RU2007107976A

RU2007107976A - Прослеживаемость семян трансгенных растений при предварительной и последующей обработке

Info

Publication number: RU2007107976A
Application number: RU2007107976/13A
Authority: RU
Inventors: Бьерн Ларус ОРВАР (IS); Бьерн Ларус ОРВАР
Original assignee: Орф Лифтаэкни Хф. (Is); Орф Лифтаэкни Хф.
Priority date: 2004-08-11
Filing date: 2005-08-11
Publication date: 2008-09-20
Also published as: AU2005270845A1; US7428875B2; KR20070059093A; RU2397250C2; EP1794300A2; CN101027398A; CN101027398B; CA2573775C; CA2573775A1; WO2006016381A2; AU2005270845B2; WO2006016381A3; WO2006016381A9; US20080029003A1

Claims

1. Способ получения трансформируемого растения для применения в сельскохозяйственном производстве молекул с семенами, обладающими визуальным характеристическим признаком, при котором (а) обеспечивают желаемый первый культивар для экспрессии и накопления гетерологичного белка в его семенах или любой его части, где указанный культивар поддается трансформации растений и регенерации растений через тканевую культуру; и (б) обеспечивают второй культивар с семенами, которые обладают визуальным характеристическим признаком, так что семена указанного культивара визуально существенно отличаются от семян обычных сельскохозяйственных культиваров или растений дикого типа того же вида, которые растут в географическом районе, предназначенном для выращивания указанного трансформированного растения; (в) скрещивают указанный второй культивар с указанным первым культиваром с получением гибридной линии; (г) проводят обратное скрещивание указанной гибридной линии с указанным первым культиваром с получением гибридных растений, геном которых по существу состоит из генома указанного первого культивара и имеет семена с таким же визуальным характеристическим признаком, как и семена в указанном втором культиваре; (д) отбирают из указанных гибридных растений гибридную линию-хозяина, которая сохраняет характеристики указанного первого культивара, что делает ее способной к трансформации растений и регенерации растений.

2. Способ по п.1, где указанный визуальный характеристический признак представляет собой окраску семени, существенно отличающуюся от окраски семени указанных обычных сельскохозяйственных культиваров или растений дикого типа того же вида, которые растут в географическом районе, предназначенном для выращивания указанного трансформированного растения.

3. Способ по п.1, где указанное генетически трансформированное растение представляет собой однодольное растение.

4. Способ по п.3, где указанное генетически трансформированное растение представляет собой ячмень.

5. Способ по п.1, где стадию обратного скрещивания (г) повторяют по меньшей мере один раз для получения указанных гибридных растений.

6. Способ по п.1, где микроспоры от указанных гибридных растений используют для тканевой культуры с получением изогенных гибридных линий, поддающихся трансформации растений и регенерации растений, с семенами, имеющими указанную иную окраску.

7. Способ по п.6, где множество указанных изогенных гибридных растений трансформируют нуклеиново-кислотной конструкцией, содержащей селективный маркерный ген, оперативно сцепленный с промотором, и где указанную гибридную линию-хозяина отбирают на основании оценки эффективности трансформации и экспрессии генного продукта указанной нуклеиново-кислотной конструкции.

8. Способ по любому из пп.2-8, где по меньшей мере 50% поверхности указанных визуально меченых семян указанного генетически трансформированного растения имеет окраску, существенно отличающуюся от окраски семени обычных сельскохозяйственных культиваров или растений дикого типа того же вида, которые растут в географическом районе, предназначенном для выращивания указанного трансформированного растения.

9. Способ по п.1, дополнительно включающий стадии, на которых

(е) обеспечивают нуклеиново-кислотную конструкцию, которая содержит нуклеиново-кислотную последовательность, кодирующую промотор, активный в растениях, оперативно сцепленный с нуклеотидной последовательностью, кодирующей интересующий гетерологичный белок;

(ж) трансформируют одну или более чем одну клетку из указанной гибридной линии-хозяина указанной нуклеиново-кислотной конструкцией;

(з) регенерируют растение из указанной трансформированной одной или более чем одной клетки растения-хозяина из указанной гибридной линии-хозяина и выращивают указанное растение с получением генетически трансформированного растения с визуально мечеными семенами, экспрессирующими указанный гетерологичный белок.

10. Способ по п.9, где указанный промотор представляет собой промотор, специфичный для семени.

11. Способ по п.9, где указанный интересующий гетерологичный белок выбран из группы, состоящей из коллагенов, коллагеназы, полипептидов гомеобокса, моноклональных антител, секретируемых антител, отдельных цепей антител, включая легкие цепи и тяжелые цепи, лектина, связывающего маннозу, пепсина, химотрипсина, трипсина, казеина, человеческого гормона роста, человеческого сывороточного альбумина, человеческого инсулина, целлюлаз, пектиназ, гемицеллюлаз, фитаз, гидролаз, пероксидаз, фибриногена, фактора IX, фактора XIII, тромбина, белка С, ксиланазы, изоамилазы, глюкоамилазы, амилаз, лизоцима, бета-глюканазы, глюкоцереброзидазы, казеинов, лактазы, уреазы, глюкозоизомеразы, инвертазы, стрептавидина, эстеразы, щелочной фосфатазы, ингибиторов протеаз, папаина, киназ, фосфатаз, дезоксирибонуклеаз, рибонуклеаз, фосфолипаз, липаз, лакказы, белков паутины, белков-антифризов, противомикробных пептидов или дефензинов, факторов роста и цитокинов.

12. Способ по п.9, где указанный интересующий гетерологичный белок представляет собой ингибиторный фактор лейкемии.

13. Способ по п.9, где указанная нуклеиново-кислотная конструкция содержит нуклеиново-кислотную последовательность, кодирующую модуль связывания целлюлозы (cbm), прилежащий к нуклеиново-кислотной последовательности, кодирующей указанный интересующий гетерологичный белок, возможно отделенной нуклеиново-кислотной последовательностью, кодирующей сайт протеолитического расщепления.

14. Способ по п.9, где указанное генетически трансформированное растение с указанными визуально мечеными семенами, выращивают в условиях, где указанная нуклеиново-кислотная последовательность, кодирующая указанный интересующий гетерологичный белок, экспрессируется таким образом, что указанный белок накапливается в семенах указанного растения.

15. Трансгенное растение ячменя, экспрессирующее в его семенах интересующий гетерологичный белок, продуцирующее в его семенах или в семенной оболочке пигмент, который по существу является визуально отличным от природной желтой окраски семени обычного ячменя, такого как вид ячменя Hordeum vulgaris.

16. Трансгенное растение ячменя по п.15, продуцирующее черный, красный или синий пигмент, достаточный для придания семенам этого растения заметной синей, красной, серой или черной окраски.

17. Трансгенное растение ячменя по п.15, экспрессирующее по существу весь указанный гетерологичный белок в его семенах.

18. Трансгенное растение ячменя по п.15, имеющее в его геноме промотор, специфичный для семени, оперативно сцепленный с нуклеиново-кислотной последовательностью, кодирующей указанный гетерологичный белок.

19. Трансгенное растение ячменя по п.18, где указанный промотор, специфичный для семени, выбран из группы, состоящей из промоторов из однодольного растения, которые являются первично специфичными для семени.

20. Трансгенное растение ячменя по п.15, которое является изогенным.

21. Трансгенное растение ячменя по п.15, поддающееся культивированию ткани и генетической трансформации.

22. Трансгенное растение ячменя по п.15, полученное способом по любому из пп.9-14.

23. Трансгенное растение ячменя по п.15, где указанный гетерологичный белок экспрессируется в виде слитого белка, содержащего модуль связывания углеводов.

24. Способ продуцирования интересующего гетерологичного белка, при котором

(а) выращивают трансгенное растение ячменя по любому из пп.15-23, которое имеет семена, визуально отличные от обычных сельскохозяйственных культиваров или растений дикого типа того же вида, которые растут в этом географическом районе, где указанное трансгенное растение ячменя экспрессирует в его семенах указанный интересующий гетерологичный белок;

(б) собирают указанное растение и

(в) экстрагируют из его семян указанный гетерологичный белок.

25. Способ по п.24, где множество указанных трансгенных растений ячменя выращивают в открытом поле, отделенном от каких-либо нетрансгенных растений ячменя.