RU2015115890A - Способы получения рекомбинантных белков - Google Patents

Способы получения рекомбинантных белков Download PDF

Info

Publication number
RU2015115890A
RU2015115890A RU2015115890A RU2015115890A RU2015115890A RU 2015115890 A RU2015115890 A RU 2015115890A RU 2015115890 A RU2015115890 A RU 2015115890A RU 2015115890 A RU2015115890 A RU 2015115890A RU 2015115890 A RU2015115890 A RU 2015115890A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
host cell
protein
paragraphs
interest
polynucleotide sequence
Prior art date
Application number
RU2015115890A
Other languages
English (en)
Inventor
Катарин Лэйси КЭЙН
Original Assignee
Юсб Биофарма Спрл
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1217398.5A external-priority patent/GB201217398D0/en
Priority claimed from GB201310868A external-priority patent/GB201310868D0/en
Application filed by Юсб Биофарма Спрл filed Critical Юсб Биофарма Спрл
Publication of RU2015115890A publication Critical patent/RU2015115890A/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y306/00—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6)
    • C12Y306/01—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6) in phosphorus-containing anhydrides (3.6.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y306/00—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6)
    • C12Y306/04—Hydrolases acting on acid anhydrides (3.6) acting on acid anhydrides; involved in cellular and subcellular movement (3.6.4)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

1. Клетка-хозяин, трансфицированная белком NHEJ или его функциональным фрагментом, или полинуклеотидом, кодирующим его, где указанная полинуклеотидная последовательность находится под контролем подходящего промотора и клетка-хозяин также трансфицирована экспрессионной кассетой, содержащей полинуклеотидную последовательность (ДНК или РНК), кодирующую по меньшей мере один белок, представляющий интерес.2. Клетка-хозяин, трансфицированная полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок NHEJ или его функциональный фрагмент, где указанная полинуклеотидная последовательность находится под контролем подходящего промотора и клетка-хозяин также трансфицирована экспрессионной кассетой, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белок, представляющий интерес.3. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, где белок NHEJ представляет собой Ku70 или Ku80, или их функциональный фрагмент.4. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, трансфицированная двумя или более белками NHEJ или их функциональными фрагментами, или полинуклеотидом, или полинуклеотидами, кодирующими их.5. Клетка-хозяин по п. 4, трансфицированная Ku70 и Ku80 или их функциональными фрагментами, или полинуклеотидом, или полинуклеотидами, кодирующими их.6. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2 и 5, представляющая собой прокариотическую клетку, эукариотическую клетку или клетку дрожжей.7. Клетка-хозяин по п. 6, представляющая собой клетку СНО.8. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где белок, представляющий интерес, представляет собой антитело или его связывающий фрагмент.9. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где белок, представляющий интерес, представляет собой белок, вызывающий сайт-специфический мутагенез, такой

Claims (38)

1. Клетка-хозяин, трансфицированная белком NHEJ или его функциональным фрагментом, или полинуклеотидом, кодирующим его, где указанная полинуклеотидная последовательность находится под контролем подходящего промотора и клетка-хозяин также трансфицирована экспрессионной кассетой, содержащей полинуклеотидную последовательность (ДНК или РНК), кодирующую по меньшей мере один белок, представляющий интерес.
2. Клетка-хозяин, трансфицированная полинуклеотидной последовательностью, кодирующей белок NHEJ или его функциональный фрагмент, где указанная полинуклеотидная последовательность находится под контролем подходящего промотора и клетка-хозяин также трансфицирована экспрессионной кассетой, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую по меньшей мере один белок, представляющий интерес.
3. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, где белок NHEJ представляет собой Ku70 или Ku80, или их функциональный фрагмент.
4. Клетка-хозяин по п. 1 или 2, трансфицированная двумя или более белками NHEJ или их функциональными фрагментами, или полинуклеотидом, или полинуклеотидами, кодирующими их.
5. Клетка-хозяин по п. 4, трансфицированная Ku70 и Ku80 или их функциональными фрагментами, или полинуклеотидом, или полинуклеотидами, кодирующими их.
6. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2 и 5, представляющая собой прокариотическую клетку, эукариотическую клетку или клетку дрожжей.
7. Клетка-хозяин по п. 6, представляющая собой клетку СНО.
8. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где белок, представляющий интерес, представляет собой антитело или его связывающий фрагмент.
9. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где белок, представляющий интерес, представляет собой белок, вызывающий сайт-специфический мутагенез, такой как нуклеаза с «цинковыми пальцами», мегануклеаза или их функциональные фрагменты.
10. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотид представляет собой ДНК.
11. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотид представляет собой РНК.
12. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок NHEJ, находится в форме плазмиды.
13. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок, представляющий интерес, находится в форме плазмиды.
14. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок, представляющий интерес, находится в форме линейной ДНК или РНК.
15. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где последовательность ДНК, кодирующая белок, представляющий интерес, предоставлена в форме плазмиды и при этом плазмида дополнительно содержит последовательность ДНК, кодирующую Ku70, Ku80, сочетание Ku70 и Ku80 или их функциональный фрагмент.
16. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где промотор представляет собой сильный вирусный промотор.
17. Клетка-хозяин по п. 16, где промотор представляет собой CMV промотор.
18. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5, 7 и 17, где белок NHEJ или его функциональный фрагмент происходит из последовательности человека, хомяка, мыши, дрожжей или другого вида.
19. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5 и 7, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок NHEJ или его функциональный фрагмент, и/или экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК, кодирующую белок, представляющий интерес, дополнительно содержит селективный маркер.
20. Клетка-хозяин по п. 19, где селективный маркер представляет собой маркер глутаминсинтетазу.
21. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5, 7 и 20, где экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК, кодирующую белок, представляющий интерес, стабильно интегрирована в геном клетки.
22. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5, 7 и 20, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок NHEJ или его функциональный фрагмент, временно трансфицирована в клетку.
23. Клетка-хозяин по любому из пп. 1, 2, 5, 7 и 20, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая белок NHEJ или его функциональный фрагмент, стабильно трансфицирована в клетку.
24. Плазмидная ДНК, содержащая последовательность, кодирующую Ku70, Ku80, их сочетание или их функциональный фрагмент, при этом указанная последовательность ДНК находится под контролем подходящего промотора.
25. Плазмидная ДНК по п. 24, дополнительно содержащая ДНК, кодирующую белок, представляющий интерес, например, в случае, когда белок, представляющий интерес, представляет собой антитело или его связывающий фрагмент.
26. Плазмидная ДНК по п. 24 или 25, где ДНК является кольцевой.
27. Плазмидная ДНК по п. 24 или 25, где ДНК является линейной.
28. Способ получения клетки-хозяина, способной экспрессировать белок, представляющий интерес, кодируемый полинуклеотидной последовательностью, включающий стадию трансфицирования клетки:
a. Ku70, Ku80, их сочетанием или их функциональным фрагментом, или полинуклеотидной последовательностью или последовательностями, кодирующими их, где указанная полинуклеотидная последовательность находится под контролем подходящего промотора, и
b. экспрессионной кассетой, содержащей полинуклеотидную последовательность (ДНК или РНК), кодирующую белок, представляющий интерес.
29. Способ по п. 28, где трансфекция компонентов на стадиях a) и b) представляет собой совместную трансфекцию (сопутствующую трансфекцию).
30. Способ по п. 28, где трансфекция компонентов стадии a) происходит раньше, чем компонентов стадии b).
31. Способ по п. 28, где трансфекция компонентов стадии b) происходит раньше, чем компонентов стадии а).
32. Способ по любому из пп. 28-31, где полинуклеотидная последовательность стадии а) представляет собой последовательность ДНК, кодирующую Ku70, Ku80, их сочетание или их функциональный фрагмент.
33. Способ по любому из пп. 28-31, где полинуклеотидные последовательности стадии a) представляют собой последовательность ДНК, кодирующую Ku70, и последовательность ДНК, кодирующую Ku80.
34. Способ по п. 32, где полинуклеотидная последовательность предоставлена в форме плазмиды.
35. Способ по п. 33, где полинуклеотидная последовательность предоставлена в форме плазмиды.
36. Способ по любому из пп. 28-31, где экспрессионная кассета, содержащая последовательность ДНК, кодирующую белок, представляющий интерес, предоставлена на плазмиде.
37. Способ по любому из пп. 28-31, где полинуклеотидная последовательность, кодирующая Ku70, Ku80, их сочетание или их функциональный фрагмент, временно трансфицирована в клетку.
38. Способ по любому из пп. 28-31, где последовательность ДНК, кодирующая белок, представляющий интерес, стабильно интегрирована в геном клетки.
RU2015115890A 2012-09-28 2013-09-30 Способы получения рекомбинантных белков RU2015115890A (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1217398.5A GB201217398D0 (en) 2012-09-28 2012-09-28 Method
GB1217398.5 2012-09-28
GB1310868.3 2013-06-18
GB201310868A GB201310868D0 (en) 2013-06-18 2013-06-18 Method
PCT/EP2013/070317 WO2014049168A1 (en) 2012-09-28 2013-09-30 Methods for producing recombinant proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2015115890A true RU2015115890A (ru) 2016-11-20

Family

ID=49293640

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2015115890A RU2015115890A (ru) 2012-09-28 2013-09-30 Способы получения рекомбинантных белков

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20150252385A1 (ru)
EP (1) EP2900824A1 (ru)
JP (1) JP2015530103A (ru)
CN (1) CN104781405A (ru)
BR (1) BR112015006995A2 (ru)
CA (1) CA2885517A1 (ru)
IN (1) IN2015DN03204A (ru)
RU (1) RU2015115890A (ru)
WO (1) WO2014049168A1 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105801693B (zh) * 2016-04-22 2019-11-22 成都正能生物技术有限责任公司 一种dna修复蛋白ku80的单克隆抗体及应用
EP3775160A4 (en) * 2018-04-02 2021-12-29 University of Delaware Method to alter chinese hamster ovary cell line stability

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6455274B1 (en) * 1994-11-08 2002-09-24 Human Genome Sciences, Inc. Human DNA Ligase IV
GB9907687D0 (en) * 1999-04-01 1999-05-26 Kudos Pharm Ltd Assays methods and means
WO2002077228A1 (en) * 2001-03-22 2002-10-03 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Gene involved in v(d)j recombination and/or dna repair
ES2350048T3 (es) * 2004-04-02 2011-01-17 Dsm Ip Assets B.V. Mutantes fúngicos filamentosos con eficiencia mejorada de recombinación homóloga.
DE602007012846D1 (de) * 2006-04-08 2011-04-14 Dsm Ip Assets Bv Verbessertes verfahren zur homologen rekombination in eukaryontischen zellen

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014049168A1 (en) 2014-04-03
EP2900824A1 (en) 2015-08-05
CA2885517A1 (en) 2014-04-03
IN2015DN03204A (ru) 2015-10-02
BR112015006995A2 (pt) 2017-07-04
US20150252385A1 (en) 2015-09-10
JP2015530103A (ja) 2015-10-15
CN104781405A (zh) 2015-07-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dang et al. Optimizing sgRNA structure to improve CRISPR-Cas9 knockout efficiency
MX2021000209A (es) Metodos y productos para transfeccion de celulas.
EA201791343A1 (ru) Композиции и способы для конструирования вирусного генома in vitro
EP4368726A3 (en) Reagents and methods for the analysis of linked nucleic acids
Narayanavari et al. Sleeping Beauty transposition: from biology to applications
WO2018073393A3 (en) Tal-effector nuclease (talen) -modified allogenic cells suitable for therapy
MX2019002498A (es) Metodos y productos para la expresion de proteinas en celulas.
CY1120538T1 (el) Τροποποιημενες ριβονουκλεοπρωτεϊνες cascade και χρησεις αυτων
AU2015286820A8 (en) Stabilization of poly(A) sequence encoding DNA sequences
EA201792036A1 (ru) Способ осуществления сайт-направленной модификации растительных геномов с использованием ненаследуемых материалов
FI3536797T3 (fi) Siirtogeenin tehostettu ilmentäminen ja prosessointi
EA201791991A1 (ru) Способ улучшения способности противодействовать внедренным днк-содержащим вирусам растения
WO2013151670A3 (en) Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
MX2022001849A (es) Nucleasas guiadas por acido ribonucleico (arn) y sus fragmentos activos y variantes y metodos de uso.
NZ705745A (en) Fad3 performance loci and corresponding target site specific binding proteins capable of inducing targeted breaks
CA2703045A1 (en) Methods and compositions for targeted integration
RU2016136855A (ru) Биомаркер-направленная многоцелевая иммунотерапия
MX2020001998A (es) Tecnología de alteración específica de secuencia objetivo utilizando reconocimiento de objetivos del nucleotído.
MX2021015157A (es) Construcciones de edicion de genes dirigidas y metodos de uso de las mismas.
MX2014015277A (es) Elementos de adn baculoviral para la expresion de proteinas recombinantes en una celula huesped.
SA518391787B1 (ar) تركيبة لعلاج متلازمة كريغلر نجار
RU2015115890A (ru) Способы получения рекомбинантных белков
Janssens et al. CUT&RUN: Targeted in situ genome-wide profiling with high efficiency for low cell numbers
JP7416745B2 (ja) 改変細胞、調製方法、及び構築物
JP5246904B2 (ja) 外来遺伝子導入用ベクター及び外来遺伝子が導入されたベクターの製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20180112