RU2014117466A

RU2014117466A - Система очистки вирусных векторов

Info

Publication number: RU2014117466A
Application number: RU2014117466/10A
Authority: RU
Inventors: Кьяра БОВОЛЕНТА; Анна СТОРНАЮОЛО
Original assignee: МОЛМЕД СпА
Priority date: 2011-10-05
Filing date: 2012-10-05
Publication date: 2015-11-10
Also published as: KR20140068259A; ZA201401481B; IN2014CN03368A; AU2012320480A1; IL231876A0; NZ623092A; CN103842501B; EP2764094A1; WO2013050523A1; US20140248695A1; RU2607044C2; CA2848939A1; CN103842501A; BR112014008225A2; JP2014528729A

Abstract

1. Способ очистки вирусного вектора, включающий:ii. введение экзогенного гена, кодирующего маркер клеточной поверхности и представляющего интерес гена, в упаковывающую линию клеток;iii. культивирование получаемой таким образом линии клеток-продуцентов;iv. сбор супернатанта, содержащего частицы вирусного вектора, несущие маркер клеточной поверхности на своей внешней оболочке;v. инкубирование указанного супернатанта с лигандом, способным связываться с маркером клеточной поверхности;vi. выделение комплекса лиганд-вирусный вектор;vii. получение очищенных частиц вирусного вектора.2. Способ по п. 1, где вирусный вектор выбран из ретровирусного вектора, лентивирусного вектора, альфа-вирусного вектора, вектора на основе рабдовируса и вектора на основе ортомиксовируса.3. Способ по п. 1, где маркер клеточной поверхности выбран из CD26, CD36, CD44, CD3, CD25 или усеченной формы низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (ΔLNGFR).4. Способ по п. 3, где маркер клеточной поверхности представляет собой усеченную форму низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (ΔLNGFR).5. Способ по п. 1, где экспрессия маркера клеточной поверхности является временной.6. Способ по п. 1, где экспрессия маркера клеточной поверхности является стабильной.7. Способ по п. 1, где представляющий интерес ген и экзогенный ген экспрессируются в одном и том же векторе для переноса.8. Способ по п. 1, где представляющий интерес ген и экзогенный ген экспрессируются в отдельных векторах.9. Способ по п. 1, где лиганд представляет собой химическую или биологическую молекулу, выбранную из группы, состоящей из агонистов, антагонистов, пептидов, пептидомиметиков, антител, фрагментов антит

Claims

1. Способ очистки вирусного вектора, включающий:

ii. введение экзогенного гена, кодирующего маркер клеточной поверхности и представляющего интерес гена, в упаковывающую линию клеток;

iii. культивирование получаемой таким образом линии клеток-продуцентов;

iv. сбор супернатанта, содержащего частицы вирусного вектора, несущие маркер клеточной поверхности на своей внешней оболочке;

v. инкубирование указанного супернатанта с лигандом, способным связываться с маркером клеточной поверхности;

vi. выделение комплекса лиганд-вирусный вектор;

vii. получение очищенных частиц вирусного вектора.

2. Способ по п. 1, где вирусный вектор выбран из ретровирусного вектора, лентивирусного вектора, альфа-вирусного вектора, вектора на основе рабдовируса и вектора на основе ортомиксовируса.

3. Способ по п. 1, где маркер клеточной поверхности выбран из CD26, CD36, CD44, CD3, CD25 или усеченной формы низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (ΔLNGFR).

4. Способ по п. 3, где маркер клеточной поверхности представляет собой усеченную форму низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (ΔLNGFR).

5. Способ по п. 1, где экспрессия маркера клеточной поверхности является временной.

6. Способ по п. 1, где экспрессия маркера клеточной поверхности является стабильной.

7. Способ по п. 1, где представляющий интерес ген и экзогенный ген экспрессируются в одном и том же векторе для переноса.

8. Способ по п. 1, где представляющий интерес ген и экзогенный ген экспрессируются в отдельных векторах.

9. Способ по п. 1, где лиганд представляет собой химическую или биологическую молекулу, выбранную из группы, состоящей из агонистов, антагонистов, пептидов, пептидомиметиков, антител, фрагментов антител, аффибоди.

10. Способ по п. 1, где лиганд является связанным с фрагментом, который можно выделять из супернатанта.

11. Способ по п. 9 или 10, где лиганд представляет собой антитело, конъюгированное с магнитными гранулами, и выделение проводят, применяя магнитное поле к раствору, содержащему комплекс антитело-вирусный вектор.

12. Способ по п. 11, где очищенный VV получают снятием магнитного поля.

13. Способ по п. 11, где выделение комплекса антитело-вирусный вектор проводят на колонке.

14. Экзогенный маркер клеточной поверхности, экспрессируемый в упаковывающей линии клеток для применения для очистки вирусных векторов, получаемых указанной упаковывающей линией клеток.

15. Экзогенный маркер клеточной поверхности по п. 14, где указанный маркер выбран из CD26, CD36, CD44, CD3, CD25 или усеченной формы низкоаффинного рецептора фактора роста нервов (ΔLNGFR).

16. Экзогенный маркер клеточной поверхности по п. 14 или 15, где указанный маркер представляет собой ΔLNGFR.