)가 배치되어 있을 수 있다.
도 8은 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치(100)를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면이다.
도 8의 실험에서는 세포주(Cell Line)명 SHP-77 세포 100개를 3mL 혈액에 스파이킹(spiking)한 시료가 사용되었다. 도 8에서 가장 오른쪽 그래프(810)는 CellSearch 사의 ferrofluids 제품을 이용한 결과를 나타낸다. 또한 중간 그래프(820)는 도 1에서 나타낸 표적물질 분리장치(100)에서 밀도구배물질층(130)을 제외하고 자성비드(140) 및 자기장 발생장치(150)를 이용해 얻은 결과이다. 또한 가장 왼쪽 그래프(830)는 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치(100)를 이용한 실험결과이다. 도 8에서 막대그래프는 회수되는 종양세포의 수를 나타내며 꺾은선 그래프는 회수된 결과물에 섞여나온 백혈구 수를 나타낸다. 종양세포와 백혈구의 확인은 DAPI, CK-PE, SD45-APC 시약을 통해 이루어졌다. 혈중 종양세포는 DAPI 및 CK-PE 시약에 대해서만 형광반응을 나타내고 SD45-APC 시약에 대해서는 형광반응을 나타내지 않는다. 반면 백혈구는 DAPI 및 CD45-APC 시약에 대해서만 형광반응을 나타내고 CK-PE 시약에 대해서는 형광반응을 나타내지 않는다. 따라서 이들 시약에 대한 형광반응으로 백혈구인지 혈중 종양세포인지 여부를 판별하였다.
도 8을 참조하면, 세가지 경우에 있어서 표적물질인 SHP-77 세포의 회수율은 모두 비슷하지만 섞여나오는 백혈구의 양에서 확연한 차이를 나타냄을 알 수 있다. 그래프를 보면 밀도구배물질층(130)이 없는 경우에도 기존의 CellSearch사의 제품보다 백혈구의 양이 10~100배 가까이 감소했음을 알 수 있다. 또한 밀도구배물질층(130)을 포함시킨 경우 그렇지 않은 경우보다 백혈구의 양이 적어도 10배 이상 적어짐을 알 수 있다. 결론적으로 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리장치(100)가 CellSearch사 제품에 비해 100~1000배 이상 분리되는 표적물질의 순도가 높음을 알 수 있다. 구체적으로 CellSearch 사의 경우 세척단계를 거치지 않을 때 표적물질에 대한 백혈구의 오염량을 나타내는 log depletion 값이 2.03 이었던데 반해 표적물질 분리장치(100)에 의할 경우 log depletion 값이 4.79로 차이를 보였다. 즉 양 실험결과에서 백혈구 양이 약 575배 가까이 확연한 차이를 보였다.
도 9는 실제 혈액내 암세포를 대상으로 하여, 도 1 내지 도 7을 참조하여 설명한 표적물질 분리장치(100)를 이용한 실험 결과를 다른 장치들과 비교하여 나타낸 도면이다.
도 9에서의 나타낸 실험결과는 실제 환자 5명의 혈액을 대상으로 한 실험결과이다. 실험에는 말기 유방암(Advanced breast cancer) 환자 5명의 혈액(5mL)가 이용되었다. 도 9의 그래프에서 세로축은 혈중 종양세포의 회수율을 나타낸다. 도 9에서 빗금친 그래프는 실시예에 따른 표적물질 분리장치(100)를 이용한 결과를 나타낸다. 또한 ‘.’으로 채워진 그래프는 Cellsearch 사의 제품을 이용한 결과를 나타낸다. 도 9를 참조하면, 5명의 환자들 가운데 4명의 환자에 대해서 실시예에 따른 표적물질 분리장치(100)의 혈중 종양세포 회수율이 CellSearch 사의 제품보다 우수함을 확인할 수 있다. 특히 환자 1, 환자 2, 환자 5의 경우 CellSearch가 존재유무를 확인하지 못한 혈중 종양세포를 확인해 냄을 알 수 있었다.
이상에서 예시적인 실시예들에 따른 표적물질 분리장치(100)에 대하여 설명하였다. 이하에서는 표적물질 분리장치(100)를 이용한 표적물질 분리방법에 대하여 설명하기로 한다. 이하에서 설명하는 표적물질 분리방법에는 전술한 표적물질 분리장치(100)의 내용들이 모두 포함될 수 있다.
도 10은 다른 예시적인 실시예에 따른 표적물질 분리방법(1000)의 흐름도를 나타낸 도면이다. 도 10을 참조하면, 표적물질 분리방법(1000)은 자성 물질을 포함하는 자성비드(140)를 표적물질(126)과 결합시켜 결합체(146)를 형성하는 단계(S1010), 제 1 챔버(110) 안에 혼합물(120)의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층(130)을 넣는 단계(S1020), 제 1 챔버(110) 안에 혼합물(120)을 넣는 단계(S1030) 및 결합체(146)에 자기장을 가하여 결합체(146)를 밀도구배물질층(130) 아래로 침전시키는 단계(S1040)를 포함할 수 있다. 위의 각 단계들의 참조 번호가 각 단계의 순서를 제한하는 것은 아니다. 예를 들어 혼합물(120)이 제 1 챔버(110) 안에 들어가기 전에 자성비드(140)와 표적물질(126)이 결합할 수도 있지만 혼합물(120)이 제 1 챔버(110) 안에 들어간 후 자성비드(140)와 표적물질(126)이 결합할 수도 있다.
전술한 바와 같이 혼합물(120)의 밀도는 밀도구배물질층(130)보다 작아서 혼합물(120)은 밀도구배물질층(130) 위에 있을 수 있다. 혼합물(120)의 종류는 다양하며 일 예로 혈액이 될 수도 있다. 그리고 표적물질(126)은 혈중 종양세포가 될 수 있다. 또한 자성비드(140)의 밀도는 다양한 값을 가질 수 있으며 경우에 따라서는 밀도구배물질층(140)의 밀도보다 높을 수도 있다. 그리고 전술한 바와 같이 자성비드(140)는 표적물질(126)에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함할 수 있다. 표면마커는 혈중 종양세포의 표면에 존재하는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45, Her2, Caveolin, EGFR, IGFR 중 적어도 하나를 포함할 수 있으며 리간드는 상기 EpCAM표면마커와 결합할 수 있는 항체를 포함할 수 있다.
또한 표면물질 분리방법(1000)은 밀도구배물질층(130)의 아래로 침전된 결합체(146)에 자기장을 가하여 결합체(146)를 제 1 챔버(110)와 연결된 제 2 챔버(120)로 이동시키는 단계를 더 포함할 수도 있다.
이상에서 도 1 내지 도 10을 참조하여 예시적인 실시예들에 따른 표면물질 분리장치(100) 및 표면물질 분리방법(1000)에 대하여 설명하였다. 이상에서 나타낸 표면물질 분리장치(100) 및 표면물질 분리방법(1000)에 의하면 표적물질(126)을 높은 회수율 및 높은 순도로 용이하게 분리해낼 수 있다.
이상의 설명에서 많은 사항들이 구체적으로 기재되어 있으나, 그들은 발명의 범위를 한정하는 것이라기보다 바람직한 실시예의 예시로서 해석되어야 한다. 때문에 본 발명의 범위는 설명된 실시예에 의하여 정하여 질 것이 아니고 특허 청구범위에 기재된 기술적 사상에 의해 정하여져야 한다.
100 …… 표적물질 분리장치
110 …… 제 1 챔버
120 …… 혼합물(혈액)
122 …… 적혈구
124 …… 백혈구
126 …… 혈중 종양세포
130 …… 밀도구배물질층
140 …… 자성비드
146 …… 결합체
10 …… 피펫
112 …… 개구부
160 …… 제 2 챔버
110 …… 제 1 챔버
120 …… 혼합물(혈액)
122 …… 적혈구
124 …… 백혈구
126 …… 혈중 종양세포
130 …… 밀도구배물질층
140 …… 자성비드
146 …… 결합체
10 …… 피펫
112 …… 개구부
160 …… 제 2 챔버
Claims (19)
- 표적물질을 포함하는 혼합물;
상기 혼합물의 아래에 위치하며 상기 혼합물의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층;
자성 물질을 포함하고 상기 표적물질과 결합하여 결합체를 형성하는 자성비드(magnetic beads);
상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 밀도구배물질층 아래로 침전시키는 자기장 발생장치;
상기 혼합물 및 상기 밀도구배물질층을 수용하는 것으로, 상기 밀도구배물질층이 수용되는 하단부에는 개구부가 형성된 제 1 챔버: 및
상기 개구부를 통해 제 1 챔버와 연통하는 제 2 챔버:를 포함하고,
상기 자기장 발생장치는 상기 제 1 챔버의 하부에 침전된 상기 결합체를 상기 제 2 챔버 안으로 이동시키는, 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 혼합물은 혈액, 골수액, 타액, 누액, 뇨, 정액 및 점막액 중 적어도 하나를 포함하는 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 표적물질은 혈중 종양세포(circulating tumor cells, CTCs)를 포함하는 표적물질 분리장치. - 제 2 항에 있어서,
상기 혼합물은 혈액이며, 상기 밀도구배물질층의 밀도는 상기 혈액 내 백혈구의 밀도보다 큰 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 자성비드의 밀도는 상기 밀도구배물질층의 밀도보다 큰 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 밀도구배물질층의 밀도는 1.077g/mL 내지 1.2g/mL인 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 자성비드는 상자성체(paramagnetic)를 포함하는 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 자성비드는, 상기 표적물질 내에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드(ligand)를 포함하는 표적물질 분리장치. - 제 8 항에 있어서,
상기 표적물질은 혈중 종양세포이며, 상기 표면마커는 상기 혈중 종양세포의 표면에 존재하는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45, Her2, Caveolin, EGFR, IGFR 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 리간드는 상기 표면마커와 결합할 수 있는 항체를 포함하는 표적물질 분리장치. - 삭제
- 삭제
- 제 1 항에 있어서,
상기 개구부의 개폐를 조절하기 위한 밸브를 더 포함하는 표적물질 분리장치. - 제 1 항에 있어서,
상기 제 1 챔버의 하면은 상기 제 2 챔버가 있는 쪽으로 갈수록 낮아지게 형성되어 있는 표적물질 분리장치. - 삭제
- 혼합물 내에 포함된 표적물질을 선택적으로 분리하는 방법에 있어서,
자성 물질을 포함하는 자성비드를 상기 표적물질과 결합시켜 결합체를 형성하는 단계;
제 1 챔버 안에 상기 혼합물의 밀도보다 높은 밀도를 가지는 밀도구배물질층을 넣는 단계;
상기 제 1 챔버 안에 상기 혼합물을 넣는 단계;
상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 밀도구배물질층 아래로 침전시키는 단계; 및
상기 밀도구배물질층의 아래로 침전된 상기 결합체에 자기장을 가하여 상기 결합체를 상기 제 1 챔버와 연결된 제 2 챔버로 이동시키는 단계;를 포함하는 표적물질 분리방법. - 제 15 항에 있어서,
상기 자성비드의 밀도는 상기 밀도구배물질층의 밀도보다 큰 표적물질 분리방법. - 제 15 항에 있어서,
상기 자성비드는 상기 표적물질에 포함된 표면마커에 특이적으로 결합할 수 있는 리간드를 포함하는 표적물질 분리방법. - 제 17 항에 있어서,
상기 표적물질은 혈중 종양세포이며, 상기 표면마커는 상기 혈중 종양세포의 표면에 존재하는 EpCAM, c-Met, cytokeratines, CD45, Her2, Caveolin, EGFR, IGFR 중 적어도 하나를 을 포함하고, 상기 리간드는 상기 표면마커에 결합할 수 있는 항체를 포함하는 표적물질 분리방법. - 삭제
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140109966A KR102323205B1 (ko) | 2014-08-22 | 2014-08-22 | 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 |
| PCT/KR2015/008099 WO2016028011A1 (ko) | 2014-08-22 | 2015-08-04 | 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 |
| US15/505,827 US10203332B2 (en) | 2014-08-22 | 2015-08-04 | Apparatus for and method of separating target matter |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020140109966A KR102323205B1 (ko) | 2014-08-22 | 2014-08-22 | 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20160023488A KR20160023488A (ko) | 2016-03-03 |
| KR102323205B1 true KR102323205B1 (ko) | 2021-11-08 |
Family
ID=55350915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020140109966A KR102323205B1 (ko) | 2014-08-22 | 2014-08-22 | 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10203332B2 (ko) |
| KR (1) | KR102323205B1 (ko) |
| WO (1) | WO2016028011A1 (ko) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10466160B2 (en) | 2011-08-01 | 2019-11-05 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for retrieving and analyzing particles |
| CN103998394B (zh) | 2011-08-01 | 2016-08-17 | 德诺弗科学公司 | 细胞捕获系统和使用方法 |
| US10391490B2 (en) | 2013-05-31 | 2019-08-27 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for isolating and analyzing cells |
| AU2018323449B2 (en) | 2017-08-29 | 2020-09-03 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for isolating and analyzing cells |
| WO2019204784A1 (en) * | 2018-04-19 | 2019-10-24 | First Light Biosciences, Inc. | Detection of targets |
| EP3864419A4 (en) * | 2018-10-08 | 2022-07-13 | Accure Health Inc. | AUTOMATED DOSAGE PROCESSING METHODS AND SYSTEMS |
| US10633693B1 (en) | 2019-04-16 | 2020-04-28 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for leakage control in a particle capture system |
| CN114072490A (zh) | 2019-05-07 | 2022-02-18 | 伯乐实验室有限公司 | 用于自动化的单细胞加工的系统和方法 |
| US11273439B2 (en) * | 2019-05-07 | 2022-03-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for target material retrieval from microwells |
| CN114008462A (zh) * | 2019-06-19 | 2022-02-01 | 生命技术公司 | 试剂容器和使用方法 |
| KR102298299B1 (ko) * | 2019-08-08 | 2021-09-07 | 광운대학교 산학협력단 | 원심분리와 자기분리가 가능한 통합형 세포분리장치 |
| KR102249418B1 (ko) * | 2019-09-19 | 2021-05-07 | 훠리스트 주식회사 | 붉나무 캘러스로부터 추출된 유효성분을 함유하는 피부 미백용 조성물 |
| WO2021086313A1 (en) * | 2019-10-29 | 2021-05-06 | Hewlett-Packard Development Company, L.P. | Concentrating biological components |
| US20220250061A1 (en) * | 2019-10-29 | 2022-08-11 | Hewlett-Packard Development Company, L.P. | Multi-fluid density gradient columns |
| WO2022084957A1 (en) * | 2020-10-22 | 2022-04-28 | Molecular Devices (Austria) GmbH | Microplates for automating organoid cultivation |
| EP4294908A1 (en) * | 2021-02-19 | 2023-12-27 | Molecular Devices (Austria) GmbH | Methods for organoid passaging using microplate well units |
| USD1028280S1 (en) | 2021-12-27 | 2024-05-21 | Molecular Devices (Austria) GmbH | Organoid microplate |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011506935A (ja) * | 2007-12-05 | 2011-03-03 | ザイオミックス インコーポレイテッド | 細胞アッセイキット及び方法 |
Family Cites Families (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4272510A (en) * | 1976-04-26 | 1981-06-09 | Smith Kendall O | Magnetic attraction transfer process for use in solid phase radioimmunoassays and in other assay methods |
| ZA877772B (en) * | 1986-10-23 | 1988-04-20 | Amoco Corporation | Target and background capture methods and apparatus for affinity assays |
| US5397539A (en) * | 1992-04-23 | 1995-03-14 | Toray Industries, Inc. | Automatic analyzing apparatus |
| DE69429159T2 (de) * | 1993-02-01 | 2002-08-14 | Thermo Labsystems Oy, Helsinki | Verfahren für einen spezifischen Bindungstest mit magnetischen Teilchen |
| US6143578A (en) * | 1996-05-10 | 2000-11-07 | Bayer Corporation | Method and apparatus for wash, resuspension, recollection and localization of magnetizable particles in assays using magnetic separation technology |
| ATE363339T1 (de) * | 1998-05-01 | 2007-06-15 | Gen Probe Inc | Rührvorrichtung für den fluiden inhalt eines behälters |
| EP0977037B1 (de) * | 1998-07-31 | 2005-08-31 | Tecan Trading AG | Magnetseparator |
| US6672458B2 (en) * | 2000-05-19 | 2004-01-06 | Becton, Dickinson And Company | System and method for manipulating magnetically responsive particles fluid samples to collect DNA or RNA from a sample |
| DE102004033811A1 (de) | 2004-07-12 | 2006-02-02 | Salama, Abdulgabar, Prof. Dr. | Verfahren zum einfachen und schnellen Nachweis von Zellen und Biomolekülen mit Hilfe paramagnetischer Partikel |
| US20070196820A1 (en) | 2005-04-05 | 2007-08-23 | Ravi Kapur | Devices and methods for enrichment and alteration of cells and other particles |
| US7846393B2 (en) | 2005-04-21 | 2010-12-07 | California Institute Of Technology | Membrane filter for capturing circulating tumor cells |
| US20070059782A1 (en) | 2005-09-13 | 2007-03-15 | Graham Henry A | Magnetic particle tagged blood bank reagents and techniques |
| CN101583722A (zh) | 2006-07-14 | 2009-11-18 | 阿维瓦生物科学股份有限公司 | 从生物学样品检测稀有细胞的方法和组合物 |
| US7731414B2 (en) * | 2007-02-08 | 2010-06-08 | Instrumentation Laboratory Company | Reagent cartridge mixing tube |
| WO2009008925A2 (en) * | 2007-04-05 | 2009-01-15 | The Regents Of The University Of California | A particle-based microfluidic device for providing high magnetic field gradients |
| US9618139B2 (en) * | 2007-07-13 | 2017-04-11 | Handylab, Inc. | Integrated heater and magnetic separator |
| TWI325337B (en) * | 2007-07-26 | 2010-06-01 | Ind Tech Res Inst | Magnetic separation device |
| CN202011883U (zh) | 2007-12-12 | 2011-10-19 | 里兰斯坦福初级大学理事会 | 用于捕获和分离目标细胞的装置 |
| CN102427885B (zh) * | 2009-05-15 | 2016-10-19 | 简·探针公司 | 用于在执行磁性分离工序的仪器中实现磁体的自动移动的方法和设备 |
| EP2565260B1 (en) * | 2010-04-30 | 2020-12-23 | Bioneer Corporation | Automatic biological sample purification device having a magnetic-field-applying unit, a method for extracting a target substance from a biological sample, and a protein expression and purification method |
| US20120142089A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method of separating target cell in biological sample |
| KR20120060140A (ko) * | 2010-12-01 | 2012-06-11 | 삼성전자주식회사 | 생물학적 시료 내에서 표적 세포를 분리하는 방법 |
| WO2012086243A1 (ja) * | 2010-12-21 | 2012-06-28 | 株式会社 島津製作所 | 管内で対象成分を操作するためのデバイス及び方法 |
| US20120252088A1 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-04 | Jie Zhang | Floating magnet probe for cell isolation |
| DK2597153T3 (en) * | 2011-11-25 | 2016-12-05 | Miltenyi Biotec Gmbh | Method for cell separation |
| US20150056649A1 (en) | 2012-01-13 | 2015-02-26 | Konica Minolta, Inc. | Method for quantifying cell of interest in blood, and method for evaluating system for quantifying said cell |
| US20140051060A1 (en) | 2012-05-01 | 2014-02-20 | Rarecyte, Inc. | Systems and methods for separating component materials of a suspension using immunomagnetic separation |
| KR20140078189A (ko) | 2012-12-17 | 2014-06-25 | 한국전자통신연구원 | 혈액 내 암 세포 분리 장치 및 이를 이용한 암 세포 분리 방법 |
-
2014
- 2014-08-22 KR KR1020140109966A patent/KR102323205B1/ko active IP Right Grant
-
2015
- 2015-08-04 WO PCT/KR2015/008099 patent/WO2016028011A1/ko active Application Filing
- 2015-08-04 US US15/505,827 patent/US10203332B2/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011506935A (ja) * | 2007-12-05 | 2011-03-03 | ザイオミックス インコーポレイテッド | 細胞アッセイキット及び方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20160023488A (ko) | 2016-03-03 |
| US10203332B2 (en) | 2019-02-12 |
| WO2016028011A1 (ko) | 2016-02-25 |
| US20170276682A1 (en) | 2017-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102323205B1 (ko) | 표적물질 분리장치 및 표적물질 분리방법 | |
| US11808767B2 (en) | Methods, compositions and systems for microfluidic assays | |
| Ferreira et al. | Circulating tumor cell technologies | |
| Hyun et al. | Two-stage microfluidic chip for selective isolation of circulating tumor cells (CTCs) | |
| Chen et al. | Multiscale immunomagnetic enrichment of circulating tumor cells: from tubes to microchips | |
| Zhao et al. | Tumor antigen-independent and cell size variation-inclusive enrichment of viable circulating tumor cells | |
| Kim et al. | Cyclic tangential flow filtration system for isolation of extracellular vesicles | |
| JP2016527907A (ja) | 細胞への物質の選択的送達 | |
| Kang et al. | Label-free rapid viable enrichment of circulating tumor cell by photosensitive polymer-based microfilter device | |
| US20200129981A1 (en) | Devices and methods for separating particles | |
| EP2460874B1 (en) | Method of separating target cell in biological sample | |
| JP2017116511A (ja) | 生物試料検出方法 | |
| CA2999535A1 (en) | Centrifuge-free isolation and detection of rare cells | |
| Liu et al. | Label-free inertial-ferrohydrodynamic cell separation with high throughput and resolution | |
| US20180297024A1 (en) | Method and device for selective, specific and simultaneous sorting of rare target cells in a biological sample | |
| Stucky et al. | Single-cell genomic analysis of head and neck squamous cell carcinoma | |
| Kim et al. | A viable circulating tumor cell isolation device with high retrieval efficiency using a reversibly deformable membrane barrier | |
| US11292000B2 (en) | Devices and methods for separating circulating tumor cells from biological samples | |
| KR20120060140A (ko) | 생물학적 시료 내에서 표적 세포를 분리하는 방법 | |
| Lee et al. | Enrichment of circulating tumor cells using a centrifugal affinity plate system | |
| WO2019094633A1 (en) | Methods and systems for separating biological particles | |
| JP2018157812A (ja) | 試料中に含まれる細胞の検出方法 | |
| US20240026267A1 (en) | Methods, systems, and devices for separating and characterizing circulating rare cells from biological samples | |
| Zhong | Detection and Isolation of Circulating Tumor Cells from Whole Blood Using a High-Throughput Microchip System | |
| WO2019217539A1 (en) | Devices and methods for separating circulating tumor cells from biological samples |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |