RU2007147422A

RU2007147422A - Способ рекомбинантного получения стимулирующего эритропоэз белка

Info

Publication number: RU2007147422A
Application number: RU2007147422/13A
Authority: RU
Inventors: ПАТЕЛЛ Виллоо МОРАВАЛА (IN); ПАТЕЛЛ Виллоо МОРАВАЛА
Original assignee: Эйвестаджен Лимитед,In (In); Эйвестаджен Лимитед,In
Priority date: 2005-05-24
Filing date: 2006-05-24
Publication date: 2009-06-27
Also published as: JP2009502117A; CN101228185A; EP1888630A2; US20090029907A1; WO2006126066A2; BRPI0611405A2; AU2006250885A1; WO2006126066A3; KR20080026113A; AP2007004249A0; CA2609473A1; IL187399A0; ZA200711011B

Abstract

1. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo стимулирующего эритропоэз белка, заключающийся в том, что ! (а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки-хозяина, трансформированные или трансфектированные выделенной последовательностью ДНК, которую выбирают из группы, включающей (I) последовательности ДНК, которые представлены в SEQ ID No.1 и SEQ ID No.2, (II) кодирующую белок последовательность, которая представлена в SEQ ID No.3, и (III) последовательности ДНК, которые гибридизуются в строгих условиях с последовательностями ДНК, указанными в (I) и (II), или их комплементарными цепями; и ! (б) выделяют из них продукт, представляющий собой эритропоэтин. ! 2. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo продукта, представляющего собой эритропоэтин, заключающийся в том, что трансформируют клетку-хозяина синтезированной последовательностью ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность эритропоэтина, представленную в SEQ ID No.3, и выделяют продукт, представляющий собой эритропоэтин, из клетки-хозяина или ее питательной среды. ! 3. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева представляют собой клетки млекопитающих. ! 4. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева предпочтительно представляют собой клетки СНО К1. ! 5. Способ получения гликозилированного полипептида эритропоэтина, который обладает биологической активностью in vivo, приводящей к повышению производства клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов, заключающийся в том, что ! а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки млекопитающих, которые содержат промоторную ДНК, отличную от промоторной ДНК чел�

Claims

1. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo стимулирующего эритропоэз белка, заключающийся в том, что

(а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки-хозяина, трансформированные или трансфектированные выделенной последовательностью ДНК, которую выбирают из группы, включающей (I) последовательности ДНК, которые представлены в SEQ ID No.1 и SEQ ID No.2, (II) кодирующую белок последовательность, которая представлена в SEQ ID No.3, и (III) последовательности ДНК, которые гибридизуются в строгих условиях с последовательностями ДНК, указанными в (I) и (II), или их комплементарными цепями; и

(б) выделяют из них продукт, представляющий собой эритропоэтин.

2. Способ получения обладающего биологической активностью in vivo продукта, представляющего собой эритропоэтин, заключающийся в том, что трансформируют клетку-хозяина синтезированной последовательностью ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность эритропоэтина, представленную в SEQ ID No.3, и выделяют продукт, представляющий собой эритропоэтин, из клетки-хозяина или ее питательной среды.

3. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева представляют собой клетки млекопитающих.

4. Способ по п.1 или 2, в котором клетки-хозяева предпочтительно представляют собой клетки СНО К1.

5. Способ получения гликозилированного полипептида эритропоэтина, который обладает биологической активностью in vivo, приводящей к повышению производства клетками костного мозга ретикулоцитов и эритроцитов, заключающийся в том, что

а) выращивают в приемлемых условиях в питательной среде клетки млекопитающих, которые содержат промоторную ДНК, отличную от промоторной ДНК человеческого эритропоэтина, которая функционально связана с ДНК, кодирующей аминокислотную последовательность зрелого человеческого эритропоэтина, которая представлена в SEQ ID No.3; и

б) выделяют гликозилированный полипептид эритропоэтина, экспрессируемый указанными клетками.

6. Способ по п.5, в котором промоторная ДНК представляет собой вирусную промоторную ДНК.

7. Способ получения обладающего биологической активность in vivo представляющего собой эритропоэтин продукта, заключающийся в том, что трансформируют клетку-хозяина векторной конструкцией, показанной на фиг.10 или 11, и выделяют представляющий собой эритропоэтин продукт из клетки-хозяина или ее питательной среды.

8. Способ по п.7, в котором вектор представляет собой специфический для клеток млекопитающих экспрессионный вектор и наиболее предпочтительно вектор, показанный на фиг.10 и 11.

9. Фармацевтическая композиция, содержащая в терапевтически эффективном количестве человеческий эритропоэтин и фармацевтически приемлемый разбавитель, адъювант или носитель, где эритропоэтин очищают из клеток млекопитающих, выращенных в культуре.

10. Способ увеличения и поддержания гематокритного числа у млекопитающего, заключающийся в том, что вводят в терапевтически эффективном количестве гипергликозилированный аналог эритропоэтина в составе фармацевтической композиции по п.9, причем для получения сопоставимого воздействия на гематокритное число аналог вводят реже, чем взятый в эквивалентном молярном количестве рекомбинантный человеческий эритропоэтин.