RU2006134100A - Способ проведения аллель-специфичной пцр для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям а и в гена каппа-казеина - Google Patents

Abstract

Способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, включающий подготовку пробы нуклеиновой кислоты, внесение указанной пробы в реакционную смесь для ПЦР, состоящую из дНТФ, буферной системы, Taq ДНК полимеразы, 4-х праймеров; проведение ПЦР; детекцию амплифицированных фрагментов ДНК методом гель-электрофореза, отличающийся тем, что используются другие последовательности праймеров, все из которых являются аллель-специфичными, не имеющие дополнительных некомплементарных ни к одному из аллелей гена каппа-казеина крупного рогатого скота "mismatch-нуклеотидов" в позиции - 2 от 3′-терминальных нуклеотидов праймеров, но имеющие 5′-некомплементарные участки (n) длиной 5-3 нуклеотидов: B-аллель-специфичные праймеры "B-F-hs": 5′-cccccGTGAGCCTACAAGTACACCTACCAT-3′ и "B-R-hs": 5′-cCcccGATGTCTCCTTAGAGTATTTAGACC-3′, которые инициируют амплификацию B-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 156 bp; A-аллель-специфичные праймеры A-F-hs: 5′-gggggCTGTTCACACACAAAAACAGTAAAG-3′ и A-R-hs: 5′-gggGGGTGCCTAACCTTATACAGCCTTTCG-3′, которые инициируют амплификацию A-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 242 bp; проводят 2-х стадийную ПЦР с совмещением температуры отжига и синтеза при 72°С.

Claims (1)

1. Способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллелям А и В гена каппа-казеина, включающий подготовку пробы нуклеиновой кислоты, внесение указанной пробы в реакционную смесь для ПЦР, состоящую из дНТФ, буферной системы, Taq ДНК полимеразы, 4-х праймеров; проведение ПЦР; детекцию амплифицированных фрагментов ДНК методом гель-электрофореза, отличающийся тем, что используются другие последовательности праймеров, все из которых являются аллель-специфичными, не имеющие дополнительных некомплементарных ни к одному из аллелей гена каппа-казеина крупного рогатого скота "mismatch-нуклеотидов" в позиции - 2 от 3′-терминальных нуклеотидов праймеров, но имеющие 5′-некомплементарные участки (n) длиной 5-3 нуклеотидов: B-аллель-специфичные праймеры "B-F-hs": 5′-cccccGTGAGCCTACAAGTACACCTACCAT-3′ и "B-R-hs": 5′-cCcccGATGTCTCCTTAGAGTATTTAGACC-3′, которые инициируют амплификацию B-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 156 bp; A-аллель-специфичные праймеры A-F-hs: 5′-gggggCTGTTCACACACAAAAACAGTAAAG-3′ и A-R-hs: 5′-gggGGGTGCCTAACCTTATACAGCCTTTCG-3′, которые инициируют амплификацию A-аллель-специфичного фрагмента ДНК гена каппа-казеина крупного рогатого скота размером 242 bp; проводят 2-х стадийную ПЦР с совмещением температуры отжига и синтеза при 72°С.