RU2008148311A

RU2008148311A - Детектирование молекул-мишеней в пробе

Info

Publication number: RU2008148311A
Application number: RU2008148311/15A
Authority: RU
Inventors: ДЕР ВЕЙК Теа ВАН (NL); ДЕР ВЕЙК Теа ВАН; Эдуард Герард Мария ПЕЛССЕРС (NL); Эдуард Герард Мария ПЕЛССЕРС; Джессика АМАДИО (NL); Джессика АМАДИО
Original assignee: Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. (Nl); Конинклейке Филипс Электроникс Н.В.
Priority date: 2006-05-09
Filing date: 2007-04-27
Publication date: 2010-06-20
Also published as: US20090117670A1; BRPI0711346A2; EP2027468B1; JP5200003B2; BRPI0711346A8; ATE514086T1; CN101438163A; EP2027468A1; US10488408B2; JP2009536344A; CN101438163B; RU2444736C2; WO2007132373A1

Abstract

1. Способ детектирования мишени, имеющей только один эпитоп, в пробе, подозреваемой на наличие мишени, включающий: ! a) контактирование пробы и первой связывающей молекулы, присоединенной к магнитной частице, в одно и то же время или в разное время, со второй связывающей молекулой, присоединенной к твердой подложке, где первая связывающая молекула способна связываться со второй связывающей молекулой, и где мишень способна препятствовать указанному связыванию; и приложение магнитной силы для перемещения магнитной частицы в положение в непосредственной близости к твердой подложке; и ! b) детектирование количества магнитных частиц, связанных с твердой подложкой посредством связывания первой связывающей молекулы со второй связывающей молекулой, где указанное число магнитных частиц определяется посредством обеспечения связывания третьей связывающей молекулы, способной к селективному связыванию с первой связывающей молекулой, с первыми связывающими молекулами, присоединенными к указанным магнитным частицам, с последующим детектированием третьих связывающих молекул, связанных с указанными первыми связывающими молекулами, и где первые связывающие молекулы, с которыми обеспечено связывание указанной третьей связывающей молекулы, являются первыми связывающими молекулами, которые не включены в связывание со второй связывающей молекулой. ! 2. Способ по п.1, где первая связывающая молекула способна селективно связывать мишени в пробе и вторую связывающую молекулу, и где стадия контактирования a) включает обеспечение конкуренции второй связывающей молекулы с мишенью за указанное селективное связывание с пер

Claims

1. Способ детектирования мишени, имеющей только один эпитоп, в пробе, подозреваемой на наличие мишени, включающий:

a) контактирование пробы и первой связывающей молекулы, присоединенной к магнитной частице, в одно и то же время или в разное время, со второй связывающей молекулой, присоединенной к твердой подложке, где первая связывающая молекула способна связываться со второй связывающей молекулой, и где мишень способна препятствовать указанному связыванию; и приложение магнитной силы для перемещения магнитной частицы в положение в непосредственной близости к твердой подложке; и

b) детектирование количества магнитных частиц, связанных с твердой подложкой посредством связывания первой связывающей молекулы со второй связывающей молекулой, где указанное число магнитных частиц определяется посредством обеспечения связывания третьей связывающей молекулы, способной к селективному связыванию с первой связывающей молекулой, с первыми связывающими молекулами, присоединенными к указанным магнитным частицам, с последующим детектированием третьих связывающих молекул, связанных с указанными первыми связывающими молекулами, и где первые связывающие молекулы, с которыми обеспечено связывание указанной третьей связывающей молекулы, являются первыми связывающими молекулами, которые не включены в связывание со второй связывающей молекулой.

2. Способ по п.1, где первая связывающая молекула способна селективно связывать мишени в пробе и вторую связывающую молекулу, и где стадия контактирования a) включает обеспечение конкуренции второй связывающей молекулы с мишенью за указанное селективное связывание с первой связывающей молекулой.

3. Способ по п.2, где вторая связывающая молекула идентична мишени или является гомологом мишени.

4. Способ по п.1, где вторая связывающая молекула способна селективно связывать мишени в пробе и первую связывающую молекулу, и где стадия контактирования a) включает обеспечение конкуренции первой связывающей молекулы с мишенью за указанное селективное связывание со второй связывающей молекулой.

5. Способ по п.4, где первая связывающая молекула идентична мишени или является гомологом мишени.

6. Способ по п.1, где мишень выбрана из группы, состоящей из маленькой молекулы, лекарственного вещества, белка, пептида, фермента, гормона и нуклеиновой кислоты.

7. Способ по п.6, где мишень представляет собой лекарственное вещество, например лекарственное вещество, вызывающее наркотическую зависимость.

8. Способ по п.7, где лекарственное вещество, вызывающее наркотическую зависимость, является морфином, кокаином, ТГК, анаболическими стероидами или лекарственным веществом группы амфетамина/метамфетамина.

9. Способ по п.1, где магнитная сила приложена таким способом, чтобы уменьшить или устранить влияние различия в подвижности между мишенью и первой связывающей молекулой, присоединенной к магнитной метке, на связывание со второй связывающей молекулой.

10. Способ по п.9, где магнитная сила приложена посредством электромагнита, катушки без сердечника или постоянного магнита.

11. Способ по п.1, дополнительно включающий перед стадией детектирования b) стадию удаления первых связывающих молекул, несвязанных со второй связывающей молекулой в ходе стадии a).

12. Способ по п.11, где первые связывающие молекулы, несвязанные со второй связывающей молекулой, удаляют посредством приложения магнитной силы.

13. Способ по п.1 или 11, где первая связывающая молекула присоединяется к указанной магнитной частице через спейсерную молекулу, белок или пару сильного связывания.

14. Способ по п.13, где спейсерная молекула представляет собой алкилендиамин или этилендиамин.

15. Способ по п.1, где твердая подложка представляет собой поверхность сенсорного устройства, например магнитного сенсорного устройства.

16. Способ по п.15, где поверхность сенсора представляет собой поверхность золота.

17. Способ по п.16, где поверхность золота покрыта белком, с которым связана вторая связывающая молекула.

18. Способ по п.17, где указанный белок представляет собой A-белок или G-белок, и где вторая связывающая молекула представляет собой антитело, способное к связыванию A-белком или G-белком, соответственно.

19. Способ по п.1, где число магнитных частиц определяется на стадии b) с помощью магнитного сенсорного устройства.

20. Способ по п.1, где указанное детектирование выполняется посредством детектируемой метки, которая связана с третьей связывающей молекулой.

21. Способ по п.1, где указанное детектирование выполняется посредством обеспечения связывания агента, который связан с детектируемой меткой и способен к селективному связыванию с третьей связывающей молекулой, с третьими связывающими молекулами, связанными с указанными первыми связывающими молекулами, с последующим детектированием указанной детектируемой метки.

22. Способ по п.20 или 21, где детектируемая метка выбрана из группы, состоящей из флуоресцентной метки, колориметрической метки, хемилюминесцентной метки, ферментной метки (например, пероксидазы хрена), радиоактивной метки, электростатически заряженной метки и донорно-акцепторной метки.

23. Способ по п.1, где указанная проба состоит из или получена из мочи, крови, пота, глазной жидкости, внутриротовой жидкости (слюны) или волос.

24. Способ по п.1, где магнитная частица выбрана из группы, состоящей из магнитной, диамагнитной, парамагнитной, суперпарамагнитной, ферримагнитной и ферромагнитной частицы.

25. Способ по п.24, где магнитная частица имеет размер приблизительно от 10 нм до приблизительно 10 мкм, приблизительно от 50 нм до приблизительно 1 мкм, приблизительно от 100 нм до приблизительно 500 нм, приблизительно 300 нм или приблизительно 200 нм.

26. Применение магнита для приложения магнитной силы с целью перемещения магнитной частицы в положение в непосредственной близости к твердой подложке в любом из способов по пп.1-25.

27. Применение по п.26, где магнит представляет собой электромагнит, катушку без сердечника или постоянный магнит.