RU2008105546A

RU2008105546A - Человеческие моноклональные антитела к фактору vii, связывающие домен gla, и их применение

Info

Publication number: RU2008105546A
Application number: RU2008105546/13A
Authority: RU
Inventors: Ганс Курт ПИНГЕЛЬ (DK); Ганс Курт ПИНГЕЛЬ; Эльзе Мари НИКОЛАЙСЕН (DK); Эльзе Мари НИКОЛАЙСЕН; Янус КРАРУП (DK); Янус КРАРУП
Original assignee: Ново Нордиск Хелс Кеа Аг (Ch); Ново Нордиск Хелс Кеа Аг
Priority date: 2005-08-31
Filing date: 2006-08-31
Publication date: 2009-10-10
Also published as: KR20080039969A; WO2007026000A2; AU2006286498A1; CA2620641A1; BRPI0615247A2; EP1928911A2; CN101253197A; US20090017557A1; WO2007026000A3; JP2009505673A

Abstract

1. Моноклональное антитело, которое связывается с эпитопом, присутствующим на интактном гамма-карбоксиглутаминовокислотном домене человеческого FVII дикого типа, только в присутствии по меньшей мере 0,05 мМ двухвалентного катиона. ! 2. Моноклональное антитело по п.1, где указанный эпитоп включает один или более чем один из аминокислотных остатков Phe4, Leu5, Gla6, Gla7, Leu8, Pro10, Gly11, Gla14, Arg15, Gla16, Cys17, Gla19, Gla20, Cys22, Gla25, Gla26, Ala27, Gla29, Phe31, Lys32, Gla35 SEQ ID NO:1. ! 3. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело конкурирует с антителом, содержащим: ! а) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5; ! б) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9; или ! в) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13. ! 4. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело содержит: ! (а) вариабельный участок CDR1 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 24-34 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, вариабельный участок CDR2 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-56 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, вариабельный участок CDR3 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 89-95 аминокисл

Claims

1. Моноклональное антитело, которое связывается с эпитопом, присутствующим на интактном гамма-карбоксиглутаминовокислотном домене человеческого FVII дикого типа, только в присутствии по меньшей мере 0,05 мМ двухвалентного катиона.

2. Моноклональное антитело по п.1, где указанный эпитоп включает один или более чем один из аминокислотных остатков Phe4, Leu5, Gla6, Gla7, Leu8, Pro10, Gly11, Gla14, Arg15, Gla16, Cys17, Gla19, Gla20, Cys22, Gla25, Gla26, Ala27, Gla29, Phe31, Lys32, Gla35 SEQ ID NO:1.

3. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело конкурирует с антителом, содержащим:

а) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5;

б) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9; или

в) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13.

4. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело содержит:

(а) вариабельный участок CDR1 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 24-34 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, вариабельный участок CDR2 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-56 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, вариабельный участок CDR3 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 89-95 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3, и вариабельный участок CDR1 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 33-35 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, вариабельный участок CDR2 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-64 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, вариабельный участок CDR3 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 99-112 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5;

(б) вариабельный участок CDR1 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 24-34 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7, вариабельный участок CDR2 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-56 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7, вариабельный участок CDR3 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 89-95 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7, и вариабельный участок CDR1 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 33-35 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:9, вариабельный участок CDR2 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-64 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:9, вариабельный участок CDR3 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 99-112 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:9; или

(в) вариабельный участок CDR1 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 24-34 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:11, вариабельный участок CDR2 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-56 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:11, вариабельный участок CDR3 легкой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 89-95 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:11, и вариабельный участок CDR1 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 33-35 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13, вариабельный участок CDR2 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 50-64 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13, вариабельный участок CDR3 тяжелой цепи, включающий аминокислотную последовательность, соответствующую остаткам 99-112 аминокислотной последовательности SEQ ID NO:13.

5. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело содержит:

(а) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:3, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:5;

(б) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:7, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:9; или

(в) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:11, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 50% идентичную SEQ ID NO:13.

6. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело содержит:

(а) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:3, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5;

(б) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9; или

(в) вариабельную область легкой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11, и вариабельную область тяжелой цепи, включающую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13.

7. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело представляет собой антитело lgG1, lgG2, lgG3 или lgG4.

8. Моноклональное антитело по любому из пп.1 и 2, где это моноклональное антитело представляет собой антитело lgG4.

9. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая моноклональное антитело, как определено в любом из пп.1-8.

10. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты, как определено в п.9.

11. Клетка, содержащая вектор, как определено в п.10.

12. Способ определения количества полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, в образце, где указанный способ включает стадии:

а) приведения образца в контакт с первым моноклональным антителом по любому из пп.1-8 в присутствии по меньшей мере 0,05 мМ двухвалентного катиона,

б) предоставления возможности для связывания любого из полипептидов FVII, присутствующих в этом образце, с указанным первым моноклональным антителом с образованием первого комплекса антитела,

в) приведения указанного первого комплекса антитела в контакт с обнаружимым вторым моноклональным антителом, специфичным ко второму эпитопу, присутствующему на указанном полипептиде FVII, где указанный второй эпитоп является отличным от эпитопа указанного первого моноклонального антитела,

г) предоставления возможности для связывания указанного первого комплекса антитела с указанным обнаружимым вторым моноклональным антителом с образованием второго комплекса антитела и

д) определения количества указанного второго комплекса антитела путем определения количества указанного второго моноклонального антитела, присутствующего во втором комплексе антитела.

13. Способ определения количества полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, в образце, где указанный способ включает стадии:

а) приведения образца в контакт со вторым моноклональным антителом, специфичным к эпитопу, присутствующему на указанном полипептиде FVII, где указанный эпитоп является отличным от эпитопа, идентифицируемого моноклональным антителом по любому из пп.1-8,

б) предоставления возможности для связывания любого из полипептидов FVII, присутствующих в этом образце, с указанным вторым моноклональным антителом с образованием первого комплекса антитела,

в) приведения указанного первого комплекса антитела в контакт с обнаружимым первым моноклональным антителом по любому из пп.1-8 в присутствии по меньшей мере 0,05 мМ двухвалентного катиона,

г) предоставления возможности для связывания указанного первого комплекса антитела с указанным обнаружимым первым моноклональным антителом с образованием второго комплекса антитела и

д) определения количества указанного второго комплекса антитела путем определения количества указанного первого моноклонального антитела, присутствующего во втором комплексе антитела.

14. Способ по любому из пп.12 или 13, где второй эпитоп присутствует на EGF-подобном домене 1 или EGF-подобном домене 2 указанного полипептида FVII.

15. Способ по любому из пп.12 и 13, где указанный двухвалентный катион выбран из группы, состоящей из Zn²⁺, Ca²⁺, Mg²⁺, Cu²⁺, Mn²⁺, Co²⁺, Fe²⁺, Sm²⁺, Mi²⁺, Cd²⁺, Нg²⁺, Sm²⁺ и Uo²⁺.

16. Способ по п.15, где указанный двухвалентный катион представляет собой Са²⁺.

17. Способ по п.15, где указанный двухвалентный катион присутствует в количестве выше 0,05 мМ, как например выше 0,1 мМ, как например выше 0,6 мМ, как например выше 1 мМ, как например выше 5 мМ.

18. Способ по п.15, где указанный двухвалентный катион присутствует в количестве в интервале от примерно 0,05 мМ до примерно 50 мМ, как например от примерно 0,1 мМ до примерно 30 мМ, как например от примерно 0,6 мМ до примерно 30 мМ, как например от примерно 1 мМ до примерно 20 мМ, как например от примерно 5 мМ до примерно 10 мМ.

19. Способ по пп.12 и 13, где обнаружение указанного обнаружимого антитела проводят способом, выбранным из ЭЛАЙЗА, поверхностного плазменного резонанса и пьезоэлектрических биосенсоров.

20. Способ определения доли полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, от суммарного количества полипептида FVII в образце, включающий стадии:

а) определения количества полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, путем применения способа по любому из пп.12-19 и

б) определения суммарного количества полипептида FVII, присутствующего в образце.

21. Применение способа по любому из пп.12-20 для оптимизации выхода функционального полипептида FVII в процессе продуцирования.

22. Способ очистки полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, из образца, где указанный способ включает стадии:

(а) связывания антитела по любому из пп.1-8 с колонкой для иммуноаффинной очистки,

(б) нанесения указанного образца на указанную колонку в присутствии по меньшей мере 0,05 мМ двухвалентного катиона и

(в) элюирования указанных полипептидов FVII, содержащих интактный гамма-карбоксиглутаминовокислотный домен, с колонки путем удаления двухвалентного катиона из колонки.

23. Способ по п.22, где указанный двухвалентный катион представляет собой Са²⁺, присутствующий в количестве в интервале от примерно 0,05 мМ до примерно 50 мМ, как например от примерно 0,1 мМ до примерно 30 мМ, как например от примерно 0,6 мМ до примерно 30 мМ, как например от примерно 1 мМ до примерно 20 мМ, как например от примерно 5 мМ до примерно 10 мМ.