JP6009431B2 - アフィニティー精製の方法 - Google Patents
アフィニティー精製の方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6009431B2 JP6009431B2 JP2013253665A JP2013253665A JP6009431B2 JP 6009431 B2 JP6009431 B2 JP 6009431B2 JP 2013253665 A JP2013253665 A JP 2013253665A JP 2013253665 A JP2013253665 A JP 2013253665A JP 6009431 B2 JP6009431 B2 JP 6009431B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- binding
- target molecule
- binding agent
- epitopes
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/44—Antibodies bound to carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
a) 標的分子に少なくとも2つ存在するエピトープに対して結合親和性を有する結合剤;
b) 標的分子のエピトープ(1)に対して結合親和性を有する結合剤および標的分子の異なるエピトープ(2)に対して結合親和性を有する異なる結合剤。
a) 標的分子上に少なくとも2つ存在するエピトープに結合する、抗体またはその断片の選択;
b) 免疫吸着剤物質への抗体またはその断片の結合;
c) 好ましくは標的分子に対して結合剤の多価結合が起こる条件での、免疫吸着剤物質への標的分子を含む組成物の添加;
d) 非特異的な結合物を除去するための、添加した免疫吸着剤の洗浄;および
e) 溶出条件の適用による標的分子の溶出。
1) 重鎖のみから成りもともと軽鎖を欠く、ラクダ科動物(camelids)およびサメから得られる抗体;
2) 通常、VHHドメインと呼ばれる、1)に定義した抗体の可変ドメイン;
3) 1)で定義したような、例えば「ラクダ科動物」の抗体の改変された形態(engineered forms)であって、ラクダ科動物(またはサメ)のVHHドメインのフレームワーク配列が、その他の供給源から得られたCDRに融合されたもの;
4) 免疫グロブリン様の可変ドメインの改変された形態であって、様々な免疫グロブリン様分子のフレームワーク配列が、例えばWO 04/108749に記載されるように、所定の標的分子に特異的なCDRに結合したもの。
配列ID 1:
QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTISRYAMSWFRQAPGKEREFVAVARRSGDGAFYADSVQGRFTVSRDDAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAIDSDTFYSGSYDYWGQGTQVTVSS。
以下のプロトコールは、特定のVHH断片を、どのように単離し、クローン化し、発現させ、その後所定のマトリックスに結合させることができるかを示す例である。
VHH抗体断片を、Saccharomyces cerevisiaeの遺伝的に改変した株を用いて、1リッターまた10リッター(振盪フラスコ)の発酵スケールで作製し、SPセファロースfast flow (Amersham Biosciences)のイオン交換クロマトグラフィーを用いて精製した。精製した抗体を、3.5 kDa遮断(cut-off)チューブ(Spectra/Por 3; Spectrum Medical Industries)を用いて、4℃で48時間、pH 7.4のPBS緩衝液または所望のカップリング緩衝液を3回交換して透析を行った。精製したサンプルの濃度は、OD280で決定した。精製した全てのサンプルは、使用しない場合は-20℃で保存した。
VHH断片Hu-カッパー-1、Hu-Fc-1およびHu-Fc-2の結合親和性定数を、BiaCore 3000の表面プラズモン共鳴解析法(surface plasmon resonance analysis)(SPR)を用いて決定した。この目的のため、精製したVHH断片を、CM5センサーチップの表面に固定し、次に、異なる濃度でヒトFabおよび/またはヒトIgG抗体を含むHBS-EP緩衝液(0.01 M HEPES, pH7,4; 0.15 M NaCl; 3 mM EDTA; 0.005% 界面活性剤P20)とともにインキュベートした。30μl/minで3分間結合させ、その後30μl/minで15分間脱離段階を行った。結合曲線を、Biacoreソフトウェアを用いて、1:1ラングミュア結合モデルに従って適合させた。計算した親和性データの概観を表2に示す。抗Hu-カッパー-1断片に関して、結合力の効果が、Fab分子とIgG分子との間の脱離率における大きな差から明らかに実証される。抗Hu-カッパー-1断片がセンサーチップの表面に固定されているため、該表面は、1つのIgG分子に存在する2つの異なるエピトープと同時に相互作用することができる。ヒトFab断片との一価の相互作用と比較して、IgGの脱離率(kdiss)は有意に低く(> 1000倍)、KD値はIgGが約120 fMであるのに対してFab断片が6.3 nMとなった。後者の値は、2つの抗Hu-Fc VHHのKD値と同じ範囲であり(それぞれ、IgGに対して6.4および2.2 nM)、一価の相互作用を表している。
N-ヒドロキシスクシンイミド(NHS)活性化セファロース4 Fast Flowへのカップリング
精製後、抗体をNHSカップリング緩衝液で透析した。この緩衝液は、0.1 MのHEPES pH 8.3を含む。最適なカップリング効率のために推奨される、カップリング溶液/NHSセファロースの体積の割合は、0.5:1である。抗体は、0.5-15 mg/mlの異なる濃度とし、抗体/抗体のNHSセファロースの割合は1:1から10:1の間で変えた。2つのリガンドの混合物をマトリックスに固定化する場合、1:1のリガンド比を使用した。以下の方法を、抗体を、NHS活性化セファロース4 Fast Flow (General Electric Healthcare)にカップリングするために使用した。その後、マトリックスをNHSカップリング緩衝液で2度洗浄した。NHSセファロースを、抗体溶液と混合し、4℃で一晩または室温で1時間放置した。インキュベーション後、ゲル材料をガラスろ過器でろ過し、ゲル材料の非反応基を、Tris (0.1 M pH 8.0)にて室温で1時間ブロッキングした。カップリングした培地を、低いpHおよび高いpHのものを交互に用いて(3x 10 cv PBS pH 2および 3x 10 cv PBS pH 7.4)洗浄した。非結合画分を用いて、カップリング効率を決定した。これは、カップリングの前後に、カップリング溶液のOD280値を測定することで決定した。また、カップリング効率は、カップリング前後で、カップリング溶液のSDS-PAGEでのタンパク質パターンをみることでも決定した。
カラムは、HR 5/カラム(GE health)を用いて、カップリングした抗体マトリックスで構成した。400μlのカラムボリュームを使用した。全てのクロマトグラフィー実験は、Akta explorer 100にて行った。2緩衝液システムを使用した。緩衝液A1のローディング緩衝液は、PBS pH 7.4であり、緩衝液Bの溶出緩衝液は、例えば、PBSに8 M HClを添加してpH 2.1にしたもの、または0.1 Mグリシン-HClを添加してpH 2もしくは3にしたものを用いた。ことなるプログラムを用いた。タンパク質検出は、OD214およびOD280のシグナルをモニターして、流れ作業(on line)で行った。1 mlの体積で画分を回収した。画分は、20μlのTris(2 M)ですぐに中和した。
動的結合容量を決定するため、カラムに標的分子を添加した。150 cm/hの流速を使用した。フロースルーおよび溶出液中の標的分子の量を、フロースルーおよび溶出液ピーク面積の積分から算出した。動的容量は、溶出ピーク面積を全ピーク面積(フロースルー + 溶出)で割り(devised)、その値に標的分子の量を乗じた値である。
VHH断片(リガンド)Hu-カッパー-1、Hu-Fc-1およびHu-Fc-2を、先に記載のとおり、NHSセファロースに固定化した。リガンド密度は、マトリックス1 ml当り20 mgのリガンドとした。動的結合容量は、上述の方法を用いて決定した。カラムに、予想される動的結合容量よりも高い量のヒトIgGを添加した。溶出は、pH値が2から4の間の0.1 Mグリシン緩衝液を用いて行った。
この実施例は、標的分子、この場合はヒトIgG抗体の異なるエピトープをそれぞれ認識する、少なくとも2つの異なるVHHリガンドを用いる多価結合によって誘導される、結合容量の増大の特徴を実証する。
この実施例は、標的分子、この場合はヒト血清アルブミンの異なるエピトープをそれぞれ認識する少なくとも2つの異なるリガンドを用いて、多価結合により誘導される結合容量の増大の特徴を実証する。
Boersma, W.J.A., Bogaerts, W.J.C., Bianchi, A.T.J., Claassen, E., 1992. Adjuvant properties of stable water-in-oil emulsions: evaluation of the experience with specol. Res. Immunol. 143, 503-512.
Chomczynnski, P., Sacchi, N., 1987. Single step method of RNA isolation by acid guanidium thiocyanate-phenolchloroform extraction. Anal. Biochem. 162, 156-159.
Frenken G.J., Richard H.J. van der Linden, Pim W.J.J. Hermans ,J. Wil Bos a, Robin C. Ruuls, Bernard de Geus, C. Theo Verrips, 2000, Journal of Biotechnology 78, 11-21.
Claims (4)
- IgG免疫グロブリンを精製する方法であって、
a)少なくとも1つの単一特異的結合剤を含む免疫吸着剤物質に前記免疫グロブリンを結合させる段階を含み、前記結合剤が前記免疫グロブリンのFab断片上の、少なくとも30オングストローム空間的に分離した少なくとも2つのエピトープに対して親和性を有し、それによって前記単一特異的結合剤による、少なくとも2つのエピトープの多価結合があり、
b)前記単一特異的結合剤は、重鎖のみから成り且つ本来軽鎖を欠いた、ラクダ科動物から得られる抗体の可変ドメインであり、
c)前記少なくとも2つのエピトープが、前記免疫グロブリン上に繰り返される少なくとも2つの免疫学的に同一なエピトープである方法。 - 請求項1に記載の方法であって、前記結合剤が免疫グロブリン由来の可変ドメインを含み、前記可変ドメインが、単一のポリペプチド鎖で前記免疫グロブリン上のエピトープに対する完全な抗原結合部位を含み、前記可変ドメインのフレームワークアミノ酸配列が、SEQ ID No.1-33の何れか1つのフレームワークアミノ酸配列と、少なくとも90%のアミノ酸の同一性を有する方法。
- 請求項1または請求項2に記載の方法であって、少なくとも2つのエピトープが、前記免疫グロブリンのCDRの外部にある方法。
- 請求項1から3の何れか1項に記載の方法であって、前記少なくとも2つのエピトープが、ヒト免疫グロブリンのエピトープである方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP04078282 | 2004-12-02 | ||
EP04078282.3 | 2004-12-02 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007544292A Division JP5875745B2 (ja) | 2004-12-02 | 2005-12-02 | アフィニティー精製の方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014077001A JP2014077001A (ja) | 2014-05-01 |
JP6009431B2 true JP6009431B2 (ja) | 2016-10-19 |
Family
ID=34928702
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007544292A Active JP5875745B2 (ja) | 2004-12-02 | 2005-12-02 | アフィニティー精製の方法 |
JP2013253665A Active JP6009431B2 (ja) | 2004-12-02 | 2013-12-06 | アフィニティー精製の方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007544292A Active JP5875745B2 (ja) | 2004-12-02 | 2005-12-02 | アフィニティー精製の方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20080249285A1 (ja) |
EP (1) | EP1817342B1 (ja) |
JP (2) | JP5875745B2 (ja) |
CN (1) | CN101072794B (ja) |
CA (1) | CA2589839C (ja) |
DK (1) | DK1817342T3 (ja) |
ES (1) | ES2408256T3 (ja) |
PT (1) | PT1817342E (ja) |
WO (1) | WO2006059904A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2487190A3 (en) | 2007-07-13 | 2012-11-14 | Bac Ip B.V. | Single-domain antigen-binding proteins that bind mammalian IgG |
DK2220107T3 (en) * | 2007-11-12 | 2017-02-13 | Chreto Aps | Double affinity polypeptide for purification |
EP2670779B1 (en) | 2011-02-01 | 2017-08-02 | Bac Ip B.V. | Antigen-binding protein directed against epitope in the ch1 domain of human igg antibodies |
WO2013125221A1 (ja) * | 2012-02-21 | 2013-08-29 | 静岡県 | 抗体精製用アフィニティリガンド |
CN103113455B (zh) * | 2012-11-23 | 2015-07-22 | 南宁市蓝光生物技术有限公司 | 血凝素肽标签重组蛋白免疫亲和纯化富集柱制备及其应用 |
EP3302553A4 (en) * | 2015-05-28 | 2019-03-06 | Bio-rad Laboratories, Inc. | AFFINITY LIGANDS AND ASSOCIATED METHODS |
EP3375875A4 (en) * | 2015-11-09 | 2018-12-05 | National University Corporation Kyoto Institute of Technology | SEPARATING AGENT FOR HUMAN SERUM-DERIVED IgG POLYCLONAL ANTIBODIES, AND METHOD FOR SEPARATING HUMAN SERUM-DERIVED IgG POLYCLONAL ANTIBODIES USING SAME |
JP6549061B2 (ja) | 2016-05-09 | 2019-07-24 | 富士フイルム株式会社 | 撮影装置および方法並びに撮影装置制御プログラム |
DE102018110252A1 (de) | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Infineon Technologies Ag | Transceiver, System mit Transceivern und Signal |
CN111423509B (zh) * | 2019-01-10 | 2021-07-09 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | 抗hsa单域抗体及其融合蛋白的亲和层析纯化方法 |
CN109628436B (zh) * | 2019-01-18 | 2022-03-29 | 重庆派金生物科技有限公司 | 一种固定重组人精氨酸酶的制备方法 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0345466A3 (en) * | 1988-05-10 | 1991-04-17 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Generation of chimeric antibodies in vivo by site-specific recombination |
US6476198B1 (en) * | 1993-07-13 | 2002-11-05 | The Scripps Research Institute | Multispecific and multivalent antigen-binding polypeptide molecules |
JP2001502325A (ja) * | 1996-10-11 | 2001-02-20 | ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー | 免疫調整の方法および組成物 |
WO1999023221A2 (en) * | 1997-10-27 | 1999-05-14 | Unilever Plc | Multivalent antigen-binding proteins |
BR9907241A (pt) * | 1998-01-26 | 2000-10-17 | Unilever Nv | Biblioteca de expressão, processo para preparar a mesma, uso de uma fonte não imunizada de sequências de ácido nucleico, e, processos para preparar fragmentos de anticorpos e, para preparar um anticorpo |
ATE535154T1 (de) * | 1998-03-12 | 2011-12-15 | Vhsquared Ltd | Produkten die inaktivierte hefen oder schimmel enthalten, die auf ihrer aussenoberfläche aktive antikörper haben |
DE60042789D1 (de) * | 1999-11-29 | 2009-10-01 | Bac Ip B V | Immobilisierte antigenbindende moleküle aus einer domäne |
JP2006519763A (ja) * | 2002-11-08 | 2006-08-31 | アブリンクス エン.ヴェー. | 治療用ポリペプチドの投与法およびそのためのポリペプチド |
EP1558650A2 (en) * | 2002-11-08 | 2005-08-03 | Ablynx N.V. | Camelidae antibodies against immunoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders |
EP2487190A3 (en) * | 2007-07-13 | 2012-11-14 | Bac Ip B.V. | Single-domain antigen-binding proteins that bind mammalian IgG |
-
2005
- 2005-12-02 CN CN2005800415117A patent/CN101072794B/zh active Active
- 2005-12-02 ES ES05817207T patent/ES2408256T3/es active Active
- 2005-12-02 WO PCT/NL2005/000829 patent/WO2006059904A1/en active Application Filing
- 2005-12-02 JP JP2007544292A patent/JP5875745B2/ja active Active
- 2005-12-02 US US11/792,145 patent/US20080249285A1/en not_active Abandoned
- 2005-12-02 EP EP05817207A patent/EP1817342B1/en active Active
- 2005-12-02 PT PT58172073T patent/PT1817342E/pt unknown
- 2005-12-02 CA CA2589839A patent/CA2589839C/en active Active
- 2005-12-02 DK DK05817207.3T patent/DK1817342T3/da active
-
2013
- 2013-12-06 JP JP2013253665A patent/JP6009431B2/ja active Active
-
2015
- 2015-08-06 US US14/820,446 patent/US20160024148A1/en not_active Abandoned
-
2017
- 2017-06-07 US US15/616,781 patent/US20170369527A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-04-23 US US17/239,195 patent/US20210347816A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PT1817342E (pt) | 2013-05-15 |
EP1817342A1 (en) | 2007-08-15 |
WO2006059904A1 (en) | 2006-06-08 |
JP2014077001A (ja) | 2014-05-01 |
CN101072794A (zh) | 2007-11-14 |
JP5875745B2 (ja) | 2016-03-02 |
US20170369527A1 (en) | 2017-12-28 |
ES2408256T3 (es) | 2013-06-19 |
EP1817342B1 (en) | 2013-03-06 |
JP2008521890A (ja) | 2008-06-26 |
DK1817342T3 (da) | 2013-06-03 |
US20210347816A1 (en) | 2021-11-11 |
CA2589839C (en) | 2016-04-05 |
CN101072794B (zh) | 2012-07-04 |
CA2589839A1 (en) | 2006-06-08 |
US20080249285A1 (en) | 2008-10-09 |
US20160024148A1 (en) | 2016-01-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6009431B2 (ja) | アフィニティー精製の方法 | |
CA2694737C (en) | Single-domain antigen-binding proteins that bind mammalian igg | |
AU2016232349B2 (en) | Methods of purifying bispecific antibodies | |
CA2611816C (en) | Methods of purifying fc region containing proteins | |
JP2020007318A5 (ja) | ||
JP6985572B2 (ja) | 単鎖抗体のスクリーニング方法及び単鎖抗体 | |
US20190248922A1 (en) | Affinity ligands and methods relating thereto | |
AU2013221940B2 (en) | Single-domain antigen-binding proteins that bind mammalian IgG |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150303 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150514 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150827 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160112 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160407 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160610 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160816 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160914 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6009431 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |