RU2015134995A - Способ получения L-лизина модифицированием гена аконитазы и/или его регуляторных элементов - Google Patents

Claims (21)

1. Способ получения L-лизина ферментацией или повышения ферментационного выхода L-лизина, включающий следующие стадии:

(1) модификацию гена аконитазы и/или его регуляторного элемента в хромосоме бактерии таким образом, что активность и/или уровень экспрессии аконитазы бактерии уменьшаются, но не элиминируются; и

(2) продуцирование L-лизина путем ферментации в бактерии, полученной с помощью модификации на стадии (1).

2. Способ по п. 1, в котором стадией модификации гена аконитазы в хромосоме бактерии является вставка, делеция или замена одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности гена аконитазы.

3. Способ по п. 2, в котором замена включает замену инициирующего кодона гена аконитазы, предпочтительно замещение GTG.

4. Способ по п. 2, в котором делеция включает делецию в нуклеотидной последовательности гена аконитазы, предпочтительно делецию 1-120 нуклеотидов, более предпочтительно делецию 1-90 нуклеотидов, наиболее предпочтительно делецию 90 нуклеотидов, например, делецию 90 нуклеотидов до терминального кодона в нуклеотидной последовательности гена аконитазы.

5. Способ по п. 1, где нуклеотидная последовательность гена аконитазы показана на SEQ ID No: 1 или 2.

6. Способ по п. 1, в котором стадией модификации регуляторного элемента гена аконитазы в хромосоме бактерии является вставка, делеция или замена одного или нескольких нуклеотидов в нуклеотидной последовательности регуляторного элемента гена аконитазы.

7. Способ по п. 6, в котором регуляторный элемент представляет собой промотор, предпочтительно, нуклеотидная последовательность такого промотора показана на SEQ ID No: 4 или 6.

8. Способ по п. 6, в котором замена включает замену в нуклеотидной последовательности промотора гена аконитазы, предпочтительно замену нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 3 или 5.

9. Способ по п. 6, в котором регуляторный элемент является транскрипционным репрессором, предпочтительно, нуклеотидная последовательность такого репрессора транскрипции показана на SEQ ID No: 7.

10. Способ по п. 6, в котором вставка включает вставку в нуклеотидную последовательность транскрипционного репрессора гена аконитазы, предпочтительно, вставка нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 8 и 7 в тандеме.

11. Способ по п. 1, в котором бактерия - это бактерия семейств Escherichia или Corynebacterium, предпочтительно Escherichia coli, Corynebacterium glutamicum или Corynebacterium pekinense.

12. Бактерия, полученная способом модификации бактерии, включающем модификацию гена аконитазы и/или его регуляторного элемента в хромосоме бактерии таким образом, что активность и/или уровень экспрессии аконитазы бактерии уменьшаются, но не элиминируются.

13. Полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого выбрана из:

(a) нуклеотидной последовательности, полученной путем замены (предпочтительно GTG) инициирующего кодона нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 1;

(b) нуклеотидной последовательности, полученной путем делеции (предпочтительно 1-120 нуклеотидов, более предпочтительно 1-90 нуклеотидов, наиболее предпочтительно 90 нуклеотидов) в нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 1 или 2, например, делеция 90 нуклеотидов до терминального кодона в нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 1 или 2; и

(c) нуклеотидной последовательности, показанной на SEQ ID No: 8 или 7 в тандеме.

14. Вектор, который содержит полинуклеотид по п. 13.

15. Применение полинуклеотида по п. 13 в способе по п. 1.

16. Применение полинуклеотида по п. 13 для получения бактерии по п. 12.