RU2004120293A - Способ получения нетоксичной противосибиреязвенной вакцины - Google Patents

Способ получения нетоксичной противосибиреязвенной вакцины Download PDF

Info

Publication number
RU2004120293A
RU2004120293A RU2004120293/13A RU2004120293A RU2004120293A RU 2004120293 A RU2004120293 A RU 2004120293A RU 2004120293/13 A RU2004120293/13 A RU 2004120293/13A RU 2004120293 A RU2004120293 A RU 2004120293A RU 2004120293 A RU2004120293 A RU 2004120293A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
recombinant dna
construct according
alanine
residue
dna construct
Prior art date
Application number
RU2004120293/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2287581C2 (ru
Inventor
Ракеш БХАТНАГАР (IN)
Ракеш БХАТНАГАР
Смрити БАТРА (IN)
Смрити БАТРА
Вибха ЧАУХАН (IN)
Вибха ЧАУХАН
Апарна СИНГХ (IN)
Апарна СИНГХ
Нидхи АХУДЖА (IN)
Нидхи АХУДЖА
Правин КУМАР (IN)
Правин КУМАР
Панкадж ГУПТА (IN)
Панкадж ГУПТА
Original Assignee
Ракеш БХАТНАГАР (IN)
Ракеш БХАТНАГАР
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ракеш БХАТНАГАР (IN), Ракеш БХАТНАГАР filed Critical Ракеш БХАТНАГАР (IN)
Publication of RU2004120293A publication Critical patent/RU2004120293A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2287581C2 publication Critical patent/RU2287581C2/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/32Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bacillus (G)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Claims (50)

1. Рекомбинантная ДНК-конструкция, включающая: экспрессирующий вектор, и ДНК-фрагмент, включающий гены защищающего антигена дикого типа (РА), или летального фактора (LF) дикого типа, или фактора отечности (EF) дикого типа.
2. Рекомбинантная ДНК-конструкция, включающая: экспрессирующий вектор, и ДНК-фрагмент, включающий гены мутантного защищающего антигена (РА), или мутантного летального фактора (LF), или мутантного фактора отечности(EF).
3. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный вектор представляет собой прокариотический вектор.
4. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 3, в которой указанный прокариотический вектор представляет собой PQE 30.
5. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 4, в которой указанный экспрессионный вектор содержит Т5-промотор и 6Х гистидиновую метку.
6. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Phe202.
7. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Leu203.
8. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Pro205.
9. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Ile207.
10. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остаткам Pro205, Trp226 и Phe236.
11. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Phe552.
12. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Ile574.
13. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Phe552 и Phe554.
14. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Ile562 и Ile574.
15. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Leu566 и Ile574.
16. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Phe552 и Phe554, Ile562, Leu566 и Ile574.
17. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Phe427.
18. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с делецией по остатку Asp425.
19. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с делецией по остатку Phe427.
20. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Trp346.
21. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Leu352.
22. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген защищающего антигена с заменой на аланин по остатку Trp346, Met350 и Leu352.
23. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Tyr148.
24. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Tyr149.
25. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Ile151.
26. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Lys153.
27. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Asp187.
28. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Phe190.
29. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген летального фактора с заменой на аланин по остатку Asp187, Leu188, Leu189 и Phe190.
30. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген фактора отечности с заменой на аланин по остатку Tyr137.
31. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген фактора отечности с заменой на аланин по остатку Tyr138.
32. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген фактора отечности с заменой на аланин по остатку Ile140.
33. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой указанный ДНК-фрагмент представляет собой ген фактора отечности с заменой на аланин по остатку Lys142.
34. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п. 1 или 2, в которой белок, кодируемый указанным ДНК-фрагментом, экспрессируется в прокариотическом хозяине.
35. Рекомбинантная ДНК-конструкция по п.34, в которой указанный прокариотический хозяин представляет собой штамм E. coli.
36. Белок, экспрессируемый генным ДНК-фрагментом, представляющий собой РА дикого типа, LF дикого типа, EF дикого типа и их мутантные варианты.
37. Способ получения мутантного белка-токсина сибирской язвы, включающий: получение мутантных генов РА, LF и EF, с использованием разных комплементарных мутагенных праймеров для ПЦР-реакции, обработку указанного мутантного ПЦР-продукта вместе с нативной матрицей с помощью фермента, который расщепляет эту нативную матрицу указанного ПЦР-продукта, трансформация указанного мутантного продукта в штамме E. coli, выделение рекомбинантной конструкции из трансформированного штамма E. coli и подтверждение требуемой мутации, трансформация подтвержденной мутантной конструкции в соответствующем экспрессионном штамме E. coli для экспрессии мутантного белка, выделение очисткой указанного экспрессируемого мутантного белка.
38. Способ по п. 37, в котором указанное выделение очисткой осуществляют с использованием Ni-NTA-хроматографии и/или другими хроматографическими методами.
39. Способ по п. 37, в котором указанный фермент представляет собой DpnI-фермент, который специфически расщепляет полностью метилированные Gme6 АТС-последовательности.
40. Способ по п. 37, в котором указанные гены клонируют в экспрессионном векторе PQE, содержащем Т5-промоторы и 6Х гистидиновую метку.
41. Способ по п. 38, в котором мутации затрагивают первый домен РА по остаткам 202, 203, 205.
42. Способ по п. 37, в котором мутации затрагивают третий домен РА по остаткам 552, 574, 552+554, 562+574, 566+574, 552+554+562+566+574, давая мутантные белки, которые оказываются дефектными для олигомеризации.
43. Способ по п. 37, в котором мутации затрагивают второй домен РА по остаткам 425 и 427 петли 4 домена 2 и нарушают способность РА к перемещению.
44. Способ по п. 37, в котором мутации затрагивают второй домен РА по остаткам 346, 352 и 346+350+352 в петле 3 домена 2 таким образом, что РА становится биологически неактивным.
45. Способ по п. 37, в котором мутации затрагивают 1-й домен LF по остаткам 148, 149, 151, 153, 187, 190 и 187+188+189+190, нарушая связывание LF с РА.
46. Способ по п. 37, в котором мутации затрагивают 1-е 250 остатков EF.
47. Противосибиреязвенная вакцина, включающая белок-токсин сибирской язвы, выбранный из РА дикого типа, или LF дикого типа, или EF дикого типа.
48. Противосибиреязвенная вакцина, включающая белок-токсин сибирской язвы, выбранный из мутантного РА, или мутантного LF, или мутантного EF, или их сочетания.
49. Противосибиреязвенная вакцина, включающая выбранный белок-токсин, который представляет собой сочетание любого белка, выбранного из РА дикого типа, или LF дикого типа, или EF дикого типа с любым одним или несколькими белками, выбранным из мутантного РА, или мутантного LF, или мутантного EF.
50. Фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество белка-токсина сибирской язвы по любому из пп. 46-49.
RU2004120293/13A 2001-12-05 2002-03-20 Способ получения нетоксичной противосибиреязвенной вакцины RU2287581C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN1222/DEL/2001 2001-12-05
IN1222DE2001 2001-12-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004120293A true RU2004120293A (ru) 2005-04-20
RU2287581C2 RU2287581C2 (ru) 2006-11-20

Family

ID=11097141

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004120293/13A RU2287581C2 (ru) 2001-12-05 2002-03-20 Способ получения нетоксичной противосибиреязвенной вакцины

Country Status (12)

Country Link
US (1) US7888490B2 (ru)
EP (2) EP1453534A1 (ru)
JP (1) JP2005511059A (ru)
CN (1) CN1694722A (ru)
AU (1) AU2002242935A1 (ru)
BR (1) BRPI0215039A2 (ru)
CA (1) CA2469671A1 (ru)
IL (1) IL162381A0 (ru)
MX (1) MXPA04005538A (ru)
RU (1) RU2287581C2 (ru)
WO (1) WO2003048390A1 (ru)
ZA (1) ZA200404444B (ru)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8481043B2 (en) * 2001-06-22 2013-07-09 Cpex Pharmaceuticals, Inc. Nasal immunization
US20060246079A1 (en) * 2003-11-14 2006-11-02 Morrow Phillip R Neutralizing human antibodies to anthrax toxin
WO2005081749A2 (en) * 2004-01-23 2005-09-09 Avanir Pharmaceuticals, Inc. Neutralizing human antibodies to anthraxtoxin
ES2422171T3 (es) 2004-02-11 2013-09-09 Ligocyte Pharmaceuticals Inc Antígenos de carbunco y procedimientos de uso
CA2669290A1 (en) * 2005-11-14 2008-04-24 Leslie W. Baillie Salmonella based oral vaccines for anthrax
CN100362094C (zh) * 2006-02-14 2008-01-16 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 一株无pX01和pX02质粒的炭疽杆菌菌株及其用途
GB0607462D0 (en) * 2006-04-13 2006-05-24 Avecia Ltd Assay
JP2009536951A (ja) * 2006-05-12 2009-10-22 オクラホマ メディカル リサーチ ファウンデーション 炭疽菌組成物ならびに使用および生成方法
WO2008152655A1 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Panacea Biotec Limited Limited Anthrax fusion proteins, compositions and uses thereof
WO2008152654A1 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Panacea Biotec Limited Anthrax fusion proteins, compositions and uses thereof
JP5701760B2 (ja) 2008-10-02 2015-04-15 ファーマシーネ,インコーポレイテッド 炭疽菌ワクチン製剤とその用途
CN101798565B (zh) * 2010-02-26 2013-08-07 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 能在芽孢表面展示pa20蛋白的炭疽芽孢杆菌及其应用
WO2012171329A1 (zh) * 2011-06-15 2012-12-20 Du Quan 一种核酸分离的方法及其应用
CN102516394B (zh) * 2011-12-14 2014-07-09 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 CMG2突变体和Fc的融合蛋白及其编码基因与应用
CN105797148B (zh) * 2016-03-30 2020-01-14 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 一种无毒炭疽活疫苗及无毒炭疽菌株
CN105749265B (zh) * 2016-03-30 2020-03-27 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 一种二价炭疽疫苗
NL2027383B1 (en) 2020-01-24 2022-04-06 Aim Immunotech Inc Methods, compositions, and vaccines for treating a virus infection

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2017606A (en) 1932-12-24 1935-10-15 Sharp & Dohme Inc Anthrax antigen preparation and product
US2151364A (en) 1937-06-02 1939-03-21 Cutter Lab Anthrax vaccine
RU2115433C1 (ru) 1992-08-28 1998-07-20 Научно-исследовательский институт микробиологии МО РФ Вакцина сибиреязвенная комбинированная
US6632640B1 (en) 1998-07-10 2003-10-14 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Vaccine against Staphylococcus intoxication
FR2798291B1 (fr) * 1999-09-10 2005-01-14 Pasteur Institut Compositions acellulaires immunogenes et compositions acellulaires vaccinales contre bacillus anthracis
CA2398207A1 (en) * 1999-12-22 2001-06-28 The Ohio State University Research Foundation Methods for protecting against lethal infection with bacillus anthracis
IL152553A0 (en) 2000-05-04 2003-05-29 Harvard College Compounds and methods for the treatment and prevention of bacterial infection
AU2002322059A1 (en) * 2001-06-08 2002-12-23 Avant Immunotherapeutics, Inc. Improved vaccination against anthrax
GB0116798D0 (en) * 2001-07-10 2001-08-29 Secr Defence Expression system
GB0126266D0 (en) * 2001-11-01 2002-01-02 Microbiological Res Authority Anthrax antigenic compositions

Also Published As

Publication number Publication date
MXPA04005538A (es) 2005-06-08
EP1958960A2 (en) 2008-08-20
JP2005511059A (ja) 2005-04-28
RU2287581C2 (ru) 2006-11-20
BRPI0215039A2 (pt) 2016-06-28
WO2003048390A1 (en) 2003-06-12
EP1453534A1 (en) 2004-09-08
CN1694722A (zh) 2005-11-09
CA2469671A1 (en) 2003-06-12
AU2002242935A1 (en) 2003-06-17
WO2003048390A8 (en) 2004-02-05
US20050063986A1 (en) 2005-03-24
US7888490B2 (en) 2011-02-15
ZA200404444B (en) 2006-03-29
EP1958960A3 (en) 2009-01-07
IL162381A0 (en) 2005-11-20
AU2002242935A8 (en) 2003-06-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2004120293A (ru) Способ получения нетоксичной противосибиреязвенной вакцины
US20230167421A1 (en) Variants of a DNA Polymerase of the Polx Family
Albers et al. Archaeal homolog of bacterial type IV prepilin signal peptidases with broad substrate specificity
Au et al. Gene synthesis by a lcr-based approach: High-level production of leptin-l54 using synthetic gene inescherichia coli
Davis et al. New fusion protein systems designed to give soluble expression in Escherichia coli
US5888795A (en) Thermostable uracil DNA glycosylase and methods of use
US10766933B2 (en) Mutated immunoglobulin-binding protein having increased alkaline tolerance
Alexeyev et al. Gene synthesis, bacterial expression and purification of the Rickettsia prowazekii ATP/ADP translocase
CN110331136B (zh) 一种末端脱氧核糖核苷转移酶变体及其应用
SMITH et al. Sequence polymorphisms of the Der p 3 house dust mite allergen
JPWO2018056374A1 (ja) 改良型組換えFcγRII
AU2001280442B2 (en) Method for preparing a physiologically active il-18 polypeptide
US5869315A (en) Modified interleukin-1β converting enzyme with increased stability
Masumoto et al. Overexpression, purification, and characterization of human m-calpain and its active site mutant, m-C105S-calpain, using a baculovirus expression system
US20210380667A1 (en) Chymotrypsin Inhibitor Variants And The Use Thereof
Mei et al. Sec-dependent secretion of subtilase SptE in haloarchaea facilitates its proper folding and heterocatalytic processing by halolysin SptA extracellularly
KR930702528A (ko) 스트렙토마이세스 리비단으로부터 분리하고 정제한 단백질 가수분해 효소 x를 암호화하는 dna 시퀸스
Franke et al. Genetic engineering, production and characterisation of monomeric variants of the dimeric Serratia marcescens endonuclease
Farrell et al. Secretion of cytoplasmic and nuclear proteins from animal cells using novel secretion modules
KR102637595B1 (ko) 알칼리내성이 증가된 면역글로불린-결합 단백질 변이체 및 이의 용도
JP2878341B2 (ja) 人工機能性ポリペプチド
JP2022114713A (ja) 組換えアデノ随伴ウイルス結合性タンパク質発現用プラスミドおよびそれを用いた前記タンパク質製造方法
KR20180098541A (ko) 생물학적 활성 재조합 캐리어 단백질을 회수하기 위한 산업적 확장성이 있는 방법
US20070110761A1 (en) Protein purification means
CN112689674A (zh) 葡聚糖亲和性标签及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20080321